Molecular and functional analysis of DAND5 in human Congenital Heart Disease (CHD)

Tese de doutoramento, Ciências Biomédicas, Departamento de Ciências Biomédicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2017The majority of congenital heart disease (CHD) is sporadic, with a minority of cases associated with a known genetic abnormality. Combinations of geneticenvironmental factors are implicated in the etiology of the disease. Recently, several studies, using mostly animal models, unraveled that perturbations in the molecular processes that precede the beginning of heart development might also be at the origin of CHD. In fact, some of the most complex CHDs are found associated with laterality defects, a disorder resulting from abnormal Left-Right axis formation. In our laboratory, the identified mouse Cerberus-like2 (Cerl2 – human DAND5), a protein that inhibit Nodal signaling, prompt us to study cardiac and laterality diseases, since the generated Cerl2 KO mice display a wide range of laterality defects and CHD. Considering the high conservation of genetic pathways regulating cardiac development in mouse and human, the main objective of the present thesis was the study of human genes involved in the Nodal pathway, focusing mostly in DAND5, in a CHD and/or laterality defects patients cohort. The sequence analysis of DAND5 revealed two patients displaying the same p.R152H variant, resulting in a substantial decreased in the function of the protein. We propose that p.R152H acts as a risk allele for CHD and/or laterality defects. In addition, we found two alterations in NODAL, two alterations in PITX2C and one alteration in CFC1. We hypothesized that the NODAL p.H165R variant can act as a common modifier and the intronic variants in NODAL and PITX2C might cause alterations in the splicing pattern of the mRNA molecules. Moreover, we generated patient-specific iPSCs to understand the molecular mechanisms of disease behind the DAND5 nucleotide variant. Although we cannot make a clearly genotype-phenotype correlation, the variants here identified probably increase the disease susceptibility due to the resulting abnormal Nodal signaling. Because most of the patients presented more than one alteration, the cumulative effect of each variant within the pathway seems to enhance even more these risk. Therefore, the imbalance in dosage-sensitive Nodal signaling is a common denominator for laterality defects and associated CHDs.Uma das questões fulcrais da biologia do desenvolvimento continua a ser como é que uma única célula, o oócito fecundado, se desenvolve num ser tão complexo e especializado, com os tecidos e órgãos diferenciados e organizados em torno de três eixos, o anterior-posterior (AP), dorso-ventral (DV) e esquerdo-direito (LR). De um modo geral, o desenvolvimento embrionário humano pode ser dividido em três períodos: o primeiro, chamado de período zigótico, inicia-se com a fusão dos gametas masculino e feminino, formação do zigoto e termina com a implantação do blastocisto na parede do útero duas semanas após a fecundação. Durante o segundo período, ou período embrionário, que vai desde a terceira até à oitava semana de gestação, ocorre a gastrulação, com a formação e diferenciação dos folhetos embrionários (ectoderme, mesoderme e endoderme), e a formação dos órgãos e sistemas fisiológicos. O ultimo período, chamado fetal, vai desde o terceiro mês de gestação até ao nascimento e é caracterizado pelo crescimento do embrião, maturação e funcionalização das estruturas e órgãos. Durante o desenvolvimento do embrião, o coração é o primeiro órgão interno a ser formado e a tornar-se funcional de modo a bombear sangue por volta das três semanas de gestação, suprindo as necessidades do embrião e garantindo a sua sobrevivência. Na maioria dos vertebrados o desenvolvimento cardíaco segue o mesmo padrão de formação. O coração forma-se a partir de duas regiões cardíacas bilaterais que advêm de uma região progenitora comum na gastrulação, a mesoderme cardíaca. A mesoderme cardíaca recebe informação posicional dos três eixos embrionários, porém o efeito do eixo Esquerda-Direita (ED) tem recebido particular atenção. Os dois “pools” bilaterais de células precursoras cardíacas mesodermais migram para a linha média onde se juntam e dão origem ao crescente cardíaco. Este crescente cardíaco vai formar posteriormente um tubo cardíaco linear primordial. De seguida, este tubo alonga e sofre um processo de “looping” para a direita levando à formação dos ventrículos e