MULTIPLICAÇÃO E ALONGAMENTO IN VITRO DE CLONES HÍBRIDOS DE Eucalyptus globulus

http://dx.doi.org/10.5902/1980509821524Eucalyptus globulus hybrids represent an excellent alternative to the pulp and paper sector, because of gains in wood quality for pulp. However, these hybrids have shown recalcitrance to adventitious rooting. Thus, micropropagation is considered the technique for rejuvenating adult genetic materials, allowing its clonal propagation. This study evaluated the in vitro culture of three clones of Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus and three clones of Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus in relation to in vitro multiplication on MS medium supplemented with 0.5 mgL-1 BAP and 0,01 mgL-1 NAA. The effect of IBA concentrations (0.25; 0.50; 0.75 and 1.0 mg L-1) and MS and JADS culture media was evaluated on in vitro elongation. The clones differed during in vitro multiplication of shoots and they had an average multiplication rate of 3.0 shoot clusters in each subculture. The responses of the clones to different concentrations of IBA, as well as to MS and JADS culture media differed for elongation in vitro. The range between 0.40 and 0.80 mg L-1 AIB provided the highest number and length of in vitro elongated shoots and the best vigor of shoots.http://dx.doi.org/10.5902/198050982524Os híbridos de Eucalyptus globulus representam uma excelente alternativa para o setor de celulose e papel, em razão dos ganhos em qualidade da madeira para a fabricação de celulose. Entretanto, estes híbridos têm apresentado recalcitrância ao enraizamento adventício. Assim, a micropropagação é apontada como a técnica para o rejuvenescimento desses híbridos adultos, viabilizando a propagação clonal dos mesmos. O presente trabalho avaliou o cultivo in vitro de três clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus e de três clones de Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus, em relação à multiplicação in vitro, no meio MS suplementado com 0,5 mg L-1 de BAP e 0,01 mg L-1 de ANA, bem como o efeito das concentrações de 0,25; 0,50; 0,75 e 1,0 mg L-1 de AIB e dos meios de cultura MS e JADS no alongamento in vitro das brotações. Os clones diferiram quanto à multiplicação in vitro das brotações e apresentaram uma taxa de multiplicação média dos clones de 3,0 tufos de brotações em cada subcultivo, ao longo dos 25subcultivos realizados. No alongamento in vitro, os clones diferiram quanto às concentrações de AIB adequadas para provocar o alongamento, bem como em relação aos meios de cultura MS e JADS. O intervalo médio entre 0,40 e 0,80 mg L-1 de AIB proporcionou o maior número e comprimento das brotações alongadas in vitro e com maior vigor.

IN VITRO MULTIPLICATION AND ELONGATION OF HYBRID CLONES OF Eucalyptus globulus

Os h\uedbridos de Eucalyptus globulus representam uma excelente alternativa para o setor de celulose e papel, em raz\ue3o dos ganhos em qualidade da madeira para a fabrica\ue7\ue3o de celulose. Entretanto, estes h\uedbridos t\ueam apresentado recalcitr\ue2ncia ao enraizamento advent\uedcio. Assim, a micropropaga\ue7\ue3o \ue9 apontada como a t\ue9cnica para o rejuvenescimento desses h\uedbridos adultos, viabilizando a propaga\ue7\ue3o clonal dos mesmos. O presente trabalho avaliou o cultivo in vitro de tr\ueas clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus e de tr\ueas clones de Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus, em rela\ue7\ue3o \ue0 multiplica\ue7\ue3o in vitro, no meio MS suplementado com 0,5 mg L-1 de BAP e 0,01 mg L-1 de ANA, bem como o efeito das concentra\ue7\uf5es de 0,25; 0,50; 0,75 e 1,0 mg L-1 de AIB e dos meios de cultura MS e JADS no alongamento in vitro das brota\ue7\uf5es. Os clones diferiram quanto \ue0 multiplica\ue7\ue3o in vitro das brota\ue7\uf5es e apresentaram uma taxa de multiplica\ue7\ue3o m\ue9dia dos clones de 3,0 tufos de brota\ue7\uf5es em cada subcultivo, ao longo dos 25 subcultivos realizados. No alongamento in vitro, os clones diferiram quanto \ue0s concentra\ue7\uf5es de AIB adequadas para provocar o alongamento, bem como em rela\ue7\ue3o aos meios de cultura MS e JADS. O intervalo m\ue9dio entre 0,40 e 0,80 mg L-1 de AIB proporcionou o maior n\ufamero e comprimento das brota\ue7\uf5es alongadas in vitro e com maior vigor.Eucalyptus globulus hybrids represent an excellent alternative to the pulp and paper sector, because of gains in wood quality for pulp. However, these hybrids have shown recalcitrance to adventitious rooting. Thus, micropropagation is considered the technique for rejuvenating adult genetic materials, allowing its clonal propagation. This study evaluated the in vitro culture of three clones of Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus and three clones of Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus in relation to in vitro multiplication on MS medium supplemented with 0.5 mgL-1 BAP and 0,01 mgL-1 NAA. The effect of IBA concentrations (0.25; 0.50; 0.75 and 1.0 mg L-1) and MS and JADS culture media was evaluated on in vitro elongation. The clones differed during in vitro multiplication of shoots and they had an average multiplication rate of 3.0 shoot clusters in each subculture. The responses of the clones to different concentrations of IBA, as well as to MS and JADS culture media differed for elongation in vitro. The range between 0.40 and 0.80 mg L-1 AIB provided the highest number and length of in vitro elongated shoots and the best vigor of shoots

