Efeito estacional sobre características ovarianas e produção de oócitos em vacas Bos indicus no Mato Grosso do Sul

The present study evaluated the effect of two seasons of the year (dry and rainy) on the ovarian characteristics of Bos indicus slaughter cows in Mato Grosso do Sul, Brazil. Ovaries (n = 10) were collected on November and December of 1998 and from January to October of 1999. In the laboratory the ovaries were evaluated for weight (g), volume (Vol. (cm³) = 3/4 p x length /2 x width/2 x thickness/2), number of corpus luteum, number of follicles >; 9 mm of diameter, total number of follicles < 9 mm, number of oocytes viable and degenerated. The main effect of the season (dry or rainy) was estimated by analysis of variance (t test), for completely randomized design. Analysis of simple correlation (Sperman rank correlations) was performed among the variables studied, which were adjusted for the season effect. The results demonstrated that the effect of ovaries weight (5.1 x 6.5 g), total follicles (10.1 x 13.7), corpus luteum (0.32 x 0.47, p < 0.05) and the frequency of viable oocytes (19.6% x 35.6%) on the total oocytes recovered varied significantly (p < 0.01) between the dry and rainy season, respectively. Correlation analysis (r) showed significant coefficients (p < 0.01) between weight and volume of the ovaries (r = 0.78), weight and total follicles (r = 0.32), weight and corpus luteum (r = 0.41), total follicles and viable oocytes (r = 57), among others. It is concluded that important changes in ovarian function, based on the production and quality of oocytes, can be estimated between the dry and the rainy season. Therefore, based on those characteristics, the rainy season is the most appropriate for implantation of reproductive programs in commercial herds.Verificou-se o efeito de duas distintas estações do ano (seca e chuvosa) sobre algumas características ovarianas em vacas Bos indicus abatidas na região de Campo Grande, MS. Ovários (n = 10) foram obtidos nos meses de novembro e dezembro de 1998 e de janeiro a outubro de 1999. No laboratório, os ovários foram avaliados quanto ao peso (g), volume (Vol. (cm³) = 3/4 p x comprimento/2 x largura/2 x espessura/2), número de corpos lúteos, número de folículos com >; 9 mm de diâmetro, número total de folículos com menos de 9 mm, número de oócitos, oócitos viáveis e oócitos degenerados. O efeito principal da estação (seca ou chuvosa) foi estimado pela análise de variância (teste t), para modelos completamente ao acaso. Utilizou-se a análise da correlação simples entre as variáveis estudadas, ajustadas para o efeito da estação. Os resultados revelaram que o peso dos ovários (5,1 x 6,5 g), folículos totais (10,1 x 13,7), corpos lúteos (0,32 x 0,47, p < 0,05) e a percentagem de oócitos viáveis (19,6% x 35,6%) sobre o total de oócitos variaram significativamente (p < 0,01) entre as estações seca e chuvosa, respectivamente. A análise da correlação (r) mostrou coeficientes significativos (p < 0,01) entre peso e volume (r = 0,78), peso e total de folículos (r = 0,32), peso e corpos lúteos (r = 0,41), total de folículos e oócitos viáveis (r = 57), entre outros. Concluiu-se que importantes modificações na função ovariana, com base na produção e qualidade dos oócitos, podem ser estimadas entre a estação seca e chuvosa. Com base nestas características, a estação chuvosa torna-se mais favorável para a implantação de programas reprodutivos em rebanhos comerciais

