MORPHO-ANATOMIC OF ADVENTITIOUS RHIZOGENESIS IN MINI-CUTTINGS OF Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla

O presente estudo teve como objetivo principal a caracteriza\ue7\ue3o morfoanat\uf4mica da rizog\ueanese advent\uedcia de miniestacas de quatro clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla . As miniestacas foram coletadas de minicepas estabelecidas em minijardim clonal, conduzido em sistema semi-hidrop\uf4nico em canaletas com fertirriga\ue7\ue3o. Para a caracteriza\ue7\ue3o histol\uf3gica do processo de rizog\ueanese das miniestacas foram coletadas amostras teciduais aos 0, 1, 2, 4, 6, 8, 10 e 12 dias ap\uf3s o estaqueamento em casa de vegeta\ue7\ue3o climatizada, para enraizamento. As amostras foram fixadas em FAA70%, desidratadas em s\ue9rie et\uedlica e inclu\ueddas em metacrilato. Os resultados revelaram a origem end\uf3gena de prim\uf3rdios radiculares a partir do c\ue2mbio vascular e, em alguns casos, a prolifera\ue7\ue3o e a forma\ue7\ue3o de uma massa de c\ue9lulas desorganizadas (calos) em miniestacas dos clones avaliados, entre 8 e 12 dias de idade.The present work aimed to accomplish the histological analysis of the events involved in the adventitious rooting pattern of four Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla clones. The mini-cuttings were collected from a mini-stump and the rooting experiments were set up under mini-hedge indoor semi-hydroponics by means of intermittent flooding fertirrigation. For histological analyses, the proximal ends of the minicuttings were collected after 0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, and 12 days after planting them at greenhouse. After fixation with FAA70%, the samples were dehydrated in a graded ethanol series and infiltrated overnight in metracrilate resin, and finally embedded in resin. It was verified the endogenous origin of adventitious root primordia from vascular cambium, and in some cases, the formation and proliferation of calli at the proximal end of the mini-cuttings within 8 to 12 days

In vitro culture of Lippia filifiolia Mart. (Verbenaceae): leaf anatomy, and effect of light irradiances and growth regulators

