Reversal of terminal differentiation and control of DNA replication

DNA replication in mammalian cells occurs in discrete nuclear foci. Here we show that terminally differentiated myotubes can be induced to reenter S phase and show the same pattern of replication foci as cycling cells. We used this cellular system to analyze the interaction of cell cycle proteins with these foci in vivo. Cyclin A and cdk2, but not cyclin B1 and cdc2, were specifically localized at nuclear replication foci, just like the replication protein proliferating cell nuclear antigen. A potential target of cyclin A and cdk2 is the 34 kd subunit of replication protein A (RPA34). In contrast with the 70 kd subunit, which localizes to the foci, RPA34 was not detected at these replication sites, which may reflect a transient interaction. The specific localization of cyclin A and cdk2 at nuclear replication foci provides a direct link between cell cycle regulation and DNA replication

Pancreatite alcoólica

Projeto de Pós-Graduação/Dissertação apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Ciências FarmacêuticasA pancreatite alcoólica é uma das principais complicações do consumo excessivo de álcool. O risco de desenvolver a doença aumenta com a ingestão de doses crescentes de álcool, sugerindo que os efeitos tóxicos estão relacionados com a quantidade de álcool ingerida. No entanto, apenas uma minoria dos alcoólicos desenvolve pancreatite, o que indica a necessidade de um fator desencadeador adicional para iniciar a lesão pancreática clinicamente evidente. A pancreatite alcoólica começa como um processo agudo necroinflamatório/ autodigestivo, progredindo com repetidos episódios de necroinflamação. O seu espectro clínico inclui pancreatite aguda (dor abdominal aguda e elevados níveis séricos das enzimas pancreáticas) e pancreatite crónica (dor abdominal, má digestão e diabetes). Têm sido feitos avanços significativos que fornecem uma visão sobre os mecanismos moleculares da lesão pancreática provocada pelo álcool, principalmente no que diz respeito aos seus efeitos tóxicos sobre as células acinares pancreáticas e recentemente, nas células estreladas pancreáticas (PSCs), que desempenham um papel fundamental na fibrose, caraterística da pancreatite crónica alcoólica. Alcoholic pancreatitis is a major complication of alcohol abuse. The risk of developing pancreatitis increases with increasing doses of alcohol, suggesting that alcohol exerts dose-related toxic effects on the pancreas. However, it is also clear that only a minority of alcoholics develop the disease, indicating that an additional trigger may be required to initiate clinically evident pancreatic injury. Alcoholic pancreatitis is thought to begin as an acute necroinflammatory/autodigestive process in a susceptible individual and to progress with repeated episodes. The clinical spectrum of the disease includes acute pancreatitis (acute abdominal pain and raised sérum levels of pancreatic enzymes) and chronic pancreatitis (abdominal pain, maldigestion, diabetes). Significant advances have been made in recent years that provide an insight into the molecular mechanisms of alcohol-related pancreatic injury, particularly with respect to the direct toxic effects of alcohol on pancreatic acinar cells and on the recently characterized PSCs, with may play a key role in the fibrosis of alcoholic chronic pancreatitis

Neuroendocrinology of cooperation: the role of neuropeptides on the modulation of mutualistic behaviour of the Indo-Pacific Cleaner Wrasse (Labroides dimidiatus)

