El consumo de antioxidantes modifica la asociación de los polimorfismos rs4880 del gen SOD2, rs2978663 del gen GSR y rs1001179 del gen CAT con la densidad mineral ósea en mujeres postmenopáusicas.

Introducción: la osteoporosis (Op) es una enfermedad multifactorial caracterizada por la disminución de la densidad mineral ósea (DMO). El estrés oxidativo se caracteriza por un desequilibrio de especies reactivas de oxígeno. Se ha descrito que polimorfismos en genes que codifican para enzimas antioxidantes (SOD, GSR, CAT) se asocian con la disminución de su capacidad antioxidante y con niveles bajos de DMO por lo que estudios de asociación permitirán identificar si esto ocurre en población mexicana. Objetivo: analizar el efecto del consumo de antioxidantes sobre la asociación de los polimorfismos rs4880 del gen SOD2, rs2978663 del gen GSR y rs1001179 del gen CAT con la DMO en mujeres postmenopáusicas. Métodos: estudio transversal, participaron 202 mujeres postmenopáusicas aparentemente sanas de Nuevo León, previo consentimiento informado, se determinaron las variables de DMO mediante DXA. Para la genotipificación, las muestras se procesaron por qPCR con sondas Taqman. La determinación del consumo de antioxidantes se realizó con un cuestionario semicuantitativo de frecuencia de consumo de alimentos cuyos resultados fueron procesados en el software Food Processor®. El análisis estadístico incluyó Chi2 y regresión lineal simple utilizando los modelos de herencia. Resultados: se seleccionaron 178 mujeres postmenopáusicas cuyos promedios de edad, IMC y DMO de cuerpo total fueron 57 + 6 años, 28.8 + 4.4 kg/m2 y 1.089 + 0.093 g/cm2, respectivamente. Los genotipos de mayor frecuencia de los polimorfismos analizados fueron el G/A para el polimorfismo rs4880 del gen SOD2 con 52.8%, el T/C del polimorfismo rs2978663 del gen GSR con 48.3% y C/C para el polimorfismo rs1001179 del gen CAT con 81.5%. En la asociación de los polimorfismos con la DMO solo se encontraron dos tendencias en el polimorfismo rs2978663 con DMO L2-L4 (p=0.097) y triángulo de Wards (p=0.078) bajo el modelo de herencia recesivo, con los polimorfismos rs4880 y rs1001179 no hubo asociación estadísticamente significativa. En el análisis del efecto de consumo de antioxidantes sobre la relación entre los polimorfismos y la DMO se encontraron asociaciones significativas en alto consumo de vitamina A (IU) en presencia de rs1001179 en L2-L4 (p=0.035), en alto consumo de vitamina A (RAE) en presencia del polimorfismo rs2978663 con L2-L4 (p=0.003) y en alto consumo de retinol en presencia del polimorfismo rs1001179 con DMO total (p=0.043), fémur izquierdo (p=0.047), triángulo de wards (p=0.035) y trocánter (p=0.018) bajo el modelo de herencia aditivo. Discusión y conclusión: las frecuencias genotípicas y alélicas de los polimorfismos rs4880 y rs2978663 son similares a estudios realizados en mujeres postmenopáusicas eslovenas, en donde también se encontraron asociaciones significativas entre rs2978663 y DMO. El consumo alto de vitamina A y retinol altera la asociación entre los polimorfismos analizados con variación de la DMO total, L2-L4, fémur izquierdo, trocánter entre otras bajo el modelo de herencia aditivo

Laminin and biomimetic extracellular elasticity enhance functional differentiation in mammary epithelia

In the mammary gland, epithelial cells are embedded in a ‘soft' environment and become functionally differentiated in culture when exposed to a laminin-rich extracellular matrix gel. Here, we define the processes by which mammary epithelial cells integrate biochemical and mechanical extracellular cues to maintain their differentiated phenotype. We used single cells cultured on top of gels in conditions permissive for β-casein expression using atomic force microscopy to measure the elasticity of the cells and their underlying substrata. We found that maintenance of β-casein expression required both laminin signalling and a ‘soft' extracellular matrix, as is the case in normal tissues in vivo, and biomimetic intracellular elasticity, as is the case in primary mammary epithelial organoids. Conversely, two hallmarks of breast cancer development, stiffening of the extracellular matrix and loss of laminin signalling, led to the loss of β-casein expression and non-biomimetic intracellular elasticity. Our data indicate that tissue-specific gene expression is controlled by both the tissues' unique biochemical milieu and mechanical properties, processes involved in maintenance of tissue integrity and protection against tumorigenesis

