Leveduras como agentes de infecção nosocomial

Orientador: Christian Ouriques BredaMonografia (especialização) - Universidade Federal do Paraná, Especialização em Análises ClínicasInclui referênciasResumo: Introdução: As infecções hospitalares são causa freqüente de morbidade e mortalidade, em países desenvolvidos e emergentes, com importância fundamental na saúde pública. Material e métodos: Pesquisa documental nas principais bases de dados. Resultados e discussão: O trabalho das Comissões de Controle de Infecção Hospitalar é essencial, porém menos de 20% dos hospitais brasileiros possuem programas adequados de prevenção e controle, com estimativa de que 5 a 15% dos pacientes hospitalizados contraem algum tipo de infecção no período de internação. Nas últimas décadas a incidência de infecções nosocomiais por fungos tem aumentado substancialmente acarretando altos índices de mortalidade. Candida albicans é a levedura mais comum isolada de pacientes com infecção nosocomial, porém, espécies não-albicans tem emergido de forma substancial nas últimas décadas, bem como espécies dos gêneros Trichosporon, Rhodotorula, Geotrichum, Hansenula, Malassezia e Saccharomyces, como causa de doenças invasivas em pacientes imunossuprimidos. A pesquisa de patógenos fúngicos comuns, e possíveis novos agentes patogênicos fúngicos, em infecções acometendo indivíduos imunocomprometidos ou em terapias hospitalares prolongadas, devem ser continuamente vigiados, para que o correto diagnóstico e a susceptibilidade antimicrobiana tragam maiores chances de cura e conseqüentemente reduzam ônus financeiro e insalubre das infecções hospitalare

Análise quimiométrica aplicada a dados de espectrometria de massas em amostras de soro de pacientes chagásicos crônicos

Orientadora : Profª. Drª. Iara J.T. Messias ReasonCoorientadora : Profª. Drª. Luiza Helena GremskiDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 26/02/2016Inclui referências : f. 89-96Área de concentração: Análises clínicasResumo: A Doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanossoma cruzi, consta na lista das 17 doenças tropicais negligenciadas, segundo dados da Organização Mundial da Saúde, e afeta aproximadamente 7 milhões de pessoas somente na América Latina. A maioria dos indivíduos infectados permanece na forma assintomática ou indeterminada por toda vida, porém, parte significativa deles evolui para alguma das formas sintomáticas, apresentando danos cardíacos, digestivos e neurológicos irreversíveis. Pouco se sabe sobre os mecanismos imunológicos e patogênicos envolvidos na transição da fase aguda para a fase crônica da doençaa, bem como, sobre os fatores que contribuem para o desenvolvimento das diferentes formas clínicas existentes. Ainda, esforços têm sido direcionados na busca por biomarcadores sorológicos que sejam diferencialmente expressos em pacientes com as diferentes formas clínicas da DC crônica e que possam ser utilizados como marcadores de evolução clínica e prognóstico. No presente trabalho foi realizado uma busca por possíveis biomarcadores no soro de pacientes chagásicos crônicos. Na busca de biomarcadores utilizou-se duas estratégias. Em um primeiro momento, os soros dos pacientes com DC foram analisados por eletroforese bidimensional para resolução do seu conteúdo proteico. A segunda estratégia baseou-se na análise dos soros dos pacientes por espectrometria de massas. Os resultados mostraram que algumas proteínas tiveram perfil de expressão diferente entre controles saudáveis e entre os grupos de pacientes chagásicos cardíacos e assintomáticos. Os dados obtidos na espectrometria de massas foram analisados utilizando a ferramenta de Análise de Componentes Principais (PCA), sendo possível verificar uma discriminação entre os grupos controle e pacientes chagásicos, bem como,, entre as diferentes formas clínicas cardíaca e indeterminada. Foram encontrados íons que podem ser relevantes na discriminação entre os subgrupos da DC. Palavras-chave: Doença de Chagas. Quimiometria. Biomarcadores. Espectrometria de massas.Abstract: Chagas disease (CD) caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, in the list of 17 neglected tropical diseases, according to the World Health Organization, and affects approximately 7 million people in Latin America alone. Most infected individuals remain in asymptomatic or indeterminate for life, however, one significant part evolves into some of the symptomatic forms, with heart, digestive and irreversible neurological damage. Little is known about the immunological pathogenic mechanisms involved in the transition from the acute to chronic stage of the disease, as well as on the factors that contribute to the development of different existing clinical forms. Furthermore, efforts have been focused on the search for serum biomarkers that are differentially expressed in patients with different clinical forms of chronic DC and can be used as markers of clinical outcome and prognosis. In the present work was carried out a search for potential biomarkers in the serum of chronic Chagas disease. In the search for biomarkers was used two strategies. At first, serum from patients with CD were analyzed by two-dimensional electrophoresis for resolution of their protein patern. The second strategy was based on analysis of patient serum by mass spectrometry. The results showed that some proteins have different expression profile between healthy controls and between groups of cardiac and asymptomatic chagasic patients. The data obtained in mass spectrometry were analyzed using Principal Component Analysis (PCA), and you can see a breakdown between the control group and patients with Chagas disease, as well as between the different cardiac and indeterminate clinical forms. Ions were found to be relevant in discriminating between subsets of DC. Keywords: Chagas disease. Chemiometry. Biomarkers. Mass Spectrometr