Tese de doutoramento, Ciências do Mar, da Terra e do Ambiente, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade do Algarve, 2015Interspecific cleaning interactions are a classical textbook example of mutualistic cooperation. One of the most notorious cleaning mutualisms involve the Indo-Pacific Bluestreak cleaner wrasse Labroides dimidiatus, which are known to interact with an average of 2300 visitor reef fish per day. In contrast to the increasing knowledge on the functional aspects of cleaning mutualisms in the last decades, their underlying physiological mechanisms are still relatively rare. One major class of neuromodulators that is involved in the control of social behaviour and that seems to be co-opted for the regulation of cleaning behaviour is a group of nonapeptides of the arginine vasopressin /oxytocin family (AVP/OT). The general aim of this study is to attempt to link functional aspects of decision-making underlying the cleaning behaviour with their proximate mechanisms, namely to determine the contribution of the neuropeptides arginine vasotocin (AVT) and isotocin (IT) for the regulation of adjustments of individual cleaner wrasses’ behavioural output. This study yielded several findings. First, I tested the influence of AVT upon the cleaners’ ability to solve two different problems that in principle differ in ecological relevance and are associated with two different memory circuits and found that AVT affected the learning competence of cleaners as individual performance showed distinct response selectivity to AVT dosage levels. However, only in the ecologically relevant task was their learning response improved by blocking AVT via treatment with the antagonist Manning compound. Next I examined if neuropeptides may be implicated in the mechanisms underlying the adjustment of individuals to the existence of partner control mechanisms in cooperative interactions between unrelated individuals and discovered that solely the experimental transient higher dosage of AVT led to a decrease of cleaners’ willingness to feed against their preference, while IT and AVT antagonists had no significant effects. Then I asked if the establishment of privileged ties and the quality of association between cleaner wrasse pairs is correlated with neuroendocrine mechanisms involving forebrain neuropeptides and whether these neuropeptides level shifts relate to individual’s interspecific service quality. Here I found .that variation in pairs’ relationship influence male and female cleaner fish differently and contribute to the variation of brain neuropeptide levels, which is linked to distinct cooperative outcomes. Finally, I explore the link between these neuroendocrine pathways and the expression of mutualistic behaviour in fishes by comparing the brain quantitative distribution of AVT and IT across the overall and in selected areas of the brain; aiming at four closely related species of labrids that differ in the degree to which they depend on cleaning. The levels of both AVT and IT varied significantly across species, as measured in the whole brain or in specific macro-areas. More importantly, significantly higher AVT levels in cerebellum and in the whole brain were found in the obligate cleaner species, which seems to be related to expression of mutualistic behaviour. Overall, my study suggests that the neuropeptidergic system but mostly AVT pathways play a pivotal role in the regulation of interspecific cooperative behaviour and conspecific social behaviour among stabilized pairs of cleaner wrasses.As interacções interespecíficas de limpeza são exemplos clássicos de cooperação mutualística. Um dos mais emblemáticos exemplos de mutualismo de limpeza envolve o bodião limpador do Indo-Pacífico Labroides dimidiatus que interage em média com cerca de 2300 espécies de peixes do recife de coral por dia. Estes bodiões removem ectoparasitas e tecido infectado ou morto da superfície dos peixes que os visitam (referidos como clientes) e dependem exclusivamente das interações mutualísticas de limpeza para obter o seu alimento. Os bodiões limpadores encontram-se em territórios específicos, designados por estações de limpeza, e vivem num sistema de harém (espécie poliginica e protogínica). As interacções de limpeza são geralmente iniciada pelos clientes, que adoptam uma posição específica ficando imoveis e abrindo a boca, opérculos e barbatanas peitorais, que demostram assim que desejam ser limpos. Por sua vez, os limpadores exibem um comportamento específico de dança, nadando para cima e para baixo, chamando assim a atenção dos seus clientes. Uma estratégia de pré-conflito utilizada pelos limpadores é a da estimulação táctil, durante a qual, usando as barbatanas pélvicas e peitorais, “massajam” o corpo do cliente durante a inspecção, e enquanto o faz não se alimenta. Apesar do crescente conhecimento sobre os aspectos funcionais do mutualismo de limpeza, pouco se sabe sobre os mecanismos fisiológicos que estão na base destas interações de cooperação. O grupo dos nonapeptidos da família da Arginina vasopressina/ Oxytocina (AVP/OT) é