Exploring Biocontrol of Unwanted Fungi by Autochthonous Debaryomyces hansenii Strains Isolated from Dry Meat Products

The exploration of alternatives to the use of chemical preservatives in food is a topic that has attracted great attention. The implementation of regulations associated with the reduction of these elements directly affects the production of cured meat products, with the premise of looking for more “natural” alternatives. From a previously identified collection of 24 strains of Debaryomyces hansenii, isolated from dry meat products of the “Valle de los Pedroches” (Córdoba), a screening was carried out to determine which strains had inhibitory potential against a battery of fungi belonging to the genera Aspergillus, Penicillium, and Candida. After a series of general trials, four strains showing the greatest potential were selected by a streak inhibition assay performed at several concentrations of NaCl. The inhibitory activity of the selected D. hansenii strains was later evaluated by measuring their fungal antagonistic diffusible and volatile compound production following radial inhibition and mouth-to-mouth approaches, respectively. Growth aspects, sporulation, and morphology changes were also considered during these assays. The results support ideas already raised in previous studies, such as the presence of D. hanseniii could imply a reduction of pathogenic fungi in food. Autochthonous yeast strains inhibited not only the mycelial growth, but also sporulation, which strengthens the biocontrol activity of this yeast. Our results show that, under certain conditions, all tested D. hansenii strains were able to alter the growth/development of fungi, being especially evident in the cases of Penicillium expansum and Aspergillus niger. Finally, our research can facilitate the future comparison of results in this area, since we contributed to standardize the methodology described to date, we quantified the number of yeast cells and spores used during the experiments, we homogenized growth conditions for both, yeasts, and molds, and applied an image analyzer software to quantify the growth of the studied microorganisms in solid media

Candida albicans Potassium Transporters

Potassium is basic for life. All living organisms require high amounts of intracellular potassium, which fulfils multiple functions. To reach efficient potassium homeostasis, eukaryotic cells have developed a complex and tightly regulated system of transporters present both in the plasma membrane and in the membranes of internal organelles that allow correct intracellular potassium content and distribution. We review the information available on the pathogenic yeast Candida albicans. While some of the plasma membrane potassium transporters are relatively well known and experimental data about their nature, function or regulation have been published, in the case of most of the transporters present in intracellular membranes, their existence and even function have just been deduced because of their homology with those present in other yeasts, such as Saccharomyces cerevisiae. Finally, we analyse the possible links between pathogenicity and potassium homeostasis. We comment on the possibility of using some of these transporters as tentative targets in the search for new antifungal drugs

Regulation and activity of CaTrk1, CaAcu1 and CaHak1, the three potassium transporters of the plasmatic membrane of C. albicans.