Estabelecimento in vitro de clones híbridos de Eucalyptus globulus

http://dx.doi.org/10.5902/198050986626The present study aimed to evaluate the behavior of Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus and Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus clones and the effect of different in vitro insertions (at 30, 90 and 150 days after pruning the donor plants) in the in vitro establishment phase. The mini-stump plants, explant providers for the in vitro introductions, were cultivated under an indoor semi-hydroponic clonal mini-hedging. Nodal segment explants of 21 Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus clones and eight Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus clones were harvested, disinfected and inoculated in an MS culture medium, supplemented with 0.5 mg L-1 of BAP and 0.1 mg L-1 of NAA. After 30 days in culture, evaluations were made and it was concluded that there were variations among the clones, as well as in vitro introductions, for the studied variables, where the in vitro establishment was possible for most clones.http://dx.doi.org/10.5902/198050986626O presente estudo teve como objetivos avaliar o comportamento de clones de Eucalyptus grandis W.Hill ex Maiden x Eucalyptus globulus Labill e Eucalyptus urophylla S.T.Blake x Eucalyptus globulus Labill e o efeito de diferentes introduções in vitro (aos 30, 90 e 150 dias após a poda do ápice das minicepas) na fase de estabelecimento in vitro. As minicepas, fornecedoras dos explantes para a introdução in vitro, foram conduzidas em minijardim clonal semi-hidropônico. Segmentos nodais de 21 clones de Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus e 8 clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus foram coletados, desinfestados e inoculados em meio de cultura MS, suplementado com 0,5 mg L-1 de BAP e 0,1 mg L-1 de ANA. Após 30 dias em cultura, foram feitas as avaliações e concluiu-se que houve variação entre clones, bem como entre introduções in vitro, para as variáveis estudadas, sendo possível o estabelecimento in vitro da maioria dos clones

IN VITRO ESTABLISHMENT OF Eucalyptus globulus HYBRID CLONES

O presente estudo teve como objetivos avaliar o comportamento de clones de Eucalyptus grandis W.Hill ex Maiden x Eucalyptus globulus Labill e Eucalyptus urophylla S.T.Blake x Eucalyptus globulus Labill e o efeito de diferentes introdu\ue7\uf5es in vitro (aos 30, 90 e 150 dias ap\uf3s a poda do \ue1pice das minicepas) na fase de estabelecimento in vitro. As minicepas, fornecedoras dos explantes para a introdu\ue7\ue3o in vitro, foram conduzidas em minijardim clonal semi-hidrop\uf4nico. Segmentos nodais de 21 clones de Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus e 8 clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus foram coletados, desinfestados e inoculados em meio de cultura MS, suplementado com 0,5 mg L-1 de BAP e 0,1 mg L-1 de ANA. Ap\uf3s 30 dias em cultura, foram feitas as avalia\ue7\uf5es e concluiu-se que houve varia\ue7\ue3o entre clones, bem como entre introdu\ue7\uf5es in vitro, para as vari\ue1veis estudadas, sendo poss \uedvel o estabelecimento in vitro da maioria dos clones.The present study aimed to evaluate the behavior of Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus and Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus clones and the effect of different in vitro insertions (at 30, 90 and 150 days after pruning the donor plants) in the in vitro establishment phase. The mini-stump plants, explant providers for the in vitro introductions, were cultivated under an indoor semi-hydroponic clonal mini-hedging. Nodal segment explants of 21 Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus clones and eight Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus clones were harvested, disinfected and inoculated in an MS culture medium, supplemented with 0.5 mg L-1 of BAP and 0.1 mg L-1 of NAA. After 30 days in culture, evaluations were made and it was concluded that there were variations among the clones, as well as in vitro introductions, for the studied variables, where the in vitro establishment was possible for most clones