uma classe importante de neuromodeladores que está relacionada com a regulação do comportamento social e que por conseguinte poderá estar envolvida na modelação do comportamento cooperativo de limpeza. Um estudo recente realizado no campo demonstrou que a administração exógena de AVT no bodião limpador contribui para a diminuição as interações de limpeza, sem afectar da mesma forma as suas relações conspecíficas destes limpadores. O principal objectivo deste estudo é relacionar os aspectos funcionais das tomadas de decisão que determinam o comportamento de limpeza com os seus mecanismos proximais, isto é, tentar perceber de que forma os neuropéptidos, a Arginina vasotocina (AVT) e a Isotocina (IT) (homólogos nos peixes da AVP e OT) contribuem para a regulação da flexibilidade das respostas comportamentais dos bodiões limpadores. Em primeiro lugar, testei em laboratório a influência da AVT sobre a capacidade do bodião limpador resolver duas tarefas sociais que diferiam na sua relevância ecológica, e que estão associadas a dois circuitos de memória diferentes. Verifiquei que a AVT influenciou a capacidade de aprendizagem do limpador e o seu comportamento revelou ser sensível a diferentes dosagens deste neuropéptido. Na tarefa de aprendizagem por “pista” - a tarefa ecologicamente relevante - o limpador melhorou a sua aprendizagem quando a AVT foi bloqueada através da administração de um composto antagonista – o composto Manning. Já na aprendizagem espacial, tarefa ecologicamente não relevante para o contexto de limpeza, apenas o tratamento com uma dose baixa de AVT diminui a capacidade de aprendizagem do bodião limpador. Seguidamente, foi examinado, também em condições controladas, se os neuropeptidos estariam implicados nos mecanismos que ajustam o controlo exercido pelos parceiros sociais envolvidos neste tipo de interação interspecífica. Os bodiões limpadores preferem o muco (com alto valor energético) aos ectoparasitas mas a fim de assegurarem relações duradoiras com os seus clientes precisam comer contra a sua preferência, controlando a impulsividade de ingerirem apenas o que preferem. Verificou-se que apenas uma dose elevada de AVT levou os bodiões limpadores a comerem menos vezes contra a sua preferência. Os antagonistas da AVT e da IT não revelaram ter resultados significativos. Depois foi estudado (em condições naturais) se o estabelecimento de ligações privilegiadas e a qualidade da associação dos casais de bodiões limpadores estariam relacionados com os mecanismos neuro endócrinos que envolvem os neuropétidos no forebrain (área cerebral associada ao comportamento social) e ainda se os níveis de neuropéptidos nesta área cerebral influenciariam a qualidade do serviço de limpeza prestado quando limpavam sozinhos. Ficou demonstrado que a variação do índex de associação dos casais de limpadores influencia machos e fêmeas de forma distinta e contribui para a variação dos níveis de neuropeptidos no cérebro, que por sua vez leva a respostas comportamentais diferentes. Os machos L. dimidiatus que estabeleciam pares com maior índice de associação tinham também valores de IT e eram mais desonestos (comiam a favor da sua preferência) com maior frequência. De igual modo, as taxas de “batota” das fêmeas pareceram relacionar-se com os seus níveis de IT no forebrain, mas menos dependentes do índice de associação. Fêmeas com valores mais elevados de IT e AVT demonstraram ser mais desonestas, mas contrariamente aos machos, as fêmeas apresentaram mais “batoteiras” pertenciam a casais onde existiam maior instabilidade. Por último analisei a ligação entre as vias neuroendocrinas e a expressão do comportamento mutualístico ao comparar os níveis de AVT e IT no cérebro (como um todo e nas diferentes áreas cerebrais que o compõem) em quatro espécies de labrídeos próximos filogeneticamente mas que diferem na expressão do comportamento de limpeza (L. dimidiatus e Labroides bicolor – limpadores obrigatórios, Labropsis australis limpador facultativo e um não limpador - Labricthys unilineatus). Verificou-se que os níveis de AVT e IT variavam significativamente entre espécies quando medidos como um todo e em cada uma das macroáreas cerebrais (cerebelo, tecto óptico, tronco cerebral e forebrain). Os limpadores obrigatórios, L. dimidiatus e Labroides bicolor, apresentaram níveis de AVT significativamente maiores no cerebelo e no cérebro total, o que pode estar relacionado com a expressão do comportamento mutualístico. Os níveis de IT não parecem estar relacionados directamente com a expressão do comportamento mutualístico mas os valores elevados de IT no L. unilineatus sugerem que estes nonapéptidos poderão estar relacionados com o desenvolvimento do dimorfismo sexual, que apenas existe na espécie de não limpador (todas as outras espécies são monomórficas). Em resumo, o meu estudo sugere que o sistema neuropeptidergico, em especial as vias neuronais de AVT desempenham um papel crucial na regulação do comportamento cooperativo interespecífico e comportamento social conspecifico entre casais estáveis de bodiões limpadores.SFRH/BD/41683/200