C. albicans es una levadura diploide y patógeno oportunista que se encuentra presente como comensal en la mayoría de los individuos sanos de forma inofensiva. Sin embargo, bajo ciertas condiciones, esta levadura se convierte en uno de los principales patógenos causantes de infecciones fúngicas en el ser humano, provocando desde enfermedades leves hasta enfermedades potencialmente letales. Al igual que en todos los seres vivos, el potasio es un catión esencial para este microorganismo, por lo que, para obtener la cantidad necesaria para su supervivencia, C. albicans compite con las células de su huésped por el potasio extracelular disponible en el organismo, que suele estar presente a baja concentración (nmol/L) extracelular. Para poder obtener este catión, C. albicans ha desarrollado tres sistemas de transporte de potasio diferentes en su membrana plasmática (Trk1, Acu1 y Hak1). Este hecho hace a este microorganismo particularmente interesante al ser de las pocas levaduras que contiene en su membrana plasmática un transportador de potasio de cada familia. Previamente a esta Tesis Doctoral, se tenía poca información respecto a la homeostasis de potasio en este microorganismo, ya que solo se conocía la existencia de estos transportadores en su membrana plasmática, y que el gen ACU1 había sido caracterizado como un pseudogen, no encontrándose presente de forma funcional en todas las cepas de C. albicans. Por estas razones y para ampliar el conocimiento que se tenía hasta la fecha, el objetivo general de esta Tesis Doctoral ha sido estudiar el proceso de la homeostasis en C. albicans. Para ello, se ha llevado a cabo un análisis de estos transportadores en dos cepas “silvestres” de C. albicans: la cepa 12C, que contiene los tres transportadores de K+ (Trk1, Acu1 y Hak1) y la cepa SC5314, que es ampliamente utilizada como cepa de referencia, pero contiene solo dos transportadores de K+ (Trk1 y Hak1). Para poder comprender mejor el papel de cada transportador de forma independiente, se intentó obtener mutantes mediante el sistema CRISPR/Cas9. Sin embargo, debido a los problemas encontrados para obtener estos mutantes, finalmente se decidió realizar dos aproximaciones: en primer lugar, mediante la expresión heteróloga de estos transportadores en una cepa mutante de S. cerevisiae carente de sus transportadores de potasio endógenos (trk1Δtrk2Δ) y, en segundo lugar, mediante la caracterización de una cepa mutante hak1- obtenida anteriormente para estudiar el papel del transportador Hak1 en la homeostasis de potasio de C. albicans. En esta Tesis Doctoral hemos logrado demostrar que C. albicans cuenta con unos sistemas de transporte de potasio altamente eficientes que, de forma independiente, son más que suficientes para que este microorganismo sea capaz de adquirir eficazmente el potasio necesario para su supervivencia. Asimismo, demostramos que el transportador Hak1 es especialmente importante en condiciones de pH ácido, donde todo indica que funciona como un simportador de K+:H+. Además, se han relacionado algunos de estos transportadores con la tolerancia a diversos iones como son el sodio o el litio. Los estudios del perfil transcriptómico han evidenciado que, como ocurre en otras levaduras, el gen TRK1 no se encuentra regulado transcripcionalmente de forma importante en ninguna de las condiciones de estrés estudiadas mientras que los genes ACU1 y HAK1 se encuentran fuertemente regulados por el ayuno de potasio.C. albicans is a diploid yeast and opportunistic pathogen that is harmlessly present as a commensal in most healthy individuals. However, under certain conditions, this yeast becomes one of the main pathogens causing fungal infections in humans, causing mild to life-threatening illnesses. As in all living beings, potassium is an essential cation for this microorganism. Therefore, to obtain the potassium necessary for its survival, C. albicans competes with the cells of its host for the extracellular potassium available in the organism, which is usually present at a low concentration (nmol/L) extracellularly. In order to obtain this cation, C. albicans contains three different potassium transport systems in its plasma membrane (Trk1, Acu1 and Hak1). This fact makes this microorganism particularly interesting as it is one of the few yeasts that contains a potassium transporter from each family in its plasma membrane. Before this Thesis, little information was available regarding potassium homeostasis in this microorganism, since the existence of these transporters was only detected in its plasma membrane, and the ACU1 gene had been characterized as a pseudogene, not being functionally present in all strains of C. albicans. For these reasons and to broaden the knowledge available to date, the general objective of this Thesis has been to study the process of homeostasis in C. albicans. For this, an analysis of these transporters has been carried out in two "wild type" strains of C. albicans: strain 12C, which contains the three K+ transporters (Trk1, Acu1 and Hak1) and strain SC5314, which is widely used as a reference strain, but contains only two K+ transporters (Trk1 and Hak1). In order to better understand the role of each transporter independently, we tried to obtain mutants using the CRISPR/Cas9 system. However, due to the problems encountered in obtaining these mutants. We finally carried out two approaches: first, through the heterologous expression of these transporters in a mutant strain of S. cerevisiae lacking its endogenous potassium transporters (trk1 Δtrk2Δ) and secondly, by characterizing a mutant strain previously obtained to study the role of the Hak1 transporter in C. albicans potassium homeostasis. In this Thesis we have managed to demonstrate that C. albicans has highly efficient potassium transport systems that, independently, are more than sufficient for this microorganism to be able to efficiently acquire the potassium necessary for its survival. Likewise, we show that the Hak1 transporter is especially important in acidic pH conditions, where everything indicates that it functions as a K+::H+ symporter. In addition, some of these transporters have been related to tolerance to various toxic cations such as sodium or lithium. Studies of the transcriptomic profile have shown that, as in other yeasts, the TRK1 gene is not significantly transcriptionally regulated under any of the stress conditions studied, while the ACU1 and HAK1 genes are strongly regulated by potassium starvation

The Potassium Transporter Hak1 in Candida Albicans, Regulation and Physiological Effects at Limiting Potassium and under Acidic Conditions

The three families of yeast plasma membrane potassium influx transporters are represented in Candida albicans: Trk, Acu, and Hak proteins. Hak transporters work as K+-H+ symporters, and the genes coding for Hak proteins are transcriptionally activated under potassium limitation. This work shows that C. albicans mutant cells lacking CaHAK1 display a severe growth impairment at limiting potassium concentrations under acidic conditions. This is the consequence of a defective capacity to transport K+, as indicated by potassium absorption experiments and by the kinetics parameters of Rb+ (K+) transport. Moreover, hak1− cells are more sensitive to the toxic cation lithium. All these phenotypes became much less robust or even disappeared at alkaline growth conditions. Finally, transcriptional studies demonstrate that the hak1− mutant, in comparison with HAK1+ cells, activates the expression of the K+/Na+ ATPase coded by CaACU1 in the presence of Na+ or in the absence of K+

