Targeting of β-Arrestin2 to the Centrosome and Primary Cilium: Role in Cell Proliferation Control

International audienceBackground: The primary cilium is a sensory organelle generated from the centrosome in quiescent cells and found at the surface of most cell types, from where it controls important physiological processes. Specific sets of membrane proteins involved in sensing the extracellular milieu are concentrated within cilia, including G protein coupled receptors (GPCRs). Most GPCRs are regulated by b-arrestins, barr1 and barr2, which control both their signalling and endocytosis, suggesting that barrs may also function at primary cilium.Methodology/Principal Findings: In cycling cells, βarr2 was observed at the centrosome, at the proximal region of the centrioles, in a microtubule independent manner. However, βarr2 did not appear to be involved in classical centrosome-associated functions. In quiescent cells, both in vitro and in vivo, βarr2 was found at the basal body and axoneme of primary cilia. Interestingly, βarr2 was found to interact and colocalize with 14-3-3 proteins and Kif3A, two proteins known to be involved in ciliogenesis and intraciliary transport. In addition, as suggested for other centrosome or cilia-associated proteins, βarrs appear to control cell cycle progression. Indeed, cells lacking βarr2 were unable to properly respond to serum starvation and formed less primary cilia in these conditions.Conclusions/Significance: Our results show that βarr2 is localized to the centrosome in cycling cells and to the primary cilium in quiescent cells, a feature shared with other proteins known to be involved in ciliogenesis or primary cilium function. Within cilia, βarr2 may participate in the signaling of cilia-associated GPCRs and, therefore, in the sensory functions of this cell “antenna”

Study of Human RIG-I Polymorphisms Identifies Two Variants with an Opposite Impact on the Antiviral Immune Response

International audienceBACKGROUND: RIG-I is a pivotal receptor that detects numerous RNA and DNA viruses. Thus, its defectiveness may strongly impair the host antiviral immunity. Remarkably, very little information is available on RIG-I single-nucleotide polymorphisms (SNPs) presenting a functional impact on the host response. METHODOLOGY/PRINCIPAL FINDINGS: Here, we studied all non-synonymous SNPs of RIG-I using biochemical and structural modeling approaches. We identified two important variants: (i) a frameshift mutation (P(229)fs) that generates a truncated, constitutively active receptor and (ii) a serine to isoleucine mutation (S(183)I), which drastically inhibits antiviral signaling and exerts a down-regulatory effect, due to unintended stable complexes of RIG-I with itself and with MAVS, a key downstream adapter protein. CONCLUSIONS/SIGNIFICANCE: Hence, this study characterized P(229)fs and S(183)I SNPs as major functional RIG-I variants and potential genetic determinants of viral susceptibility. This work also demonstrated that serine 183 is a residue that critically regulates RIG-I-induced antiviral signaling

Vancomycin-induced Henoch-Schönlein purpura: a case report

<p>Abstract</p> <p>Introduction</p> <p>Henoch-Schönlein purpura is a small-vessel systemic vasculitis. Although its exact pathophysiology remains unknown, Henoch-Schönlein purpura has been reported in association with various medical conditions including hypersensitivity. We report the case of a patient with vancomycin-induced Henoch-Schönlein purpura.</p> <p>Case presentation</p> <p>A 42-year-old Caucasian man who had previously undergone a heart transplant was diagnosed as having an intra-abdominal abscess after he underwent a Hartmann procedure. At 15 days after initiation of antibiotic therapy including vancomycin, he developed a purpuric rash of the lower limbs, arthralgia, and macroscopic hematuria. At that time, our patient was already on hemodialysis for end-stage renal disease. Henoch-Schönlein purpura was diagnosed. After a second 15-day course of vancomycin, a second flare of Henoch-Schönlein purpura occurred. Skin biopsies showed leucocytoclastic vasculitis with IgA deposits and eosinophils in the peri-capillary inflammatory infiltrate, suggesting an allergic mechanism. After vancomycin was stopped, we did not observe any further flares. Only five cases of isolated cutaneous vasculitis, one case of lupus-like syndrome and one case of Henoch-Schönlein purpura after vancomycin treatment have been described to date in the literature.</p> <p>Conclusions</p> <p>Clinicians should be aware that systemic vasculitis can be induced by some treatments. Vancomycin is a widely prescribed antibiotic. Occurrence of rare but serious Henoch-Schönlein purpura associated with vancomycin requires its prompt discontinuation.</p

