Impact of oral versus subcutaneous methotrexate treatment on the quality of life of children with juvenile idiopathic arthritis

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2022O metotrexato (MTX) continua a ser a terapêutica de eleição na Artrite Idiopática Juvenil (AIJ), podendo ser administrado por via oral ou subcutânea. Não existem diferenças significativas entre as duas vias de administração, contudo, alguns estudos demonstraram uma maior biodisponibilidade e melhores respostas com o uso de MTX subcutâneo, sobretudo quando em doses mais elevadas. No entanto, um maior receio das injeções, entre outros, pode comprometer a qualidade de vida e a adesão à terapêutica. Este projeto visa comparar o impacto do MTX oral versus subcutâneo na qualidade de vida de crianças e adolescentes com AIJ, bem como a efetividade e os efeitos adversos. Com esse propósito realizou-se um estudo observacional de coorte, seguida prospectivamente no Reuma.pt. A qualidade de vida foi avaliada pelo JAMAR e EQ-5DY e a efetividade pela melhoria da atividade da doença e da função. Os efeitos adversos que levaram a alteração de dose, via de administração ou descontinuação foram recolhidos. Um total de 26 crianças e adolescentes com AIJ, 65.4% raparigas, com uma idade média de 11.9, uma mediana de idade de diagnóstico de 2.7 e uma média de duração de doença de 7.5 anos, foram incluídos. Foram analisados 17 cursos terapêuticos com MTX subcutâneo e 29 com oral. As medianas do EQ-5D-Y foram 0.85 e 1 (p=0.864) e as medianas do JAMAR-criança foram 4 e 3.5 (p=818) para a via subcutânea e oral, respetivamente. O MTX subcutâneo foi superior ao oral na redução da dor, e do JADAS e VS aos 6 meses. Contudo, a dose de MTX subcutâneo foi superior. A tolerância foi semelhante entres as duas vias de administração. Nesta coorte, a via de administração do MTX não afetou a qualidade de vida. O MTX foi eficaz e bem tolerado, independentemente da via de administração.Methotrexate (MTX), administered either orally or subcutaneously, remains the mainstay of Juvenile Idiopathic Arthritis (JIA) treatment because of its effectiveness and acceptable safety profile. No significant differences between the two routes of administration have been reported, but some studies demonstrated a greater bioavailability with subcutaneous route, especially with higher doses. Nevertheless, fear of injections, among other concerns, can compromise the quality of life and medication adherence. This project addresses the impact of orally and subcutaneously administered MTX on the quality of life of children and adolescents with JIA, as well as the effectiveness and side effects with both routes of administration. The database Reuma.pt was used to perform an observational study. The quality of life was measured by JAMAR and EQ-5DY questionnaires, and effectiveness assessed by the improvement in disease activity and function. Side effects that led to change of dose or route of administration or MTX discontinuation were also collected. A total of 26 children and adolescents with JIA, 65.4% females, with a mean age of 11.9, a median age at diagnosis of 2.7 and a mean disease duration of 7.5 years were included. 17 treatment courses with subcutaneous and 29 with oral MTX were analyzed. The median scores of EQ-5D-Y were 0.85 and 1 (p=0.864) and of JAMAR for children were 4 and 3.5 (p=0.818), for subcutaneous and oral routes of administration, respectively. Regarding effectiveness, subcutaneous MTX was superior to oral MTX, in terms of JADAS and ESR reduction at 6 months and reduction of pain. However, the dosage of subcutaneous MTX was significantly higher. Both subcutaneous and oral MTX were well tolerated. In this cohort, the route of administration of MTX did not affect quality of life. MTX was effective and well tolerated regardless of the route of administration

Salt stress response of the extremely halotolerant yeast candida halophila (syn versatilis) CBS 4019: biochemical and physiological studies