Development of Clay Plasters Containing Thermoregulating Microcapsules for Indoor Walls

This work shows the technical feasibility of incorporating phase change materials (PCMs) into clay plastering mortars to improve the thermal properties of the building envelopes. Due to the absence of regulated and internationally agreed-upon norms for clay mortars containing thermoregulating microcapsules (MPCMs), two tests following UNE-EN-998-1:2010 and UNE-EN-1015, were designed to provide the greatest similarity to its final application. Three different dosages 5, 10, and 15 wt% of MPCM relative to the dried mortar weight were used. Fresh mortars were physically characterized to determine its consistency, apparent density, period of workability and open time, and occluded air content. Physical and mechanical characteristics were determined for hardened mortar. The thermal characteristics of the specimens were analysed by using a differential scanning calorimetry, obtaining their apparent specific heat capacities and the enthalpy curves. Building simulation software is a fundamental tool for designing buildings with almost zero energy consumption. In this study, three identical architectural models were simulated. The reference building had inner coatings of clay-based mortar, mortar with 15% added material, and a conventional gypsum mortar. These buildings were subjected to the same exposure and radiation conditions, which allowed the result to be compared to evaluate the effect of incorporating the PCM

Impuesto a las embarcaciones de recreo

Tax Law attempts to regulate the majority of possible circumstances, in order to achieve an effective taxing on what requires be taxed. Being the acquisition of recreational boats an increasingly frequent phenomenon, it’s necessary to apply the Tax to Recreational Boats and to understand this tax in the light of the Peruvian legislation. On this occasion, the author analyzes the current situation of the imposition to these movable goods, through the interpretation and even questioning of its legal basis: the Law of Municipal Taxation and the regulation of the Tax to Recreational Boats.El Derecho Tributario intenta regular la mayoría de circunstancias posibles para gravar efectivamente aquello que requiera imposición. Siendo la adquisición de embarcaciones de recreo un fenómeno cada vez más frecuente, surge la necesidad de aplicar el Impuestoa las Embarcaciones de Recreo y de entender esta carga a la luz de la normativa peruana. En esta oportunidad, el autor analiza la situación actual de la imposición a estos bienes muebles, a través de la interpretación de su base legal: La Ley de Tributación Municipal yel Reglamento del Impuesto a las Embarcaciones de Recreo

Concept of Sale for the Purposes of the General Tax on Sales

El concepto de venta puede ser determinado de diversas maneras según la rama del Derecho que estudie la venta; sin embargo, para efectos tributarios, la venta toma otra connotación que intenta ser dilucidada en el presente artículo, en el que se toma en cuenta, tanto la ley del Impuesto General a las Ventas (IGV) como las resoluciones del Tribunal Fiscal. Así mismo, se intenta dilucidar el hecho que constituye venta para efectos del IGV, en donde se apela a la autonomía del Derecho tributario.The definition of sale can be determined in several ways depending on the law branch that is studying the sale, however, for tax purposes, the sale takes a different connotation which tries to be elucidated in the current article, in which is taken into account the Tax on the General Sales (IGV) as the resolutions of the Tax Court. Furthermore, it is intended to elucidate the fact that constitutes the sale for IGV in which is called the self-governing of the Taxation Law

Los efectos de la inflación en el pago de las obligaciones dinerarias en situación de mora del deudor

Latinoamerica es una de las regiones que en los últimos tiempos viebe padeciendo los estragos que produce la inflación. En particular, el Perú ha registmdlo recientemente uno de los mayores índices de inflación a nivel mundial. Por ejemplo en 1990 los prcrios se incrementaron en un prmnedio de 7649.7% Este dato nos puede dar una idea sobre la magnitud de la depreciación del valor real de nues1tra moneda nacional. En las obligaciones pecuniarias sucede que cuanto mayor es el lapso que demora el deudor en cumplir con la prestación a su cargo, entonces resulta más seria la pérdida del poder adquisltvo del dinero que se emplea en el pago, con el consiguiente perjuicio para el acreedor común y corriente. ¿Cómo ha reaccionado el Derecho frente a este problema? La doctrina y jurisprudencia vienen desarrollando fórmulas de solución bastante polémicas que han alcanzado ribetes verdaderamente brillantes sobretodo en Argentina. Sin embargo, la inflación y la mora del deudor configuran un tema riquísimo en cuanto a posibilidades de investigación se refiere, muchas de las cuales todavía no han tnerecido tma debida atención. En virtud de esta última consideración nuestro trabajo pretende explorar ciertos puntos de vista que nos parecen verdaderamente medulares para contprender a cabalidad el problema planteado. Sabemos que a lo largo de esta obra hemos discurrido por los oscuros límites que separan al Derecho Civil de otras ramas del Derecho en general. En efecto he, nos abordado la perspectiva de la Fllosofia del Derecho, Derecho Constitucional, Derecho Comparado y Derecho Monetario con el propósito de enriquecer la visión de conjunto con relación al tema central de nuestro análisis. Al final puede constatarse una suerte de retroalimentación entre todas estas áreas del quehacer jurídico y que viene a constituir una expresión más del carácter dinámico, complementario y creativo que tiene todo sistenta jurídico para dilucidar los problemas económicos y sociales que se deben regular