Role of the AP2 β-Appendage Hub in Recruiting Partners for Clathrin-Coated Vesicle Assembly

Adaptor protein complex 2 α and β-appendage domains act as hubs for the assembly of accessory protein networks involved in clathrin-coated vesicle formation. We identify a large repertoire of β-appendage interactors by mass spectrometry. These interact with two distinct ligand interaction sites on the β-appendage (the “top” and “side” sites) that bind motifs distinct from those previously identified on the α-appendage. We solved the structure of the β-appendage with a peptide from the accessory protein Eps15 bound to the side site and with a peptide from the accessory cargo adaptor β-arrestin bound to the top site. We show that accessory proteins can bind simultaneously to multiple appendages, allowing these to cooperate in enhancing ligand avidities that appear to be irreversible in vitro. We now propose that clathrin, which interacts with the β-appendage, achieves ligand displacement in vivo by self-polymerisation as the coated pit matures. This changes the interaction environment from liquid-phase, affinity-driven interactions, to interactions driven by solid-phase stability (“matricity”). Accessory proteins that interact solely with the appendages are thereby displaced to areas of the coated pit where clathrin has not yet polymerised. However, proteins such as β-arrestin (non-visual arrestin) and autosomal recessive hypercholesterolemia protein, which have direct clathrin interactions, will remain in the coated pits with their interacting receptors

D'autiste à adolescente, le parcours de Laïs

International audienc

Caractérisation des éléments cellulaires des sécrétions lactées transférables de la mère à la progéniture chez la vache, la chèvre et la truie

National audienceLa construction des phénotypes des animaux de rente pendant les premières phases de la vie post-natale est une étape cruciale pour une expression optimale de leur phénotype au stade adulte (multiperformance agronomique). La récente mise en évidence de cellules souches et progénitrices, et de vésicules extracellulaires (VEs), dans le lait de plusieurs espèces (humaine et murine) pose la question du contenu et du devenir de ces éléments cellulaires chez la progéniture, de leurs rôles dans le développement des tissus (participation directe, régulation) et impacts sur la santé tout au long de la vie (robustesse, bien-être). Ce projet, cofinancé par les départements PHASE et GA, participe à la compréhension des mécanismes d’élaboration des phénotypes des animaux de rente en identifiant les éléments cellulaires (cellules totales, cellules souches et VEs) dans les sécrétions lactées (colostrum et lait) de truies, vaches et chèvres laitières. L'apport de ces éléments à la progéniture pouvant avoir un rôle physiologique au début de la vie post-natale, notre protocole expérimental intègre une analyse cinétique grâce à un échantillonnage de «lait» dans les premières heures (0, 3, 6, jusqu’à 24h) après la mise-bas (colostrum), puis au cours des premiers jours de la lactation (jusqu’à 7 jours pour chèvres et vaches, 18 jours pour les truies), sur 6 femelles multipares (IE production laitière et UE3P). Les cellules des sécrétions lactées ont été analysées en cytométrie en flux en utilisant des marqueurs moléculaires spécifiques de typage (combinaison d’anticorps dirigés contre des protéines de surface) ciblant les cellules souches mammaires, les cellules souches mésenchymateuses et les cellules souches hématopoïétiques. Les premiers résultats montrent que, chez la vache et la chèvre, des cellules viables se retrouvent en nombre dans le colostrum dès la mise-bas. Elles diminuent progressivement pendant les 12 heures qui suivent, puis régulièrement tout au long de la semaine de suivi cinétique. Chez la truie, en revanche, le nombre de cellules viables est maximal un jour après la mise-bas. Pour les trois espèces, l’analyse en cytométrie montre que les cellules souches mammaires (0,5% à 1,5% des cellules viables selon l’espèce) sont retrouvées principalement dans le colostrum des premières heures après la mise-bas, devenant quasi inexistantes les jours d'après (< 0,2%). Fait intéressant, une population cellulaire exprimant CD24, une protéine exprimée par certaines cellules souches hématopoïétiques et les lymphocytes B, est fortement présente chez les trois espèces pendant les six premières heures, puis évolue à la baisse au cours de la lactation. Cette population cellulaire mérite une caractérisation plus poussée. A ce jour, le retraitement a posteriori des données de cytométrie des cellules souches mésenchymateuses et hématopoïétiques se poursuit. Cela nous permettra de compléter notre connaissance des différents types de cellules évoluant dans les sécrétions lactées au cours des premiers jours de lactation. Concernant les VEs, nous avons développé la purification par ultracentrifugation différentielle et par chromatographie à exclusion de taille des petites et grandes VEs ainsi que leur analyse physico-chimique par « nanoparticle tracking analysis » et western blot. Chez le bovin, les VEs sont retrouvées dans le lait par centaines de milliard par millilitre de lait écrémé. Cette abondance sera évaluée dans les différentes espèces au cours des phases de lactation et la proportion des sous-classes de VEs sera déterminée suite à leur purification par immunocapture (criblage d’anticorps en cours). En conclusion, le dépouillement partiel des analyses cytométriques et des VEs met notamment en évidence l'existence de cellules souches mammaires dans les sécrétions lactées et suggère la présence de populations cellulaires et vésiculaires spécifiques, potentiellement avantageuses sur le plan physiologique, au(x) premier(s) jour(s) de lactation. Chez les ruminants, nos résultats pourraient venir appuyer des pratiques d’élevage permettant d’améliorer le bien-être et la santé des petits, et la robustesse des animaux adultes. Pour l’espèce porcine, nos résultats pourraient confirmer la nécessité pour les porcelets de consommer le colostrum de leur mère biologique. Enfin, la poursuite de la comparaison des 3 espèces sera déterminante pour établir si ce phénomène de transfert cellulaire et vésiculaire est générique ou spécifique à l’espèce