O gênero Lippia (Verbenaceae) possui importância econômica devido aos diferentes usos do óleo essencial presente em suas espécies, que ocorrem em grande número no Brasil. Lippia filifolia Mart. & Schau. é endêmica da Cadeia do Espinhaço, em Minas Gerais, e está ameaçada de extinção. Plantas estabelecidas in vitro demonstraram que a espécie é sensível à mudanças de ambiente, durante o processo de aclimatação. O primeiro objetivo deste trabalho foi avaliar o cultivo in vitro de L. filifolia, analisando a influência de níveis de irradiância e de meios de cultivo suplementados com diferentes reguladores de crescimento, visando subsidiar a produção de plantas mais tolerantes à aclimatação. Ápices caulinares foram cultivados nos meios MSO, MS + ANA (0,1 mg L -1 ), MS + BAP (0,5 mg L -1 ), MS + ANA (0,1 mg L -1 ) + BAP (0,5 mg L -1 ) e, submetidos aos níveis de irradiância 40, 104 e 172 μmol m -2 s -1 . Interações significativas entre as variáveis níveis de irradiância e meios de cultivo foram obtidas para as características concentração de carotenóides, crescimento em altura, número de brotações e área foliar. As clorofilas a, b e totais foram influenciadas somente pela irradiância, diminuindo a concentração de acordo com o aumento da irradiância. O fator meio de cultivo influenciou o número e o tamanho das raízes, o peso de matéria fresca da parte aérea e a concentração de antocianinas. Não houve interação para as características peso de matéria fresca e seca do sistema radicular e peso de matéria seca da parte aérea, no entanto, os fatores irradiância e meio de cultivo, analisados isoladamente, foram significativos para tais características. Os níveis de irradiância e os meios de cultivos utilizados influenciaram no desenvolvimento da parte aérea, mas, não comprometendo a sobrevida da planta no decorrer do experimento. As variações nos níveis de irradiância não influenciaram a biossíntese de antocianinas, demonstrando que as condições a que L. filifolia foi submetida, não induziram elevados níveis de estresse para as plantas. O segundo objetivo deste trabalho foi caracterizar anatomicamente, mediante microscopia de luz e eletrônica de varredura, a folha de L. filifolia cultivada in vitro, e identificar por técnicas histoquímicas, as principais substâncias presentes no órgão. As avaliações histoquímicas foram conduzidas em material fresco e em amostras incluídas em resina sintética. A estrutura foliar segue o padrão descrito para outras espécies do gênero, todavia, apresentando características anatômicas, geralmente, relacionadas às plantas cultivadas in vitro, como cutícula delgada, grandes espaços intercelulares, ausência de tecidos de sustentação e folhas finas. Em ambas as superfícies epidérmicas ocorrem um grande número de tricomas tectores e secretores. Três tipos de tricomas secretores foram observados: o tipo I, caracterizado por 1-2 células basais, pedículo de 2-3 células e uma cabeça secretora elíptica, constituída por 4-8 células; o tipo II, possui base e pedículo unicelular e cabeça bicelular globular; e o tipo III possui base, pedículo e cabeça esférica todos unicelulares. Os testes histoquímicos confirmaram a presença de óleos essenciais nos tricomas secretores e por todo o mesofilo; de polissacarídeos no tricoma glandular tipo II; e sugere a presença de proteínas na substância secretada pelos tricomas glandulares. As reações para detectar alcalóides, compostos fenólicos, amido e ligninas foram negativas. A presença de substâncias lipofílicas, dentre elas os óleos essenciais e as oleoresinas, evidencia a grande importância do gênero. A estrutura foliar segue os padrões relatados para a