Expressão temporal de genes alfa, beta e gama durante a infecção pelo BoHV-5

Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell’s transcriptome changes over the course of infection

LEAD POISONING IN DOG – CASE REPORT

The present study reports the occurrence of lead poisoning in a male, 2 year-old mongrel dog attended at UNESP Botucatu Veterinary Hospital. The animal was brought to the hospital with claim of gastrointestinal and nervous disturbs for 10 days, worsening in the last 24 hours. After unsuccessfully attempts to control status epileticus, the animal died. Hematological evaluation revealed significant rubricytosis and basophilic stippling, highly suggestive of lead poisoning. Serum lead concentration confirmed toxic levels of this element. Necropsy evidenced the presence of foreign bodies in stomach (one stone and two metallic objects) and, microscopically, characteristic inclusions in renal parenchyma. Fragments obtained from liver and kidneys revealed lead concentrations of 0, 8 μg/g and 25 μg/g, respectively, which in association to clinical signs of saturnism, determined the diagnosis of lead poisoning

Early type 2 diabetes and obesity does not affect eicosanoids level and renal morphology in a rat model/ Diabetes tipo 2 no estágio inicial e obesidade não afetam o nível de eicosanóides e a morfologia renal em um modelo de rato

This study evaluated the effects of the early development of Diabetes Mellitus 2 (T2D) and diet-induced Obesity in the eicosanoid pathways and its effects on renal tissue. Thirty male Wistar rats were fed with a high-fat or standard diet and were divided into 3 groups: The Control group received a standard diet, the T2D group received a high-fat diet and a single dose of streptozotocin (25mg/Kg) and the Obesity group received high-fat diet. Caloric intake, feed efficiency, body weight gain, visceral fat, blood glucose, plasma levels of 14,15 EET/DHET, 20-HETE, and kidneys’ morphology were analyzed. Total caloric intake and feed efficiency were higher in the animals of the Obesity group than in Control.  Body weight gain, visceral fat, and blood glucose were higher in Obesity and T2D induced groups than in Control. Body weight gain, visceral fat, and feed efficiency associated positively with blood glucose. However, there was no difference in 14,15 EET/DHET, 20-HETE levels, or kidney injury between groups. In conclusion, we were unable to assess whether changes in eicosanoids are due to obesity or diabetes induction. So, this study suggests that longer periods of homeostatic disturbance caused by these protocols seem to be necessary to induce complications related to the disruption of the eicosanoid’s pathway and its effects on renal tissue.

Correlação do status sorológico para FIV e a gravidade da gengivoestomatite crônica felina

Feline chronic gingivostomatitis (FCGS) is a challenge for the veterinary practitioner since its etiology and treatments are still undefined. The present paper investigated the role of the feline immunodeficiency virus (FIV) in the severity of the FCGS. Oral mucosal biopsies obtained from 19 cats with FCGS were divided into two groups according to their FIV serology status. Later, the clinical lesion score was correlated with the histopathological grade of FCGS lesions and the degree of immunostaining in both groups. Most of the animals had significant histological changes; however, no correlation with FIV immunostaining intensity was observed. It was concluded that the presence of FIV infection or the animal’s seropositivity status does not seem to interfere with the severity of clinical signs nor the degree of histopathological changes when compared to the seronegative group.A gengivoestomatite crônica felina (FCGS) é um desafio para o veterinário, uma vez que a sua etiologia e tratamentos permanecem indefinidos. O presente trabalho investigou o papel do vírus da imunodeficiência felina (FIV) na gravidade do FCGS. Biópsias da mucosa oral de 19 gatos com FCGS foram divididas em dois grupos de acordo com o status sorológico de FIV. Mais tarde, o escore de lesão clínica foi correlacionado com o grau histopatológico das lesões FCGS e o grau de imunocoloração em ambos os grupos. A maioria dos animais apresentou alterações histológicas significativas, porém não foi observada correlação com a intensidade de imunocoloração para FIV. Concluiu-se que a presença de infecção por FIV ou o estado soropositivo dos animais não parece interferir com a gravidade dos sinais clínicos nem com o grau de alterações histopatológicas quando comparado ao grupo soronegativo

Avaliação histopatológica, imunoistoquímica e detecção molecular do DNA viral no sistema nervoso central de bovinos inoculados experimentalmente com herpesvirus bovino 5

