Involvement of PPARy in the antitumoral action of cannabinoids on hepatocellular carcinoma

Cannabinoids exert antiproliferative effects in a wide range of tumoral cells, including hepatocellular carcinoma (HCC) cells. In\ud this study, we examined whether the PPARc-activated pathway contributed to the antitumor effect of two cannabinoids,\ud D9-tetrahydrocannabinol (THC) and JWH-015, against HepG2 and HUH-7 HCC cells. Both cannabinoids increased the activity\ud and intracellular level of PPARc mRNA and protein, which was abolished by the PPARc inhibitor GW9662. Moreover, genetic\ud ablation with small interfering RNA (siRNA), as well as pharmacological inhibition of PPARc decreased the cannabinoid-induced\ud cell death and apoptosis. Likewise, GW9662 totally blocked the antitumoral action of cannabinoids in xenograft-induced HCC\ud tumors in mice. In addition, PPARc knockdown with siRNA caused accumulation of the autophagy markers LC3-II and p62,\ud suggesting that PPARc is necessary for the autophagy flux promoted by cannabinoids. Interestingly, downregulation of the\ud endoplasmic reticulum stress-related protein tribbles homolog 3 (TRIB3) markedly reduced PPARc expression and induced p62\ud accumulation, which was counteracted by overexpression of PPARc in TRIB3-knocked down cells. Taken together, we\ud demonstrate for the first time that the antiproliferative action of the cannabinoids THC and JWH-015 on HCC, in vitro and in vivo,\ud are modulated by upregulation of PPARc-dependent pathways

Involvement of PPARy in the antitumoral action of cannabinoids on hepatocellular carcinoma

Cannabinoids exert antiproliferative effects in a wide range of tumoral cells, including hepatocellular carcinoma (HCC) cells. In this study, we examined whether the PPARc-activated pathway contributed to the antitumor effect of two cannabinoids, D9-tetrahydrocannabinol (THC) and JWH-015, against HepG2 and HUH-7 HCC cells. Both cannabinoids increased the activity and intracellular level of PPARc mRNA and protein, which was abolished by the PPARc inhibitor GW9662. Moreover, genetic ablation with small interfering RNA (siRNA), as well as pharmacological inhibition of PPARc decreased the cannabinoid-induced cell death and apoptosis. Likewise, GW9662 totally blocked the antitumoral action of cannabinoids in xenograft-induced HCC tumors in mice. In addition, PPARc knockdown with siRNA caused accumulation of the autophagy markers LC3-II and p62, suggesting that PPARc is necessary for the autophagy flux promoted by cannabinoids. Interestingly, downregulation of the endoplasmic reticulum stress-related protein tribbles homolog 3 (TRIB3) markedly reduced PPARc expression and induced p62 accumulation, which was counteracted by overexpression of PPARc in TRIB3-knocked down cells. Taken together, we demonstrate for the first time that the antiproliferative action of the cannabinoids THC and JWH-015 on HCC, in vitro and in vivo, are modulated by upregulation of PPARc-dependent pathways

The cannabinoid WIN 55,212-2 prevents neuroendocrine differentiation of LNCaP prostate cancer cells

BACKGROUND: Neuroendocrine (NE) differentiation represents a common feature of prostate cancer and is associated with accelerated disease progression and poor clinical outcome. Nowadays, there is no treatment for this aggressive form of prostate cancer. The aim of this study was to determine the influence of the cannabinoid WIN 55,212-2 (WIN, a non-selective cannabinoid CB1 and CB2 receptor agonist) on the NE differentiation of prostate cancer cells. METHODS: NE differentiation of prostate cancer LNCaP cells was induced by serum deprivation or by incubation with interleukin-6, for 6 days. Levels of NE markers and signaling proteins were determined by western blotting. Levels of cannabinoid receptors were determined by quantitative PCR. The involvement of signaling cascades was investigated by pharmacological inhibition and small interfering RNA. RESULTS: The differentiated LNCaP cells exhibited neurite outgrowth, and increased the expression of the typical NE markers neuron-specific enolase and ?III tubulin (?III Tub). Treatment with 3??M WIN inhibited NK differentiation of LNCaP cells. The cannabinoid WIN downregulated the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway, resulting in NE differentiation inhibition. In addition, an activation of AMP-activated protein kinase (AMPK) was observed in WIN-treated cells, which correlated with a decrease in the NE markers expression. Our results also show that during NE differentiation the expression of cannabinoid receptors CB1 and CB2 dramatically decreases. CONCLUSIONS: Taken together, we demonstrate that PI3K/Akt/AMPK might be an important axis modulating NE differentiation of prostate cancer that is blocked by the cannabinoid WIN, pointing to a therapeutic potential of cannabinoids against NE prostate cancer.Ministerio de Economía y CompetitividadJunta de Comunidades de Castilla-La ManchaFundación Tatiana Pérez de Guzmán el BuenoFondo Europeo de Desarrollo RegionalComunidad de Madri