família, contudo, apresentando as características anatômicas relacionadas ao cultivo in vitro. Estes resultados podem contribuir para melhor compreensão do comportamento da espécie durante o processo de aclimatação.The genus Lippia (Verbenaceae) has great economical importance due to different applications of the essential oils present in several species occurring in Brazil. Lippia filifiolia Mart. & Schau. is an endemic species of the “Serra do Espinhaço”, Minas Gerais State, Brazil, and is considered as an endangered species. Following to the establishment and in vitro propagation of the species, it proved to be sensitive to the environmental changes that acclimatization process brings about. This way, the present study was conducted to evaluate histological and histochemical aspects of in vitro grown plants, and the influence of irradiance levels and growth regulators on in vitro culture performance of L. filifolia, aiming to obtain plants more tolerant to the acclimatization process. For anatomical studies leaf samples were characterized under photonic and scanning electron microscopy. The histochemical analyses were carried out using both fresh and hystoresin embedded samples. Apical segments were cultured onto a semi-solid MS-based medium supplemented with either NAA (0.1 mg L -1 ), BAP (0.5 mg L -1 ), and NAA (0.1 mg L -1 ) plus BAP (0.5 mg L -1 ), and submitted to three irradiance levels (40, 104, and 172 μmol m -2 s -1 ). Significant interactions between irradiance levels and culture were achieved for carotenoid content, plant height, average shoot number and leaf area. The contents of chlorophylls ‘a’ and ‘b’ were affected only by irradiance, lessening their concentrations with increasing irradiance levels. The growth regulator composition influenced the number and average size of the roots, the fresh mass of the aerial parts, and the anthocyanin concentration. For fresh and dry root weight and aerial fresh weight there was no interaction between irradiance levels and growth regulator combinations, although when analyzed isolated they influenced the measured characteristics. The irradiance levels did not affect carotenoid biosynthesis as revealed by carotenoid contents with increasing irradiance levels, suggesting that the species tolerates higher irradiance levels without any prejudice to the development, and may reflect possible positive effects during acclimatization. The leaf structure fits on the previously described pattern for the family, however, presenting thin cuticle and mesophyll size, large intercellular spaces, absence of supporting tissue, though consistent with those induced by in vitro conditions. In both epidermis surfaces there are a great number of tector and secretory trichomes. The latter presented three types: type I, formed by 1-2 basal cells, 2-3 pedicel cells, and an elliptical secretory head with 4-8 cells; type II, posses unicellular base and pedicel, and a globular bicellular head; type III, has base, pedicel, and a spherical head, all unicellular. The histochemical tests confirmed the presence of essential oils within secretory trichomes and spread throughout the mesophyll; polysaccharides in glandular trichomes type II; and suggest the presence of proteins in the secreted substance by glandular trichomes. The specific reactions for alkaloids, phenolic compounds, starch and lignins were negative. The presence of lypophilic substances, among them, essential oils and oleoresins, evidenced the great importance of the genus. The results may contribute for further work on acclimatization attempts of the species.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio

