In vitro activity of essential oil of Origanum vulgare L. in clinical isolates from Aspergillus spp

Aspergillus fumigatus, A. flavus e A. niger são os mais importantes agentes etiológicos da aspergilose, relevante micose aviária, com tratamento ineficaz e altas taxas de mortalidade. Em vista da importância da aspergilose, da necessidade de prospectar novos fármacos e do potencial terapêutico do óleo essencial de Origanum vulgare L. (OEO), o orégano, objetivou-se avaliar a sensibilidade in vitro de isolados clínicos de Aspergillus spp. em relação ao OEO. O óleo foi obtido por hidrodestilação em Clevenger, e a análise química realizada por cromatografia de massa (GC/MS). Observaram-se 15 diferentes compostos ativos, sendo 4-terpineol, hidrato de sabinene e timol os majoritários. Nos testes de microdiluição em caldo (Reference..., 2008), todos os isolados (n= 23) foram sensíveis ao OEO: A. fumigatus teve CIM entre 28,125mg/mL (0,1875%) e 450mg/mL (3,0%), A. flavus entre 112,5mg/mL (0,75%) e 450mg/mL, e A. niger 112,5mg/mL. CFM variou de 112,5mg/mL a 450mg/mL nos isolados de A. fumigatus, de 225mg/mL (1,5%) a 450mg/mL em A. flavus, e foi de 450mg/mL em A. niger. CIM e CFM foram idênticos em 6/14 isolados, o que demonstra que o óleo com a mesma concentração pode ter capacidade fungistática e fungicida. CIM 90 correspondeu à CIM máxima. Os resultados demonstram a atividade anti-Aspergillus do OEO, com CIM 90 de 450mg/mL (3%).Aspergillus fumigatus, A. flavus and A. niger are the most important etiological agents of aspergillosis, a relevant avian mycosis, with innefective treatment and high mortality rates. Due the importance of aspergillosis, the necessity of prospection of new drugs and the therapeutic potential of the essential oil of Origanum vulgare L. (OEO), popularly known as oregano, aims to evaluate the in vitro sensitivity of Aspergillus spp. opposing to OEO. The oil was obtained by hydrodistillation in Clevenger, and the chemical analysis performed by mass chromatography (GC/MS). 15 different active compounds were observed, being 4-terpineol (18.4%), sabinene hydrate (15.6%) and thymol (13.6%), the majority components. In the in vitro susceptibility test, all strains showed sensitivity to OEO, MIC of Aspergillus fumigatus ranged from 28,125mg/mL (0,1875%) to 450mg/mL (3,0%), A. flavus 112,5mg/mL (0,75%) to 450mg/mL, and A. niger 112,5mg/mL. MFC ranged from 112,5mg/mL to 450mg/mL in the A. fumigatus isolates, 225mg/mL (1,5%) to 450mg/mL in A. flavus, and 450mg/mL for A. niger. The MIC and FMC values were identical in 6/14 of the isolated subjects, demonstrating that the oil with the same concentration can have fungistatic and fungicidal capacity. The results demonstrates anti-Aspergillus activities of OEO with CIM90 de 450mg/mL (3%)

Antifungal action of essential oils of Origanum vulgare and Rosmarinus officinalis against isolates of Pythium insidiosum and Dermatophytes

