Enquistación in vitro de Giardia lamblia: análisis por electroforesis bidimensional de proteínas expresadas diferencialmente.

The reconstruction of Giardia lamblia life cycle in vitro is an excellent tool for the study of the parasite's molecular biology. The present work describes techniques developed that better define parasite differentiation. An encystation protocol is presented along with a method for isolation and purification of the produced cysts. The cyst morphology at the light microscopy level is identical to that of in vivo cysts. A two-dimension protein map obtained by high-resolution electrophoresis indicated that most of the parasite's proteins are acid. Based on this result, the two dimension gel electrophoresis used a pH 4-7 gradient in the first, isoelectric focusing dimension. Differences in protein expression during the stages of encystation were clearly discerned, as well as images of the parasite obtained by light and by transmission electron microscopy that describe the morphological and the ultrastructural changes that occur as the cysts are produced in vitro.La reconstrucción in vitro del ciclo de vida de Giardia lamblia es un excelente instrumento para el estudio de la biología molecular del parásito. El presente trabajo pretende contribuir al desarrollo de algunas técnicas por las cuales se puede definir mejor un modelo de diferenciación celular del parásito. El estudio presenta un protocolo de enquistación in vitro y establece un método para el aislamiento y la purificación de los quistes producidos, cuyas características morfológicas, por microscopía de luz, coinciden con las de los quistes obtenidos in vivo. Se estudió el mapa de las proteínas de G. lamblia por medio de electroforesis bidimensional de alta resolución y de electroforesis en una dimensión. Estos estudios mostraron que la mayoría de las proteínas del parásito son de carácter ácido. Se amplió, con base en ese resultado, la resolución de la región ácida por medio de un isoelectroenfoque de pH 4-7 en la primera dimensión. Se encontraron diferencias en la expresión de las proteínas durante el proceso de enquistación. Se obtuvieron, además, imágenes por microscopía de luz y electrónica de transmisión que permitieron observar morfológica y ultraestructuralmente las células producidas durante el proceso de la enquistación

Matrices de inclusión para obtención de cortes de tejidos en vibrátomo en estudios citoquímicos

The use of an inert supporting matrix is necessary in order to obtain 50 pm vibratome tissue slices for cytochemistry studies when using small tissue samples. Five matrices were assayed: granulate agar, purified agar, agar-agar, agarose and gelatine at different concentrations. The best results were obtained with agar-agar and agarose which both gave good tissue stability, providing an easy handling of samples and resulting in more homogeneous texture. These requirements are important if good slices are to be obtained which will be useful for cytochemistry, immunocytochemistry and histochemical tracing studies.Para estudios citoquímicos en diferentes muestras de tejidos, de tamaños pequeños, se hace necesaria la utilización de una matriz inerte que genere soporte y estabilidad al tejido en el momento de obtener cortes de 50 pm en vibrátomo. Por esta razón se ensayaron cinco matrices: agar granulado, agar purificado, agar-agar, agarosa y gelatina, a diferentes concentraciones.Tanto con el agar-agar como con la agarosa se obtuvieron los mejores resultados, puesto que estos ofrecen mayor estabilidad al tejido, fluyen fácilmente al servirse y su textura es muy homogénea, requisitos necesarios para la obtención de cortes precisos, utilizables en citoquímica, inmunocitoquímica y trazados histoquímicos

Virus de la influenza

El virus de la influenza es un importante agente patógeno humano que causa infecciones respira-torias y una considerable morbimortalidad anual a nivel mundial. El virus puede circular esporádicamente durante brotes locales como parte de una epidemia estacional o puede generar una pandemia mundial

Clasificación de Plasmodium Falciparum por estadio en cultivos sincrónicos de eritrocitos

La malaria es considerada como un problema de salud mundial, que afecta principalmente a países en vía de desarrollo. El objetivo de este trabajo consiste en evaluar técnicas de minería de datos param clasificar automáticamente eritrocitos infectados con Plasmodium falciparumen cultivos sincrónicos de eritrocitos. Se evaluaron imágenes de eritrocitos con parásitos de 14, 28, 40 y 48 horas y como controles se consideraron eritrocitos no infectados, los modelos de clasificación empleados corresponden a Naive Bayes (NB), árbol de decisión con el algoritmo J48 y red neuronal Multilayer Perceptron (RN). Encontrando el mejor desempeño con árbol de decisión