Halotolerant yeasts have been described as being able to grow in the presence of salt concentrations as high as 4 M NaCl, but yeasts can survive environments with higher salt concentrations like in salines. On the other hand, physiological mechanisms underlying extreme salttolerance in yeasts are still poorly understood. For this reason we selected Candida halophila from a salt stress resistance survey performed on 42 different yeast species, as a potentially good model to unveil some of the physiological mechanisms underlying long-term extreme tolerance to salt. The physiological studies here presented were performed in yeast cells surviving under heavy stress, i.e., growing on synthetic medium in the presence of increasing salt concentrations up to close to the limits of salt solubility (4 to 5 M). These studies included (1) the determination of kinetic growth parameters, (2) the measurement of intracellular accumulation of osmolyte and other compounds, (3) glucose, glycerol and mannitol plasma membrane transport characterization, (4) the determination of intracellular volume and pH, (5) the study of glycerol and mannitol pathways, (6) the measurement of fermentative and respiratory fluxes, (7) in vitro assays of several enzymes from different central metabolic pathways like glycolysis or Krebs cycle between others, (8) the measurement of intracellular bulk redox equivalents and (9) the determination of sodium and potassium intracellular concentrations. C. halophila grows better in the presence of a certain amount of salt than in its absence, although, unlike halophilic bacteria, it does not depend on the presence of salt to survive. It is a slow growing yeast, not severely affected by salt, but rather by external pH under stress. When growing on glucose as carbon source, mannitol and glycerol were produced. Glycerol is the osmolyte, since its accumulation increased exponentially with increasing concentrations of sodium chloride in the media. Mannitol is produced in cells using either carbon source tested, yet, its physiological role is still unknown. Data suggest that both glycerol and mannitol are actively transported. On the other hand, glucose is transported by facilitated diffusion. While both active transport Vmax were not affected by growth under stress, glucose facilitated diffusion Vmax was. Internal pH was constant during growth at all initial pH/salt combinations. H+-ATPase activity was not affected by salt. Furthermore, we have shown that C. halophila maintains and even increases slightly intracellular volume when cultivated under stress, though it decreases significantly upon the same degrees of stress shock. Glycerol and mannitol pathways were not under glucose repression but still metabolically regulated. In particular, glycerol kinase and mitochondrial glycerol 3-P dehydrogenase activities were not detected, suggesting glycerol dissimilation operates through dihydroxyacetone. Glycerol-3Pdehydrogenase (Gpdp) is the key enzyme in glycerol production. Unlike Gpd1p and Gpd2p from S.cerevisiae, in C. halophila it proved to be able to use either co-factor, being NADPH preferred during growth under salt. This co-factor interchange ability, an increased fermentation rate and mannitol pathway activity, are suggested to contribute to redox stability as found. Our results show a generalised increase in enzyme expression under stress-growth conditions, though enzymes per se were not salt-tolerant in vitro. This increase had a correspondence in respiratory and fermentative fluxes increment. Consistently, intracellular sodium was low and potassium high. Potassium concentrations closely correlate with growth rates in the presence of salt and thus can be considered as a requirement for growth. In view of the results from this work, the concept of halophily and its applicability to yeasts is discussed.Leveduras halotolerantes foram descritas como capazes de se multiplicar na presença de elevadas concentrações, até 4M de NaCl. No entanto, as leveduras podem sobreviver em concentrações de sal superiores como as que se encontram nas salinas. Os mecanismos fisiológicos subjacentes a esta tolerância extrema são pouco conhecidos ou compreendidos. Por esta razão seleccionámos a levedura Candida halophila de um rastreio envolvendo 42 espécies de leveduras, como uma boa candidata para estudar alguns dos mecanismos responsáveis pela resistência ao sal de longa duração. Os estudos fisiológicos apresentados nesta tese foram realizados em levedura cultivada em condições de stresse salino extremo, i.e., em meio mineral na presença de concentrações crescentes de NaCl até perto do seu limite de solubilidade (4 a 5M). Estes estudos incluíram (1) a determinação de parâmetros de crescimento, (2) a identificação e quantificação