This study aimed to determine the chemical composition and evaluate the antifungal essential oils of Origanum vulgare (oregano) and Rosmarinus officinalis (rosemary). The oils were analyzed by gas chromatography and identified by comparison with the retention time of standards. To evaluate the antifungal activity method was used in broth, and used nine isolates of dermatophytes and nine isolates of Pythium insidiosum from clinical cases in animals. The oils were subjected to a series of ten dilutions in logarithm base 2, in RPMI 1640, resulting in concentrations from 30 to 0, 03 μlmL-1. The microplates were incubated at 32°C for 72 h and susceptibility was expressed by the minimum inhibitory concentration (MIC). The main oil constituents R. officinalis were camphor (51.52%), verbenone (11.84%), 1,8-cineole (8.94%), myrcene (4.50%), α-terpineol (4.39%) and borneol (2.68%) and O. vulgare were 4-terpineol (27.67%), gamma-terpinene (4.10%), thymol (0.58%) and carvacrol (21.58%). For dermatophytes the MIC R. Officinallis ranged from 30 to 3 μ/lmL and O. vulgare varied from 3 to 0.3 μL/ml. In the case of P. insidiosum MIC R. Officinallis ranged from 3 to 1.5 μl/mL and O. vulgare varied from 3 to 0.75 μl/mL. According to the results obtained, it can be argued that the tested oils have antifungal activity on dermatophytes and P. insidiosum. The results should stimulate further research, especially in relation to P. insidiosum, as yet no effective treatment is available.O presente estudo teve como objetivos determinar a composição química e avaliar a ação antifúngica dos óleos essenciais de Origanum vulgare (orégano) e Rosmarinus officinalis (alecrim). Os óleos foram analisados por cromatografia gasosa e identificados por comparação com o tempo de retenção de padrões. A avaliação da atividade antifúngica foi realisado o método de microdiluição em caldo, sendo utilizados nove isolados de dermatófitos e nove isolados de Pythium insidiosum provenientes de casos clínicos em animais. Os óleos foram submetidos a uma série de dez diluições em logaritmo de base 2, no meio RPMI 1640, obtendo-se concentrações de 30- 0,03μl/mL. As microplacas foram incubadas a 32ºC por 72 h e a susceptibilidade foi expressa pela concentração inibitória mínima (CIM). Os principais constituintes dos óleos de R. oficinalis foram cânfora (51,52%), verbenona (11,84%), 1,8-cineol (8,94%), mirceno (4,50%), α-terpineol (4,39%) e borneol (2,68%) e para o O. vulgare foram 4-terpineol (27,67%), gama-terpineno (4,10%), timol (0,58%) e carvacrol (21,58%). Para os Dermatófitos o CIM do R. Officinallis variou entre 30 a 3 μl/ml e para o O. vulgare variou entre 3 a 0,3 μl/mL. No caso do P. insidiosum o CIM do R. Officinallis variou entre 3 a 1,5 μl/ml e para o O. vulgare variou entre 3 a 0,75 μl/mL. De acordo com os resultados obtidos, pode-se afirmar que o óleos testados apresentam atividade antifúngica em dermatófitos e P. insidiosum. Os resultados estimulam novos estudos, especialmente em relação a P. insidiosum, já que ainda não está disponível nenhum tratamento eficaz

In vitro and in vivo susceptibility of Pythium insidiosum to four essential oils from the Lamiaceae plant family and the proposal of a new inoculum for in vitro susceptibility testing