Kinetics of bovine cryopreserved sperm cells after sexing by flow cytometry

O objetivo deste estudo foi comparar a cinética de sêmen bovino criopreservado não sexado, sexado X e sexado Y antes e depois da seleção espermática por gradiente de Percoll. Amostras criopreservadas de sêmen não sexado (grupo NS) e sexado X (grupo SX) e Y (grupo SY) por citometria de fluxo, de quatro touros, foram avaliadas quanto à motilidade e à cinética espermática com o "computer-assisted semen analysis" (CASA) e o restante da amostra de cada grupo foi submetido à seleção espermática em gradiente de Percoll (45:60%). Após a seleção, foram realizadas as mesmas avaliações que antes da passagem pelo Percoll. A motilidade do grupo NS foi superior à dos grupos SX e SY e não foi observada diferença entre os grupos SX e SY nos parâmetros de cinética espermática obtidos pelo CASA, antes ou após a passagem pelo Percoll. Foi observado aumento na motilidade para todos os grupos como efeito da seleção pelo Percoll. O processo de sexagem por citometria de fluxo afeta a cinética espermática, e a passagem pelo Percoll aumenta a motilidade do sêmen sexado e não sexado sem alterar a cinética do sêmen não sexado.The objective of this study was to compare the kinetics of bovine cryopreserved nonsexed, sexed for X and sexed for Y sperm cells before and after selection using Percoll gradient. Cryopreserved nonsexed (NS group) semen samples and sexed for X (SX group) and for Y (SY group) by flow cytometry, from four different sires, were analyzed for motility by computer-assisted semen analysis (CASA), and the remainder of the sperm samples for each group was submitted to Percoll (45:60%) gradient selection. After Percoll selection, the same sperm analyses done before the passing through Percoll gradient were performed. Sperm motility was higher in the NS group than in the SX and SY groups, and no differences were observed between these last two groups for any of the sperm parameters evaluated by CASA, either before or after Percoll selection. Percoll increased motility for all groups. Changes in other characteristics evaluated by CASA were observed only in the NS group. Sex-sorting procedure by flow cytometry affected sperm kinetics, and Percoll gradient selection increases motility in sexed and nonsexed sperm without affecting the kinetics of nonsexed sperm

Efeito da suplementação da insulina transferrina selênio (its) na produção e qualidade de embriões bovinos

Visto que o Brasil é um importante país no desenvolvimento da produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos, a eficiência dessa biotécnica ainda possui algumas limitações como por exemplo, o estresse oxidativo gerado pela produção exacerba de radicais livres. Os radicais livres são produzidos naturalmente pelo metabolismo, mas quando em altas concentrações geram danos ao sistema biológico, podendo causar apoptose e lipoperoxidação lipídica, consequentemente influenciando nas baixas taxas de produção de embriões e diminuindo a qualidade embrionária. Portanto, torna-se necessário buscar alternativas para minimizar os problemas causados pelo estresse oxidativo, como por exemplo o uso de antioxidantes eficientes, estáveis, seguros e não tóxicos para a suplementação dos meios utilizados para produção de embriões. Tendo em vista nisso foi testado o uso do ITS (insulina transferrina e selênio) como antioxidantes em ovócitos coletados de ovários oriundos de abatedouro através de quatro tratamentos: T1: -CIS -ITS; T2: +CIS -ITS; T3: +CIS +ITS; T4: -CIS +ITS do meio de maturação in vitro. Esses ovócitos foram submetidos ao restante das etapas de produção in vitro de embriões, fecundação e cultivo in vitro. No primeiro experimento foi visualizado as taxas de produção de embriões de cada tratamento. Já no segundo experimento foi aferido a qualidade dos embriões a partir da coloração diferencial realizada em cada embrião produzido. Sendo possível avaliar se a presença do ITS ou não interferiu na produção e qualidade dos embriões produzidos. Em ambos os experimentos a presença do ITS na maturação in vitro não influenciou de forma significativa a produção e qualidade embrionária (p0,05). Portanto há uma necessidade de mais estudos para avaliar outras formas de suplementação com ITS e associações onde tal complexo pode ser funcional, seja em outras concentrações ou em vias de uso como no cultivo in vitro, ou associação de seu uso nas duas etapas, maturação e cultivo in vitr

Composição de fosfolipídios e resistência à vitrificação de blastocistos produzidos in vivo de uma raça de suíno naturalizada brasileira