Grafting and propagation in vitro of fafia [Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen]

Pfaffia glomerata, popularmente conhecida como Ginseng brasileiro, é uma importante espécie medicinal cuja demanda no mercado e a forma de extrativismo levaram a sua inclusão na lista de espécies prioritárias para a conservação. Apresenta grande diversidade genética entre suas populações naturais, sendo essa variabilidade tanto na produção de biomassa das raízes, órgão de interesse na espécie, quanto na concentração de princípio ativo (β-ecdisona). Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivos: (a) avaliar a eficiência da enxertia in vitro na propagação de dois acessos de Pfaffia glomerata, visando a estabelecer combinação compatível entre um acesso de elevada (2202) e um de baixa produção do princípio ativo (2209), para aumentar a produção do composto de interesse comercial; e (b) analisar o potencial fotoautotrófico de P. glomerata propagadas in vitro, comparando-se parâmetros fisiológicos e estruturais das plantas propagadas sob condições heterotróficas, fotomixotrófica e fotoautrófica. Na enxertia in vitro foram utilizados segmentos internodais como hipobioto e ápice caulinar como epibioto, de plantas cultivadas in vitro, para estabelecer as combinações recíprocas entre os acessos utilizados, autoenxertia (controle) e testemunhas (plantas sem enxerto). As avaliações foram realizadas quanto ao percentual de pegamento e características de crescimento dos enxertos durante a etapa in vitro (aos 30 dias) e quanto à sobrevivência e desenvolvimento das plantas enxertadas, tanto na condição in vitro quanto ex vitro, sendo monitoradas por 360 dias após a enxertia. Em toda a etapa de aclimatização foram analisados parâmetros fisiológicos como teor de pigmentos cloroplastídicos, fluorescência da clorofila a e taxa fotossintética. As regiões de conexões de todos os tratamentos que envolveram enxertia foram analisadas histologicamente, nos períodos de 7, 14, 21, 28, 35, 70 e 100 dias de cultivo após a enxertia in vitro. O índice de pegamento da enxertia variou de regular à excelente em 80% das plantas em todas as combinações. As plantas enxertadas apresentaram menor média de crescimento in vitro em relação às testemunhas, porém o estabelecimento e o desenvolvimento dos enxertos in vitro e ex vitro não ficaram comprometidos. Foram observadas mortalidade e diferenças no crescimento entre os tratamentos somente na fase de estabelecimento in vitro. Analisando os padrões fisiológicos não foram detectadas diferenças estatísticas entre os tratamentos, no entanto, considerando as condições de cultivo a que foram submetidas, a casa de vegetação foi o melhor ambiente. Em condição de campo foi notável a diferença na fenologia dos dois acessos utilizados, principalmente em relação à produção de raízes e inflorescências, bem como na susceptibilidade ao ataque de insetos. As plantas que apresentaram maior concentração do princípio ativo nas folhas foram constituídas pelo acesso 2202; estas também apresentaram maior número de danos ocasionados pelo ataque de insetos na parte aérea. O acesso considerado o maior produtor de princípio ativo foi susceptível ao ataque de nematóides e apresentou sintomas de galhas, enquanto o outro acesso mostrou-se resistente. Os nematóides influenciaram a produção do princípio ativo nas raízes, mas não comprometeram o desenvolvimento das plantas. A enxertia proporcionou maior concentração do princípio ativo quando a planta foi constituída pelo acesso 2202 como epibioto e pelo acesso 2209 como hipobioto, comprovando as interações fisiológicas existentes entre os componentes da enxertia. As análises anatômicas indicaram que a formação do calo na região de união foi resposta imediata à injúria, e a reconexão vascular das plantas enxertadas ocorreu aos 21 dias após a realização da enxertia. Não houve diferença estrutural no processo de cicatrização entre os tratamentos. Os resultados indicaram a eficiência da aplicação da enxertia in vitro para estabelecer diferentes combinações de acessos de P. glomerata e obter maior concentração de β-ecdisona nas raízes. (b) Foram utilizados segmentos nodais para propagação em meio contendo 0 e 30 g L-1 de sacarose, combinado com tipos de vedação: 1. uma camada de filme plástico de PVC transparente (PVC); 2. tampa rígida de polipropileno autoclavável (TSO); 3. tampa rígida de polipropileno autoclavável com um orifício (T1O); e 4. TR com dois furos (T2O), cobertos por membranas permeáveis a trocas gasosas. O experimento foi mantido em sala de crescimento, à temperatura de 25 ± 2 ºC, sob fotoperíodo de 16 horas com irradiância de 50 µmol m-2 s-1. Foram observadas diferenças morfológicas significativas entre os tratamentos; as plantas cultivadas na presença de sacarose e de membrana apresentaram-se mais vigorosas. No entanto, analisando os padrões de crescimento, as plantas cultivadas na ausência de sacarose e na presença de membranas não diferiram estatisticamente dos demais tratamentos cultivados heterotroficamente. A sacarose influenciou as respostas fisiológicas, sendo encontrados maiores teores de pigmentos cloroplastídicos e maior quantidade de massa seca na presença desse carboidrato, enquanto que a taxa fotossintética foi maior na ausência de sacarose. A análise estrutural da folha demonstrou a influência da fonte de carboidrato na formação das paredes celulares, na presença de tecido de sustentação e na diferenciação de feixes vasculares. As plantas cultivadas na ausência de sacarose e sem a membrana apresentaram estômatos mal formados e células hipertrofiadas, enquanto que, na presença da fonte de carboidrato, independente do tipo de tampa utilizada, as folhas apresentaram