AVALIAÇÃO DA PRESENÇA DE Sporothrix spp. EM SOLO DE ÁREA HIPERENDÊMICA PARA ESPOROTRICOSE NO EXTREMO SUL DO BRASIL

O aumento de casos de esporotricose zoonótica tornou-se um problema de saúde pública em áreas hiperendêmicas para a doença em felinos. O envolvimento dos gatos domésticos nesta transmissão e o contato contínuo destes animais com o solo sugerem que o ambiente possa ser uma importante fonte e/ou reservatório de fungos Sporothrix spp. Assim, este estudo objetivou avaliar a presença de fungos do complexo Sporothrix em amostras de solo provenientes de locais de acesso de felinos infectados no sul do Brasil. Foram coletadas amostras de solo de residências com felinos com esporotricose, de locais próximos a estas residências e também de locais públicos, totalizando 101 amostras. Estas foram processadas pela técnica de plaqueamento direto e incubadas a 25°C por até 15 dias. Dezessete amostras foram paralelamente submetidas a extração de DNA (kitNORGEN BIOTEK CORP(r)) e técnica de PCR espécie-específico e Nested-PCR. Embora em nenhuma amostra avaliada tenha sido detectada a presença de Sporothrix spp., seja por cultivo ou por biologia molecular, este estudo não descarta o papel do ambiente na tríade do processo infeccioso (solo - animal - humano), sendo necessários outros estudos ampliando área de abrangência, volume, tipo e método de coleta das amostras, bem como técnicas de detecção.Palavras-chave: Ambiente; geofílico; S. brasiliensis; S. schenckii

Avaliação do uso da resazurina em teste de suscetibilidade in vitro frente a Sporothrix brasiliensis

A técnica de microdiluição em caldo, que permite determinar a concentração inibitória mínima (CIM) dos fármacos frente aos microrganismos, é considerada padrão ouro para avaliação do perfil de suscetibilidade fúngica in vitro. Considerando que a leitura dos resultados é realizada pela visualização do crescimento fúngico, e que a utilização de indicadores de crescimento microbiano poderia otimizar essa leitura, o estudo teve como objetivo avaliar o uso da resazurina como indicador do crescimento de Sporotrhix brasiliensis em testes de microdiluição em caldo. Cinco isolados clínicos (nas fases leveduriforme e filamentosa) foram testados frente ao itraconazol (ITC – concentrações de 0,0313 a 16 µg/mL) a partir da técnica de microdiluição em caldo, utilizando a resazurina nas concentrações de 0,01% e 0,002%. A leitura dos resultados foi realizada após 24, 48 e 72 horas de incubação, e a CIM dos poços com resazurina foi considerada como sendo a menor concentração sem modificação na coloração, enquanto que a CIM do controle, foi considerada a menor concentração de fármaco capaz de inibir o crescimento fúngico. Os resultados da mudança da cor da resazurina foram comparados com os resultados sem acréscimo de resazurina. A CIM do ITC na microdiluição clássica frente aos isolados testados variou de 0,0625 a 1 µg/mL, porém, com o uso da resazurina como indicador de crescimento fúngico, independente da concentração testada, a CIM foi ≤0,0625 µg/mL. O estudo evidencia que a resazurina não é eficaz como indicador de crescimento de S. brasiliensis visto que não modificou a coloração do meio de cultivo, mesmo na presença visível de crescimento fúngico, sendo portanto contra indicada para uso em testes de suscetibilidade in vitro frente a este microrganismo

Desconhecimento de profissionais e ações de extensão quanto à esporotricose no extremo Sul do Brasil

Atualmente o aumento crescente e alarmante de casos de esporotricose na região Sul do Rio Grande do Sul (RS) acarreta um grave problema para a saúde pública local. Nesta linha, estudos que visem o conhecimento sobre a doença nesta região tornam-se de extrema importância para a compreensão do panorama epidemiológico. Tendo isto em vista, o estudo teve como objetivo avaliar o conhecimento de profissionais da saúde sobre a esporotricose em área hiperendêmica e relatar as atividades de extensão que estão sendo realizadas neste âmbito. Foram aplicados questionários semi-estruturados a profissionais de saúde humana, de dois municípios do sul do RS, totalizando 91 entrevistados. Apesar da alta incidência da doença na região, 26% dos profissionais não conheciam a doença, e cerca de 40% apontaram erroneamente ou desconheciam o agente etiológico (38%) e a principal apresentação clínica da esporotricose (45%). Considerando a necessidade da suspeição clínica para o diagnóstico e correto tratamento da doença, ações de capacitação foram realizadas abrangendo profissionais da saúde humana e animal. Levando em consideração a alta endemicidade da doença na região, faz-se necessária uma continuidade dessas ações de extensão, com intuito de conscientização dos profissionais e da população quanto ao grave cenário atual da esporotricose, buscando frear o atual aumento do número de casos da doença nesta região

Anti-Aspergillus fumigatus IgG in patients with bronchiectasis and its relationship with clinical outcome