dos osmolitos e outros compostos acumulados intracelularmente, (3) a caracterização bioquímica do transporte transmembranar do glicerol, do manitol e da glucose, (4) a determinação de variações de volume e pH intracellular, (5) o estudo das vias metabólicas associadas ao glicerol e ao manitol, bem como (7) dos fluxos fermentativo e respiratório e (8) ensaios in vitro de enzimas seleccionadas como representantes de vias metabólicas essenciais para a célula, como do ciclo de Krebs ou da glicólise, entre outras. Para além disso, este estudo englobou ainda a medição dos equivalentes redox globais (9) e a quantificação intracelular dos iões sódio e potássio (10). C. halophila cresce melhor na presença de uma quantidade moderada de NaCl do que na sua ausência. No entanto esta levedura não se comporta como uma bactéria halófila, visto que não requer a presença de sal para sobreviver. É uma levedura de crescimento lento, que, uma vez na presença de sal se torna mais sensível a variações de pH da cultura. C. halophila cultivada em glucose produz glicerol e manitol. O glicerol, tal como em outras leveduras, tem o papel de osmolito, dado que a sua concentração intracelular se mostrou proporcional à concentração externa de sal. Por seu lado, o manitol diminui a sua concentração com o aumento da concentração externa de sal, não estando ainda esclarecido o seu papel fisiológico. Ambos estes metabolitos são transportados por transporte mediado sendo no caso do glycerol do tipo simporte com protões, cuja Vmax não se mostrou sensível ao cultivo em condições de stresse. Foi também determinado que a glucose era transportada por difusão facilitada, cuja Vmax, ao contrário dos transportes de glicerol e manitol, se mostrou sensível ao cultivo em sal. Por seu lado, a actividade da H+-ATPase foi também medida, tendo-se verificado que, em concomitância com o caso dos simportadores, não era afectada pelo crescimento em stresse salino. O pH intracellular de C. halophila cultivada em concentrações crescentes de NaCl/pH variável manteve-se constante. Por seu lado, o volume intracelular mostrou um ligeiro aumento em células cultivadas em sal por comparação a células cultivadas sem sal. O mesmo não se verificou quando as células foram sujeitas a choque, ao qual se verificou, à semelhança de outras leveduras, uma diminuição acentuada. As enzimas das vias associadas à produção e ao consumo do glicerol e do manitol mostraram ser constitutivamente expressas. No caso particular do glycerol não se conseguiu detectar a actividade da via de consumo que corresponde à actividade da glycerol cinase e da glycerol 3-P desidrogenase mitocondrial, mas antes, foi detectada actividade correspondente a uma glicerol desidrogenase e dihidroxiacetona cinase, o que indica ser esta a via em funcionamento em C. halophila para a dissimilação do glicerol. Já no caso da sua síntese, as actividades enzimáticas detectadas sugerem que esta se processe através da produção de glycerol 3-P como intermediário metabólico. Em particular há a salientar o facto de haver especificidades de co-factor pouco usuais. A glicerol 3-P desidrogenase citoplasmática (Gpdp) mostou ser capaz de utilizar tanto NADH como em S. cerevisiae como NADPH, sendo o NADPH o co-factor preferido em condições de stresse. Esta versatilidade de utilização de co-factor, em conjunto com a presença de um ciclo constitutivo de produção e consumo de manitol, sugerem uma regulação do potencial redox citoplasmático mais eficiente que em S. cerevisiae, como que à semelhança do papel desempenhado pelas transhidrogenases em algumas bactérias. O comprovativo deste equilíbrio foi obtido com a medição dos equivalentes redox intracelulares em células cultivadas em sal. Os resultados obtidos com os ensaios enzimáticos in vitro mostraram generalizadamente um aumento da actividade específica das enzimas com o cultivo em stresse salino. As enzymas de per se não são tolerantes a sal, como foi possível mostrar em variados casos. Antes, a regulação da sua expressão parece ser sujeita a um estímulo sucessivamente maior em condições de stresse acrescido. Em concordância, verificou-se que as concentrações intracelulares de sódio em C. halophila são muito baixas, mesmo em células cultivas em 4M de NaCl. Verificou-se que para concentrações crescentes de sal, entre 2 e 3 M se observa uma viragem das concentrações dos dois iões, sendo que o sódio ultrapassa o valor do potássio. As concentrações de potássio variam em percentagem idêntica à variacão das taxas específicas de crescimento, verificando-se ser a manutenção da concentração intracelular de potássio um requerimento indispensável ao crescimento. Tendo em conta os resultados, é discutido no âmbito desta tese o conceito de halofilia e a sua aplicabilidade às leveduras