Occurrence and identification of yeasts in dogs external ear canal with and without otitis

ABSTRACT Objective. To analyze the presence of yeast in the external ear canal of 116 dogs with and without a diagnosis of otitis from veterinary clinic in the Chapecó city, Santa Catarina, Brazil, and to examine the secretion of the proteinase in isolates. Materials and methods. Were collected cerumen of conduct hearing of dogs of 16 different races 71% with pendular ear type, 5% of semi-pendular and 24% of the erect type. All dogs were previously evaluated by otoscopy and grouped in dogs with and without otitis. Results. Yeasts were isolated in 44 samples (approximately 36%), where Malassezia pachydermatis was identified in 95% of samples where were observed growth of yeasts. On 20 samples the proteinase enzyme showed strong activity in 31% isolates, were 21% of the dogs with otitis tested showed high proteolytic activity. Conclusions. We observed a variation of strains of M. pachydermatis-producing enzymes. The variation in production of these enzymes is probably more associated with different response to the action of the immune system of the animal in the tissue injury

Autoimmunity in Chronic Chagas Disease: A Road of Multiple Pathways to Cardiomyopathy?

Chagas disease (CD), a neglected tropical disease caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, affects around six million individuals in Latin America. Currently, CD occurs worldwide, becoming a significant public health concern due to its silent aspect and high morbimortality rate. T. cruzi presents different escape strategies which allow its evasion from the host immune system, enabling its persistence and the establishment of chronic infection which leads to the development of chronic Chagas cardiomyopathy (CCC). The potent immune stimuli generated by T. cruzi persistence may result in tissue damage and inflammatory response. In addition, molecular mimicry between parasites molecules and host proteins may result in cross-reaction with self-molecules and consequently in autoimmune features including autoantibodies and autoreactive cells. Although controversial, there is evidence demonstrating a role for autoimmunity in the clinical progression of CCC. Nevertheless, the exact mechanism underlying the generation of an autoimmune response in human CD progression is unknown. In this review, we summarize the recent findings and hypotheses related to the autoimmune mechanisms involved in the development and progression of CCC

Análise quimiométrica aplicada a dados de espectrometria de massas em amostras de soro de pacientes chagásicos crônicos