Up-Regulated Expression of LAMP2 and Autophagy Activity during Neuroendocrine Differentiation of Prostate Cancer LNCaP Cells

Neuroendocrine (NE) prostate cancer (PCa) is a highly aggressive subtype of prostate cancer associated with resistance to androgen ablation therapy. In this study, we used LNCaP prostate cancer cells cultured in a serum-free medium for 6 days as a NE model of prostate cancer. Serum deprivation increased the expression of NE markers such as neuron-specific enolase (NSE) and ?III tubulin (?III tub) and decreased the expression of the androgen receptor protein in LNCaP cells. Using cDNA microarrays, we compared gene expression profiles of NE cells and non-differentiated LNCaP cells. We identified up-regulation of 155 genes, among them LAMP2, a lysosomal membrane protein involved in lysosomal stability and autophagy. We then confirmed up-regulation of LAMP2 in NE cells by qRT-PCR, Western blot and confocal microscopy assays, showing that mRNA up-regulation correlated with increased levels of LAMP2 protein. Subsequently, we determined autophagy activity in NE cells by assessing the protein levels of SQSTM/p62 and LC3 by Western blot and LC3 and Atg5 mRNAs content by qRT-PCR. The decreased levels of SQSTM/p62 was accompanied by an enhanced expression of LC3 and ATG5, suggesting activation of autophagy in NE cells. Blockage of autophagy with 1?M AKT inhibitor IV, or by silencing Beclin 1 and Atg5, prevented NE cell differentiation, as revealed by decreased levels of the NE markers. In addition, AKT inhibitor IV as well as Beclin1 and Atg5 kwockdown attenuated LAMP2 expression in NE cells. On the other hand, LAMP2 knockdown by siRNA led to a marked blockage of autophagy, prevention of NE differentiation and decrease of cell survival. Taken together, these results suggest that LAMP2 overexpression assists NE differentiation of LNCaP cells induced by serum deprivation and facilitates autophagy activity in order to attain the NE phenotype and cell survival. LAMP2 could thus be a potential biomarker and potential target for NE prostate cancer

Efecto de la capsaicina en el metabolismo de células de hepatocarcinoma

Los fitoquímicos son compuestos presentes en los vegetales, que pueden ser beneficiosos para el ser humano. En los últimos años han ganado relevancia gracias a su poder terapéutico en el tratamiento de determinadas enfermedades humanas. Algunos poseen propiedades antitumorales como es el caso de la capsaicina (CAP), el agente responsable de las propiedades picantes de los pimientos. El objetivo de este trabajo ha sido valorar el efecto de la capsaicina sobre la viabilidad de la línea celular de cáncer de hígado HepG2 y su relación con el metabolismo celular. Los resultados obtenidos muestran que CAP disminuye la viabilidad celular en HepG2 de manera dosis dependiente, y regula negativamente la proteína AMPK, enzima reguladora del metabolismo, activando ACC. Los resultados obtenidos en los ensayos de tinción de lípidos neutros muestran que CAP produce un acúmulo, lo cual podría estar correlacionado con la activación de ACC y el aumento de expresión de PPAR[gamma

Up-regulated expression of LAMP2 and autophagy activity during neuroendocrine differentiation of prostate cancer LNCaP cells