Willingness to Communicate: The desire to speak in the English classroom

Willingness to communicate is an individual difference, which defines the probability to engage in communicative acts when the opportunity arises (McCroskey and Richmond, 1992). It has been slowly growing as a fundamental concept to a deeper understanding of second language instruction. While some students easily engage in communicative activities in the classroom, others avoid it as much as they can. Teachers can easily encounter linguistically competent students who are unwilling to speak and, on the other hand, students with low proficiency levels who engage in communicative acts as often as possible. This research work aims to investigate the variables state communicative self-confidence, and the desire to communicate with a specific person related to willingness to communicate situated in the classroom among adolescents. The research work was carried out during five lessons designed to enhance oral communication in different interactional patterns. Data was collected from questionnaires handed to students after the completion of speaking activities and recorded interviews. This study aims to contribute to a deeper understanding of the theoretical construct willingness to communicate and simultaneously reflect on the pedagogical implications for teaching and learning English as a foreign language. Focussing on the variables state communicative self-confidence and the desire to communicate with a specific person, results seem to show that willingness to communicate is affected by contextual and individual factors which lead to increased or diminished levels of willingness to communicate. Preparation time and the possibility to interact in a classroom where mistakes are understood as learning possibilities were key aspects to enhance state communicative self-confidence. Familiarity with the interlocutor and perceived linguistic competence were crucial in determining their willingness to communicate with a peer. Taking in consideration the situational constraints that might reduce or increase students’ willingness to communicate, teachers should adjust their actions in order to develop the communicative abilities of learners and create a classroom environment that stimulates students’ will to engage in communicative acts.A vontade de comunicar é uma diferença individual, que define a probabilidade de se envolver em atos comunicativos quando surge a oportunidade (McCroskey e Richmond, 1992). Este conceito tem crescido lentamente e o seu desenvolvimento é fundamental para uma compreensão mais profunda do ensino de uma segunda língua. Enquanto alguns alunos se envolvem facilmente em atividades comunicativas na sala de aula, outros evitam-nas tanto quanto podem. Os professores podem facilmente encontrar alunos linguisticamente competentes que não estão dispostos a falar e, por outro lado, alunos com baixos níveis de proficiência que se envolvem em atos comunicativos o mais frequentemente possível. Esta dissertação tem como objetivo investigar as variáveis autoconfiança comunicativa e o desejo de comunicar com uma pessoa específica relacionadas com a vontade de comunicar na sala de aula entre adolescentes. Os dados obtidos para esta dissertação foram recolhidos durante cinco aulas destinadas a melhorar a comunicação oral promovendo atividades em diferentes contextos comunicativos. Os dados foram recolhidos através de questionários entregues aos alunos após a conclusão das atividades de comunicação oral e entrevistas gravadas. Este estudo tem como objetivo contribuir para uma compreensão mais aprofundada dos fatores que condicionam a vontade de comunicar na sala de aula e refletir simultaneamente sobre as implicações pedagógicas para o ensino e aprendizagem do inglês como língua estrangeira. Focando-se nas variáveis autoconfiança comunicativa e desejo de comunicar com uma pessoa específica, os resultados parecem mostrar que a vontade de comunicar na sala de aula é afetada por fatores contextuais e individuais que levam ao aumento ou diminuição dos níveis de vontade de comunicar. O tempo de preparação da atividade e a possibilidade de interagir numa sala de aula onde os erros são entendidos como oportunidades de aprendizagem foram aspetos-chave apontados para melhorar a autoconfiança comunicativa. A familiaridade com o interlocutor e a competência linguística atribuída ao interlocutor foram identificados como aspetos determinantes para decidir com quem comunicar. Levando em consideração as restrições situacionais, que podem reduzir ou aumentar a disposição dos alunos para comunicarem oralmente, os professores devem ajustar suas planificações de modo a desenvolver as competências comunicativas dos alunos e criar um ambiente de sala de aula que estimula a vontade dos alunos se envolverem em atos comunicativos