Análisis de la activación celular y la expresión de marcadores de respuesta exhausta en linfocitos T de pacientes con enfermedad de Chagas crónica

Los linfocitos T juegan un rol central en la respuesta inmune adaptativa frente a la infección por T. cruzi. En el estadío crónico de la enfermedad de Chagas, se observó que los pacientes tienen una alta frecuencia de células T activadas y que estas son importantes para controlar la parasitemia. Aún así, se ha postulado que la exposición persistente al antígeno puede llevar al desarrollo de un perfil de células T exhaustas donde, entre otras características, hay una mayor expresión de receptores inhibitorios y perdida de funciones efectoras. Adicionalmente, se ha descrito que la frecuencia de células con este perfil tiene relación directa con el desarrollo de patología cardíaca.En el presente trabajo analizamos la activación de linfocitos T mediante el método de marcadores de activación en superficie celular (AIM, por Activation Induced Markers) en pacientes con enfermedad de Chagas crónico y evaluamos la expresión de los marcadores de células exhaustas TIGIT, TIM-3 y LAG-3 en los mismos, cuyo perfil se desconocía hasta el momento. Para esto, células mononucleares de sangre periférica de pacientes con Chagas crónico, tanto asintomáticos como con cardiopatía, e individuos no infectados con T. cruzi, fueron incubadas por 18-20 h bajo tres condiciones diferentes: ausencia de estímulo antigénico, lisado de tripomastigote-amastigote de T. cruzi y PHA (estímulo antígeno-inespecífico fuerte). Posteriormente se realizó la marcación con anticuerpos y la lectura de resultados por citometría.Se observó una mayor activación de linfocitos T CD4+ en pacientes asintomáticos que en pacientes con cardiopatía y no infectados. Por otra parte la expresión de LAG-3 es mayor en los pacientes con cardiopatía, independientemente del estímulo. A su vez, frente al estímulo con PHA, los pacientes con enfermedad de Chagas crónica presentan una expresión mayor de este marcador comparado con los sujetos no infectados. También de forma independiente del estímulo, tanto TIGIT como TIM-3 presentan una expresión mayor en los pacientes con Chagas y entre ellos es más alta en los pacientes con cardiopatía.En conclusión, el método AIM evidenció una activación diferencial de linfocitos T CD4+ entre los grupos de pacientes con enfermedad de Chagas crónico. Además se observaron diferencias en la expresión de los marcadores TIGIT, TIM-3 y LAG-3 en relación con las manifestaciones cínicas de la enfermedad de Chagas crónica.Fil: Alcaraz, Paula Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Girard, Magalí Celeste. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Fernández, Marisa. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Hernández, Yolanda. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Chadi, Raúl. Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Doctor Ignacio Pirovano; ArgentinaFil: Gomez, Karina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Acevedo, Gonzalo Raúl. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaXXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de ProtozoologíaResistenciaArgentinaSociedad Argentina de Protozoologí

Cell shape regulates global histone acetylation in human mammary epithelial cells

Extracellular matrix (ECM) regulates cell morphology and gene expression in vivo; these relationships are maintained in three-dimensional (3D) cultures of mammary epithelial cells. In the presence of laminin-rich ECM (lrECM), mammary epithelial cells round up and undergo global histone deacetylation, a process critical for their functional differentiation. However, it remains unclear whether lrECM-dependent cell rounding and global histone deacetylation are indeed part of a common physical-biochemical pathway. Using 3D cultures as well as nonadhesive and micropatterned substrata, here we showed that the cell 'rounding' caused by lrECM was sufficient to induce deacetylation of histones H3 and H4 in the absence of biochemical cues. Microarray and confocal analysis demonstrated that this deacetylation in 3D culture is associated with a global increase in chromatin condensation and a reduction in gene expression. Whereas cells cultured on plastic substrata formed prominent stress fibers, cells grown in 3D lrECM or on micropatterns lacked these structures. Disruption of the actin cytoskeleton with cytochalasin D phenocopied the lrECM-induced cell rounding and histone deacetylation. These results reveal a novel link between ECM-controlled cell shape and chromatin structure, and suggest that this link is mediated by changes in the actin cytoskeleton

CD4+ T cells from chronica Chagas disease patients with different degrees of cardiac compromise exhibit distinct expression patterns of inhibitory receptors TIGIT, TIM-3 and LAG-3