Caractérisation des éléments cellulaires des sécrétions lactées transférables de la mère à la progéniture chez la vache, la chèvre et la truie

National audienceLa construction des phénotypes des animaux de rente pendant les premières phases de la vie post-natale est une étape cruciale pour une expression optimale de leur phénotype au stade adulte (multiperformance agronomique). La récente mise en évidence de cellules souches et progénitrices, et de vésicules extracellulaires (VEs), dans le lait de plusieurs espèces (humaine et murine) pose la question du contenu et du devenir de ces éléments cellulaires chez la progéniture, de leurs rôles dans le développement des tissus (participation directe, régulation) et impacts sur la santé tout au long de la vie (robustesse, bien-être). Ce projet, cofinancé par les départements PHASE et GA, participe à la compréhension des mécanismes d’élaboration des phénotypes des animaux de rente en identifiant les éléments cellulaires (cellules totales, cellules souches et VEs) dans les sécrétions lactées (colostrum et lait) de truies, vaches et chèvres laitières. L'apport de ces éléments à la progéniture pouvant avoir un rôle physiologique au début de la vie post-natale, notre protocole expérimental intègre une analyse cinétique grâce à un échantillonnage de «lait» dans les premières heures (0, 3, 6, jusqu’à 24h) après la mise-bas (colostrum), puis au cours des premiers jours de la lactation (jusqu’à 7 jours pour chèvres et vaches, 18 jours pour les truies), sur 6 femelles multipares (IE production laitière et UE3P). Les cellules des sécrétions lactées ont été analysées en cytométrie en flux en utilisant des marqueurs moléculaires spécifiques de typage (combinaison d’anticorps dirigés contre des protéines de surface) ciblant les cellules souches mammaires, les cellules souches mésenchymateuses et les cellules souches hématopoïétiques. Les premiers résultats montrent que, chez la vache et la chèvre, des cellules viables se retrouvent en nombre dans le colostrum dès la mise-bas. Elles diminuent progressivement pendant les 12 heures qui suivent, puis régulièrement tout au long de la semaine de suivi cinétique. Chez la truie, en revanche, le nombre de cellules viables est maximal un jour après la mise-bas. Pour les trois espèces, l’analyse en cytométrie montre que les cellules souches mammaires (0,5% à 1,5% des cellules viables selon l’espèce) sont retrouvées principalement dans le colostrum des premières heures après la mise-bas, devenant quasi inexistantes les jours d'après (< 0,2%). Fait intéressant, une population cellulaire exprimant CD24, une protéine exprimée par certaines cellules souches hématopoïétiques et les lymphocytes B, est fortement présente chez les trois espèces pendant les six premières heures, puis évolue à la baisse au cours de la lactation. Cette population cellulaire mérite une caractérisation plus poussée. A ce jour, le retraitement a posteriori des données de cytométrie des cellules souches mésenchymateuses et hématopoïétiques se poursuit. Cela nous permettra de compléter notre connaissance des différents types de cellules évoluant dans les sécrétions lactées au cours des premiers jours de lactation. Concernant les VEs, nous avons développé la purification par ultracentrifugation différentielle et par chromatographie à exclusion de taille des petites et grandes VEs ainsi que leur analyse physico-chimique par « nanoparticle tracking analysis » et western blot. Chez le bovin, les VEs sont retrouvées dans le lait par centaines de milliard par millilitre de lait écrémé. Cette abondance sera évaluée dans les différentes espèces au cours des phases de lactation et la proportion des sous-classes de VEs sera déterminée suite à leur purification par immunocapture (criblage d’anticorps en cours). En conclusion, le dépouillement partiel des analyses cytométriques et des VEs met notamment en évidence l'existence de cellules souches mammaires dans les sécrétions lactées et suggère la présence de populations cellulaires et vésiculaires spécifiques, potentiellement avantageuses sur le plan physiologique, au(x) premier(s) jour(s) de lactation. Chez les ruminants, nos résultats pourraient venir appuyer des pratiques d’élevage permettant d’améliorer le bien-être et la santé des petits, et la robustesse des animaux adultes. Pour l’espèce porcine, nos résultats pourraient confirmer la nécessité pour les porcelets de consommer le colostrum de leur mère biologique. Enfin, la poursuite de la comparaison des 3 espèces sera déterminante pour établir si ce phénomène de transfert cellulaire et vésiculaire est générique ou spécifique à l’espèce