Assexualidade: factores de vulnerabilidade psicológica

Mestrado em Psicologia ForenseA presente investigação procurou contribuir para a compreensão da Assexualidade, especificamente, pretendeu verificar se existiam diferenças significativas ao nível de crenças, personalidade e presença de psicopatologia entre pessoas Assexuais e pessoas não Assexuais, em suma procurou-se compreender quais os factores psicológicos que estão associados a esta área pouco explorada da variabilidade sexual. Um total 170 indivíduos do sexo feminino maiores de 18 anos participaram no estudo. Foram constituídos dois grupos: Grupo de Assexuais (n=85) (que se consideram assexuais) e Grupo de Controle (n=85) (mulheres não assexuais). Todos os participantes responderam a um questionário on-line que era constituído por: Questionário introdutório, Questionário das Crenças Sexuais Disfuncionais (SDBQ; P. Nobre, Pinto-Gouveia & Gomes, 2003), Breve Inventário de Sintomas (BSI; Derogatis & Spencer, 1982) e o NEO FFI (Costa e McCrae, 1992). Os resultados indicaram que as mulheres assexuais apresentam significativamente menor frequência de actividade sexual e maior grau de crença e prática religiosa comparativamente ao grupo de controlo. Relativamente às crenças sexuais, os dados indicaram que as mulheres assexuais apresentaram significativamente mais crenças sexuais disfuncionais (conservadorismo, desejo como pecado, crenças relacionadas com a idade, crenças relacionadas com a imagem corporal). No que concerne à personalidade, concluiu-se que as mulheres assexuais apresentaram níveis significativamente superiores na dimensão de neuroticismo e inferiores nas dimensões de extroversão e conscienciosidade. Finalmente os grupos não se distinguiram relativamente à presença de sintomatologia psicopatológica. De uma forma geral, os resultados obtidos sugerem que a assexualidade é independente de mecanismos psicopatológicos e que os traços de personalidade e as crenças sexuais podem funcionar como factores predisponentes para a sua manifestação.The present investigation sought to contribute to the understanding of the asexuality, specifically, sought to check if there were significant differences on the levels of beliefs, personality and psychopathology between asexual and non asexual women, in short, we tried to understand what psychological factors are associated to this almost unexplored area of the sexual variability. A total of 170 females with more than 18 years of age participated in the study. Two groups were created: Asexual Group (n = 85) (females who consider themselves asexual) and Control Group (n = 85) (non asexual females). All participants completed an online questionnaire that was consisted of: Introductory Questionnaire, Sexual Dysfunctional Beliefs Questionnaire (SDBQ; P. Nobre & Pinto-Gouveia Gomes, 2003), Brief Symptom Inventory (BSI; Derogatis & Spencer, 1982) and the NEO FFI (Costa and McCrae, 1992). The results showed that asexual females have lower frequency of sexual activity and are more believers and religion practitioners than the Control Group. As regards to sexual beliefs the results indicated that asexual females endorse significantly more dysfunctional sexual beliefs (conservatism, desire as a sin, age related beliefs and body image beliefs ). Regarding personality, results indicated that asexual females present significantly higer levels of neuroticism and lower levels of extraversion and conscientiousness. Finally the groups were not distinguished in relation to the presence of psychopathological symptomatology. In general, the results suggest that asexuality is independent from psychopathology mechanisms and that personality traits and sexual beliefs may work as predisposing factors for its manifestation