In the chronic stage of Chagas disease, patients show a high frequency of activated T cells. Despite this, persistent presence of antigenic stimulus may affect their functionality and induce an exhausted phenotype with a high expression of inhibitory receptors and loss of effector functions. We hypothesize that inhibitory receptors TIGIT, Tim-3 and Lag-3 may be involved in immune modulation of anti-T. cruzi T cell response.In the present work, we assessed the frequency of CD4+ T cells expressing these receptors and their relation to cellular activation, measured as the expression of activation induced markers (AIM) Ox40 and CD25. Samples from chronic Chagas disease patients (CCD) with different degrees of cardiac compromise (asymptomatic, A, and with cardiopathy, C) and non-infected donors (NI) were analyzed under different stimulation conditions: T. cruzi lysate (Tc), unstimulated, or PHA.We observed statistically significant differences in the frequency of activated (Ox40+CD25+) CD4+ T cells between the CCD and NI subjects when stimulated with Tc. Cells from CCD showed an increased frequency of CD4+TIGIT+ T cells upon stimulation with PHA as compared with the unstimulated condition. CD4+Tim-3+ T cells are more abundant in the circulation of C patients and Lag-3+ cells showed increased frequency in the non-activated subset, within the A group.We demonstrated that the AIM method can be used to detect anti-T.cruzi response in CD4+ T cells, upon in vitro stimulation with Tc. Also, TIGIT, Tim-3 and Lag-3 are expressed differently, or they behave in diverging ways upon in vitro stimulation, in CCD.Fil: Alcaraz, Paula Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Girard, Magalí Celeste. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Beati, Maria Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Chadi, Raul. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán". Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben"; ArgentinaFil: Fernández, Marisa. Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Doctor Ignacio Pirovano; ArgentinaFil: Hernandez Vasquez, Yolanda Maria. Gobierno de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Doctor Ignacio Pirovano; ArgentinaFil: Gomez, Karina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Acevedo, Gonzalo Raúl. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaLXVII Reunión Científica Anual de Sociedad Argentina de InmunologíaTucumanArgentinaSociedad Argentina de Inmunologi

Expression of Inhibitory Receptors TIGIT, TIM-3, and LAG-3 on CD4+ T Cells from Patients with Different Clinical Forms of Chronic Chagas Disease

T cells are central to the adaptive immune response against Trypanosoma cruzi infection. In chronic Chagas disease (CCD), circulating parasite-specific memory T cells show reduced functionality and increased expression of inhibitory receptors as a result of persistent antigenic stimulation. This phenotype has been linked to progression of cardiac pathology, whereas the presence of polyfunctional T cells shows association with therapeutic success. In this study, we demonstrate that T. cruzi-specific human CD4+ T cells can be identified by their expression of OX40 and CD25 upon in vitro stimulation. We characterized the expression of the inhibitory receptors T cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains (TIGIT), T cell Ig and mucin-domain containing-3 (TIM-3), and lymphocyte activation gene 3 (LAG-3) in CD4+ T cells from CCD patients with and without cardiac alterations. Our results show that, independently of their clinical stage, CCD patients present an increased frequency of CD4+ T cells expressing TIGIT in comparison with non-T. cruzi-infected donors. Exposure to parasite Ags increases the expression of TIM-3 in CD4+ T cells from CCD patients, especially in those with cardiac compromise. Upregulation of LAG-3 was also detected in CCD individuals without cardiac manifestations, predominantly within the subpopulation of cells that did not become activated upon stimulation. Further differences were found between groups in the coexpression of these receptors. Blockade of each individual receptor did not affect activation or the production of IFN-g and IL-10 by CD4+ T cells in response to parasite Ags. Our results suggest a role for TIGIT, TIM-3, and LAG-3 in the modulation of inflammatory phenomena thought to ultimately lead to tissue damage and cardiac pathology.Fil: Ferragut, Fatima Eneida del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Alcaraz, Paula Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Beati, Maria Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Girard, Magalí Celeste. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Ossowski, Micaela Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; ArgentinaFil: Chadi, Raúl. Gobierno de la Ciudad Autonoma de Buenos Aires. Hospital General de Agudos Doctor Ignacio Pirovano .; ArgentinaFil: Fernández, Marisa. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Hernandez Vasquez, Yolanda Maria. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”. Instituto Nacional de Parasitología "Dr. Mario Fatala Chaben”; ArgentinaFil: Acevedo, Gonzalo Raúl. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentina. University of California; Estados UnidosFil: Gomez, Karina Andrea. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres"; Argentin