aurículas. Subsequentemente, ocorre a diferenciação, especialização e septação das quatro camaras cardíacas e válvulas proporcionando as paredes necessárias para a separação física da circulação sistémica e pulmonar de sangue. Por último a formação do sistema de condução cardíaco e maturação dos cardiomiócitos, culminam na formação de um coração inteiramente funcional. As doenças cardíacas congénitas (DCC) são a manifestação clínica de problemas durante o desenvolvimento embrionário do coração. Esta doença é a forma mais comum de defeito à nascença, ocorrendo em cerca de 8 em 1000 nados vivos, bem como a principal causa não-infeciosa de morte no primeiro ano de vida. Na maioria dos casos (80%), esta doença tem origem desconhecida e manifesta-se isoladamente em doentes não sindrómicos e não seguindo os padrões de hereditariedade definidos por Mendel, sendo considerada uma doença complexa com origem multifatorial. Esta complexidade advém do facto de a doença em muitos casos se apresentar geneticamente heterogenica, com penetrância reduzida e expressividade genética variável. Para além disso, fatores de risco ambientais foram também identificados como contribuído para o risco de desenvolver a doença. Nos dias de hoje, um modelo envolvendo tanto fatores genéticos como a interação genes-ambiente, é a explicação mais plausível para as altas frequências verificadas para a doença cardíaca congénita. Nos últimos anos, vários esforços foram feitos de modo a se compreender os mecanismos moleculares que levam a uma má formação do coração. Estes estudos, usando principalmente animais modelo e genética molecular humana, da morfogénese do coração e dos primeiros passos da determinação do eixo de simetria esquerdo-direito durante a embriogénese, indicam que na maioria dos casos de distúrbios de lateralidade é observada uma malformação cardíaca complexa, sugerindo que as DCC podem dever-se a defeitos de lateralidade na morfogénese do coração. Uma das redes regulatórias por detrás do estabelecimento do eixo esquerdodireito é a via de sinalização Nodal, um fator de crescimento da família TGF-b, que é expresso assimetricamente do lado esquerdo do nó e placa lateral esquerda da mesoderme de ratinho. Os fenótipos cardíacos de ratinhos geneticamente modificados para desativar a sinalização de nodal ou a sua regulação, demonstraram que o desenvolvimento cardíaco depende vivamente do estabelecimento do eixo E-D embrionário. Para além disso, foram identificadas variantes genéticas em genes envolvidos na via de sinalização Nodal em doentes com DCC. O nosso laboratório identificou um membro da família Cerberus/DAN, o gene Cerberus-like2 (Cerl2), que é assimetricamente expresso no lado direito do nó em ratinho. O gene Cerl2 codifica para uma proteína secretada capaz de se liga diretamente a Nodal, inibindo a sua via de sinalização. Na presença de Cerl2 a atividade da via de sinalização Nodal restringe-se apenas ao lado esquerdo do embrião, o que culmina com uma morfogénese normal dos órgãos do abdómem. Ratinhos knock-out para o gene Cerl2, em que o gene Nodal passa a poder ser expresso e induzir a sua cascata de sinalização em ambos os lados da placa lateral da mesoderme, revelaram uma ampla gama de defeitos de lateralidade - situs inversus, isomerismos e heterotaxia - e malformações cardíacas - formação incompleta das aurículas, defeitos no septo ventricular, falha na rotação das principais artérias (transposição das grandes artérias, ventrículo direito de dupla saída), looping cardíaco anormal (randomizado), posicionamento do ápex cardíaco e hipertrofia ventricular - o que nos levou a suspeitar que alterações neste gene poderiam estar associadas a doenças de lateralidade e/ou casos isolados de doenças cardíacas congénitas. Dado que as vias genéticas que regulam o desenvolvimento cardíaco em ratinhos e humanos são conservadas, o principal objetivo desta tese foi o estudo de alguns dos genes homólogos humanos envolvidos na via de sinalização Nodal, com principal foco no gene DAND5, homólogo humano de Cerl2, mapeado no cromossoma 19, região 19p13.2, mas também verificando a existência de variantes nos genes NODAL, PITX2C e CFC1 numa cohort de doentes com defeitos cardíacos congénitos com origem em perturbações do eixo esquerdo-direito. A análise dos resultados da sequenciação de DNA do gene DAND5 permitiunos identificar dois doentes com a mesma variação. Clinicamente, um dos doentes apresenta um fenótipo de defeito no septo ventricular com aorta conectada aos dois ventrículos, atresia pulmonar e isomerismo