Aspergillosis is a mycosis, most commonly afecting the airways. This mycosis can worsen the clinical condition of patients with concurrent lung diseases. We assayed for the presence of serum anti-A. fumigatus IgG in bronchiectasis patients from a tertiary hospital in south Brazil and evaluated the relationship with clinical outcome. Thirty-one patients with bronchiec tasis, without cystic fbrosis, were included. Clinical and epidemiological data were collected from all participants. Positive serological tests were detected in 13% (4/31) of the patients. The mortality rate for the year following the assay was, in the seropositive group, 75% (3/4), whereas in the seronegative group, 15% (4/27). An illustrative case is also shown and discussed. Our study highlights the diagnostic challenge and the possible impact of Aspergillus infection on these patients, indicating the necessity of more and larger investigations in the feldinfo:eu-repo/semantics/publishedVersio

Integration and expression of ltb-r1 in tobacco plants

During the past decades, the development of genetically modified plants became a consolidated reality. Taking advantage of the genetic engineering process, it is possible to obtain modified plants to use as bioreactors in the production of tissue or organs expressing antigens which can be easily used as vaccines. The plant-based expression systems as tomato and lettuce, which attend as models for that process, present innumerous advantages such as conservation of eukaryotic machinery, which promote pos-translational modifications, possibility of large-scale production and development of safer and economically more attractive vaccines. Taking use of that strategy, the Swine mycoplasm hyopneumoniae (SMP) disease can be one important and possible target to either be eradicated or controlled. The SMP, caused by fastidious bacterium Mycoplasma hyopneumoniae, is one of the most important respiratory disease in swine breeding, due to its very high prevalence coupled with associated losses all over the whorld, and has in the recombinant DNA technology a viable alternative in the development of more effective and safe vaccines The objective of my work was to genetically manipulate tobacco plants in order to use them as bioreactor in the production of an antigen against PMS. Tobacco leaves and internodes were cultured in different concentrations of BAP and AIA hormones. The best regeneration results for both explants were seen with 1,5mg.L-1 BAP and 0,1mg.L-1 AIA. The selection test with the kanamycin antibiotic appeared to be highly effective, showing a total inhibition of regeneration with 30 mg.L-1 and 100 mg.L-1 for leaves and internodes respectively. The recombinant colonies of A. tumefaciens, containing ltb-r, were co-cultivated with the internodes and leaves from plants germinated in vitro. The next step, the explants were transferred to the selection medium in order to induce the selection of the putatively transformed cells. The genomic DNA from regenerated and putatively transformed plants were extracted and amplified by PCR, where it was detected the presence of a band referent to ltb r1. The analyses of the integration and the transcription of ltb-r1 were carried out by Southern blot and RT-PCR, respectively. In both techniques, it was possible to confirm the presence of one band which corresponds to the expected size of ltb-r1, supporting the integration and expression of the gene. However, with the tests used here, it was not possible to detect with accuracy the recombinant proteinNas últimas décadas, o desenvolvimento de plantas geneticamente modificadas tornou-se uma realidade consolidada. Nesse sentido, utilizando-se da engenharia genética, é possível obter plantas servindo como biorreatores na produção de tecidos ou orgãos expressando antígenos que podem ser facilmente utilizados como vacina. Os sistemas de expressão em plantas como tomate, alface, tabaco que servem como modelos desse processo, apresentam várias vantagens, entre elas, a conservação da maquinaria eucariótica que promove as modificações póstraducionais das proteínas e ainda a possibilidade de produção em larga escala. Dentro desta estratégia de produção de proteínas, pode-se citar a pneumonia micoplásmica suína (PMS), causada pelo agente Mycoplasma hyopneumoniae, uma das principais doenças de suínos que provoca elevadas perdas econômicas em todo mundo, e tem, na tecnologia do DNA recombinante, uma alternativa de desenvolvimento de vacinas mais efetivas. O objetivo do trabalho foi transformar plantas de tabaco para sua utilização como biorreator na produção de um antígeno vacinal contra a PMS. Folhas e entrenós foram cultivados em diferentes concentrações de BAP e AIA. As melhores taxas de regeneração foram encontradas utilizando 1,5 mg.L-1 de BAP e 0,1 mg.L-1 de AIA para segmentos de folhas e entrenós. O teste de seleção utilizando canamicina mostrou-se altamente eficiente, obtendo-se a supressão da regeneração com 30 mg.L-1 e 100 mg.L-1 para segmentos de folhas e entrenós, respectivamente. Colônias recombinantes de A. tumefaciens contendo ltb-r1 foram co-cultivadas com entrenós e segmentos foliares de plantas germinadas in vitro. Após esta etapa, os explantes foram transferidos para meios de seleção, visando selecionar células possivelmente transformadas. O DNA genômico das plantas regeneradas e putativamente transformadas foi extraído e amplificado por PCR, na qual foi possível visualizar uma banda referente ao ltb-r1. A detecção da integração e transcrição do gene foi realizada por Southern blot e RTPCR, respectivamente. Em ambas as técnicas, foi possível verificar a presença de uma banda do tamanho esperado para ltb-r1, demonstrando assim, a integração e expressão do gene. Entretanto, não foi possível detectar com precisão, através dos testes utilizados, a proteína recombinante

