Fracionamento da peçonha da serpente Bothrops alternatus e determinação da atividade proteolítica de suas frações isoladas

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoFAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas GeraisTrabalho de Conclusão de Curso (Graduação)O presente trabalho descreve o fracionamento da peçonha bruta de Bothrops alternatus e a caracterização de suas frações isoladas quanto à atividade proteolítica e perfil eletroforético. A peçonha foi fracionada em DEAE Sephacel, previamente equilibrada em tampão bicarbonato de amônio 0,05 M, num gradiente de concentração de 0,05 a 1,0 M, apresentando um perfil cromatográfico de seis frações principais, denominadas de D1 a D6. Todas as frações (D1 a D6) degradaram a caseína e as cadeiras A-α e B-β do fibrinogênio bovino em pH 7,0-9,0. uma fibriogenase, denominada MPA, foi purificada a partir do refracionamento da fração D6 em Sephadex G-75, seguida por Heparina Agarose. Em eletroforese em gel de poliacrilamida, MPA se comportou como uma proteína de cadeia simples com peso molecular aprente de 29.000, na presença de β-mercaptoetanol. A enzima degrada a caseína e fibrina. A MPA hidrolisa a cadeira A-α mais rapidamente que a cadeia B-β, mas não altera a cadeia γ do fribrinogênio. A atividade fibrinogenolítica na MPA foi inibida pela 1,10-fenantrolina. Resultados preliminares mostraram que MPA foi capaz de tornar o sangue de camundongos incoagulável

Perfil epidemiológico dos acidentes ofí­dicos na cidade de Ituiutaba, Minas Gerais, Brasil (2007-2021)

As pesquisas epidemiológicas sobre os acidentes ofí­dicos são importantes para a Saúde Pública. Devido à carência de estudos sobre o ofidismo no municí­pio de Ituiutaba, Estado de Minas Gerais- Brasil, o presente trabalho descreve as caracterí­sticas epidemiológicas dos acidentes ofí­dicos notificados no municí­pio no perí­odo de 2007 a 2021. As informações foram obtidas do banco de dados do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN). De acordo com nosso estudo, foram registrados 244 casos de acidentes por serpentes peçonhentas na cidade de Ituiutaba no perí­odo analisado, sendo 82% deles ocasionados pelo gênero Bothrops, seguido de Crotalus (16%) e Micrurus (2%). Quanto a gravidade, foram notificados 115 (47,1%) e 107 (44%) casos de acidentes ofí­dicos classificados como leves e moderados, respectivamente, com 232 (99%) casos evoluí­dos para cura e uma taxa de letalidade de 1,0%. Ainda, os dados sobre o intervalo de tempo entre o acidente e atendimento médico mostraram que 208 casos (85,5%) tiveram o atendimento médico nas primeiras três horas após a picada. O presente trabalho é um precursor na caracterização do perfil epidemiológico dos acidentes ofí­dicos no municí­pio de Ituiutaba-MG e apresenta dados importantes que podem fomentar ações de vigilância em saúde e de orientação dos profissionais de saúde da região, possibilitar ações educativas para a população em geral e contribuir para a distribuição racional dos soros antiofí­dicos no municí­pio