Electrochemical Studies of Electron Transfer Proteins and Electroactive Biofilms

Bioelectrochemistry has been recognized as a very important technique to get relevant thermodynamic and kinetic information on diverse complex biological systems. From the determination of redox potentials of metallic centers in small electron carrier proteins to the resolution of more complex mechanisms in highly organised enzymes, and even whole bacteria systems, the application of dynamic electrochemical techniques has proved to be a powerful tool that has allowed to get deeper in the understanding of such systems. In the present thesis electrochemical techniques were used to study diverse biochemical systems. Different approaches have been used, namely the classic bulk systems in which the reactive species are in solution and immobilised systems where proteins are physically constrained at the electrode surface. Within these, also alternative methods were used, as membrane electrodes and physical adsorption of the biological material. Several systems of different complexity were object of study. Simple Enzymes Small non-hemic proteins, essentially related to electron transfer processes, with iron-sulfur centers, as desulforedoxin and other related iron-sulfur proteins, associated with oxidative stress protection, namely superoxide reductases, were investigated by cyclic and square wave voltammetry; its redox potentials and pH dependence were determined. Complex Enzymes and Catalytic Systems Nitrogen Cycle Enzymes Enzymes taking part in the nitrogen cycle were studied, namely the periplasmic nitrate reductase isolated from Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 and nitric oxide reductase purifed from Pseudomonas nautica 617. The first one, responsible the nitrate reduction to nitrite, is the only known monomeric nitrate reductase biding an iron-sulfur center and a molybdopterin co-factor. In this work it was possible, for the first time, to observe the individual metal centers voltammetric features. The electrocatalytic activity was also evaluated. The second enzyme, nitric oxide reductase, promotes the two electrons reduction of NO to N2O. In this unique work it was possible to obtain data from a nitric oxide reductase resulting from direct electron transfer assays, accomplished by cyclic voltammetry. The demonstration of the catalytic activity towards the oxygen reduction was achieved and the reduction and catalysis of NO was also observed by direct electrochemistry. The pH dependence of the catalytic center redox process was evaluated and it was possible to show that the immobilized enzyme retained its native properties. Production and Consumption of Hydrogen Hydrogenase (Hase), isolated from Desulfovibrio gigas (Dg), is a multicenter enzyme that catalyses the interconversion between H2 and H+, and that is involved in the dissimilatory sulphate reduction pathway. In this work, the direct electrochemistry of the Dg Hase, in bulk solution and also immobilised by adsorption, in turnover and non-turnover conditions was studied. For the first time the redox features of the enzyme metallic centers in non-catalytic conditions and without the addition of any of the known enzyme inhibitors were attained. Besides, it was possible to tune the activation and inactivation of the enzyme by dynamic potential control. Approach to in vivo systems Finally, the electrochemical behaviour of biofilms formed from pure cultures of sulphate reducing bacteria, namely Desulfovibrio desulfuricans ATCC 27774 was studied. The response of the biofilm on the electrodes was evaluated by the ratio of current obtained in the presence/absence of the biofilm and its stability in time. For the first time it was possible to observe that pure culture biofilms of sulphate reducing bacteria are electroactive

A method to correct the flow distortion of offshore wind data using CFD simulation and experimental wind tunnel tests

The assessment of wind energy resource for the development of deep offshore wind plants requires the use of every possible source of data and, in many cases, includes data gathered at meteorological stations installed at islands, islets or even oil platforms—all structures that interfere with, and change, the flow characteristics. This work aims to contribute to the evaluation of such changes in the flow by developing a correction methodology and applying it to the case of Berlenga island, Portugal. The study is performed using computational fluid dynamic simulations (CFD) validated by wind tunnel tests. In order to simulate the incoming offshore flow with CFD models a wind profile, unknown a priori, was established using observations from two coastal wind stations and a power law wind profile was fitted to the existing data (a=0.165). The results show that the resulting horizontal wind speed at 80 m above sea level is 16% lower than the wind speed at 80 m above the island for the dominant wind direction sector