SISTEMAS DE RESPONSABILIDADE CIVIL DOS PROVEDORES DE APLICAÇÕES DA INTERNET POR ATO DE TERCEIROS: BRASIL, UNIÃO EUROPEIA E ESTADOS UNIDOS DA AMÉRICA

This paper analyzes the confluence between the Civil Liability Systems of Internet application providers by third parties in Brazil, the European Union and the United States of America. The study analyzes in comparative perspective the Civil Internet Framework, the European Directive and the Decency Millenium Copyright Act. The methodology is based on the analytical technique, in which the formalistic aspects of the systematization of legal rules and norms are evaluated, focusing on the juridical order and their internal relations, added to the interpretive hermeneutic approach. It was concluded that the law did not comply with the strict liability rule and, on the other hand, the providers base their defense on the application of subsidiary responsibility in the exercise of freedom of expression. In addition, they also claim that they can not and should not do surveillance and check all the movements of its users, which in addition to being impossible, could be regarded as a censorship.El presente artículo analiza la confluencia entre los Sistemas de Responsabilidad Civil de los proveedores de aplicaciones de Internet por parte de terceros en Brasil, la Unión Europea y los Estados Unidos de América. El artículo analiza en perspectiva comparada el Marco Civil de Internet, la Directiva Europea (E-commerce Directive) y la Ley Americana (Decencia Millenium Copyright Act - DMCA). La metodología del artículo se fundamenta en la técnica analítica, en la cual se evalúan los aspectos formalistas de la sistematización de las reglas y normas jurídicas, con foco en el ordenamiento jurídico y sus relaciones internas, sumado al enfoque hermenéutico interpretativo. Concluye que el Marco Civil de Internet no acató la regla de la responsabilidad objetiva y, por otro lado, los proveedores fundamentan su defensa en la aplicación de la responsabilidad subsidiaria, en el ejercicio de la libertad de expresión. Además, alegan también que no pueden y no deben hacer vigilancia y verificar todos los movimientos de sus usuarios, lo que además de ser imposible, podría ser considerado como censura.O presente artigo analisa a confluência entre os Sistemas de Responsabilidade Civil dos provedores de aplicações da internet por ato de terceiros no Brasil, União Europeia e Estados Unidos da América. O artigo analisa em perspectiva comparada o Marco Civil da Internet, a Diretiva Europeia (E-commerce Directive) e a Lei Americana (Decency Millenium Copyright Act – DMCA). A metodologia fundamenta-se na técnica analítica, na qual são avaliados os aspectos formalistas da sistematização das regras e normas jurídicas, com foco no ordenamento jurídico e suas relações internas, somado ao enfoque hermenêutico interpretativo. Concluiu-se que o Marco Civil da Internet não acatou a regra da responsabilidade objetiva e, por outro lado, os provedores fundamentam sua defesa na aplicação da responsabilidade subsidiária, no exercício da liberdade de expressão. Além disso, alegam também que não podem e não devem fazer vigilância e verificar todas as movimentações dos seus usuários, o que além de ser impossível, poderia ser encarado como censura

No deleterious effect of low dose methotrexate on titanium implant osseointegration in a rabbit model

OBJECTIVE: To evaluate the effect of low dose methotrexate alone or in combination with glucocorticoid treatment on titanium implant osseointegration. METHODS: Groups of 6-8 adult New Zealand White rabbits were treated for 18 weeks with saline (control), methotrexate, glucocorticoid, or methotrexate plus glucocorticoid. The animals received a titanium implant in the tibia at week 6. Lumbar spine and tibia bone mineral densities were analyzed before and after treatment. Histomorphometric analysis of bone cortical thickness, total bone area around the implant, and % of bone to implant contact was performed. RESULTS: After 18 weeks, the change in the bone mineral density in the lumbar spines and tibias in the methotrexate group was comparable to the control group (0.035 vs. 0.055 g/cm² and 0.021 vs. 0.041 g/cm², respectively). In contrast, both the glucocorticoid group and glucocorticoid plus methotrexate group had significant reductions at both sites. Histomorphometric analysis of the tibia in the control and methotrexate groups revealed no significant changes in cortical thickness (133 vs. 126 μm), total bone area around the implant (33 vs. 30%), or bone to implant contact (40 vs. 38%). In contrast, glucocorticoid group had significant reductions compared to controls in tibia cortical thickness (99 vs. 133 μm), total bone area around the implant (24 vs. 33%), and bone to implant contact (27 vs. 40%). Similar reductions were observed in the glucocorticoid plus methotrexate group. CONCLUSIONS: Our results demonstrate that low dose methotrexate treatment does not affect titanium implant osseointegration, suggesting that this therapy is safe for surgical procedures requiring a titanium implant