esquerdo. O outro doente apresenta um caso extremo de tetralogia de Fallot (defeito no septo ventricular com aorta conectada aos dois ventrículos, hipertrofia do ventrículo esquerdo e atresia pulmonar). A variante, identificada nos dois doentes como heterozigótica, leva à substituição de um nucleótido guanina por uma adenina na posição 455 do exão 2, resultando na substituição de um aminoácido arginina por uma histidina (p.R152H) numa região altamente conservada e funcionalmente importante da proteína DAND5. De modo a entendermos o potencial efeito da alteração p.R152H na proteína DAND5, fizemos um estudo in silico recorrendo a vários programas bioinformáticos. Os resultados dessas predições foram inconclusivos uma vez que 3 programas apontam para um possível efeito nefasto enquanto que outro programa sugere que a variante não tem qualquer efeito na proteína. Para clarificarmos a função desta proteína variante, avaliámos o seu efeito na regulação da via de sinalização Nodal recorrendo a um ensaio funcional de luciferase. O resultado obtido mostra uma diminuição substancial da função da proteína mutante comparada com a proteína wild-type. Embora os fenótipos dos doentes sejam muito semelhantes, não podemos fazer uma clara correlação do genótipo com o fenótipo pois a variante c.455G>A foi reportada em bases de dados publicas como variante de nucleótido único (rs45513495). Além disso, a mãe de um dos doentes é portadora da variante sem apresentar indícios de doença, sugerindo uma penetrância incompleta, expressividade genética variável ou o efeito de fatores ambientais. Estas observações estão de acordo com a complexidade das doenças cardíacas congénitas e/ou defeitos de lateralidade e podem refletir a acção de variantes modificadoras ou outras variantes genéticas na via de sinalização que podem exacerbar ou atenuar o efeito da variante p.R152H na proteína DAND5 e nos fenótipos dos doentes. Portanto, nós propomos que esta variação no gene DAND5 pode ser um alelo de risco para o desenvolvimento de DCC e/ou defeitos de lateralidade. Por esta razão, decidimos levar a cabo uma busca de possíveis alterações em genes que fazem parte desta cascata Nodal. Foram assim identificadas uma nova alteração na zona codificante do gene CFC1, sem efeito funcional aparente, e quatro polimorfismos, um na zona codificante e outro no intrão do gene NODAL e dois na zona não codificante do gene PITX2C em doentes com uma vasta gama de defeitos. Tendo em conta a análise levada a cabo por um programa bioinformático que permite analisar se alterações genéticas podem afetar o processo de splicing, nós verificamos que de facto, as variantes genómicas encontradas fora das zonas codificantes dos genes NODAL e PITX2C podem resultar em moléculas de RNA mensageiro anormais, principalmente devido à criação ou disrupção de locais para a ligação da maquinaria de splicing. Quanto à variante na zona codificante do gene NODAL, esta encontra-se no exão 2, e leva à substituição do aminoácido Histidina por uma Arginina na posição 165 (p.H165R). Esta variante já tinha sido reportada em dois estudos de 2008/2009 nos quais os autores verificaram, recorrendo a um ensaio funcional de lucifarese, que a variante leva à redução da atividade da proteína NODAL e parece atuar como variante modificadora e como fator de risco quando associada a outras possíbeis alterações em genes da via Nodal, com os quais este normalmente interage. Para além disto, e com o objetivo de modelar a doença e estudar os mecanismos moleculares por de trás de uma simples variação num nucleótido, geramos células estaminais induzidas de um dos doentes com a variante no gene DAND5. Estas células foram caracterizadas, apresentado uma morfologia, expressão de marcadores pluripotentes e cariotipo normais. Em conclusão, embora não possamos fazer uma correlação dos genótipofenótipo, nem classificar as alterações identificadas neste estudo como alelos associadas a doença por si, estas variantes, podem, no entanto, aumentar a suscetibilidade para o desenvolvimento de DCC e/ou defeitos de lateralidade. Uma vez que a maioria dos doentes apresenta mais do que uma das variantes no seu genoma, o efeito cumulativo de cada variante na via parece aumentar ainda mais o risco para desenvolver doença. Portanto, o desequilíbrio dos níveis adequados da via de sinalização Nodal, em ambos os lados da placa lateral da mesoderme, devido a uma ou várias variantes nos seus componentes, é um denominador comum para defeitos de lateralidade e/ou doenças cardíacas congénitas