Contact-dependent transfer of TiO₂ nanoparticles between mammalian cells

<p>Cellular organelles have been shown to shuttle between cells in co-culture. We hereby show that titanium dioxide (TiO₂) nanoparticles (NPs) can be transferred in such a manner, between cells in direct contact, along with endosomes and lysosomes. A co-culture system was employed for this purpose and the NP transfer was observed in mammalian cells including normal rat kidney (NRK) and HeLa cells. We found that the small GTPase Arf6 facilitates the intercellular transfer of smaller NPs and agglomerates. Spherical, anatase nano-TiO₂ with sizes of 5 (Ti5) and 40 nm (Ti40) were used in this study. Humans are increasingly exposed to TiO₂ NPs from external sources such as constituents of foods, cosmetics, and pharmaceuticals, or from internal sources represented by Ti-based implants, which release NPs upon abrasion. Exposure to 5 mg/l of Ti5 and Ti40 for 24 h did not affect cellular viability but modified their ability to communicate with surrounding cells. Altogether, our results have important implications for the design of nanomedicines, drug delivery and toxicity.</p

Impact of reference panel composition on scores of script concordance test assessing basic nephrology knowledge in undergraduate medical education

International audiencePurposeIn the assessment of basic medical knowledge, the composition of the reference panel between specialists and primary care (PC) physicians is a contentious issue. We assessed the effect of panel composition on the scores of undergraduate medical students in a script concordance test (SCT).MethodsThe scale of an SCT on basic nephrology knowledge was set by a panel of nephrologists or a mixed panel of nephrologists and PC physicians. The results of the SCTs were compared with ANOVA for repeated measurements. Concordance was assessed with Bland and Altman plots.ResultsForty-five students completed the SCT. Their scores differed according to panel composition: 65.6 & PLUSMN; 9.73/100 points for nephrologists, and 70.27 & PLUSMN; 8.82 for the mixed panel, p < 0.001. Concordance between the scores was low with a bias of -4.27 & PLUSMN; 2.19 and a 95% limit of agreement of -8.96 to -0.38. Panel composition led to a change in the ranking of 71% of students (mean 3.6 & PLUSMN; 2.6 places).ConclusionThe composition of the reference panel, either specialist or mixed, for SCT assessment of basic knowledge has an impact on test results and student rankings.Practice pointsThe composition of the reference panel, either specialist or mixed (specialist and primary care (PC) physicians) for SCT assessment of basic knowledge has an impact on test results and student rankings.The choice of the reference panel to assess basic knowledge should be discussed according to educational objectives before testing