Pythium insidiosum is an aquatic oomycete and etiological agent of Pythiosis, an infectious, non-contagious, difficult-to-treat disease. It affects mammals that inhabit marshy and flooded areas. This study aimed to: a) evaluate and standardize an inoculum from P. insidiosum mycelial culture; b) evaluate P. insidiosum in vitro susceptibility to Origanum vulgare, Origanum majorana, Mentha piperita and Rosmarinus officinalis essential oils; c) investigate the antimicrobial activity of O. vulgare and M. piperita essential oils separately, associated and in combination with immunotherapy in the treatment of experimental Pythiosis. The inoculum was prepared from P. insidiosum mycelial culture and tested against azole antifungals. The results were compared to susceptibility tests by using zoospore standard inoculum against the same antifungals. The proposed inoculum showed susceptibility patterns comparable to standard inoculum, thus indicating that it can be a suitable method to evaluate oomycete susceptibility, particularly when it is not possible to obtain standard inoculum. The oils were analyzed by gas chromatography mass spectrometry. Essential oils main components were as follows: O. vulgare: carvacrol (93.10%); O. majorana: 4-terpineol (34.34%); M. piperita: menthone (57.53%); A. officinalis: 1.8-cineole (64.53%). Antimicrobial activity was determined by the broth microdilution method against 22 P. insidiosum isolates. The oils were subjected to serial dilutions, and 14-0.025mg/mL concentrations were obtained. O. marjorana, M. piperita and R. officinalis minimum inhibitory concentrations ranged from 0.11 to 3.5 mg/mL, and those for O. vulgare, from 0.05 to 1.75 mg/mL. The results showed that the tested essential oils had antimicrobial effect on P. insidiosum, with O. vulgare essential oil being the most active. The in vivo experiment was outlined from these results. Eighteen rabbits with experimental Pythiosis, divided into six groups of three animals, were used: group 1 control; group 2 was treated with Mentha piperita essential oil; group 3 was treated with Origanum vulgare essential oil; group 4 was treated with commercial immunotherapic; group 5 was treated with a combination of Mentha piperita and Origanum vulgare oils, and group 6 was treated with a combination of immunotherapy plus oils. The oils were formulated as topical cream and lesions were treated daily for 45 days; animals in groups 4 and 6 received an immunotherapy dose every 14 days. The results revealed that the evolution of lesions in groups 5 and 6 did not differ between each other, but differed from the other groups. Group 5 lesions increased 3.16 fold every day, whereas those in group 6 increased 1.83 fold, thus showing that the smallest lesion growth occurred when an combination of therapies was employed. This is the first study to use essential oils from plants and a combined oil therapy in theexperimental treatment of Pythiosis. It was demonstrated that the use of essential oils can be a viable alternative for skin Pythiosis treatment, particularly when used in combination with or associated to immunotherapy.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESPythium insidiosum é um oomiceto aquático e agente etiológico da pitiose, uma doença infecciosa, não contagiosa, de difícil tratamento e prognóstico desfavorável, que acomete mamíferos que habitam áreas pantanosas e alagadas. O presente estudo teve como objetivos: a) avaliar e padronizar um inóculo a partir de cultivo micelial de P. insidiosum; b) avaliar a suscetibilidade in vitro de P. insidiosum aos óleos essenciais de Origanum vulgare, Origanum majorana, Mentha piperita e Rosmarinus officinalis; c) investigar a ação antimicrobiana dos óleos essenciais de O. vulgare e M. piperita sozinhos, associados e em combinação com imunoterapia no tratamento da pitiose experimental. O inóculo foi confeccionado a partir de cultura micelial de P. insidiosum e testado frente a antifúngicos azólicos. Os resultados foram comparados aos testes de suscetibilidade empregando o inóculo padrão de zoósporos frente aos mesmos antifúngicos. O inóculo proposto mostrou padrões de suscetibilidade comparáveis ao inoculo padrão, indicando, portanto, que pode ser um método adequado para avaliar-se a suscetibilidade deste oomiceto, particularmente quando não é possível obter-se o inóculo padrão. Os óleos foram analisados por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa. Os componentes majoritários dos óleos essenciais foram os seguintes: O. vulgare: carvacrol (93,10%) e beta; O. majorana: 1,4-terpineol (34,34%); M. piperita: mentona (57,53%); R. officinalis: 1,8-cineol (64,53%). A atividade antimicrobiana foi determinada pelo método de microdiluição em caldo frente a 22 isolados de P. insidiosum. Os óleos foram submetidos a uma série de diluições, obtendo-se concentrações de 14 a 0,025mg/mL. As concentrações inibitórias mínimas para O. majorana, M. piperita e R. officinallis variaram de 0,11 a 3,5mg/mL e para O. vulgare de 0,05 a 1,75mg/mL. Os resultados evidenciaram que os óleos essenciais avaliados apresentaram ação antimicrobiana sobre P. insidiosum, ressaltando-se a melhor atividade do óleo essencial de O. vulgare. A partir destes dados delineou-se o experimento in vivo, no qual foram utilizados 18 coelhos com pitiose experimental, divididos em seis grupos de três animais sendo: grupo 1 controle; grupo 2 tratados com óleo essencial de M. piperita; grupo 3 tratados com óleo essencial de O. vulgare; grupo 4 tratados com imunoterápico Pitium Vac®; grupo 5 tratados com associação dos óleos de M. piperita e O. vulgare e grupo 6 tratados com associação dos óleos plus imunoterápico. Os óleos foram formulados em creme tópico e as lesões foram tratadas diariamente por 45 dias; os animais dos grupos 4 e 6 receberam uma dose do imunoterápico a cada 14 dias. Os resultados revelaram que a evolução das lesões dos grupos 5 e 6, não diferiram entre si, porém diferiram dos demais grupos. Evidenciou-se que as lesões do grupo 5 aumentaram 3.16 vezes a cada dia, enquanto àquelas do grupo 6, aumentaram 1.83 vezes, indicando o menor crescimento das lesões quando o tratamento empregou a combinação das terapias. Este estudo é pioneiro no tratamento da pitiose experimental empregando óleos essenciais de plantas e combinação de terapias com óleos em pitiose. Demonstrou que o emprego de óleos essenciais pode se constituir numa alternativa viável de tratamento da pitiose cutânea, particularmente quando utilizados em combinação ou em associação com imunoterapia

Exposure of Toxocara canis eggs to Purpureocillium lilacinum as a biocontrol strategy: an experimental model evaluation