Generation of a gene-corrected human induced pluripotent stem cell line derived from a patient with laterality defects and congenital heart anomalies with a c.455G > A alteration in DAND5.

This work was supported by Fundação para a Ciência e a Tecnologia (PTDC/ BIM-MED/3363/2014) and iNOVA4Health -UID/Multi/04462/ 2013, a program financially supported by Fundação para a Ciência e Tecnologia/ Ministério da Educação e Ciência, through national funds and co-funded by FEDER under the PT2020 Partnership Agreement.Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) from individual patient basis are considered a powerful resource to model human diseases. However, to study complex multigenic diseases such as Congenital Heart Disease, it is crucial to generate perfect isogenic controls to understand gene singularity and contribution. Here, we report the engendering of an isogenic hiPSC line with homozygous correction of c.455G > A alteration in the DAND5 gene, using CRISPR/Cas9 technology. The characterization of a clone of this cell line demonstrates normal karyotype, pluripotent state, and potential to differentiate in vitro towards endoderm, mesoderm, and ectoderm.publishersversionpublishe

Estimación de orientación de un dron mediantes método bioinspirado basado en Ocelos

Desde siempre, la naturaleza ha sido una de las mayores fuentes de inspiración del ser humano, a lo largo de su historia, e incluso en el mundo actual inundado por la tecnología, todavía esta nos demuestra que nos faltan cosas por aprender y mejorar. Este deseo de aprender de la naturaleza se unió a la ciencia en las llamadas biónica y biomimesis, dando lugar al desarrollo de por ejemplo los sistemas bioinspirados, en los cuales se basará este proyecto. En concreto esta investigación se nos plantea el desarrollo de un sistema, capaz de replicar la funcionalidad de los órganos visuales llamados ocelos, mediante un sistema basado en las redes neuronales convolucionales. Estos son pequeños ojos encontrados en gran variedad de insectos, y entre otras cualidades se investiga que les ayuden a orientarse durante el vuelo. Al existir esta relación, conseguir una red entrenada permitiría su uso en vehículos y robots aéreos, consiguiendo una alternativa puede que incluso mejor que otros métodos electrónicos. El objetivo por lo tanto, será diseñar una red que con los datos de entrada de los que disponen los ocelos orgánicos, consiga predecir con la mayor fiabilidad posible los datos espaciales del sistema.Historically, nature has been one of the greatest sources of inspiration for the human being, and even in the current world, awash by technology, it still remind us that there are many things left to learn and improve. This desire to learn from nature joined science in the so-called bionics and biomimetics, giving rise to for example the development of bio-inspired systems, on which this project will be based. Specifically, this research shows the development of a system capable to replicate the functionality of visual organs called ocellis, by using convolutional neural networks. These are small eyes that can be found in a great variety of insects and, among other features, investigations have proved that they are helpful for fly orientation. Therefore, using a trained network would allow us to implement it in aerial vehicles and robots, getting an alternative that might be better than other electronic methods. The objective will be to design a network that, with the input data available for organic ocelli, can predict the spatial data of the system with the highest possible accuracy.Universidad de Sevilla. Grado en Ingeniería Electrónica, Robótica y Mecatrónic