Impacto da educação na saúde de pacientes com artrite reumatoide - estudo piloto

Objetivo: Grupos de orientação para pacientes com artrite reumatoide (AR) têm boa aceitação, mas benefícios controversos no tratamento dessa doença. Este estudo visa a avaliar seu impacto sobre a qualidade de vida e a dor em pacientes com AR. Métodos: Ensaio clínico piloto de intervenção em grupos de orientação que incluiu 15 pacientes com AR. Foram realizados 12 encontros de duas horas por semanas, que abordaram ações educativas sobre a doença, o tratamento, medidas de proteção articular e conservação de energia, atividades terapêuticas ocupacionais e oficinas de vivências. Foram utilizados a escala visual analógica de dor (EVA dor) e o sistema descritivo em três níveis de cinco dimensões do EuroQol e sua escala visual analógica (EQ-5D-3L e EQ-VAS) para avaliação da qualidade de vida. Resultados: Catorze (93%) pacientes eram do gênero feminino, com idade média 61,27 anos, tempo médio de doença de 19,93 anos. Treze (87%) deles apresentavam deformidades articulares em mãos pela AR. Houve melhora significativa no domínio cuidados pessoais do EQ-5D-3L (p=0,046) e tendência à redução da dor (EVA dor) e melhora da qualidade de vida (EQ-5D-3L e EQVAS), sem significância estatística (P>0,05). Conclusões: Apesar do pequeno número de pacientes incluídos neste estudo piloto, a melhora dos cuidados pessoais, da autopercepção da dor e da qualidade de vida dos pacientes sugere que houve impacto positivo da educação, das atividades terapêuticas ocupacionais e do compartilhamento de vivências entre os pacientes com AR.Background: Educational groups of patients with rheumatoid arthritis (RA) have good acceptance, but controversial benefits for its treatment. This study aims to evaluate quality of life and pain in RA patient attending education groups. Methods: Pilot clinical intervention study of educational groups including 15 RA patients. Twelve weekly appointments lasting two hours each were held. They addressed educational actions on the disease treatment, joint protection and energy conservation measures, occupational therapeutic activities and workshops on sharing experiences. The pain visual analogue scale (VAS-pain) and the 5 domain-threedimensional descriptive system of EuroQol (EQ-5D-3L) and its visual analogue scale (EQ-VAS) were applied to assess pain and quality of life. Results: Fourteen (93%) patients were female, with a mean age of 61,27 years, mean disease time of 19,93 years. Thirteen (87%) of them had hand joint deformities due to RA. There was a significant improvement in the personal care domain of the EQ-5D-3L (P= 0,046) and a tendency to pain reduction (VAS-pain) and improvement of quality of life (EQ-5D-3L and EQVAS index), without statistical significance (P>0.05). Conclusion: Despite the evaluation of few RA patients, the improvement of patients’ personal care, pain self-perception and quality of life suggests that there was a positive impact of education, occupational therapy interventions and sharing experiences among patients with RA

Cell-derived microvesicles in infective endocarditis: Role in diagnosis and potential for risk stratification at hospital admission

Objectives: To characterize the plasmatic profile of cell-derived microvesicles (MVs) at diagnosis and during the treatment of patients with infective endocarditis (IE). Methods: Blood samples from 57 patients with IE were obtained on 3 consecutive moments: upon admission (T0), at 2 weeks (T1), and at the end of treatment (T2), and were compared with 22 patients with other bacterial infections. MPs were measured by flow cytometry and labeled for specific cell markers of CD45 (leukocytes), CD66b (neutrophils), CD14 (monocytes), CD41a (platelets), CD51 (endothelial cells), CD3 (T lymphocyte) and CD235a (erythrocytes). Results: MVs from platelets (pltMVs), leukocytes (leukMVs), neutrophils (neutMVs), monocytes (monoMVs) and lymphocytes (lymphMVs) were significantly more elevated in the patients with IE, compared to the patients with other bacterial infections, despite comparable age, sex, blood counts and C-reactive protein levels. MVs values revealed a relatively stable pattern over time in IE, except for a significant increase in leukMVs and neutMVs in T1. LeukMVs (p = 0.011), neutMVs (p = 0.010), monoMVs (p = 0.016) and lymphMVs (p = 0.020), measured at admission, were significantly higher in IE patients that died during hospitalization in comparison with those that survived. In a multivariable analyses, the levels of neutMVs remained as an independent factor associated with mortality (odds ratio 2.203; 95% confidence interval 1.217 - 3.988; p = 0.009), adjustment for heart failure during the treatment. Conclusions: Plasma levels of pltMVs, leukMVs, neutMVs, monoMVs and lymphMVs were significantly more elevated in patients with IE than in patients with other bacterial infections at hospital admission. Furthermore, neutMVs at admission have been identified as an independent predictor of mortality in patients with IE. Thus, cell derived MPs may become an important tool in the differential diagnosis and mortality risk assessment early in the course of IE suspected cases

Caracterização funcional e estrutural de novas proteases isoladas da peçonha de Bothrops alternatus e do látex de Euphorbia milii var. hislopii