Blastocistos de suínos foram submetidos ao MALDI-TOF para se identificarem os principais fosfolipídios (PL). Depois, parte destes embriões (D6) foram vitrificados (n=52), ou permaneceram frescos (grupo controle, n=42). Após o aquecimento, os blastocistos foram cultivados in vitro para se avaliar a reexpansão e a eclosão (BE) às 24 e 48 horas. Finalmente, às 48 horas, os BE foram submetidos ao RT-qPCR em busca dos genes BCL2A1, BAK, BAX e CASP3. No MALDI-TOF, a intensidade do íon foi expressa em unidades arbitrárias. O desenvolvimento embrionário foi comparado por qui-quadrado (P0,05) entre blastocistos frescos ou vitrificados às 24 (33,3%, 32,7%) e 48 horas (2,4%, 13,5%). As taxas de eclosão foram maiores (P 0.05) between fresh or vitrified blastocysts at 24 (33.3%; 32.7%) or 48 hours (2.4%; 13.5%). Hatching rates were higher (P< 0.05) for fresh compared to vitrified at 24 (66.7%; 15.4%) and 48 hours (97.6%; 36.0%). BAX was overexpressed (P< 0.05) after vitrification. In conclusion, Piau blastocysts can be cryopreserved by Cryotop. This study also demonstrated that the apoptotic pathway may be responsible for the low efficiency of porcine embryo cryopreservation

Factors influencing in vitro maturation of pig oocytes

The present studies were undertaken to investigate the effect of different medium supplements, the involvement of steroid hormones and the role of estradiol-17$\beta$ on in vitro maturation of pig oocytes. Cumulus oocyte complexes (COC) were obtained by aspiration of 2-5 mm follicles. The oocytes were cultured for 42 hours at 38.5\sp\circC in mTCM-199 supplemented with LH, FSH, follicular fluid, fetal calf serum and estrous gilt serum, alone or in combination. After culture the oocytes were stained with 1% lacmoid. Oocytes showing metaphase II chromosomes were considered nuclear matured. Cytoplasmic maturation was assessed by the presence of one female pronucleus and at least one male pronucleus after in vitro fertilization. Addition of 10% pFF in combination with gonadotropins during maturation provided the best environment for in vitro maturation with the highest percentage of oocytes reaching nuclear and cytoplasmic maturation. Addition of various levels of estrogen, progesterone and testosterone either alone or in combination had no effect on nuclear or cytoplasmic maturation. During culture COC and cumulus cells secreted both estrogen and progesterone. To investigate the role of estradiol in maturation COC were cultured in steroid free medium in the presence of either an antiestrogen (tamoxifen) or an aromatase inhibitor (4-OHA). Before use, the content of estradiol receptors (ER) in CC and oocytes were determined by a binding assay, before, during and after maturation. The highest levels of ER were observed at 24 and 36 hours of maturation on the oocytes and CC respectively. The presence of tamoxifen and 4-HOA in the culture medium did not influence nuclear or cytoplasmic maturation. In conclusion, the optimal environment for in vitro maturation of pig oocytes was found to be culture medium containing gonadotropins and 10% porcine follicular fluid. No steroids need to be added to the maturation medium with estradiol not necessary for pronuclei formation.U of I OnlyETDs are only available to UIUC Users without author permissio

Biochemical profiling of the follicular environment to predict oocyte competence in cattle.

To identify markers of oocyte competence, we compared the biochemical characteristics of fluid and cells from follicles containing oocytes with different capacities to form an embryo. Follicles (5-6 mm) were dissected, and follicular fluid (FF), granulosa cells (GC), cumulus cells (CC) from immature and mature cumulus-oocyte-complexes (COC) were individually collected. The oocytes were matured, fertilized, and cultured individually until day 8 (D8) of development. On D8, the samples were grouped according to embryo production into those that gave rise to blastocysts (EMB) and those that did not reach the blastocyst stage (NEMB). In CCs from immature and mature COCs and GCs, expression of CASP3, SERPINE2, VCAN, LUM, FSHR, EGFR, PGR, and GHR genes was quantified. Cell-free DNA (cfDNA), progesterone, and estradiol concentrations in the FF were determined. Data were analyzed by Mann-Whitney U test (GraphPad Prism 9). GHR was highly expressed in immature CCs from the EMB group, whereas CASP3 was highly expressed in mature CCs from the NEMB group (P<0.05). During maturation, the expression of CASP3 and GHR genes increased only in the NEMB group. ART2 cfDNA was highly detected in FF of the NEMB compared to the EMB group. Progesterone concentration was similar between the groups, whereas estradiol concentration was higher (P<0.05) in the EMB than in the NEMB group. It was concluded that a higher level of GHR transcripts in immature CCs, lower CASP3 expression in CCs from matured COCs, lower levels of ART2, and higher estradiol concentrations in FF may indicate oocytes with greater potential for development