Orientadora : Profª. Drª. Iara J.T. Messias ReasonCoorientadora : Profª. Drª. Luiza Helena GremskiDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 26/02/2016Inclui referências : f. 89-96Área de concentração: Análises clínicasResumo: A Doença de Chagas (DC), causada pelo protozoário Trypanossoma cruzi, consta na lista das 17 doenças tropicais negligenciadas, segundo dados da Organização Mundial da Saúde, e afeta aproximadamente 7 milhões de pessoas somente na América Latina. A maioria dos indivíduos infectados permanece na forma assintomática ou indeterminada por toda vida, porém, parte significativa deles evolui para alguma das formas sintomáticas, apresentando danos cardíacos, digestivos e neurológicos irreversíveis. Pouco se sabe sobre os mecanismos imunológicos e patogênicos envolvidos na transição da fase aguda para a fase crônica da doençaa, bem como, sobre os fatores que contribuem para o desenvolvimento das diferentes formas clínicas existentes. Ainda, esforços têm sido direcionados na busca por biomarcadores sorológicos que sejam diferencialmente expressos em pacientes com as diferentes formas clínicas da DC crônica e que possam ser utilizados como marcadores de evolução clínica e prognóstico. No presente trabalho foi realizado uma busca por possíveis biomarcadores no soro de pacientes chagásicos crônicos. Na busca de biomarcadores utilizou-se duas estratégias. Em um primeiro momento, os soros dos pacientes com DC foram analisados por eletroforese bidimensional para resolução do seu conteúdo proteico. A segunda estratégia baseou-se na análise dos soros dos pacientes por espectrometria de massas. Os resultados mostraram que algumas proteínas tiveram perfil de expressão diferente entre controles saudáveis e entre os grupos de pacientes chagásicos cardíacos e assintomáticos. Os dados obtidos na espectrometria de massas foram analisados utilizando a ferramenta de Análise de Componentes Principais (PCA), sendo possível verificar uma discriminação entre os grupos controle e pacientes chagásicos, bem como,, entre as diferentes formas clínicas cardíaca e indeterminada. Foram encontrados íons que podem ser relevantes na discriminação entre os subgrupos da DC. Palavras-chave: Doença de Chagas. Quimiometria. Biomarcadores. Espectrometria de massas.Abstract: Chagas disease (CD) caused by the protozoan Trypanosoma cruzi, in the list of 17 neglected tropical diseases, according to the World Health Organization, and affects approximately 7 million people in Latin America alone. Most infected individuals remain in asymptomatic or indeterminate for life, however, one significant part evolves into some of the symptomatic forms, with heart, digestive and irreversible neurological damage. Little is known about the immunological pathogenic mechanisms involved in the transition from the acute to chronic stage of the disease, as well as on the factors that contribute to the development of different existing clinical forms. Furthermore, efforts have been focused on the search for serum biomarkers that are differentially expressed in patients with different clinical forms of chronic DC and can be used as markers of clinical outcome and prognosis. In the present work was carried out a search for potential biomarkers in the serum of chronic Chagas disease. In the search for biomarkers was used two strategies. At first, serum from patients with CD were analyzed by two-dimensional electrophoresis for resolution of their protein patern. The second strategy was based on analysis of patient serum by mass spectrometry. The results showed that some proteins have different expression profile between healthy controls and between groups of cardiac and asymptomatic chagasic patients. The data obtained in mass spectrometry were analyzed using Principal Component Analysis (PCA), and you can see a breakdown between the control group and patients with Chagas disease, as well as between the different cardiac and indeterminate clinical forms. Ions were found to be relevant in discriminating between subsets of DC. Keywords: Chagas disease. Chemiometry. Biomarkers. Mass Spectrometr

Produção e avaliação de hialuronidase do veneno de aranha marrom : busca por aplicações biotecnológicas e soluções terapêuticas