CHAPTER II: A protease, which we designate Eumiliin, was isolated from the latex of Euphorbia milii var. hislopii by a combination of ion-exchange chromatography using DEAE-Sephacel and gel filtration with Sephadex G-75. Eumiliin is a monomeric protein with an apparent molecular mass of 30 kDa by SDS PAGE under reducing conditions and gave one main peak at 29814 kDa in MALDITOF/ TOF mass spectrometry. Eumiliin has caseinolytic and fibrinogenolytic activities, but no hemorrhagic or defibrinating activities. The enzyme readily hydrolyzes the Aα-chain of fibrinogen and, more slowly, the Bß-chain. Its fibrinogenolytic activity is inhibited by b-mercaptoethanol and leupeptin. In contrast, EDTA and benzamidine did not affect the activity of Eumiliin. The caseinolytic activity of Eumiliin had a pH optimum of 8.0 and was stable in solution at up to 40 °C; activity was completely lost at 80 °C. Intraplantar injection of Eumiliin (1 25 μg/paw) caused a dose- and time-dependent hyperalgesia, which peaked 1 - 5 h after enzyme injection. Intraplantar injection of Eumiliin (1 25 μg/paw) also caused an oedematogenic response that was maximal after 1 h. Morphological analyses indicated that Eumiliin induced an intense myonecrosis, with visible leukocyte infiltrate and damaged muscle cells 24 h after injection. CHAPTER III: A protease, which we designate Eumiliin, was isolated from the latex of Euphorbia milii var. hislopii by a combination of ion-exchange chromatography using DEAE-Sephacel and gel filtration with Sephadex G-75. Eumiliin is a monomeric protein with an apparent molecular mass of 30 kDa by SDS PAGE under reducing conditions and gave one main peak at 29814 kDa in MALDITOF/ TOF mass spectrometry. Eumiliin has caseinolytic and fibrinogenolytic activities, but no hemorrhagic or defibrinating activities. The enzyme readily hydrolyzes the A-chain of fibrinogen and, more slowly, the B-chain. Its fibrinogenolytic activity is inhibited by b-mercaptoethanol and leupeptin. In contrast, EDTA and benzamidine did not affect the activity of Eumiliin. The caseinolytic activity of Eumiliin had a pH optimum of 8.0 and was stable in solution at up to 40 °C; activity was completely lost at 80 °C. Intraplantar injection of Eumiliin (1 25 μg/paw) caused a dose- and time-dependent hyperalgesia, which peaked 1 - 5 h after enzyme injection. Intraplantar injection of Eumiliin (1 25 μg/paw) also caused an oedematogenic response that was maximal after 1 h. Morphological analyses indicated that Eumiliin induced an intense myonecrosis, with visible leukocyte infiltrate and damaged muscle cells 24 h after injection. CHAPTER IV: Bhalternin and Eumiliin are proteases extracted from the venom of Bothrops alternatus and latex of Euphorbia milli var. hislopii, respectively. The stabilities of Bhalternin and Eumiliin against denaturation by heat and urea were determined and compared. The plant protease proved to be tougher when heated at high temperatures and also when subjected to the action of urea as denaturant. Further studies are needed to better characterize the conditions for stabilization of these enzymes, especially those related to the strategies needed to protect the transport and storage in the commercial, therapeutic and biotechnological processes.Doutor em Genética e BioquímicaCAPÍTULO II: Uma serinoprotease da peçonha de Bothrops alternatus foi isolada por meio de três etapas cromatográficas: DEAE Sephacel, Sephadex G-75 e Benzamidina-Sepharose. A enzima purificada, denominada balternina, apresentou uma única banda protéica quando analisada em SDS-PAGE, eletroforese em gel de poliacrilamida sob condições desnaturantes, apresentando peso molecular de aproximadamente 31.500 e 27.000 na presença e na ausência de agente redutor, respectivamente. O cDNA completo foi obtido por RT-PCR e a proteína madura de 236 resíduos de aminoácidos foi codificada por 708 pares de bases. O alinhamento múltiplo das sequências de aminoácidos deduzidas desta enzima mostrou similaridade estrutural com outras serinoproteases de peçonhas de serpentes. A balternina apresentou atividades fibrinogenolítica e albuminolítica. Quando a protease e o fibrinogênio bovino foram incubados a 37 °C, na proporção de 1:10 (m/m), a enzima clivou preferencialmente a cadeia Aα e, aparentemente, não degradou as cadeias Bβ e do substrato. Testes de estabilidade mostraram que o intervalo ótimo de temperatura e pH para a atividade proteolítica sobre o fibrinogênio foram de 30 a 40 °C e 7,0 a 8,0, respectivamente. O efeito de inibidores enzimáticos mostrou que a benzamidina inibiu a atividade fibrinogenolítica, indicando que a balternina é uma serinoprotease. A enzima isolada causou, ainda, alterações morfológicas no coração, fígado, pulmão e músculo de camundongos, desencadeando também coagulação in vitro e desfibrinogenação in vivo, quando administrada intraperitonealmente em camundongos, sugerindo ser uma enzima thrombin-like . Desta forma, a balternina pode ser de interesse como agente terapêutico na prevenção e tratamento de desordens trombóticas. CAPÍTULO III: A protease, designada de eumilina, foi isolada do látex de Euphorbia milii var. hislopii pela combinação de duas etapas cromatográficas: troca iônica (DEAE-Sephacel) e filtração em gel (Sephadex G-75). A eumilina é uma proteína monomérica com massa molecular aparente de 30 kDa quando analisada em SDS-PAGE sob condições redutoras e apresentou um pico principal de 29,814 kDa em espectrometria de massa MALDI-TOF/TOF. A eumilina apresentou atividades caseinolítica e fibrinogenolítica, mas não desencadeou atividade hemorrágica ou desfibrinogenante. Esta protease hidrolisa preferencialmente a cadeia A do fibrinogênio e, mais lentamente, a cadeia B. A atividade fibrinogenolítica foi inibida por b-mercaptoetanol e leupeptina. Em contraste, o EDTA e a benzamidina não afetaram a referida atividade. A ação proteolítica da eumilina sobre a caseína apresentou pH ótimo igual a 8,0 e foi estável em solução até 40 °C; perdendo completamente a atividade em temperatura 80 °C. A injeção Intraplantar de eumilina (1 25 μg/pata) causou hiperalgesia dose e tempodependente, com pico entre 1 a 5 h após injeção de enzima. Da mesma forma, causou resposta edematogênica máxima após 1 h. A análise morfológica indicou que a eumilina induziu mionecrose intensa, com infiltrado leucocitário e danos em células musculares cerca de 24 h após a injeção. CAPÍTULO IV: A balternina e a eumilina são proteases extraídas da peçonha da serpente Bothrops alternatus e do látex de Euphorbia milii var. hislopii, respectivamente. As estabilidades da balternina e da eumilina contra a desnaturação pelo calor e por uréia foram determinadas e comparadas entre si. A protease vegetal mostrou-se mais resistente quando aquecida em altas temperatutas e também quando submetida à ação da uréia como desnaturante. Novos estudos serão importantes para melhor caracterizar as condições necessárias para estabilização dessas enzimas, especialmente aquelas relacionadas com as estratégias de proteção relacionadas ao transporte e estocagem nos processos comercial, terapêutico e biotecnológico