Ações não humanas no mundo missioneiro da província jesuítica do Paraguay

O presente artigo tem por finalidade apresentar a participação dos não humanos e os impactos causados por problemas ambientais na convivência com os Guarani e jesuítas nas missões durante os séculos XVII e XVIII. O estudo utilizou-se de documentos escritos pelos padres jesuítas, como cartas e diários, encontrados no Centro de Pesquisas Históricas da PUCRS e obras publicadas por Jaime Cortesão (1969), Hélio Vianna (1970), padre Antônio Sepp (1951) e bibliografias que abordam as missões jesuíticas e práticas indígenas. Os pressupostos teóricos se fundamentam em autores da História Ambiental que auxiliam na compreensão do comportamento de determinadas espécies e impactos ambientais. Os resultados apontam para ações de ratões, formigas e gafanhotos no cotidiano das missões jesuíticas. Situações que geraram fome e a cobrança dos indígenas para que os padres formulassem soluções para os problemas. Com base na História Ambiental demonstrou-se como os não humanos causaram constrangimentos e ao mesmo tempo influenciaram ações por parte dos padres e também de lideranças xamânicas.This article aims to present the participation of non-humans and the impacts caused by environmental problems in the coexistence with the Guarani and Jesuits in the missions during the 17th and 18th centuries. The study used documents written by the Jesuit priests, such as letters and diaries, found at the PUCRS Historical Research Center and works published by Jaime Cortesão (1969), Hélio Vianna (1970), Father Antônio Sepp (1951) and bibliographies that address Jesuit missions and indigenous practices. Theorists are based on authors of Environmental History who help to understand the behavior of certain species and environmental impacts. The results point to the actions of rats, ants and locusts in the daily life of the Jesuit missions. Situations that generated hunger and demand from the indigenous people for the priests to formulate solutions to the problems. Based on Environmental History, it was demonstrated how non-humans caused embarrassment and, at the same time, influenced actions by the priests and also by shamanic leaders

DAND5 Inactivation Enhances Cardiac Differentiation in Mouse Embryonic Stem Cells

Funding: This work was supported by the Fundação para a Ciência e a Tecnologia (PTDC/BIM-MED/3363/2014) and Scientific Employment Stimulus to JI (Norma Transitória 8189/2018), predoctoral fellowship to JG (FCT; PD/BD/136919/2018) and postdoctoral fellowship to FC (DAI/ 2019/08/SAICTPAC/0047/2015), and iNOVA4Health-UID/Multi/04462/2013, a program financially supported by Fundação para a Ciência e a Tecnologia/Ministério da Educação e Ciência, through national funds and co-funded by FEDER under the PT2020 Partnership Agreement.Deciphering the clues of a regenerative mechanism for the mammalian adult heart would save millions of lives in the near future. Heart failure due to cardiomyocyte loss is still one of the significant health burdens worldwide. Here, we show the potential of a single molecule, DAND5, in mouse pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes specification and proliferation. Dand5 loss-of-function generated the double of cardiac beating foci compared to the wild-type cells. The early formation of cardiac progenitor cells and the increased proliferative capacity of Dand5 KO mESC-derived cardiomyocytes contribute to the observed higher number of derived cardiac cells. Transcriptional profiling sequencing and quantitative RT-PCR assays showed an upregulation of early cardiac gene networks governing cardiomyocyte differentiation, cell cycling, and cardiac regenerative pathways but reduced levels of genes involved in cardiomyocyte maturation. These findings prompt DAND5 as a key driver for the generation and expansion of pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes systems with further clinical application purposes.publishersversionpublishe

Methods of evaluation of nutrient cycling in the Cerrado biome : a systematic review