Cryptococcus spp. em excretas de Columba livia (pombos domésticos) provenientes de um hospital universitário no Sul do Brasil

RESUMO A criptococose é uma micose primariamente pulmonar, sendo adquirida por meio de inalação de propágulos fúngicos infectantes encontrados no ambiente. Um dos principais agentes etiológicos da criptococose é a espécie Cryptococcus neoformans , que apresenta distribuição mundial. O objetivo desse trabalho foi pesquisar a ocorrência de Cryptococcus spp. em excretas de Columba livia (pombos domésticos) encontradas na área externa do prédio do Hospital Universitário Dr. Miguel Riet Correa Junior, centro de referência para o tratamento da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida na região sul do estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Durante um período de dez meses, foi coletado um total de 40 amostras de excretas secas da área acadêmica e da área hospitalar do Hospital Universitário. As excretas foram adicionadas de solução salina com cloranfenicol, homogeneizados em vórtex, semeados em ágar Níger e incubados a 25ºC com observações diárias até sete dias. A identificação do micro-organismo foi realizada por provas fenotípicas e bioquímicas. Das 40 amostras processadas e analisadas, 13 (32,5%) foram positivas para o isolamento de Cryptococcus spp., variando de 20.000 a 3.000.000 UFC/g de fezes. O isolamento desse fungo em um ambiente hospitalar é relevante em saúde pública, pois evidencia a exposição dos indivíduos que frequentam esse local a propágulos infectantes

Genetic diversity among accesses of paspalum urvillei steudel estimated by microssatelites and RAPD markers

Submitted by Ilno Conceição ([email protected]) on 2012-08-30T21:22:37Z No. of bitstreams: 1 Utilização de microssatélites e RAPD na caracterização molecular de acessos de Paspalum urvillei Steudel.pdf: 310097 bytes, checksum: 51ad059c3d2c4bf1e4483df2c419a6f7 (MD5)Approved for entry into archive by Gabriela Silva da Rosa([email protected]) on 2012-09-21T17:24:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Utilização de microssatélites e RAPD na caracterização molecular de acessos de Paspalum urvillei Steudel.pdf: 310097 bytes, checksum: 51ad059c3d2c4bf1e4483df2c419a6f7 (MD5)Made available in DSpace on 2012-09-21T17:24:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Utilização de microssatélites e RAPD na caracterização molecular de acessos de Paspalum urvillei Steudel.pdf: 310097 bytes, checksum: 51ad059c3d2c4bf1e4483df2c419a6f7 (MD5) Previous issue date: 2008Este estudo foi realizado com o objetivo de verificar a diversidade genética na coleção de acessos de P. urvillei do Departamento de Plantas Forrageiras e Agrometeorologia(DPFA) da Faculdade de Agronomia (UFRG) visando sua utilização em futuros trabalhos de seleção. Foram avaliados 64 acessos provenientes do Rio Grande do Sul, 1 de Xanxerê, Santa Catarina, três de Curitiba, Paraná, e 1 da Argentina. A diversidade genética foi analisada por meio de marcadores do tipo RAPD e SSR. Utilizaram-se dez primers para marcadores RAPD, o que possibilitou obter 56 bandas polimórficas e 11 grupos no dendrograma com similaridade média de 0,70. Na técnica de SSR, foram utilizados sete primers e obtidas 28 bandas polimórficas, formando sete grupos no dendrograma com similaridade média de 0,66. Ambos os marcadores foram eficientes para o agrupamento de acessos coletados. O uso de maior número de primers para gerar mais bandas polimórficas foi necessário para obtenção de fingerprints genômicos dos indivíduos similares. Os dendrogramas gerados neste estudo dão subsídios para futuros cruzamentos de gerações parentais contrastantes ou similares no melhoramento de Paspalum urvillei.The aim of this study was to estimate the genetic diversity among accesses of P. urvillei of Departamento de Plantas Forrageiras e Agrometeorologia (DPFA) of the College of Agronomy – UFRGS and to evaluate their use in selection programs. Sixty four accesses from different cities of the Southern Region of Brazil (Rio Grande do Sul, Santa Catarina and Parana States) and from Argentine were analyzed by RAPD and SSR molecular markers. Ten primers of RAPD markers were used and resulted in 56 polymorphic bands and 11 groups in a dendrogram with average similarity 0.70. Seven primers were used for the SSR technique and resulted in 28 polymorphic bands and seven groups in a dendrogram with average similarity 0.66. Both markers were efficient on grouping the accesses collected across the Southern region. A large number of primers was required to generate additional polymorphic bands to get genomic fingerprints of similar individuals. The dendrograms obtained from this study provided significant information for designing crossing strategies of parental generations in breeding programs of P. urvillei

Produção de matéria seca de ecótipos de Paspalum no Rio Grande do Sul

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Utilização de microssatélites e RAPD na caracterização molecular de acessos de Paspalum urvillei Steudel

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