La coloración de Ziehl-Neelsen en histopatología

El diagnóstico definitivo de las enfermedades infecciosas causadas por micobacterias se basa en la demostración de su agente etiológico. Esto se consigue, entre otras formas, por histopatología, mediante la tinción de los bacilos ácido alcohol resistentes (BAAR) en los tejidos obtenidos in vivo o en la autopsia

Detección de antígenos del virus del dengue en tejidos post mórtem

The epidemiological situation of dengue has worsened over the last decade. The difficulties in preventing its transmission and the absence of a vaccine or specific treatment have made dengue a serious risk to public health, health centers and research systems at different levels. Currently, most studies on the pathogenesis of dengue infection focus on the T-cell immune response almost exclusively in secondary infections and are aimed at identifying the mechanisms involved in the development of vascular permeability and bleeding events that accompany the infection.This report describes the case of a baby girl less than 45 days of age with clinical signs of severe dengue, whose diagnosis was confirmed by reverse transcription polymerase chain reaction in post-mortem tissue samples and by the ancillary diagnostic use of immunohistochemistry, which detected viral antigens in all organs obtained at autopsy.This case highlights the importance of studying primary infections associated with severe dengue, particularly in children, who are more likely to develop the severe form of the disease without previous infection, and it further stresses the importance of a diagnosis that should not be based solely on the examination of liver tissue samples when studying the pathogenesis of the viral infection.El panorama epidemiológico del dengue ha empeorado durante la última década. Las dificultades para prevenir su transmisión, así como la ausencia de una vacuna o tratamiento específico, lo convierten en un riesgo que desafía las medidas de salud pública y desborda la capacidad de los centros de salud y los sistemas de investigación a muchos niveles. Actualmente, la mayoría de los estudios sobre la patogenia de la infección centran su atención en la respuesta inmunitaria de las células T casi exclusivamente en infecciones secundarias y están dirigidos a identificar los mecanismos implicados en el desarrollo de la permeabilidad vascular y de los eventos hemorrágicos que lo acompañan.En este reporte se describe el caso de una menor de 45 días de edad con signos clínicos de dengue grave, cuyo diagnóstico se confirmó por reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa en muestras de tejido post mórtem y por herramientas de apoyo diagnóstico de inmunohistoquímica, las cuales detectaron antígenos virales en todos los órganos obtenidos en la necropsia. Este caso subraya la importancia del estudio de las infecciones primarias asociadas a dengue grave, particularmente en niños, en quienes es más probable el desarrollo de la forma grave de la enfermedad sin una infección previa, y, además, pone de relieve la importancia de un diagnóstico que no se limite a las muestras de tejido hepático en el estudio de la patogenia de la infección viral.

Alteraciones morfológicas en pulmón por la influenza A H1N1/v09 en autopsias, Colombia, 2009