Purification and biochemical characterization of three proteases present in the venoms of Bothrops alternatus and Bothrops moojeni: balt-f1, balt-f2 and bmoo-f

This work describes the purification and partial biochemical characterization of two proteases from Bothrops alternatus venoms (Balt-F1 and Balt-F2) and one from Bothrops moojeni (Bmoo-F). The enzymes were purified on chromatographic columns containing the DEAE Sephacel, Sephadex G-75 and Heparin-Agarose resins. The apparent molecular weight analyzed in SDS-PAGE under reducing conditions, showed homogeneous bands of 26,200, 29,900 and 24,800, respectively. All enzymes hydrolyzed bovine fibrinogen A-a and B-p chains. Balt-F1 did not show coagulating and defibrinogenating activities. The enzymes Balt-F2 and Bmoo-F, when injected i.p. made the blood of mice uncoagulable. The inhibition of proteolytic activity on bovine fibrinogen from the enzymes Balt-F1, Balt-F2 and Bmoo-F by metal ion chelating agents, allows them to be classified as metalloproteases.Dissertação (Mestrado)Este trabalho descreve a purificação e a caracterização bioquímica parcial de duas proteases das peçonhas de Bothrops alternatus (Balt-F1 e Balt-F2) e uma de Bothrops moojeni (Bmoo-F). As enzimas foram purificadas em colunas cromatográficas contendo as resinas DEAE Sephacel, Sephadex G-75 e Heparina-Agarose. O peso molecular aparente analisado em SDS-PAGE sob condições redutoras, mostrou bandas homogêneas de 26.200, 29.900 e 24.800, respectivamente. Todas as enzimas hidrolisaram as cadeias A-a e B-p do fibrinogênio bovino. A Balt-F1 não apresentou atividades coagulante e desfibrinogenante. As enzimas Balt-F2 e Bmoo-F, quando injetadas i.p. tornaram o sangue de camundongos incoagulável. A inibição da atividade proteolítica sobre o fibrinogênio bovino das enzimas Balt-F1, Balt-F2 e Bmoo-F por agentes quelantes de íons metálicos, permite classificá-las como metaloproteases

