Análise antigênica e genômica dos adenovírus isolados em pacientes pediátricos atendidos no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná

Orientadora: Prof.ª Dr.ª Cristina de Oliveira RodriguesCoorientadora: Prof.ª Dr.ª Sonia Mara RaboniTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e do Adolescente. Defesa : Curitiba, 30/05/2012Inclui referências: p.82-107Área de concentração: Infectologia PediátricaResumo: O Adenovírus humano foi descrito em 1953 e apresenta considerável relevância nas infecções respiratórias, devido à elevada frequência e gravidade das manifestações clínicas. Nas infecções respiratórias agudas vem sendo um dos principais motivos de mortalidade mundial em crianças menores de cinco anos. Os objetivos do presente estudo foram padronizar a técnica de detecção genética do adenovírus humano para introdução na rotina do laboratório de virologia do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná; comparar as características operacionais do método de biologia molecular padronizado com as técnicas de pesquisa de antígeno viral e isolamento celular para o adenovírus humano; estudar a caracterização genômica viral e sua associação com a evolução clínica de adenovírus humano isolados em amostras de aspirado de nasofaringe desde o ano de 1996 até o ano de 2008; relatar aspectos epidemiológicos e clínicos dos pacientes pediátricos do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná infectados por adenovírus humano. O estudo foi realizado retrospectivamente em 22 amostras armazenadas de aspirado de nasofaringe e prospectivamente em 11 amostras. O DNA foi extraído utilizando o método do tiocianato de guanidina e a nested PCR foi realizada para amplificar um fragmento de 168 pb do gene hexon do adenovírus. A subtipagem dos vírus detectados foi realizada por enzima de restrição e por sequenciamento genético. Os dados clínicos dos pacientes infectados foram obtidos dos prontuários médicos. A nested PCR foi padronizada, para o gene hexon, no setor de biologia molecular do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná. Os subgêneros encontrados por enzima de restrição e sequenciamento foram B:1, B:2, C e D. Foram obtidas 31 sequências para o gene VA-RNA, das quais, 19 representam sequências de consenso entre ambas as fitas do DNA, enquanto em outras 12 apenas uma das fitas apresentava condições para análise. A análise da árvore filogenética foi organizada com as sequências nucleotídicas obtidas para o gene VA-RNA. Os valores de divergência genética entre as amostras obtidas por este estudo identificadas como de um mesmo grupo apresentaram uma grande variação, com os altos valores de divergência sendo encontrados nos subgêneros B:1 tipo 3 e B:1 sorotipo 7 e baixos valores de divergência entre as demais linhagens. Os resultados de cultura de células demonstraram uma maior sensibilidade do que a Imunofluorescência e menor sensibilidade do que os resultados da PCR. A incidência do HAdV foi maior em crianças com idade inferior a dois anos. Os sintomas mais observados foram taquipneia, esforço respiratório, febre, taquicardia e tosse. Houve coinfecções virais em seis casos (18,2%). Doze pacientes hospitalizados (36%) evoluíram para o óbito. Os subgêneros que mais levaram à internação em Unidade de Tratamento Intensivo e a óbito foram B:1 e C. Palavras-chave: Adenovírus humanos; Análise de sequência de DNA; Filogenia; Infecção respiratória; Sintomas; Evolução fatal.Abstract: The adenovirus was described in 1953 and has considerable significance in respiratory infections due to high frequency and severity of clinical manifestations. Acute respiratory infections have been a major source of global mortality in children under five years. The objectives of this study were to standardize the molecular detection of adenovirus for introduction into the routine at the virology laboratory of the Hospital de Clinicas, Federal University of Paraná (HC-UFPR), to compare the operational characteristics of the molecular biology method with standard techniques of viral antigen research and isolation in cell culture to study viral genomic characterization study and its association with clinical isolates of adenovirus in nasopharyngeal aspirate samples from the year 1996 until the year 2008, reporting epidemiological and clinical aspects of pediatric patients infected with adenovirus at HC-UFPR. The study was conducted retrospectively on 22 nasopharyngeal aspirate stored samples and prospectively in 11. DNA was extracted using the guanidine thiocyanate method and nested PCR was performed to amplify a 168 bp fragment of the adenovirus hexon gene. The subtyping of the virus was performed by restriction enzyme and genetic sequencing. The clinical data of infected patients were obtained from medical records. The nested PCR was standardized in the laboratory of molecular biology of the HC-UFPR. The subgenus found by restriction enzyme and sequencing were B:1, B:2, C and D. It was obtained 31 sequences for the VA-RNA gene, of which 19 represent consensus sequences of both strands of DNA, while in the remaining only is could be analysed. The incidence of adenovirus was higher in children younger than two years. The symptoms observed were tachypnea, respiratory distress, fever, tachycardia, and coughing. There was viral co-infections in six cases (18.2%). Twelve hospitalized patients (36%) died. The analysis of phylogenetic tree was organized with the nucleotide sequences obtained for the VARNA gene. The values of genetic divergence among the samples obtained by this study identified as a group varied widely, with high values of divergence being found in subgenus B:1 serotype 3 and serotype 7 and low levels of divergence between the other strains. The subgenus that led to more admissions in the Intensive Care Unit and death were B:1 and C. The results of cell culture showed a higher sensitivity than the immunofluorescence and lower sensitivity than the PCR. Key words: Adenoviruses human, Sequence analysis DNA, Phylogeny, Respiratory infection, Symptoms, Fatal outcome