Attacin a gene transference to plants of yellow passion fruit (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) by biolistics.

O Brasil é o principal produtor de maracujá amarelo. Entretanto, a produtividade é baixa, cerca de 1 0.000 t por hectare. A produção de frutos varia com o cultivar, condições climáticas, manejo e outros fatores, principalmente doenças causadas por bactérias e vírus. Metodologias de transformação genética são alternativas modernas para obter plantas resistentes. A proteína derivada de inseto, atacina A atua como bactericida, e tem sido utilizada para conferir resistência a espécies vegetais. Os objetivos do presente estudo foram (i) obter a regeneração de brotos in vitro, (ii) testar a eficiência de agentes seletivos durante o processo organogênico, (iii) construir o cassete contendo o gene atacína A, e (iv) determinar as condições físicas e biológicas para a transformação genética de plantas de maracujá amarelo utilizando o método de biobaiística. Em relação a estudos in vitro, três recipientes de cultura foram avaliados como também diferentes concentrações de benzylaminopurina (BA) e água de coco que foram adicionadas ao meio basal. Phytagei e agar também foram testados como agentes solidificantes. As culturas foram avaliadas quanto à resposta morfogênica dos discos foliares. O gene atacina A foi sequenciado e clonado para receber o promotor CAMV 35S com um enhancer duplicado e o terminador 35S. Este vetor foi denominado pFFatacina. O cassete de expressão foi cionado nos vetores pcambia 1300 e pcambia 2300 que contêm os genes higromicina (hpt) e canamicina (nptll), respectivamente. Discos foliares, assim como segmentos entrenodais e hipocotiledonares que induzem calos, foram usados nos experimentos de biobaiística. A expressão do gene uida foi avaliada para testar os parâmetros de bombardeamento, pressão de gás Hélio (psi) e a distância da tela de retenção até o tecido alvo (cm). A resposta organogênica dos discos foliares não diferiu quando placas de petrí, tubos ou frascos foram usados, embora os tubos (2,4 x 8,5 cm, 30 mi) mostraram uma resposta ligeiramente melhor. O meio MS (Murashige & Skoog, Physiologia Plantarum, 15, 1962) solidificado com agar (0,6%) e suplementado com 0,5 mg/L BA e 5% de água de coco (w/v) provou ser eficiente na indução de organgênese. Brotos foram obtidos após 30 dias. Segmentos entrenodais e hipocotiledonares produziram 300 estruturas semelhantes a gemas por explante. Microscopia de varredura e análises histológicas demonstraram ser estruturas foliares, as quais evoluíram em brotos após 50 dias em Y2 MS. Higromicina a 5 mg/L provou ser um agente seletivo apropdado, inibindo organogênese em 60% dos explantes. Canamicina a 50 mg/L foi também efetiva. Calos morfogênicos de até 10 dias e discos foliares de 3 dias de cultivo mostraram elevados níveis de expressão transiente sob 80016,5 ou 100019,5 (psi de gás Héliolcm de distância de võo dos microprojéteis). Foram realizados experimentos de co-transformação com pB[426 (8,7 kb) que contém o gene npdi e pFFatacina (5,25 kb), como também utilizando-se um único vetor (pcatacina 1300), Freqüência de transformação estável de 0,85% foi obtida. A integração do transgene foi confirmada por PCR para o gene atacina A. Este é o primeiro trabalho que relata a transferência de um gene de interesse para plantas de maracujá amarelo por biobalística.Brazil is the leading producer of the yellow passion fruit. However, the productivity is fairly low, about 10,000 t per hectare. Fruit yields vary with cultivars, climatic conditions, management and other factors, namely bacterial and virus díseases. Genetic transformation methodologies are modern alternatives to obtain plant resistance. The insectderived protein, attacin A acts as bacterícide, and it has been used to confer resistance to plant species. The objectives of the present study were (i) to obtain in vitro shoot regeneration, (ii) to test the efficiency of certain selective agents during the organogenesis process, (iií) to construct the cassette containing the attacin A gene, and (iv) to determine the physical and biological conditions for genetic transformation of passion fruit plants by using the biolistic approach. Regarding the ín vítro studies, three culture recipients were evaluated as well as different concentrations of benzylaminopurine (BA) and coconut water that suppiemented the basal medium. Phytagei and agar were aiso tested as solidifying agents. Cultures were evaluated with respect to leaf dises morphogenic responses. The attacín A gene was sequenced, and cioned to receive the CAMV 35S promoter with a duplicated enhancer sequence, and the 35S terminator. This vector was denoted pFFatacina. The cassette was cioned in pcambia 1300 and pcambia 2300 vectors that contain the hygromícin (hpt) and kanamycin (nptil) genes, respectively. Leaf discs, as well as internodal segments and hypocotyl-derived sections chosen to índuce calii, were used in the biolistic experiments. The uida gene expression was evaluated for testing bombardment parameters, namely the helium pressure (psi) and the distance from the stopping screen to the target tissue (cm). The organogenic response of the leaf discs did not differ when petri dishes, tubes or culture vesseis were used although the tubes (2,4 x 8,5 cm, 30 ml capacity) showed to be slightly better. The agar (0.6%)-solidifíed MS (Murashige & Skoog, Physíología Plantarum, 15, 1962) medium suppiemented with 0.5 mg/L BA and 5% (wlv) coconut water proved to be efficient to induce organogenesis. Shoots were obtained after 30 days. Internada[ and hypocotyl-derived segments produced 300 bud-like structures per explant. Scanning microscopy and histologícal anaiyses provided evidences that they were leaf structures, which last 50 days in 1/2 MS to evolve into shoots. Hygromicin at 5 mg/L proved to be proper as selective agent, inhibiting organogenesis in 60% of the explants. Kanamycin at 50 mg/L was also effective. Morphogenic calli up to 10 days old and 3 d-leaf discs showed high levels of transient uida gene expression under 80016.5 or 1000/9.5 helium pressureldistance from the stopping screen to the target tissue. Cotransformation experiments with pBI426 (8.7 kb) that contain the nptil gene and pFFatacina (5.25 kb) were carried on as well singre vector transformation tríals (pcatacina 1300). Stable transformation frequency of 0.85% was obtained. Transgene integration was confirmei by PCR for the attacin A gene. This is the first report on agronomicaily useful-gene transfer to yeilow passion fruit plants by biolistics