Introduction. Influenza is an acute respiratory infection that may be seasonal or pandemic. In 2009 The World Health Organization (WHO) declared an influenza pandemia; 3,876 cases and 239 deaths were reported in Colombia.Objective. The morphological changes in lung tissues associated with virus infection H1N1/v09 were described from autopsied victims.Materials and methods. Seventy-five cases were diagnosed by RT-PCR for influenza A H1N1/v09, of which the lungs of 20 were selected for morphological study by light microscopy, optical microscopy, high-resolution transmission electron microscopy and immunohistochemistry.Results. Of the 75 cases, 83% had viral pneumonitis and 17% alveolitis. Complications included intra-alveolar hemorrhage (66%), edema (89%), diffuse alveolar damage (2%), and bacterial co-infection (32%). Morphological changes were as follows: destruction of the alveolar epithelium and interstitium, edema, macrophages with vacuolated cytoplasm,and infiltration of polymorphonuclear leukocytes in the alveolar lumen and interstitium, vacuolization cytoplasmic type I pneumocytes and electron-dense bodies in cellular debris in the alveolar lumen, and immunoreactivity of viral antigens in bronchiolar epithelial cells and alveolar infiltrate.Conclusion. The low percentage of bacterial co-infection observed in these cases was a prominent feature, and suggested that the fatal result was probably not associated with secondary bacterial disease (Indicated by previous reports). The tissue lesions were attributed to tissue damage due to viral lesion, as well as the cellular and humoral inflammatory response associated with infiltration by polymorphonucleocytes and macrophages in the interstitium and alveolar lumen.Introducción. La influenza es una infección respiratoria aguda que se presenta de forma estacional y pandémica. En el 2009, la Organización Mundial de Salud (OMS) declaró una pandemia por influenza de tipo A en la que se reportaron en Colombia 3.876 casos de infección, de los cuales 239 fallecieron.Objetivo. Describir los cambios morfológicos asociados a la infección por el virus A H1N1/v09 en tejido pulmonar de autopsias de la pandemia de 2009 en Colombia.Materiales y métodos. Se estudiaron 75 casos con diagnóstico por RT-PCR para el virus A H1N1/v09, de los cuales, 20 fueron seleccionados para el estudio morfológico mediante microscopía convencional de luz, microscopía óptica de alta resolución y electrónica de transmisión e inmunohistoquímica.Resultados. De los 75 casos estudiados, 83 % presentaron pneumonitis viral y 17 % alveolitis. Se observaron complicaciones por hemorragia intraalveolar (66 %) y edema (89 %), daño alveolar difuso (2 %) e infección bacteriana concomitante (32 %).Algunos de los cambios morfológicos observados fueron: destrucción del epitelio alveolary el instersticio, edema, macrófagos con citoplasma vacuolado e infiltración de leucocitos polimorfonucleares en la luz alveolar y el intersticio; vacuolización citoplásmica en neumocitos de tipo I y cuerpos electrodensos en restos celulares en la luz alveolar; inmunorreacción de antígenos virales en el epitelio bronquiolar y en células del infiltrado alveolar.Conclusión. El porcentaje bajo de infección bacteriana concomitante observado en los casos de influenza A H1N1/ v09 en este estudio, es una característica sobresaliente que sugiere que el resultado fatal de la infección, probablemente no esté asociado a una enfermedad bacteriana secundaria, como se ha sugerido en reportes previos. Es probable que las lesiones observadas se puedan atribuir al daño tisular en la respuesta inflamatoria celular y humoral asociada a la infiltración por células poliformonucleares y macrófagos en el intersticio y la luz alveolares, como también por la lesión viral

Nuclei ultrastructural changes of C6/36 cells infected with virus dengue type 2

Introduction: Dengue virus replication has been considered mainly cytoplasmic, however, studies indicate that some flaviviruses may use the intranuclear pathway as part of the machinery that the virus uses to increase infection capacity in the host cell. This paper describes alterations at nuclear level in the cell infected with dengue, which are likely involved in the virus replication processes. Objective: This paper addresses the ultrastructural observations of C6/36 cells of the Aedes albopictus mosquito infected with dengue virus type 2. Materials and methods: C6/36 cells were infected in culture medium with the serum of a patient positively diagnosed for dengue 2. Subsequently, the cells were incubated for 10 days and the cytopathic effect was assessed. The cells were processed for immunofluorescence assays and transmission electron microscopy. Results: The immunofluorescence assays confirmed the presence of viral protein E associated with cellular syncytia in the culture. In the ultrastructural study, the infected cells showed vesicular-tubular structures and dilated cisterns of the endoplasmic reticulum at the cytoplasmic level. Viral particles were found exclusively in cytoplasm localized within the vacuoles. Nuclei of cellular syncytia showed membrane structures arranged in a circular shape and, in some cases, these syncytia displayed lysis; in no case viral particles were observed at the nuclear level. Conclusions: The ultrastructural alterations of nuclei in cells infected with the dengue virus using electron microscopy techniques had not been reported before, as far as we know. It is likely that such modifications are associated with replicative processes at an intranuclear level as an alternate replication mechanism

Clinical rating scale for pantothenate kinase-associated neurodegeneration: A pilot study

Pantothenate kinase-associated neurodegeneration is a progressive neurological disorder occurring in both childhood and adulthood. The objective of this study was to design and pilot-test a disease-specific clinical rating scale for the assessment of patients with pantothenate kinase-associated neurodegeneration.info:eu-repo/semantics/publishedVersio