Em sistemas florestais, a forma natural de aporte de nutrientes se dá através da serapilheira, a qual compreende todo material vegetal depositado ao solo. Logo, vista a importância do tema, o presente trabalho objetivou realizar uma revisão sistemática sobre as diferentes metodologias utilizadas na temática da serapilheira e ciclagem de nutrientes nas diversas fitofisionomias do bioma Cerrado. Foram avaliadas todas as publicações, independentemente do período de publicação, e catalogadas as que se enquadraram na temática: quantificação da produção e decomposição da serapilheira no bioma Cerrado, por meio de buscas no portal periódicos CAPES. Foram selecionados 26 artigos com estudos nas seguintes formações florestais: Cerrado sentido restrito; Cerradão; Matas de Galeria; Florestas de transição Cerrado-Amazônia e plantios homogêneos. A respeito das metodologias, os coletores mais comuns nos trabalhos de produção foram os de formato quadrado (0,25 m2) e o número de coletores variou bastante entre os trabalhos (de 10 a 60 coletores). As folhas contribuíram em torno de 70% ou mais do total da serapilheira. A decomposição apresentou grande variação na massa acondicionada nas bolsas e nos tempos de coleta. Com exceção de um trabalho, os manuscritos avaliados não apresentaram estudos sobre a decomposição de outros componentes da serapilheira, que não a foliar, evidenciando assim a necessidade de estudos nesta temática. Os trabalhos apresentaram tempo total de um ano de avaliação em quase sua totalidade, o que evidencia a necessidade dos monitoramentos de longo prazo, pois estudos com breve duração não permitem avaliar os efeitos de alterações interanuais. As metodologias utilizadas nos trabalhos avaliados apresentaram alto grau de variação, evidenciando a necessidade de padronização que permita a comparação entre estes. Por fim, pôde-se observar que algumas fitofisionomias não possuem nenhuma publicação sobre os temas avaliados, o que reforça a necessidade de estudo da dinâmica da ciclagem de nutrientes nestes locais.In forest systems, the natural form of nutrient supply is through the litter, which comprises all plant material deposited in the soil. Therefore, the present work aimed to perform a systematic review on the different methodologies used in the litter and nutrient cycling topics in the diverse phytophysiognomies of the Cerrado biome. All publications were evaluated, regardless of the period of publication, and cataloged those that fit the theme: quantification of the production and decomposition of litter in the Cerrado biome, through searches in the Periódicos CAPES gate. Twenty-six (26) articles were selected with studies in the following forest formations: Cerrado restricted sense; Cerradão; Gallery Woods; Cerrado-Amazonian transition forests and homogeneous plantations. About the methodologies, the most common collectors in the production works were those with square format (0.25 m2) and the number of collectors varied widely between works (from 10 to 60 collectors). The leaves contributed around 70% or more of the total litter. The decomposition showed great variation in the mass conditioned in the litter bags and also in times of collection. Except one study, the evaluated manuscripts did not present studies on the decomposition of other litter components, other than the leaves, thus evidencing the need for studies in this topic. The studies presented a total time of one-year evaluation in almost all of them, which shows the need for long-term monitoring, since short-term studies do not allow the evaluation of the inter-annual changes effects. The methodologies used in the evaluated works presented a high degree of variation, evidencing the need for standardization that allows the comparison between them. Finally, it could be observed that some phytophysiognomies do not have any publications on the subjects evaluated, which reinforces the need to study the dynamics of the nutrient cycling in these sites

Métodos de avaliação da ciclagem de nutrientes no bioma Cerrado: uma revisão sistemática