Induction of cassava somatic embryogenesis in liquid medium associated to floating membrane rafts

The objective of this study was to examine the effect of two culture systems, liquid medium associated to floating membranes and solid medium, both supplemented with different concentrations of 2,4-D, in the induction of somatic embryogenesis of cassava (Manihot esculenta Crantz). Only 28% of the young leaf lobes (with 9 µM 2,4-D) were induced to form organized embryogenic structures (OES) with membrane rafts, compared to 50% of the explants presenting this type of tissue in solid medium with 36 µM of 2,4-D. Despite the lower response observed in liquid medium with membrane, the amount of OES/explant in all 2,4-D concentrations was higher than solid medium. Based on the results and considering the high cost of the membrane rafts, this system was not distinctly superior than solid medium for inducing somatic embryogenesis in cassava.<br>O objetivo deste estudo foi comparar a indução de embriogênese somática em mandioca (Manihot esculenta Crantz) utilizando o sistema de cultivo em meio líquido associado com membranas flutuantes com meio sólido, ambos suplementados com diferentes doses de 2,4-D. Utilizando membranas flutuantes, o melhor resultado foi obtido na concentração de 9 µM 2,4-D, onde apenas 28% dos explantes foliares apresentaram estruturas embriogênicas organizadas (OES). Por outro lado, em explantes cultivados em meio sólido suplementado com 36 µM de 2,4-D a frequência de OES foi de 50%. Embora a frequência de indução embriogênica tenha sido inferior em meio líquido associado com membranas flutuantes, a quantidade de OES por explante foi igual ou superior ao do meio sólido em todas as concentrações de 2,4-D testadas. Baseado nestes resultados, e considerando o elevado custo das membranas, este sistema de cultura não apresentou vantagens significativas para indução de embriogênese somática em mandioca em relação ao meio sólido