Cuidar do corpo para melhor cuidar da casa” – influência do projecto comunitário de promoção de saúde nas domésticas

O trabalho doméstico consiste numa actividade fisicamente muito difícil. Avaliar a implementação de um projecto comunitário na sintomatologia neuro-músculo-esquelética de domésticas. O Questionário de Avaliação de Risco, a Escala de Borg e o Questionário Nórdico foi aplicado a 30 domésticas. Foram implementados uma acção de educação para a saúde e um programa de exercícios específicos. Com o projecto, a sintomatologia, a percepção subjectiva de esforço e a intensidade média de dor (p<0,05) diminuíram. Os conhecimentos melhoraram (p<0,05) e modificaram os comportamentos de risco (p<0,05). A implementação do projecto foi eficaz na promoção de saúde das domésticas.Household activities are an extremely hard work. Aim: Evaluate the implementation of a community project in neuro-musculoskeletal symptomatology of household women. The Risk Assessment Questionnaire, the Rating of Perceived Exertion of Borg Scale and the Nordic Musculoskeletal Questionnaire were applied to household women. It were implemented a health education session and a specific exercises programme. After the project, symptomatology, rating of perceived exertion and average intensity of pain decreased (p <0.05). Household women improved (p <0.05) their knowledge and changed (p <0.05) their behaviors. The implementation of a community project has become effective on health promotion

Educação e expressão musical em crianças com lesão cerebral: paralisia cerebral

O trabalho que se segue pretende focar quais os benefícios que uma criança com Paralisia Cerebral pode alcançar ao frequentar as aulas de Educação e Expressão Musical. Neste sentido, a temática-alvo em análise é a paralisia cerebral, debruçando-se no contributo da área de Educação e Expressão Musical no desenvolvimento cognitivo de uma criança esta patologia

Collective action and information and communication technologies: The case of consensus movements