Análise da accountability no instituto de previdência municipal dos servidores públicos do município de Viçosa/ MG (IPREVI)

Este artigo apresenta o cenário da accountability no Instituto de Previdência dos Servidores Públicos do Município de Viçosa/MG– IPREVI. Assim, o escopo desse estudo de caso foi investigar se os mecanismos institucionalizados de accountability vertical, horizontal e social estão presentes na referida unidade gestora. A análise foi realizada por meio do Instrumento de Identificação e Avaliação do processo de Accountability nas Unidades Gestoras do Regime Próprio de Previdência Social – RPPS – municipal que agrupa dois inventários desenvolvidos por Martins (2015): o Inventário normativo da accountability aplicada ao RPPS (INA) e o Inventário de perfil e percepção do segurado sobre o processo de accountability (IPPSA). Observou-se que há no IPREVI mecanismos institucionalizados capazes de viabilizar a realização da accountability nessas três classificações. Entretanto, os resultados indicaram que o elemento Informação Transparente é o mais precário em todas as análises realizadas, inclusive no aspecto institucional, o que compromete também a realização dos demais elementos, sobretudo, a participação e interação do segurado.This article presents the accountability scenario from the Public Servants Social Security Institute of Viçosa/-MG - IPREVI. Thus, the scope of this study was to investigate if the vertical, horizontal and social accountability institutionalized mechanisms are present in the aforementioned management unit. The analysis was carried out using the Instrument of Identification and Evaluation of the Accountability process at the Management Units of the municipal RPPS. This instrument combines two inventories developed by Martins (2015): the Normative Inventory of Accountability (INA) applied to RPPS and the Inventory of the Insured ́s Profile and Perception about the process of Accountability process (IPPSA). It was observed that in this institution, there are institutionalized mechanisms capable of making accountability possible in these three classifications. However, the results indicated that the element of Transparent Information is the most precarious in all the analyzes conducted, including under the institutional aspect, which also compromises the realization of the other elements, above all, the participation and interaction of the insured.Este artículo presenta el escenario de la accountability en el Instituto de Previsión de los Servidores Públicos del Municipio de Viçosa/MG - IPREVI. Así, el objetivo de este estudio de caso fue investigar si los mecanismos institucionalizados de accountability vertical, horizontal y social están presentes en la referida unidad gestora. El análisis fue hecho a través del Instrumento de Identificación y Evaluación del proceso de accountability en las Unidades Gestoras del RPPS municipal que agrupa dos inventarios desarrollados por Martins (2015): el Inventario normativo de la accountability aplicada al RPPS(INA) y el Inventario de perfil y percepción del asegurado sobre el proceso de accountability (IPPSA).Se observó que en el IPREVI haymecanismos institucionalizados capaces de viabilizar la realización de la accountability en esas las tres clasificaciones mencionadas. No obstante, los resultados indicaron que el elemento Información transparente es el más precario en todos las análisis realizados, incluso en el aspecto institucional, lo que compromete también la realización de los demás elementos, sobre todo, la Participación e interacción del asegurado

Association between abdominal obesity, screen time and sleep in adolescents

Objective: To assess the association between abdominal obesity, food intake, sleep deprivation, and screen time in adolescents. Methods: This cross-sectional study was conducted with 432 adolescents aged 14–19 years, from public and private schools. Anthropometric and body composition measures included body weight, waist circumference, body mass index for age, waist-to-hip ratio, waist-to-height ratio, and body fat percentage. Abdominal obesity was defined by age and sex specific cut-off points for waist circumference. Food intake, screen time, sexual maturation, and sleep duration were evaluated by self-administered questionnaires. Results: The prevalence of excess body weight and abdominal obesity was 16.7% and 27.5%, respectively. Students in the adult phase (post-puberty), with inadequate waist-to-height ratio, high body fat percentage, and screen time ≥ 3 h/day were, respectively, 2.5 (95% CI 1.40–4.46), 7.44 (95% CI 1.08–51.46), 2.79 (95% CI 1.04–7.50), and 1.43 (95% CI 1.24–3.89) more likely to have abdominal obesity. Low intake of unprocessed or minimally processed foods was associated with inadequate sleep duration, while high intake of ultra-processed foods was associated with high screen time. Conclusions: Abdominal obesity was associated with the adult phase, short sleep duration and high screen time. The degree of food processing was associated with screen time and sleep duration. Assessing the risk factors of abdominal obesity may be a useful strategy for preventing cardiovascular disease in adolescents