In forest systems, the natural form of nutrient supply is through the litter, which comprises all plant material deposited in the soil. Therefore, the present work aimed to perform a systematic review on the different methodologies used in the litter and nutrient cycling topics in the diverse phytophysiognomies of the Cerrado biome. All publications were evaluated, regardless of the period of publication, and cataloged those that fit the theme: quantification of the production and decomposition of litter in the Cerrado biome, through searches in the Periódicos CAPES gate. Twentysix (26) articles were selected with studies in the following forest formations: Cerrado restricted sense; Cerradão; Gallery Woods; Cerrado-Amazonian transition forests and homogeneous plantations. About the methodologies, the most common collectors in the production works were those with square format (0.25 m²) and the number of collectors varied widely between works (from 10 to 60 collectors). The leaves contributed around 70% or more of the total litter. The decomposition showed great variation in the mass conditioned in the litter bags and also in times of collection. Except one study, the evaluated manuscripts did not present studies on the decomposition of other litter components, other than the leaves, thus evidencing the need for studies in this topic. The studies presented a total time of one-year evaluation in almost all of them, which shows the need for long-term monitoring, since short-term studies do not allow the evaluation of the inter-annual changes effects. The methodologies used in the evaluated works presented a high degree of variation, evidencing the need for standardization that allows the comparison between them. Finally, it could be observed that some phytophysiognomies do not have any publications on the subjects evaluated, which reinforces the need to study the dynamics of the nutrient cycling in these sites.Em sistemas florestais, a forma natural de aporte de nutrientes se dá através da serapilheira, a qual compreende todo material vegetal depositado ao solo. Logo, vista a importância do tema, o presente trabalho objetivou realizar uma revisão sistemática sobre as diferentes metodologias utilizadas na temática da serapilheira e ciclagem de nutrientes nas diversas fitofisionomias do bioma Cerrado. Foram avaliadas todas as publicações, independentemente do período de publicação, e catalogadas as que se enquadraram na temática: quantificação da produção e decomposição da serapilheira no bioma Cerrado, por meio de buscas no portal periódicos CAPES. Foram selecionados 26 artigos com estudos nas seguintes formações florestais: Cerrado sentido restrito; Cerradão; Matas de Galeria; Florestas de transição Cerrado-Amazônia e plantios homogêneos. A respeito das metodologias, os coletores mais comuns nos trabalhos de produção foram os de formato quadrado (0,25 m²) e o número de coletores variou bastante entre os trabalhos (de 10 a 60 coletores). As folhas contribuíram em torno de 70% ou mais do total da serapilheira. A decomposição apresentou grande variação na massa acondicionada nas bolsas e nos tempos de coleta. Com exceção de um trabalho, os manuscritos avaliados não apresentaram estudos sobre a decomposição de outros componentes da serapilheira, que não a foliar, evidenciando assim a necessidade de estudos nesta temática. Os trabalhos apresentaram tempo total de um ano de avaliação em quase sua totalidade, o que evidencia a necessidade dos monitoramentos de longo prazo, pois estudos com breve duração não permitem avaliar os efeitos de alterações interanuais. As metodologias utilizadas nos trabalhos avaliados apresentaram alto grau de variação, evidenciando a necessidade de padronização que permita a comparação entre estes. Por fim, pôde-se observar que algumas fitofisionomias não possuem nenhuma publicação sobre os temas avaliados, o que reforça a necessidade de estudo da dinâmica da ciclagem de nutrientes nestes locais

Análise da outorga como instrumento de gestão e controle do uso de água na bacia Piracicaba Capivari e Jundiaí – PCJ

This study focuses on the relationship between water resources management as well as water availability. The main goal relies on analyzing the instrument of granting use rights as a regulator in management and how it has been responding to conflicts and the criticality of the Piracicaba Capivari and Jundiaí basin (PCJ). For this study, an integrative review of the specialized literature about the Piracicaba Capivari and Jundiaí basins was carried out, granting the right to use them and reports on the situation of the PCJ basins containing information about water availability and quality, demand, and multiple uses, in addition to scientific articles published between 2013 and 2018. The results point to the low availability of water in the Piracicaba, Capivari and Jundiaí River Basins (PCJ), which dropped 10% in eight years, from 1,069.00 m³/inhabitant.year in 2010 to 971.08 m³/inhabitant.year in 2018. This fact demonstrates a critical situation and the need to build mechanisms that can effectively contribute to water security with respect to availability and uses. Faced with population growth and the growing demand for water and lack of sanitary sewage in the region, the problem of water scarcity in the PCJ basin becomes increasingly greater, which will result in a new water crisis in the PCJ basin, if urgent solutions do not occur.Este estudo se concentra nas relações entre gestão dos recursos hídricos e a sua disponibilidade com o objetivo de analisar o instrumento da outorga dos direitos de uso como regulador na gestão e como vem correspondendo frente aos conflitos e a criticidade da bacia Piracicaba Capivari e Jundiaí (PCJ). Para este estudo, foi realizado um levantamento de revisão integrativa da literatura especializada, das bacias Piracicaba Capivri e Jundiaí, outorga de direito de uso das mesmas e relatórios da situação das bacias PCJ contendo informações sobre disponibilidade e qualidade das águas, demanda e usos múltiplos, além de aritgos cientificos publicadas entre o perído de 2013 a 2018. Os resultados apontam a baixa disponibilidade de água nas Bacias dos Rios Piracicaba, Capivari e Jundiaí (PCJ) que caiu 10% em oito anos, saindo 1.069,00 m³/hab.ano em 2010, para 971,08 m³/hab.ano em 2018. Este fato demonstra uma situação crítica e a necessidade da construção de mecanismos que possam efetivamente contribuir para a segurança hídrica tanto no aspecto da disponibilidade como de seus usos. Diante do tamanho esgotamento sanitário e o fato de o mesmo, não ter acompanhado o crescimento populacional e territorial da região, o problema fica ainda mais grave frente ao panorama de escassez hídrica da bacia PCJ. Como resultado desse esgotamento temos o risco de uma nova crise na bacia PCJ