Multiplicação e alongamento in vitro de clones híbridos de Eucalyptus globulus

Eucalyptus globulus hybrids represent an excellent alternative to the pulp and paper sector, because of gains in wood quality for pulp. However, these hybrids have shown recalcitrance to adventitious rooting. Thus, micropropagation is considered the technique for rejuvenating adult genetic materials, allowing its clonal propagation. This study evaluated the in vitro culture of three clones of Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus and three clones of Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus in relation to in vitro multiplication on MS medium supplemented with 0.5 mgL-1 BAP and 0,01 mgL-1 NAA. The effect of IBA concentrations (0.25; 0.50; 0.75 and 1.0 mg L-1) and MS and JADS culture media was evaluated on in vitro elongation. The clones differed during in vitro multiplication of shoots and they had an average multiplication rate of 3.0 shoot clusters in each subculture. The responses of the clones to different concentrations of IBA, as well as to MS and JADS culture media differed for elongation in vitro. The range between 0.40 and 0.80 mg L-1 AIB provided the highest number and length of in vitro elongated shoots and the best vigor of shoots. © 2016, Universidade Federal de Santa Maria. All rights reserved

Multiplicação e alongamento in vitro de clones híbridos de Eucalyptus globulus

Os híbridos de Eucalyptus globulus representam uma excelente alternativa para o setor de celulose e papel, em razão dos ganhos em qualidade da madeira para a fabricação de celulose. Entretanto, estes híbridos têm apresentado recalcitrância ao enraizamento adventício. Assim, a micropropagação é apontada como a técnica para o rejuvenescimento desses híbridos adultos, viabilizando a propagação clonal dos mesmos. O presente trabalho avaliou o cultivo in vitro de três clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus e de três clones de Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus, em relação à multiplicação in vitro, no meio MS suplementado com 0,5 mg L -1 de BAP e 0,01 mg L -1 de ANA, bem como o efeito das concentrações de 0,25; 0,50; 0,75 e 1,0 mg L -1 de AIB e dos meios de cultura MS e JADS no alongamento in vitro das brotações. Os clones diferiram quanto à multiplicação in vitro das brotações e apresentaram uma taxa de multiplicação média dos clones de 3,0 tufos de brotações em cada subcultivo, ao longo dos 25subcultivos realizados. No alongamento in vitro, os clones diferiram quanto às concentrações de AIB adequadas para provocar o alongamento, bem como em relação aos meios de cultura MS e JADS. O intervalo médio entre 0,40 e 0,80 mg L -1 de AIB proporcionou o maior número e comprimento das brotações alongadas in vitro e com maior vigor.Eucalyptus globulus hybrids represent an excellent alternative to the pulp and paper sector, because of gains in wood quality for pulp. However, these hybrids have shown recalcitrance to adventitious rooting. Thus, micropropagation is considered the technique for rejuvenating adult genetic materials, allowing its clonal propagation. This study evaluated the in vitro culture of three clones of Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus and three clones of Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus in relation to in vitro multiplication on MS medium supplemented with 0.5 mgL-1 BAP and 0,01 mgL-1 NAA. The effect of IBA concentrations (0.25; 0.50; 0.75 and 1.0 mg L-1) and MS and JADS culture media was evaluated on in vitro elongation. The clones differed during in vitro multiplication of shoots and they had an average multiplication rate of 3.0 shoot clusters in each subculture. The responses of the clones to different concentrations of IBA, as well as to MS and JADS culture media differed for elongation in vitro. The range between 0.40 and 0.80 mg L-1 AIB provided the highest number and length of in vitro elongated shoots and the best vigor of shoots