A meningoencefalite herpética bovina é uma infecção viral do SNC causada pelo BoHV-5, um vírus DNA de fita dupla, envelopado, pertencente á família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae. A meningoencefalite acomete principalmente animais jovens, ocorrendo principalmente em forma de surtos de casos isolados ou de surtos com morbidade baixa e letalidade é alta. A doença não possui caráter sazonal e nem predileção por raça ou sexo. Surtos de meningoencefalite por BHV-5 têm sido relatados após algumas práticas de manejo, todas associadas a situações de estresse. O diagnóstico final baseiase nos achados clínicos, epidemiológicos, macro e microscópicos e o isolamento viral associado a técnicas como imunoperoxidase, restrição da endonuclease e PCR. Entrentanto, o isolamento viral nem sempre é possível devido a distância das fazendas e ao tempo entre a morte dos animais e a coleta das amostras. Nestes casos a imunoistoquímica e a PCR são ferramentas diagnósticas úteis. Além disso, estas técnicas permitem o diagnóstico a partir de tecido fixado em formol e incluído em parafina. O objetivo deste trabalho foi descrever as alterações histopatológicas nas diferentes regiões do sistema nervoso central de bovinos infectados experimentalmente pelo BoHV-5 e relacionar a intensidade e o tipo das lesões encontradas com os resultados da PCR e da imunoistoquímica (IHQ) para detecção do BoHV-5. Para isso, blocos de parafina do sistema nervoso central de seis bovinos provenientes de animais inoculados experimentalmente pelo BoHV-5 foram avaliados microscopicamente e pelas técnicas da IHQ e da PCR. Todos os animais apresentaram alterações histopatológicas de meningoencefalite não supurativa, com intensidade variável entre as áreas e os animais, sendo que as regiões do córtex cerebral apresentaram alterações microscópicas mais acentuadas...Bovine meningoencephalitis is a viral infection caused by BHV-5, a doublestranded DNA and enveloped virus, that belongs to the Herpesviridae family, subfamily Alphaherpesvirinae. Meningoencephalitis mainly occurs in young animals, causing individual deaths or outbreaks with low morbidity and high mortality. The disease has no seasonal character or predilection for breed or gender. Outbreaks of meningoencephalitis have been reported associated with stressful factors like weaning, vaccinations, transport, changes in feeding. The final diagnosis is based on clinical, epidemiological, gross and microscopic findings and virus isolation associated with others techniques like immunoperoxidase, endonucleases restriction and PCR. Wherever, virus isolation is no always possible due the distance of farms and time from animal death to the samples collection. Immunohistochemistry and PCR are better diagnostic tools in this cases. Besides this two techniques could be used in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. The aim of this study was to describe the histological changes in the CNS of BHV-5 experimentally infected calves and associate it with the PCR and IHC results. For this purpose, formalin-fixed, paraffin-embedded CNS tissue from previously BHV-5 inoculated calves (Cunha, 2010) were microscopically evaluated and were tested by immunohistochemistry (IHC) and polymerase chain reaction (PCR). All animals presented non-suppurative meningoencephalitis that had variable distribution among the cases and among the various sections of brain regions in each case. The cerebral cortex had more accentuated lesions. From 108 evaluated areas, 32.41% and 35.19% were positives by IHC and PCR, respectively. The IHQ and PCR positive areas had more accentuated microscopic lesions. These findings extend the knowledge about the BHV-5 distribution in the CNS of calves and show that IHC and PCR could be usefulFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP

Expressão diferencial de mRNA em células de cultivo infectadas ple herpesvírus bovino 5

Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an Alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis mainly in young cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Besides BoHV-5 epidemiology, pathological findings and diagnosis were well known, the molecular interactions between host cell and BoHV-5 are poorly understood. Molecular biology techniques such as quantitative PCR (qPCR) and RNA sequencing (RNA-seq) are important tools to study virus and host cell interactions. In this study we infected MDBK cells and use the extracted mRNA at 0, 6, 12, 18 and 24h post infection (pi) to analyse BoHV-5 (bICP0, UL9 e US4) and host cell gene (GAPDH) expression using qPCR and 1h, 6h and 24h pi in the RNA-seq study. Mock-infected cells were used to control purpouse. The qPCR releveled that the three BoHV-5 genes showed the same expression behavior during the infection and the GAPDH gene were down-regulated in the infected group. At least 900 genes were differentially expressed during BoHV-5 in each moment analysed by RNA-seq. These genes were up- or down-regulated and mainly associated with cell cycle, interleukin production, inflammatory cells chemotaxis, DNA damage and repair, response to virus, apoptosis, oxidation-reduction process, and ubiquitination pathways. The results demonstrate new insights about BoHV-5 and bovine cells interactions and could be a starting point to new researches and to better understand the pathology of this virusHerpesvirus bovino (BoHV-5) é um alfaherpesvirus que causa meningoencefalite não-supurativa preferencialmente em bovinos jovens. Esta enfermidade ocorre naturalmente em surtos ou casos isolados, apresentando baixa morbidade e alta letalidade. A epidemiologia, as características anatomopatológicas e o diagnóstico do BoHV-5 são bem conhecido. No entanto, as interações moleculares entre a células hospedeiras e o BoHV-5 são pobremente compreendidas. Técnicas moleculares como a PCR quantitativa e o sequenciamento de RNA (RNA-seq) são importantes ferramentas para o estudo de interações entre vírus e células hospedeiras. Neste estudo células MDBK foram infectadas pelo BoHV-5, cepa SV507-99 e o mRNA extraído em 0, 6, 12, 18, e 24 horas após a infecção (pi) foi utilizado para avaliar a expressão de genes do vírus e da célula hospedeira por qPCR e o mRNA de 1h, 6h e 24h pi foram utilizado no estudo por RNA-seq. Células MDBK não infectadas foram usadas como controle. A qPCR demonstrou que os três genes do BoHV-5 estudados (bICP0, UL9 e US4) apresentaram perfil de expressão semelhante nos diferentes momentos após infecção e que o gene bovino GAPDH teve sua expressão diminuída pela infecção viral. Ao menos 900 genes foram diferencialmente expressos para cada momento de infecção na análise por RNA-seq. Estes genes estavam principalmente relacionados a vias celulares de controle de ciclo celular, produção de interleucinas, quimiotaxia para células inflamatórias, reparo e dano ao DNA, resposta a vírus, apoptose, processo oxidativo, e ubiquitização de moléculas. Estes resultados representam novos conhecimentos sobre a interação entre o BoHV-5 e as células bovinas e podem representar um ponto de partida para novas pesquisas e melhor compreensão da patogenia deste víru