Tese de Doutoramento - Programa Doutoral em Tecnologias e Sistemas de InformaçãoAtualmente, as tecnologias de informação e comunicação (TIC) são utilizadas em diferentes facetas da vida humana. Para além da aplicação destas tecnologias em contextos relacionados com o trabalho, cada vez mais as TIC estão implicadas em interações sociais e em formas informais de organização. Por exemplo, uma considerável parte da socialização ocorre em contextos electrónicos e, frequentemente, pessoas com interesses comuns coordenam ações de grupo através de diferentes plataformas electrónicas, tais como sites de redes sociais, forums de discussão em grupo, e sites de comunidades virtuais. A existência de pessoas que se organizam informalmente para desenvolver interesses comuns ou para colaborar em atividades em prol de uma comunidade ou de um grupo não é uma coisa rara nem nova. Na verdade, isso é essencialmente ação coletiva – entendida como atividade intencional e coordenada de indivíduos com interesse na provisão de bens comuns, ou seja, bens que geram benefícios coletivos para uma comunidade ou um grupo independentemente das contribuições individuais dos seus membros. A ação coletiva é um fenómeno que tem sido investigado por várias áreas científicas, nomeadamente economia, sociologia, ciência política, e ciências da comunicação. Apesar de os fundamentos teóricos deste fenómeno estarem já bem estabelecidos, as implicações do actual contexto tecnológico para a organização de ação coletiva não são ainda bem conhecidas. A fim de estreitar esta lacuna de conhecimento, esta tese investiga o entrelaçamento da organização de ação coletiva com as TIC. O trabalho empírico consiste em estudos de caso de dois movimentos cívicos que organizaram ações coletivas de âmbito consensual, em Portugal e na Estónia, e explica de que forma a organização dessas ações foi facilitada ou dificultada pela utilização destas tecnologias. Os resultados desta tese desvendam sete dimensões de ação coletiva estreitamente entrelaçadas com a utilização das TIC, e desenredam o papel facilitador ou constrangedor destas tecnologias em cada uma dessas dimensões. Esta investigação também enfatiza a agência dos organizadores de ação coletiva e a utilização das TIC como amplificadores de capacidades e de intenções humanas. Estes resultados permitem compreender melhor o papel das TIC nos processos de mudança social que são organizados online e portanto contribuem para a literatura sobre sociedade de informação e consequências societais das TIC.The use of information and communication technologies (ICTs) currently permeates different facets of human lives. Beyond the application of these technologies in workrelated contexts, ICTs are increasingly supporting social interactions and facilitating informal ways of organizing. For example, a significant part of sociality is nowadays enjoyed through social media, and people with common interests often assemble and coordinate group action through different ICT platforms (e.g. social networking sites, community websites). People organizing informally to further common interests or to collaborate on communal goals is not something unusual or even new. In fact, that is the essence of collective action – understood as coordinated action undertaken by individuals who have a shared interest in the provision of common goods, that is, goods that yield collective benefits to all members of a community irrespective of their individual contributions. Collective action is a phenomenon that has drawn scholarship from various scientific areas, namely economics, political science, sociology, and, more recently, communication studies. Although the theoretical underpinnings of collective action are well established, the implications of the contemporary technological mediated context for the organizing of collective action are not well understood. In order to narrow this knowledge gap, this thesis examines the entwinement of ICTs with collective action organizing. Through the study of two cases of civic movements that organized consensual collective action, this research explains how this kind of organizing is facilitated and hindered by the use of ICTs. The results of this thesis unveil seven dimensions of collective action closely entwined with the use of ICTs and extricate the constraining and facilitating role of ICTs within each of these dimensions. This research also underscores the agency of organizers of collective action and the instrumental role of ICTs, which worked as an amplifier of human forces and intents. These findings constitute an improved understanding of ICTs’ role in the process of organizing online for societal change and thus contribute to the literature about the information society and societal impacts of ICTs

Fenotipagem do DNA e pigmentação induzida por drogas: uma abordagem teórica

A variação genética humana tem um alto poder discriminativo; portanto, a previsão de fenótipos através do genótipo tem sido um tópico de crescente interesse para estudo, existindo expectativa do seu uso na medicina personalizada e na área da genética forense, sendo esta última de maior interesse na previsão de características visíveis externamente. Uma das áreas de variação genética humana com mais variantes é a pigmentação, e pela sua natureza multifatorial é de grande interesse estudar o efeito de medicamentos sobre essa característica, ainda mais considerando que medicamentos já identificados como relacionados com a pigmentação induzida, estão presentes no ambiente e, por esse motivo, somos expostos a eles, mesmo sem conhecimento. A influência de drogas na pigmentação é uma área com quase nenhum estudo, sendo apenas mencionada mas não explorada muito além, principalmente porque aqueles estudos que se concentram nos efeitos das drogas nos organismos normalmente estão mais relacionados a patologias, sendo a pigmentação uma característica descartada facilmenteHuman genetic variation has a high discriminatory power, so the prediction of phenotypes through genotype has been a topic of growing interest for study, and there is anticipation for its use in personalized medicine and in the area of forensic genetics, the latter having a greater interest in predicting externally visible traits. One of the areas of human genetic variation with more variants is the pigmentation, and for its multifactorial nature is of great interest to study the effect of pharmaceutical drugs on this characteristic, even more considering that drugs that have already been identified as related to induced pigmentation, are present in the environment and for that reason we are exposed to them even without knowledge. Drug influence in pigmentation is an area with almost no studies, having only a few that mention pigmentation but do not explore this any further mainly because the ones who focus on drugs effects on organisms normally are more related to pathologies being the pigmentation a characteristic that is easily discardedMestrado em Biologia Aplicad