organização bem definida. As plantas cultivadas sem sacarose e com duas membranas apresentaram organização típica das plantas cultivadas in vitro. No entanto, esse tratamento apresentou maior área foliar entre os tratamentos, e seu crescimento não ficou comprometido. Portanto, P. glomerata apresenta potencial para propagação fotoautotrófica.Pfaffia glomerata, popularly known as Brazilian Ginseng, is an important medicinal species whose market demand and extractivism form led to its inclusion in the priority conservation species list. It presents great genetic diversity among its natural populations, being this variability expressed both in root biomass production, organ of interest of the species, as in the active principle content (β-ecdysone). Thereby, the present work aimed: (a) to evaluate in vitro micrografting efficiency in two P. glomerata accessions to establish a compatible combination between a low- (2202) and a high-producing (2209) β-ecdysone accessions, in order to increase the production of the commercial interest compound; and (b) to evaluate the photoautotrophic capacity of P. glomerata propagated in vitro by comparison of physiological and structural parameters under heterotrophic, photomixotrophic and photoautotrophic conditions. In in vitro micrografting, internodal segments and stem apexes, obtained from in vitro propagated plants, were used as rootstock and as scion, respectively, in order to establish reciprocal combinations between the accessions, self-micrografting, and comparisons with non-micrografted counterparts. Evaluations were made concerning the connection percentage and growing features of graftings during in vitro stage (at 30 days) and survival and growing of micrografted plants both in vitro as in ex vitro conditions, being monitored throughout 360 days after micrografting. The acclimatization process was monitored by physiological parameters, such as chloroplastidic pigments tenors, chlorophyll fluorescence, and photossynthetic rates. The time course of grafting connections was monitored by histological analyses in the periods of 7, 14, 21, 28, 35, 70 and 100 days after the in vitro grafting. Well-formed micrografting connections achieved indexes varying from regular to excellent in 80% of plants in all combinations. The micrografted plants had lower in vitro growth rates as compared to the non-grafted ones. Mortality rates (2.5-17.5%) were only observed during the phase of in vitro establishment. Analyzing the physiological patterns statistical differences were not detected among the treatments, however considering the cultivation conditions which plants were submitted, the greenhouse was the best environment tested. Under field conditions, the phenology difference between both accessions tested was very expressive, especially concerning root and inflorescence production, as well as susceptibility to insects attack. Accession 2202 plants presented higher active principle concentration in leaves, and higher number of injuries resulting from insect attack to the shoots. The accessions considered the greatest active principle producer was susceptible to nematode attack and exhibited gall symptoms, while the other access was resistant. Interestingly, the nematodes positively influenced β-ecdysone production in roots, but did not commit plants development. Micrografting promoted higher active principle concentration when constituted by accession 2202 as scion and accession 2209 as rootstock, proving the existence of physiological interactions between grafting components. Anatomical evaluations indicated that formation of calli in graft union region occurred as an immediate response to injury, and vascular reconnection of graftings occurred 21 days after micrografting performance. There was no structural difference in healing process among treatments. Results indicated efficiency of in vitro micrografting application in establishing different accession combinations of P. glomerata and obtainment of higher concentrations of β- ecdysone on roots. Nodal segments were used for propagation in sucrose-containing (0 to 30 g L-1) medium combined with closure types: 1. one polyvinyl chloride transparent film layer (PVC); 2. polypropylene rigid lid (LWH); 3. LWH with one orifice (L1H); and 4. LWH with 2 orifices (L2H) covered by gas exchanging permeable membranes. The experiment was maintained in growth room at 25 ± 2 °C under 16 hours of photoperiod with 50 µmol m-2 s-1 irradiance. Significant morphological differences were observed among treatments; plants cultivated with sucrose and membrane closure were the most vigorous. However, analyzing growing patterns plants cultivated without sucrose and with membranes closure did not differ statistically from other heterotrophic cultivation treatments. Sucrose influenced physiological responses, with highest content of chloroplastidic pigments and higher amount of fresh mass with this carbohydrate, while photosynthetic rates were higher in sucrose-lacking medium. Leaf structural analysis demonstrated influence of carbohydrate source on cell wall formation, supporting tissues and vascular bundles differentiation. Plants cultivated without both sucrose and membrane closure presented poorly formed stomata and hypertrophic cells, while with this carbohydrate source, despite closure types used, leaves presented well defined organization. Plants cultivated without sucrose and with two membranes closure presented typical in vitro organization. However, this treatment presented the highest leaf area between treatments, without growth compromising. Therefore, P. glomerata has potential for photoautotrophic propagation.Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidad

Morfoanatomia da rizogênese adventícia em miniestacas de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla

O presente estudo teve como objetivo principal a caracterização morfoanatômica da rizogênese adventícia de miniestacas de quatro clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla. As miniestacas foram coletadas de minicepas estabelecidas em minijardim clonal, conduzido em sistema semi-hidropônico em canaletas com fertirrigação. Para a caracterização histológica do processo de rizogênese das miniestacas foram coletadas amostras teciduais aos 0, 1, 2, 4, 6, 8, 10 e 12 dias após o estaqueamento em casa de vegetação climatizada, para enraizamento. As amostras foram fixadas em FAA70%, desidratadas em série etílica e incluídas em metacrilato. Os resultados revelaram a origem endógena de primórdios radiculares a partir do câmbio vascular e, em alguns casos, a proliferação e a formação de uma massa de células desorganizadas (calos) em miniestacas dos clones avaliados, entre 8 e 12 dias de idade.The present work aimed to accomplish the histological analysis of the events involved in the adventitious rooting pattern of four Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla clones. The mini-cuttings were collected from a mini-stump and the rooting experiments were set up under mini-hedge indoor semi-hydroponics by means of intermittent flooding fertirrigation. For histological analyses, the proximal ends of the mini-cuttings were collected after 0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, and 12 days after planting them at greenhouse. After fixation with FAA70%, the samples were dehydrated in a graded ethanol series and infiltrated overnight in metracrilate resin, and finally embedded in resin. It was verified the endogenous origin of adventitious root primordia from vascular cambium, and in some cases, the formation and proliferation of calli at the proximal end of the mini-cuttings within 8 to 12 days

Foliar anatomy and histochemistry in seven species of Eucalyptus

This work aimed to describe the foliar anatomy of seven species of Eucalyptus, emphasizing the characterization of secretory structures and the chemical nature of the compounds secreted and /or present in the leaves. Anatomical characterization and histochemical evaluation to determine the nature and localization of the secondary compounds were carried out in fully expanded leaves, according to standard methodology. Anatomical differences were verified among the species studied, especially in E. pyrocarpa. Sub-epidermal cavities were the only secretory structures found in the seven species studied, with higher density in E. pellita and lower in E. pilularis. The following compounds were histochemically detected: lipophilic compounds, specifically lipids of the essential or resin-oil type and sesquiterpene lactones found in the lumen of the cavities of the seven species; and hydrophilic compounds, of the phenolic compound type found in the mesophyll of all the species studied and on the epidermis of some of them. The results confirmed the complexity of the product secreted by the cavities, stressing the homogeneous histochemistry nature of these compounds among the species. However, the phenolic compounds results may be an indication of important variations in adaptations and ecological relations, since they show differences among the species

Protocolo para extração de pigmentos foliares em porta-enxertos de videira micropropagados

O presente trabalho teve por objetivo o desenvolvimento de um protocolo para extração de pigmentos foliares em dois porta-enxertos de videira, Vitis vinifera x V. rotundifolia e V. riparia. Nesse sentido, foram estudados três métodos de extração de pigmentos foliares para plantas cultivadas in vitro e aclimatizadas. Para isso, foram realizados dois experimentos no esquema fatorial 3 x 3, sendo três métodos de extração (DMSO com incubação por 24 horas,DMSO com incubação por 48 horas e acetona 80%) e número de discos foliares (quatro, cinco e seis) com cinco repetições por tratamento, sendo mensurados os conteúdos de clorofila a, b, totais e de carotenóides. O método de extração de pigmentos foliares baseado em DMSO demonstrou ser tão eficiente quanto o com acetona 80% para a extração de clorofila a e mais eficiente na extração de clorofila b para Vitis vinifera x V. rotundifolia cultivada in vitro e apresentou melhores resultados na extração de clorofilas a e b para ambos os cultivares na fase de aclimatização.The present work aimed to establish a protocol for extraction of leaf pigments of two grapevine rootstock varieties, Vitis vinifera x V. rotundifolia and Vitis riparia. Three leaf pigment extraction methods were evaluated for in vitro grown plants and those acclimatized. The experiments followed a factorial design 3 x 3, considering three extraction methods (incubation with DMSO for 24 h, incubation with DMSO for 48 h, and 80% acetone ) and number (four, five and six) of 5 mm diameter leaf disks, with five replicates each treatment. a, b, and total chlorophyll and carotenoid levels were quantified. DMSO proved to be as efficient as 80% acetone to extract chlorophyll a, and more efficient to extract chlorophyll b from in vitro cultured Vitis vinifera x V. rotundifolia , and also presented better results for extraction of chlorophyll a and b for both acclimatized cultivars