Orientadora: Profª Drª Andrea Senff RibeiroCoorientadora: Profª Drª Luiza Helena GremskiTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa : Curitiba, 19/02/2020Inclui referências: p. 99-112Resumo: Hialuronidases são enzimas que medeiam a degradação do ácido hiaiurônico (AH), aumentam a permeabilidade de tecidos conjuntivos e decrescem a viscosidade dos fluidos corporais. São comuns em venenos animais, estando presentes no veneno de aranhas do gênero Loxoceles, e referidas como um "fator de espalhamento" das demais toxinas. Anteriormente, uma isoforma de hialuronidase recombinante de Loxosceles intermedia (DHAase, Dietrich's hyaluronidase) foi produzida em sistema de expressão procarioto como uma proteína recombinante insolúvel necessitando de processo de redobramento in vitro para sua solubilização e atividade. A utilização de modelos de expressão baseados em células de inseto foi a abordagem escolhida neste trabalho como um método alternativo de expressão dessa enzima capaz de estabelecer modificações póstraducionais e produzir uma proteína recombinante com características semelhantes à enzima nativa. O trabalho descreve a obtenção e purificação bemsucedida de uma isoforma de hialuronidase recombinante de L. intermedia em sistema eucarioto, ativa e possivelmente mais próxima a conformação nativa que a isoforma produzida em sistema procarioto. Os processos de purificação e ímunodetecção foram demonstrados em ensaios de SDS-PAGE e Western blotting e a comprovação da produção da enzima ativa foi demonstrada em ensaios de degradação de agarose, zimografia e turbidimetria. A função da enzima como "fator de espalhamento" no veneno de L. intermedia foi confirmada por meio de ensaios de dermonecrose experimental em coelhos e de permeabilidade vascular em camundongos. Em ambos testes biológicos a enzima mostrou aumentar a área de ação da fosfolipase-D recombinante. Como fatores de espalhamento, as hialuronidases têm um papel relevante no desenvolvimento dos sintomas após os acidentes e, por isso, há uma busca por moléculas que inibam a atividade dessas enzimas. A N-acetilcisteína (NAC) é uma molécula amplamente utilizada na clínica com seu uso aprovado há mais de 30 anos e estudos farmacocinéticos, farmacodinâmicos e de toxicidade bem estabelecidos. Sua ação inibitória sobre rnetaloproteases e hialuronidases tem sido demonstrada. A inibição da hialuronidases e rnetaloproteases de venenos loxoscélicos pela N-acetil cisteína (NAC) foi demonstrada através de ensaios de turbidimetria e zimograma. Assim, pela primeira vez uma hialuronidase de veneno de Loxosceles foi produzida por sistema de expressão eucarioto. Essa enzima recombinante - LiHyal2 - é uma bioferramenta importante com características muitos semelhantes à hialuronidase nativa e deve continuar a auxiliar na elucidação dos mecanismos do loxoscelismo. A inibição da sua atividade enzimática pela N-acetilcisteína também demonstra a importância da LiHyal2 na busca por uma terapia específica para os pacientes picados por estas aranhas. PALAVRAS-CHAVES: HIALURONIDASE; LOXOSCELES; CÉLULAS Sf9.Abstract: Hyaluronidases are a group of enzymes that mediate the degradation of hyaluronic acid (HA), increase the permeability of connective tissues and decrease the viscosity of body fluids. They are common in animal venoms. They are present in the Loxoceles spider venom and known as "spreading factors" of the other toxins. Previously, a recombinant hyaluronidase isoform of Loxoceles intermedia (DHAase, Dietrich's hyaluronidase) was produced in a prokaryotic expression system as an insoluble recombinant protein, requiring in vitro refolding for its solubilization and activity. The use of expression models based on insect cells was the approach used in this work, as an alternative method of expression of this enzyme. Eukaryotic systems can perform post-translational modifications and produce a recombinant protein with characteristics closer to the native enzyme. The data show the obtaining and successful purification of a recombinant hyaluronidase isoform of L. intermedia in eukaryotic system, in its active form and possibly closer to its native conformation than was the isoform previously produced in prokaryotic system. The purification and immunodetection processes were demonstrated in SDS-PAGE and Western blotting assays and the evidence of active enzyme production was demonstrated by hyaluronic acid degradation visualized by agarose gel, zymography and turbidimetry assays. The function of the enzyme as a "spreading factor" in the L. intermedia venom was confirmed through experimental dermonecrosis in rabbits and vascular permeability in mice. In both biological tests, the enzyme was able to increase the dermonecrosis area produced by recombinant phospholipase-D and increased the vascular permeability. As spreading factors, hyaluronidases have a relevant role in the development of symptoms after accidents and, therefore, there is a search for hyaluronidase inhibitors. N-acetylcysteine (NAC) is a molecule widely used in the clinic and its use is approved for over 30 years with well-established pharmacokinetic, pharmacodynamic and toxicity studies. Its inhibitory action against metalloproteases and hyaluronidases has been demonstrated. The inhibition of hyaluronidases and metalloproteases of Loxosceles venoms by N-acetyl cysteine (NAC) was demonstrated through turbidimetry and zymogram tests. Thus, for the first time a hyaluronidase from Loxosceles venom was produced in a eukaryotic expression system. This recombinant enzyme - LiHyal2 - is an important biotool with very similar characteristics to native hyaluronidases and should continue to help elucidate the mechanisms of loxoscelism. The inhibition of its enzymatic activity by N-acetylcysteine also demonstrates the importance of LiHyal2 in the search for a specific therapy for victims of these spiders. KEY WORDS: HYALURONIDASE; LOXOSCELES; Sf9 CELL