Los efectos de la inflación en el pago de las obligaciones dinerarias en situación de mora del deudor

Latinoamerica es una de las regiones que en los últimos tiempos viebe padeciendo los estragos que produce la inflación. En particular, el Perú ha registmdlo recientemente uno de los mayores índices de inflación a nivel mundial. Por ejemplo en 1990 los prcrios se incrementaron en un prmnedio de 7649.7% Este dato nos puede dar una idea sobre la magnitud de la depreciación del valor real de nues1tra moneda nacional. En las obligaciones pecuniarias sucede que cuanto mayor es el lapso que demora el deudor en cumplir con la prestación a su cargo, entonces resulta más seria la pérdida del poder adquisltvo del dinero que se emplea en el pago, con el consiguiente perjuicio para el acreedor común y corriente. ¿Cómo ha reaccionado el Derecho frente a este problema? La doctrina y jurisprudencia vienen desarrollando fórmulas de solución bastante polémicas que han alcanzado ribetes verdaderamente brillantes sobretodo en Argentina. Sin embargo, la inflación y la mora del deudor configuran un tema riquísimo en cuanto a posibilidades de investigación se refiere, muchas de las cuales todavía no han tnerecido tma debida atención. En virtud de esta última consideración nuestro trabajo pretende explorar ciertos puntos de vista que nos parecen verdaderamente medulares para contprender a cabalidad el problema planteado. Sabemos que a lo largo de esta obra hemos discurrido por los oscuros límites que separan al Derecho Civil de otras ramas del Derecho en general. En efecto he, nos abordado la perspectiva de la Fllosofia del Derecho, Derecho Constitucional, Derecho Comparado y Derecho Monetario con el propósito de enriquecer la visión de conjunto con relación al tema central de nuestro análisis. Al final puede constatarse una suerte de retroalimentación entre todas estas áreas del quehacer jurídico y que viene a constituir una expresión más del carácter dinámico, complementario y creativo que tiene todo sistenta jurídico para dilucidar los problemas económicos y sociales que se deben regular.Tesi

Downregulation of protein tyrosine phosphatase PTPL1 alters cell cycle and upregulates invasion-related genes in prostate cancer cells

The final publication is available at link.springer.comPTPL1, a non-receptor type protein tyrosine phosphatase, has been involved in the regulation of apoptosis and invasiveness of various tumour cell types, but its role in prostate cancer remained to be investigated. We report here that downregulation of PTPL1 by small interfering RNA in PC3 cells decreases cell proliferation and concomitantly reduces the expression of cell cycle-related proteins such as cyclins E and B1, PCNA, PTTG1 and phospho-histone H3. PTPL1 downregulation also increases the invasion ability of PC3 cells through Matrigel coated membranes. cDNA array of PTPL1-silenced PC3 cells versus control cells showed an upregulation of invasion-related genes such as uPA, uPAR, tPA, PAI-1, integrin α6 and osteopontin. This increased expression was also confirmed in PTPL1-silenced DU145 prostate cancer cells by quantitative real time PCR and western blot. These findings suggest that PTPL1 is an important mediator of central cellular processes such as proliferation and invasion. © 2012 Springer Science+Business Media B.V.This work was supported by Grants from the Ministerio de Ciencia e Innovación, Instituto de Salud Carlos III, Spain (FIS PI10/02026 and SAF2008-05046-C02-02), ISCIIIRETIC-RD06/0020-FEDER, Consejería de Salud (PI-2009-0589, AI-2010-003 to M.A.J.), and Consejería de Innovación, Ciencia y Empresa (CTS-6243), Junta de Andalucía (06/189, PI-2009-0589, and AI-2010-003 to M. A. J.). C. C. was supported by a pre-doctoral Grant from the Spanish Ministerio de Educación (F.P.I.: BES200612419) co-financiated by Fondo Social Europeo. C. S. was supported by a contract from Instituto de Salud Carlos III/FIS and Fundación Progreso y Salud, Consejería de Salud, Junta de Andalucía, Miguel Servet Program.Peer Reviewe