Neuroendocrine (NE) prostate cancer (PCa) is a highly aggressive subtype of prostate cancer associated with resistance to androgen ablation therapy. In this study, we used LNCaP prostate cancer cells cultured in a serum-free medium for 6 days as a NE model of prostate cancer. Serum deprivation increased the expression of NE markers such as neuron-specific enolase (NSE) and βIII tubulin (βIII tub) and decreased the expression of the androgen receptor protein in LNCaP cells. Using cDNA microarrays, we compared gene expression profiles of NE cells and non-differentiated LNCaP cells. We identified up-regulation of 155 genes, among them LAMP2, a lysosomal membrane protein involved in lysosomal stability and autophagy. We then confirmed up-regulation of LAMP2 in NE cells by qRT-PCR, Western blot and confocal microscopy assays, showing that mRNA up-regulation correlated with increased levels of LAMP2 protein. Subsequently, we determined autophagy activity in NE cells by assessing the protein levels of SQSTM/p62 and LC3 by Western blot and LC3 and Atg5 mRNAs content by qRT-PCR. The decreased levels of SQSTM/p62 was accompanied by an enhanced expression of LC3 and ATG5, suggesting activation of autophagy in NE cells. Blockage of autophagy with 1μM AKT inhibitor IV, or by silencing Beclin 1 and Atg5, prevented NE cell differentiation, as revealed by decreased levels of the NE markers. In addition, AKT inhibitor IV as well as Beclin1 and Atg5 kwockdown attenuated LAMP2 expression in NE cells. On the other hand, LAMP2 knockdown by siRNA led to a marked blockage of autophagy, prevention of NE differentiation and decrease of cell survival. Taken together, these results suggest that LAMP2 overexpression assists NE differentiation of LNCaP cells induced by serum deprivation and facilitates autophagy activity in order to attain the NE phenotype and cell survival. LAMP2 could thus be a potential biomarker and potential target for NE prostate cancer

Enfermedad Mínima Residual (EMR) en Leucemia Linfoblástica Aguda pediátrica (LLA). Estudio multicéntrico

En las últimas 4 décadas se profundizó el conocimiento en la cinética de la respuesta temprana al tratamiento en pacientes con Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) para predecir riesgo de recaída1. Sin embargo, 20% de los pacientes que inicialmente responden al tratamiento y morfológicamente no presentan blastos en médula ósea, recidivan durante el tratamiento o luego de la finalizar el mismo.Fil: Soria, Rose Mari. Hospital de Niños Dr. Ricardo Gutiérrez; Argentina.Fil: Agriello, Evangelina. Laboratorio de Especialidades Bioquímicas; Argentina.Fil: Agriello, Evangelina. Hospital Interzonal General Dr. José Penna; Argentina.Fil: Agriello, Evangelina. Grupo Argentino de Tratamiento de la Leucemia Aguda; Argentina.Fil: Gutierrez, María. Hospital de Niños Dr. Ricardo Gutiérrez; Argentina.Fil: Gil, Gimena. Hospital de Niños Dr. Ricardo Gutiérrez; Argentina.Fil: Iommi, María Paula. Laboratorio de Especialidades Bioquímicas; Argentina.Fil: Torreguitart, Federico Andrés. Laboratorio de Especialidades Bioquímicas; Argentina.Fil: Caferri, Horacio. Hospital Interzonal General Dr. José Penna; Argentina.Fil: Cédola, Alejandra. Sanatorio San Lucas; Argentina.Fil: Majek, Elena. Hospital de Niños Dr. Héctor Quintana; Argentina.Fil: Hiramatsu, Elizabeth. Hospital Pediátrico del Niño Jesús; Argentina.Fil: Morell, Daniela. Hospital Pediátrico del Niño Jesús; Argentina.Fil: Rizzi, María Laura. Sanatorio Allende; Argentina.Fil: Rodríguez Cuimbra, Silvia. Hospital Pediátrico Juan Pablo II; Argentina.Fil: Gomel De Baraja, María E. Hospital Pediátrico Juan Pablo II; Argentina.Fil: Cabral Castella, Antonia C. Hospital Pediátrico Juan Pablo II; Argentina.Fil: Pistaccio, Luis. Hospital Interzonal de Agudos Especializado en Pediatría Sor María Ludovica; Argentina.Fil: Schuttemberg, Virginia. Hospital Interzonal de Agudos Especializado en Pediatría Sor María Ludovica; Argentina.Fil: Riccieri, Cecilia.Fil: Solari, Liliana. Hospital Nacional Profesor Alejandro Posadas; Argentina.Fil: Solari, Liliana. Grupo Argentino de Tratamiento de la Leucemia Aguda; Argentina.Fil: Riccieri, Cecilia. Hospital Nacional Profesor Alejandro Posadas; Argentina.Fil: Gaillard, María I. Hospital de Niños Dr. Ricardo Gutiérrez; Argentina.Fil: Gaillard, María I. Grupo Argentino de Tratamiento de la Leucemia Aguda; Argentina.Fil: Ferraro, C. Hospital de Niños Dr. Ricardo Gutiérrez; Argentina.Fil: Hernández, M. Clínica Dr. Matera; Argentina.Fil: Drosovsky, C. Sanatorio San Lucas; Argentina.Hematologí