Pacientes HIV/AIDS+ tratados com o medicamento homeopático Canova : estudo prospectivo observacional em índices laboratoriais, clínicos e de qualidade de vida

Orientadora : Dorly de Freitas BuchiDissertaçao (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2005Inclui bibliografiaResumo: Canova (a CA) é um medicamento brasileiro produzido com técnicas homeopáticas, compostas de Aconitium, Thuya, Bryonia, Arsenicum, Lachesis em água destilada que contém menos de 1% ethanol. Estudos prévios demonstraram que o Medicamento Canova não é tóxico nem mutagênico além de ativar macrófagos e diminuir a produção TNFa. Objetivo: Avaliar a evolução longitudinal em pacientes de HIV/AIDS antes e depois de um e seis meses de uso contínuo de Canova. Métodos: Foram avaliados os pacientes em duas Organizações Não Governamentais (ONG) e em uma instituiçào pública de saúde em Curitiba. Os pacientes tiveram avaliação clínica, laboratorial e por meio de um questionário específico para a qualidade de vida. Resultados: Os dados indicam que o tratamento é altamente efetivo reduzindo infecções oportunistas, aumento de células CD4 e número de eritrócitos, assim houve melhora na qualidade de vida recuperando parâmetros como decréscimo da dor, depressão, aumento do apetite e energia para trabalhar. Conclusões: houve melhora dos pacientes HIV/AIDS+ após tratamento com o Medicamento Homeopático Canova, usando ou não tratamentos convencionais simultaneamente. Palavras Chave: Homeopatia; Medicamento Canova; HIV/AIDS; Qualidade de Vida; células CD4; infecções oportunista

Balanced Scorecard aplicado em laboratórios de análises clínicas

Este artigo apresenta um modelo de Balanced Scorecard (BSC) proposto para laboratório de análises clínicas, baseado na estratégia de Kaplan e Norton, que apresenta um modelo de gestão em laboratório clínico para empresas de qualquer porte. De acordo com esse modelo, a estratégia é definida em relação a perspectivas financeiras, clientes, processos internos, aprendizado e crescimento. O BSC é um instrumento direcionado para o sistema de gestão estratégica que utiliza indicadores de desempenho baseados em variáveis capazes de interferir direta e indiretamente nas ações da empresa

Análise da Aplicação da Criolipólise sobre Parâmetros Clínicos, Fisiológicos e Hematológicos

Dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduaçãoem Biociências, do Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza, da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Mestre em Ciências, área de concentração Biociências.A criolipólise é uma técnica mundialmente conhecida para redução de gordura localizada, não invasivo e capaz de resfriar o tecido gorduroso sem gerar danos a tecidos adjacentes e gradativamente reduzir a camada adiposa. As evidências científicas comprovam a redução, entretanto as investigações nos parâmetros laboratoriais em âmbito sistêmico são superficiais, gerando dúvidas sobre a segurança do método. O objetivo principal deste trabalho foi analisar possíveis alterações em parâmetros hematológicos, inflamatórios e bioquímicos, além da redução de percentual de massa de gordura corporal através da análise de bioimpedância (BIA). Neste estudo longitudinal prospectivo, obteve-se uma amostragem total de 20 participantes, segregados em grupo A e B, respectivamente, composto por 5 homens e 5 mulheres em cada grupo e com idade entre 25 e 45 anos. Os participantes foram submetidos a exposição de resfriamento por 60 minutos, seguindo padrão de aplicação, o grupo A em -5°C com o manípulo 360°; o grupo B em -10°C com o manípulo “blindada”. As análises bioquímicas incluíram níveis séricos de Proteína C Reativa (PCR) e hemograma nos tempos: T0 (baseline), T1 (2 dias após), T2 (14 dias), T3 (30 dias) e T4 (60 dias) e as análises de medição corporal avaliaram o percentual de massa de gordura corporal por BIA nos tempos: T0 (baseline), T1 (30 dias após), T2 (60 dias), T3 (90 dias) e T4 (120 dias). Os valores obtidos pelas análises de marcadores hematológicos e inflamatórios não revelaram alterações estatisticamente significativa nos níveis séricos. Todavia, a medição através da BIA pelo equipamento In Body, revelou diferenças na redução do percentual de massa de gordura corporal, com resultados estatisticamente significativos. Os participantes submetidos a -5°C, apresentaram 2,6%; 7,3% e 8,2% de redução média respectivamente em 30, 90 e 120 dias comparado a baseline (p<0,05). Os submetidos a -10°C, apresentaram 4,4% e 5,2% de redução média, respectivamente em 60, 90 e 120 dias comparado a baseline (p<0,01). Os resultados obtidos sugerem que a criolipólise é considerado um método eficaz para redução de gordura localizada, sem alterações bioquímicas significativas por meio das análises utilizadas

Balanced Scorecard aplicado em laboratórios de análises clínicas

This article presents a model of Balanced Scorecard (BSC) proposed for clinical laboratory, based on Kaplan and Norton strategy, which presents a management model for the clinical laboratory business of any size. According to this model, strategy is defined as financial prospects, customers, internal processes, learning and growth. The BSC is an instrument directed to the strategic management system that uses performance indicators based on variables that can affect directly and indirectly in company stock.Este artigo apresenta um modelo de Balanced Scorecard (BSC) proposto para laboratório de análises clínicas, baseado na estratégia de Kaplan e Norton, que apresenta um modelo de gestão em laboratório clínico para empresas de qualquer porte. De acordo com esse modelo, a estratégia é definida em relação a perspectivas financeiras, clientes, processos internos, aprendizado e crescimento. O BSC é um instrumento direcionado para o sistema de gestão estratégica que utiliza indicadores de desempenho baseados em variáveis capazes de interferir direta e indiretamente nas ações da empresa

BALANCED SCORECARD APPLIED TO IN CLINICAL LABORATORY

This article presents a model of Balanced Scorecard (BSC) proposed for clinical laboratory, based on Kaplan and Norton strategy, which presents a management model for the clinical laboratory business of any size. According to this model, strategy is defined as financial prospects, customers, internal processes, learning and growth. The BSC is an instrument directed to the strategic management system that uses performance indicators based on variables that can affect directly and indirectly in company stock.Este artigo apresenta um modelo de Balanced Scorecard (BSC) proposto para laboratório de análises clínicas, baseado na estratégia de Kaplan e Norton, que apresenta um modelo de gestão em laboratório clínico para empresas de qualquer porte. De acordo com esse modelo, a estratégia é definida em relação a perspectivas financeiras, clientes, processos internos, aprendizado e crescimento. O BSC é um instrumento direcionado para o sistema de gestão estratégica que utiliza indicadores de desempenho baseados em variáveis capazes de interferir direta e indiretamente nas ações da empresa