Abstract Purpureocillium lilacinum is a nematophagous fungus used in biological control against some parasites, including Toxocara canis. This study researched the infectivity of embryonated T. canis eggs after exposure to the fungus P. lilacinum. T. canis eggs were exposed to P. lilacinum for 15 or 30 days and subsequently administered to Swiss mice (n=20). Control group consisted of mice who received T. canis embryonated eggs without fungal exposure. Forty-eight hours after infection, heart, lung, and liver from animals of each group were collected to assess larval recovery. The organs of mice that received embryonated eggs exposed to the fungus showed a lower average larval recovery (P<0.05) suggesting that exposure of T. canis eggs to P. lilacinum was able to reduce experimental infection. Under the evaluated conditions, the interaction time between the fungus and the parasite eggs was not a significant factor in larvae recovery. P. lilacinum may be considered a promising T. canis biological control agent. However, further studies are needed to determine a protocol for the use of this fungus as a biological control agent

Cutaneous candidiasis in a cebus apella (capuchins monkeys)

Submitted by Cristina Damasceno ([email protected]) on 2012-10-09T22:00:50Z No. of bitstreams: 1 Candidíase cutânea em Cebus apella (macaco prego).pdf: 383017 bytes, checksum: 2ca445166e43297f4fd7589a40e7e03e (MD5)Approved for entry into archive by Gabriela Silva da Rosa([email protected]) on 2013-01-29T11:57:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Candidíase cutânea em Cebus apella (macaco prego).pdf: 383017 bytes, checksum: 2ca445166e43297f4fd7589a40e7e03e (MD5)Made available in DSpace on 2013-01-29T11:57:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Candidíase cutânea em Cebus apella (macaco prego).pdf: 383017 bytes, checksum: 2ca445166e43297f4fd7589a40e7e03e (MD5) Previous issue date: 2008Leveduras do gênero Candida têm sido freqüentemente isoladas de animais domésticos e silvestres, entretanto, candidíase não tem sido reportada em primatas. Encaminhou- se à Faculdade de Veterinária, Departamento de Patologia Animal, um macaco-prego (Cebus apella) para necropsia, que vinha apresentando emagrecimento profundo e lesões ulcerativas de pele e mucosas. Fragmentos de pele e órgãos foram processados para histologia e corados com H.E. e Groccot. Para micologia, coletaram-se fragmentos de órgãos, exsudato e crostas da pele, sendo realizado exame direto e cultivo a 37oC. Macroscopicamente, o animal apresentava alopecia, caquexia e ulcerações cutâneas de 1-4 cm. Histologicamente, nas ulcerações, a derme continha infiltrado de mononucleares e proliferação fibroblástica. Mediante utilização de Groccot, encontraram-se hifas e/ou pseudo-hifas e blastoconídeos intralesionais. Em cultivos de crostas e exsudato, observaram-se colônias brilhantes, com superfície lisa e coloração branca a creme. A microscopia das colônias revelou células leveduriformes ovaladas ou alongadas, com brotamento unipolar, gram-positivas. No microcultivo em fubá, observaram-se blastoconídeos globosos terminais, com parede espessa e pseudomicélio abundante e ramificado, com formação de tubo germinativo em albumina de ovo, sendo a levedura classificada como Candida albicans. O estudo aborda o risco da infecção por micoses oportunistas como a candidíase em animais silvestres em cativeiro.Candida spp has been frequently isolated from domestic and sylvan animals, however, Candidiasis has not been reported in primates. One Cebus apella, with progressive thinning and ulcerative skin lesions and mucous, was necropsied. Fragments of tissue were collected and processed for histology. Coloration of H.E. and Groccot was made. For mycology was collected tissue, exsudate, and skin crusts. Direct exam was made, and samples cultivated at 37oC in agar Sabouraud with cloranfenicol and agarcorn. Macroscopically the animal presented; itself extremely thin with ulcerative lesions on the skin, ranging from 1 to 4 cm. Histologically, on dermis ulcerations, there was mononuclear infiltrate and fibroblastic proliferation. With Groccot, it was observed intralesionally hyphae and blastoconidia. The direct exam showed round and/or ovalate gram positive cells, compatible with yeast. The cultives showed shining colonies with a smooth surface, some of them with edges fringed and white-yellowish coloration. The colonies showed yeast cells with ovalate or alongate forms and sprouting unipolar on microscopy. With microcultive, it was found globosous blastoconidia, with wall thick and pseudohyfaes abundant and ramified. There was the formation of a germinative tube, confirming the C. albicans species. This study shows the risk of candidiasis in wildlife primates living on captivity