Protagonismo Guarani na porção sul do Brasil Meridional: o ñande reko em territórios das bacias hidrográficas dos rios Iequí e Caií no ano de 1635

No século XVII a Companhia de Jesus adentrou áreas do atual Estado do Rio Grande do Sul, incursionando pelas bacias hidrográficas dos rios Iequí (Pardo) e Caii (Caí), onde parcialidades Guarani estabeleceram alianças com os jesuítas. Contudo, nem todos os Guarani aceitaram o projeto colonial, a exemplo das lideranças espirituais que refutaram aproximações com os padres. O objetivo do estudo é analisar a atuação de lideranças, tais como Tayubai e Apyçaire que declararam guerra aos padres em nome do nãnde reko Guarani em territórios dos rios Iequí e Caií no ano de 1635. A metodologia é qualitativa e descritiva, fundamentada na abordagem etno-histórica para análise da Carta Ânua de 1635. O trabalho analisou dois eventos ocorridos próximos as reduções jesuíticas do rio Iequí e em territórios do rio Caii, quando parcialidades Guarani entraram em conflito com os jesuítas. No primeiro evento, o padre Mendonza é assassinado por parcialidades lideradas por Tayubai, no segundo evento outras parcialidades atacaram a redução de Jesus Maria no rio Iequí. Em vista disso, constatou-se que nem todos indígenas Guarani aceitaram os jesuítas nas proximidades de seus territórios, pois avaliaram o contato a partir de seus parâmetros culturais, não concordando com os ensinamentos dos padres

Los juegos tradicionales como herramienta pedagógica para mejorar la convivencia escolar en los estudiantes del Grado tercero de la Institución Educativa San Marcos, sede Monseñor Santo del municipio de San Marcos, Sucre.

Un ambiente de convivencia pacífica, aporta a la permanencia de los niños y adolescentes en el plantel educativo, mejora los desempeños académicos y previene situaciones como el bullying, matoneo y otras situaciones que limitan el desarrollo integral del educando. Por esta razón, hemos tomado los juegos tradicionales como estrategia pedagógica para mejorar la convivencia de los estudiantes de 3° grado, para que a través del juego construyan relaciones de convivencia basados en el compañerismo, la ayuda mutua, el respeto, el trabajo en equipo, la amistad y la empatía, estableciendo normas y reglas las cuales se deben seguir para una mejor relación y trato en la realización del juego.An environment of peaceful coexistence, contributes to the permanence of children and adolescents in the educational establishment, improves academic performance and prevents situations such as bullying, bullying and other situations that limit the integral development of the student. For this reason, we have taken traditional games as a pedagogical strategy to improve the coexistence of 3rd grade students, so that through the game they build coexistence relationships based on companionship, mutual help, respect, teamwork , friendship and empathy, establishing rules and rules which must be followed for a better relationship and treatment in the realization of the game