Infecção respiratória aguda por adenovirus: comparação dos métodos de PCR e imunofluorescência indireta para o seu diagnóstico e dados clínicos dos pacientes infectados

Infecções respiratórias por Adenovírus (ADV) são geralmente descritas associadas com alta mortalidade. O diagnóstico laboratorial é essencial para o estabelecimento da terapêutica adequada e para orientar a implantação de medidas preventivas evitando a propagação da infecção. Com o objetivo de analisar a sensibilidade e a especificidade dos métodos de avaliação de diagnóstico laboratorial, foi comparada a detecção de antígeno por imunofluorescência indireta (IF) com a reação em cadeia da polimerase específica (PCR) para detectar AdV em amostras respiratórias coletadas de pacientes internados com doença respiratória aguda. As amostras com resultados positivos foram inoculadas em cultura celular. Foram analisadas 381 amostras da secreção nasofaríngea coletadas durante o ano de 2008, das quais 2,6% foram positivas pela IF e 10% pela PCR, isolamento positivo foi obtido em 40% e 26% dos casos positivos pelos testes anteriores, respectivamente. A maioria dos pacientes infectados eram crianças com menos de seis meses de idade, e apesar do fato de que um número significativo de pacientes necessitou de cuidados intensivos, a taxa de mortalidade foi baixa (5%). Em conclusão, os métodos moleculares são úteis para o diagnóstico rápido de infecções por adenovírus com maior sensibilidade do que a detecção do antígeno, a sua introdução na rotina permitiu um aumento significativo no diagnóstico de infecções por adenovírus.Adenovirus (AdV) respiratory infections are usually described as being associated with high mortality rates. Laboratory diagnosis is essential for the establishment of the appropriate therapy, and for guiding the implementation of preventive measures in order to prevent the spread of the infection. Aiming to analyze the sensitivity and specificity of the laboratorial diagnosis methods available, we compared antigen detection by indirect immunofluorescence assay (IF), and a specific nested polymerase chain reaction (PCR), to detect AdV in respiratory samples collected from patients admitted to hospital with acute respiratory disease. Positive samples were inoculated into a cell culture to confirm the results. We analyzed 381 samples from the nasopharyngeal aspirates collected during the year 2008; of these, 2.6% tested were positive for adenovirus through IF and 10% through PCR; positive isolation was obtained in 40% and 26% of these cases, respectively. Most infected patients were children under six months of age, and despite of the fact that a significant number of patients required intensive care, the mortality rate was low (5%). In conclusion, molecular methods were found to be useful for rapid diagnosis of adenovirus infections with higher sensitivity than antigen detection; their introduction permitted a significant increase in diagnoses of adenovirus infections

Análise antigênica e genômica dos adenovírus isolados em pacientes pediátricos atendidos no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná

Orientadora: Prof.ª Dr.ª Cristina de Oliveira RodriguesCoorientadora: Prof.ª Dr.ª Sonia Mara RaboniTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e do Adolescente. Defesa : Curitiba, 30/05/2012Inclui referências: p.82-107Área de concentração: Infectologia PediátricaResumo: O Adenovírus humano foi descrito em 1953 e apresenta considerável relevância nas infecções respiratórias, devido à elevada frequência e gravidade das manifestações clínicas. Nas infecções respiratórias agudas vem sendo um dos principais motivos de mortalidade mundial em crianças menores de cinco anos. Os objetivos do presente estudo foram padronizar a técnica de detecção genética do adenovírus humano para introdução na rotina do laboratório de virologia do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná; comparar as características operacionais do método de biologia molecular padronizado com as técnicas de pesquisa de antígeno viral e isolamento celular para o adenovírus humano; estudar a caracterização genômica viral e sua associação com a evolução clínica de adenovírus humano isolados em amostras de aspirado de nasofaringe desde o ano de 1996 até o ano de 2008; relatar aspectos epidemiológicos e clínicos dos pacientes pediátricos do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná infectados por adenovírus humano. O estudo foi realizado retrospectivamente em 22 amostras armazenadas de aspirado de nasofaringe e prospectivamente em 11 amostras. O DNA foi extraído utilizando o método do tiocianato de guanidina e a nested PCR foi realizada para amplificar um fragmento de 168 pb do gene hexon do adenovírus. A subtipagem dos vírus detectados foi realizada por enzima de restrição e por sequenciamento genético. Os dados clínicos dos pacientes infectados foram obtidos dos prontuários médicos. A nested PCR foi padronizada, para o gene hexon, no setor de biologia molecular do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná. Os subgêneros encontrados por enzima de restrição e sequenciamento foram B:1, B:2, C e D. Foram obtidas 31 sequências para o gene VA-RNA, das quais, 19 representam sequências de consenso entre ambas as fitas do DNA, enquanto em outras 12 apenas uma das fitas apresentava condições para análise. A análise da árvore filogenética foi organizada com as sequências nucleotídicas obtidas para o gene VA-RNA. Os valores de divergência genética entre as amostras obtidas por este estudo identificadas como de um mesmo grupo apresentaram uma grande variação, com os altos valores de divergência sendo encontrados nos subgêneros B:1 tipo 3 e B:1 sorotipo 7 e baixos valores de divergência entre as demais linhagens. Os resultados de cultura de células demonstraram uma maior sensibilidade do que a Imunofluorescência e menor sensibilidade do que os resultados da PCR. A incidência do HAdV foi maior em crianças com idade inferior a dois anos. Os sintomas mais observados foram taquipneia, esforço respiratório, febre, taquicardia e tosse. Houve coinfecções virais em seis casos (18,2%). Doze pacientes hospitalizados (36%) evoluíram para o óbito. Os subgêneros que mais levaram à internação em Unidade de Tratamento Intensivo e a óbito foram B:1 e C. Palavras-chave: Adenovírus humanos; Análise de sequência de DNA; Filogenia; Infecção respiratória; Sintomas; Evolução fatal.Abstract: The adenovirus was described in 1953 and has considerable significance in respiratory infections due to high frequency and severity of clinical manifestations. Acute respiratory infections have been a major source of global mortality in children under five years. The objectives of this study were to standardize the molecular detection of adenovirus for introduction into the routine at the virology laboratory of the Hospital de Clinicas, Federal University of Paraná (HC-UFPR), to compare the operational characteristics of the molecular biology method with standard techniques of viral antigen research and isolation in cell culture to study viral genomic characterization study and its association with clinical isolates of adenovirus in nasopharyngeal aspirate samples from the year 1996 until the year 2008, reporting epidemiological and clinical aspects of pediatric patients infected with adenovirus at HC-UFPR. The study was conducted retrospectively on 22 nasopharyngeal aspirate stored samples and prospectively in 11. DNA was extracted using the guanidine thiocyanate method and nested PCR was performed to amplify a 168 bp fragment of the adenovirus hexon gene. The subtyping of the virus was performed by restriction enzyme and genetic sequencing. The clinical data of infected patients were obtained from medical records. The nested PCR was standardized in the laboratory of molecular biology of the HC-UFPR. The subgenus found by restriction enzyme and sequencing were B:1, B:2, C and D. It was obtained 31 sequences for the VA-RNA gene, of which 19 represent consensus sequences of both strands of DNA, while in the remaining only is could be analysed. The incidence of adenovirus was higher in children younger than two years. The symptoms observed were tachypnea, respiratory distress, fever, tachycardia, and coughing. There was viral co-infections in six cases (18.2%). Twelve hospitalized patients (36%) died. The analysis of phylogenetic tree was organized with the nucleotide sequences obtained for the VARNA gene. The values of genetic divergence among the samples obtained by this study identified as a group varied widely, with high values of divergence being found in subgenus B:1 serotype 3 and serotype 7 and low levels of divergence between the other strains. The subgenus that led to more admissions in the Intensive Care Unit and death were B:1 and C. The results of cell culture showed a higher sensitivity than the immunofluorescence and lower sensitivity than the PCR. Key words: Adenoviruses human, Sequence analysis DNA, Phylogeny, Respiratory infection, Symptoms, Fatal outcome