Cromoblastomicosis en el estado de Santa Catarina, Brasil

A case of chromoblastomycosis caused by Cladophialophora carrionii is reported. The diabetic and hypertensive patient presented serpiginous and verrucous lesions, with centrifugal evolution. The patient, with a history of disease for 59 years, had not been diagnosed or treated before. Dematiaceous septate hyphal and elliptical conidia were seen on microscopic observations. The isolated fungus was identified on the basis of micro-macromorphologic characteristics.Se reportó un caso de cromoblastomicosis causado por Cladophialophora carrionii. El paciente, diabético e hipertenso, presentaba lesiones de apariencia verrugosa y serpiginosa, con evolución centrífuga. Tenía un historial de enfermedad hace 59 años sin haber sido diagnosticado hasta entonces. En el examen microscópico de observaron elementos hifales septados, pigmentados y con conidios elípticos. La identificación del hongo se basó en las características macromorfológicas y micromorfológicas

Cromoblastomicosis en el estado de Santa Catarina, Brasil

A case of chromoblastomycosis caused by Cladophialophora carrionii is reported. The diabetic and hypertensive patient presented serpiginous and verrucous lesions, with centrifugal evolution. The patient, with a history of disease for 59 years, had not been diagnosed or treated before. Dematiaceous septate hyphal and elliptical conidia were seen on microscopic observations. The isolated fungus was identified on the basis of micro-macromorphologic characteristics.Se reportó un caso de cromoblastomicosis causado por Cladophialophora carrionii. El paciente, diabético e hipertenso, presentaba lesiones de apariencia verrugosa y serpiginosa, con evolución centrífuga. Tenía un historial de enfermedad hace 59 años sin haber sido diagnosticado hasta entonces. En el examen microscópico de observaron elementos hifales septados, pigmentados y con conidios elípticos. La identificación del hongo se basó en las características macromorfológicas y micromorfológicas

Occurrence and identification of yeasts in dogs external ear canal with and without otitis

Objective. To analyze the presence of yeast in the external ear canal of 116 dogs with and without a diagnosis of otitis from veterinary clinic in the Chapecó city, Santa Catarina, Brazil, and to examine the secretion of the proteinase in isolates. Materials and methods. Were collected cerumen of conduct hearing of dogs of 16 different races 71% with pendular ear type, 5% of semi-pendular and 24% of the erect type. All dogs were previously evaluated by otoscopy and grouped in dogs with and without otitis. Results. Yeasts were isolated in 44 samples (approximately 36%), where Malassezia pachydermatis was identified in 95% of samples where were observed growth of yeasts. On 20 samples the proteinase enzyme showed strong activity in 31% isolates, were 21% of the dogs with otitis tested showed high proteolytic activity. Conclusions. We observed a variation of strains of M. pachydermatis-producing enzymes. The variation in production of these enzymes is probably more associated with different response to the action of the immune system of the animal in the tissue injury.clínica veterinaria en la ciudad de Chapecó, Santa Catarina,Brasil, en perros sanos y perros con otitis y se examinó la secreción de la proteinasa en las muestra aisladas. Materiales y métodos. Se recogieron cerumen del oído de perros de 16 razas diferentes, dónde 71% fue de oído de tipo pendular, 5% de semi-pendular y 24% del tipo erecto. Todos los perros fueron evaluados previamente por otoscopia y agrupados en perros con y sin otitis externa. Resultados. Las levaduras se aislaron en 44 muestras (aproximadamente 36%), donde Malassezia pachydermatis se identificó en el 95% de las muestras donde se observó el crecimiento de las levaduras. El 20 muestras la secreción de proteinasa mostró fuerte actividad en el 31% de los aislados y en 21% de los perros con otitis mostró alta actividad proteolítica. Conclusiones. Hemos observado una variación de cepas de M. pachydermatis productoras de enzimas. La variación en la producción de estas enzimas es probablemente más asociados con la respuesta diferente a la acción del sistema inmunológico del animal en la lesión tisular