Validation of the method microwave assisted extraction to total fat extraction in fish

Os ácidos gordos podem ser encontrados numa ampla gama de moléculas com diversas propriedades químicas e físicas. A análise destes é essencial para a rotulagem nutricional, auxiliando na compreensão da diversidade de ácidos gordos presentes em diversos produtos alimentares, o que torna a sua extração um desafio. Este trabalho, em parceria com a AEMITEQ, teve como principal objetivo a validação do método de extração assistida por micro-ondas (MAE) para avaliação da gordura total na matriz peixe, garantindo as condições de otimização. Outro objetivo deste trabalho foi a comparação entre métodos. Esta foi feita entre o método MAE e o método de Soxhlet, utilizado pelo Instituto Português do Mar e da Atmosfera (IPMA), de modo a perceber qual o mais vantajoso. Para a realização deste trabalho foi utilizado o equipamento ETHOS X, da Milestone. Este equipamento permite a utilização de 12 vasos em simultâneo, permitindo aumentar o desempenho de extração e sendo assim uma grande vantagem do método quando comparado com outros. Para a extração da gordura total são utilizados dois solventes: ácido sulfúrico (10 mL) que origina a hidrólise, e ciclohexano (25 mL), que forma duas fases distintas. O tempo de extração é de cerca 90 minutos, no qual se segue 20 minutos de evaporação da fase orgânica para obter a gordura total. Para a validação do método, os parâmetros estudados foram o limite de quantificação e deteção, padrões de controlo, duplicados e replicados de amostra, testes de recuperação, e finalmente, materiais de referência. Para validar o método foram calculadas a incerteza expandida (), a precisão e a veracidade. O valor de foi calculado de quatro maneiras para diferentes gamas de trabalho: 0,1-1 g/100g, 1-5 g/100g, 5-10 g/100g e >10 g/100g. A partir de padrões de controlo + duplicados + material de referência obtiveram-se os seguintes valores de : 20%, 22%, 15% e 12%, respetivamente. Tendo em conta padrões de controlo + duplicados + testes de recuperação obtiveram-se valores de 29%, 30%, 25% e 24% para cada gama de trabalho. Para o cálculo da por amostras, as gamas de trabalho estudadas foram apenas de: 1-5 g/100g, 5-10 g/100g e >10 g/100g. Os valores obtidos a partir de amostras + material de referência foram de 20%, 11% e 12%, e para amostras + testes de recuperação obteve-se 28%, 23% e 24%, respetivamente. Com isto, o valor de escolhido foi 22% obtido pelos padrões de controlo + material de referência, uma vez que é o menor valor que abrange todas as gamas de trabalho estudadas. iv Com o estudo realizado, pode-se confirmar que o método é bastante vantajoso quando comparado com o Soxhlet, uma vez que apresenta um menor tempo de extração, a quantidade de solvente a utilizar é inferior, e ainda, é possível analisar 12 amostras ao mesmo tempo. Conclui-se também que o método foi validado com sucesso, podendo ainda haver espaço para melhorias