Mecanismos de señalización que intervienen en la diferenciación neuroendocrina del cáncer de próstata: papel de la autofagia y del cannabinoide WIN 55-212-2

La mayoría de tumores de próstata aparecen en forma de adenocarcinoma cuyo desarrollo y progresión depende de los andrógenos. Por ello, la estrategia terapéutica convencional consiste en bloquear la síntesis de andrógenos endógenos y/o inhibir la función del receptor de andrógenos. La terapia de eliminación de andrógenos (ADT) suele ser altamente efectiva pero, con el tiempo, los pacientes desarrollan resistencia a este tratamiento dando lugar al cáncer de próstata resistente a la castración (CRPC). En algunos casos, este tipo de cáncer resistente evoluciona hacia un subtipo muy agresivo con fenotipo neuroendocrino o diferenciación neuroendocrina (NED) para el que la supervivencia es de aproximadamente 1 año. Conocer los mecanismos moleculares que permiten la aparición de las células neuroendocrinas (NE) es de crucial importancia para desarrollar nuevas estrategias terapéuticas que permitan combatir este tipo de cáncer tan letal. En primer lugar hemos establecido un modelo de NED mediante el cultivo de las células de cáncer de próstata LNCaP en un medio sin suero durante seis días. En este modelo in vitro, las células NE presentan características morfológicas y moleculares similares a las que se observan en las células NE del cáncer de próstata, tienen aumentada la expresión de los marcadores neuroendocrinos NSE y [beta]III Tub, y disminuida la de AR y PSA. Demostramos que es un proceso reversible, puesto que si se repone el suero en el medio de cultivo se revierte el fenotipo NE como lo indican el cambio morfológico de las células, la disminución de los niveles de marcadores NE y el aumento de AR. Las células NE tienen aumentada la expresión de IL-6 y capacidad estimuladora del crecimiento de otras células, ya que la presencia de células NE aumenta el crecimiento de células PC-3 tanto in vitro como en tumores xenógrafos, y los sobrenadantes obtenidos de células NE aumentan el crecimiento de células PC-3 in vitro, sin embargo este efecto de las células NE no está mediado por la IL-6. Posteriormente hemos analizado el papel de las vías de señalización PI3K/Akt/mTOR y AMPK en el proceso de la NED de las células LNCaP, estableciendo que las células NE tienen la vía PI3K/Akt/mTOR activada, y su inhibición impide la NED, y la vía AMPK inhibida, y su activación impide la NED. Además, hemos observado que las células NE tienen aumentada la expresión de la proteína lisosomal LAMP2 y activada la autofagia, y hemos demostrado que ambos hechos son necesarios para alcanzar el fenotipo NE puesto que tanto el silenciamiento de LAMP2 como el bloqueo de la autofagia impiden la NED de las células LNCaP. Así mismo, hemos demostrado la importancia de las las vías de señalización PI3K/Akt/mTOR y AMPK participan en la activación de la autofagia de las células NE, debido a que la inhibición farmacológica de PI3K/Akt/mTOR y la activación de AMPK bloquean la autofagia e impiden la NED de las células LNCaP. Por último hemos establecido que durante la NED de las células LNCaP se produce una disminución drástica de los niveles de receptores de cannabinoides CB1 Y CB2. El cannabinoide sintético WIN 55,212-2 (WIN), con afinidad por ambos receptores, produce una disminución de la viabilidad de células LNCaP y células NE que no está mediada por los receptores CB1 y CB2. El tratamiento con dicho cannabinoide impide la NED de las células LNCaP, ya que ejerce un efecto inhibitorio sobre la vía de señalización PI3K/Akt/mTOR y un efecto activador sobre la vía de señalización de AMPK. El tratamiento de tumores xenógrafos de células PC-3, células PC-3+LNCaP y de células PC-3+NE con WIN 55,212-2 (WIN) disminuye el crecimiento de los mismos en comparación con aquellos que solo reciben tratamiento con vehículo. Este estudio aporta un nuevo modelo in vitro que permite el estudio de la NED del cáncer de próstata, demuestra el papel modulador de la vía PI3K/Akt/mTOR/AMPK en este proceso, y propone al cannabinoide WIN 55,212-2 y a la proteína lisosomal LAMP2 como potenciales tratamiento terapéutico y diana terapéutica, respectivamente, del cáncer de próstata NE