In vitro organogenesis from root culture segments of Bixa orellana L. (Bixaceae)

The organogenic potential of root explants derived from cultured seedlings of Bixa orellana L. (annatto) was investigated in response to different incubation conditions and either 4.44 μM 6-benzyladenine, 4.54 μM Thidiazuron, or 4.56 μM Zeatin. Explants cultured in liquid media with agitation generally showed better development of adventitious buds versus explants cultured on semi-solid media. The most adventitious buds developed from explants cultured in liquid media under a 16-h photoperiod. Use of Zeatin and Thidiazuron promoted the development of more adventitious buds than 6-benzyladenine but morphological abnormalities among regenerating shoots and plants were observed. Fewer adventitious buds developed from explants cultured in liquid media supplemented with 6-benzyladenine, but the buds gave rise to the highest percentage of morphologically normal regenerated plants. Histological analyses showed that adventitious buds originated from cell proliferation within the pericycle, opposite the protoxylem poles of the explant. Seedling root tissue is useful for in vitro propagation of B. orellana

Biochemical and morpho-anatomical analyses of strawberry vitroplants hyperhydric tissues affected by BA and gelling agents

In vitro propagation has become an effective practice for large-scale production of strawberry plants. The objective of this study was to evaluate the hyperhydricity and the multiplication capacity of two strawberry varieties (Fragaria x ananassa Duch. 'Dover' and 'Burkley') propagated in vitro. Plants maintained in MS medium supplemented with 1.0 mg L-1 BA were individualized and transferred to the same medium solidified with Agar (6.5 g L-1) or Phytagel® (2.5 g L-1) and BA at different concentrations (0; 0.5; 1.0; 2.0 and 3.0 mg L-1). Biochemical and anatomical analyses were carried out, as well as the analysis of the morphological hyperhydricity characteristics. The analysis of data showed: a) the increase in cytokinin concentration increased hyperhydricity frequency in both varieties; b) at concentrations up to 2.0 mg L-1 BA, the replacement of Agar by Phytagel® induced a higher formation of hyperhydric shoots; and c) the addition of BA induced oxidative stress, which is characterized by increased antioxidant activity and lipid peroxidation, as well as alterations at the cellular level, such as malformation of stomata and epidermal cells. In conclusion, the culture medium containing 0.5 mg L-1 BA solidified with Agar provided lower hyperhydricity percentages in association with higher rates of shoot proliferation in strawberry.A propagação in vitro tem se destacado como uma técnica efetiva na produção em larga escala de plantas sadias de morangueiro. Neste trabalho estudamos a hiperhidricidade associado a capacidade de multiplicação in vitro na propagação de duas variedades de morangueiro (Fragaria x ananassa Duch. "Dover" e "Burkley"). Plantas mantidas em meio de cultura MS, suplementadas com 1.0 mg L-1 de BA fora individualizadas e transferidas para o mesmo meio com Ágar (6.5 g L-1) ou Phytagel® (2,5 g L-1) e BA em diferentes concentrações (0; 0,5; 1,0; 2,0 e 3,0 mg L-1). Foram realizadas análises bioquímica e anatômicas, além da caracterização morfológica do material hiper-hídrico. A análise dos dados mostrou: a) o incremento na concentração de citocinina aumentou a freqüência de hiper-hidricidade para ambas as variedades; b) concentrações maiores que 2,0 mg L-1 de BA, com a substituição do Ágar pelo Phytagel® induziu a maior formação de ramos hiper-hídricos; e c) a adição de BA induziu o estresse oxidativo, caracterizado pelo incremento da atividade antioxidante e peroxidação de lipídeos, bem como alterações a nível celular, como má formação dos estômatos e células epidérmicas. Concluindo, o meio de cultura contendo 0,5 mg L-1 de BA solidificado com Ágar promoveu menor porcentagem de hiper-hidricidade associado com maiores taxas de proliferação de gemas em morangueiro