Podredumbres postcosecha por Phacidiopycnis en frutos de pepita

El Alto Valle de Río Negro es una de las principales zonas productoras de frutales de pepita de la Argentina. El almacenamiento frigorífico postcosecha es frecuentemente utilizado para la exportación y/o comercialización a contraestación. Frecuentemente, durante este período, se producen pérdidas por patógenos como Botrytis cinerea, Alternaria spp., Cladosporium spp, Penicillium expansum. De carácter esporádico, con cierta frecuencia de aparición, en diferentes cultivares de peras y manzanas se han detectado durante los últimos 10 años, podredumbres con sintomatología característica de Phacidiopycnis ssp. (teleomorfo de Potebniamyces spp.). La problemática fue detectada con baja incidencia durante la corta conservación en pera William’s (2012 y 2013), y mediana-larga conservación en manzana Granny Smith (2019), pera Beurré d’Anjou (2021) y en Packham’s Triumph (2022). Con el objetivo de establecer las características del patógeno, desde frutos de pera de Packham’s Triumph con 7 meses de almacenamiento, con síntomas principalmente asociados a pedúnculos y signos, se llevaron a cabo aislamientos en agar papa dextrosa acidificado (APD-A), a partir de los cuales se realizó la identificación molecular y pruebas de patogenicidad en los cultivares de pera más importantes para la región. Los aislados obtenidos en APD-A incubados a 7, 14 y 21 días con un régimen de luz 12:12 horas, se caracterizaron macro y micromorfológicamente, y se los identificó molecularmente a través del secuenciamiento del fragmento ITS1-ITS4. Las pruebas de patogenicidad se realizaron con inoculación de frutos de los cultivares Beurre d’Anjou, Packham’s Triumph y William’s a partir de suspensiones de conidios en pedúnculo, cáliz y heridas en la zona ecuatorial, e incubación 7 días a 20°C y 30 días a 0°C más 7 a 20°C (góndola). Desde los síntomas de los frutos inoculados se realizaron re-aislamientos, con los cuales se cumplimentaron los Postulados de Koch. Las características macro-microscópicas respondieron a las características descriptas para el género Phacidiopycnis. Las secuencias de ITS de los aislados confirmaron la identidad del patógeno, con una similaridad de 99-100% con la secuencia de Potebniamyces pyri (anamorfo Phacidiopycnis pyri) CBS:322.63. Las secuencias fueron depositadas en el GenBank (accesos: OQ280987.1, OQ280986.1, OQ280985.1). En lo que respecta a las pruebas de patogenicidad, tanto a los 7 días 20°C, como luego de 30 días a 0°C más 7 a 20°C, los aislados resultaron patogénicos a partir de las inoculaciones de pedúnculo y heridas de frutos de todos los cultivares, mientras que de cáliz sólo en William’s y d’Anjou. De acuerdo con nuestros estudios, Phacidiopycnis en la región, es un patógeno que hasta el momento aparece en baja frecuencia, pero afectando a todos los cultivares de pera de importancia. Estudios epidemiológicos son necesarios para conocer las fuentes de inoculo, momentos de infección y condiciones ambientales predisponentes para la ocurrencia de la podredumbre.Facultad de Ciencias Agrarias y Forestale

Docencia en inglés en el Grado en Criminología: análisis, evaluación y propuestas de mejora

El presente trabajo expone los resultados generales del estudio realizado en el marco de la Red de Docencia Universitaria de la Universidad de Alicante “Docencia en inglés en el Grado en Criminología: análisis, evaluación y propuestas de mejora (3791)” correspondiente al curso 2016-2017. Esta red estaba dirigida a analizar la autopercepción del alumnado de su experiencia de aprendizaje en asignaturas impartidas en lengua inglesa, de modo que los resultados permitan introducir mejoras en cursos venideros. Para llevar a cabo este objetivo general, se utilizó como principal herramienta de recogida de datos un cuestionario estructurado que combinaba preguntas cerradas, semicerradas y abiertas, y que se administró de forma presencial en las tres asignaturas impartidas en lengua inglesa en el Grado en Criminología durante el curso 2016-2017. Este documento ofrece los resultados descriptivos de dicho cuestionario y las principales conclusiones del estudio