Estudio del uso de tecnologías de la información y comunicación (TIC) y su influencia en la estructura y funcionamiento de las familias que residen en Colonia Nueva, barrio el Centro del municipio de San Lorenzo en el departamento de Ahuachapán durante el Año 2017

La presente investigación tiene como objetivo principal el estudio del uso de tecnologías de la información y comunicación (TIC) y su influencia en la estructura y funcionamiento de la familia, ya que a lo largo de la historia, esta ha tenido que adaptarse sin poder lograrlo satisfactoriamente y como consecuencia de ello, la homeostasis se ha visto alterada entre los diferentes cambios a los cuales ha tenido que enfrentar la familia en la última década se encuentran el surgimiento de las tecnologías de la información y comunicación conocidas como TIC, que se han convertido en una parte fundamental de la sociedad y la familia por ser la base de esta, también ha resultado influenciada ya que dichas tecnologías han transformado de forma significativa su funcionamiento y estructura volviéndose un verdadero reto para mantener el balance familiar debido al cambio en la comunicación de los miembros del sistema familiar, como resultado de ello las relaciones interpersonales y su dinámica se han visto modificados a tal punto de romper con los esquemas tradicionales utilizados para interactuar dentro de la familia. Debido a lo anterior se considera importante investigar como las familias de Colonia Nueva de San Lorenzo manejan el uso de las TIC y por ello es que se toma a bien el realizar una investigación que profundice al respecto, focalizándose en estos grupos. Ya que hasta la fecha este es un tema poco explorado. Y los resultados de esta investigación proporcionan una visión más clara sobre la influencia de las TIC en las familias investigadas

Cell-cycle and suppressor proteins expression in uterine cervix in HIV/HPV co-infection: comparative study by tissue micro-array (TMA)

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>The oncoproteins of human papillomavirus (HPVs) directly effect cell-cycle control. We hypothesize that regulatory and cell cycle protein expression might be additionally modified in the cervix of HIV/HPV co-infected women.</p> <p>Methods</p> <p>We analyzed the expression of Rb, p27, VEGF and Elf-1 transcriptor factor by immunohistochemistry in 163 paraffin-embeded cervical samples using Tissue Micro-Array (TMA) and correlated this to HIV-1 and HPV infection.</p> <p>Results</p> <p>HIV/HPV co-infection was associated with a significant increase in expression (p < 0.001) of VEGF and p27 in both low and high grade CIN when compared to the cervices of women infected by HPV alone. Decreased Rb expression was evident with increased CIN grade in the cervices of women infected with HPV alone (p = 0.003 average of cells/mm²in CIN I: 17.9, CIN II/III: 4.8, and tumor 3.9). Rb expression increased 3-fold for both low and high grade CIN with HPV/HIV-1 co-infection compared to HPV infection alone but did not reach statistical significance. There was a significant increase in Elf-1 expression in HPV+/HIV- women with CIN II/III and tumor (average of cells/mm²in CIN I: 63.8; CIN II/III: 115.7 and tumor: 112.0, p = 0.005), in comparison to controls.</p> <p>Conclusion</p> <p>Co-infection of HPV and HIV leads to significant increase in the VEGF and p27 expression when compared to HPV+/HIV-negative infection that could facilitate viral persistence and invasive tumor development.</p

Evaluation of MCM-2 Expression in TMA Cervical Specimens

Background:Minichromosome maintenance proteins (MCM) are highly expressed in actively replicating cells. The need for biological markers for cervical carcinoma and its precursor lesions is emerging. Our main aim was to determine the immunohistochemical expression of MCM-2 in HIV-positive and -negative dysplastic cervical specimens. Methods:Immunohistochemical analysis of MCM-2 was performed in a total of 352 cervical TMA specimens of normal control, low-grade CIN, high-grade CIN and invasive tumor. 38 specimens were from HIV-positive women. A receiver operating characteristic (ROC) curve was constructed to determine the best cutoff to diagnose high-grade CIN and invasive cervical cancer. Results:In the progression from normal epithelium to high-grade CIN and invasive tumor we found significant differences in the MCM-2 expression (p,0.05). Based on the ROC curve of 80% with an area under the curve (AUC) of 0.78, expression of MCM-2 to diagnose high-grade CIN and invasive tumor resulted in sensitivity of 81%, specificity of 66%, a positive predictive value (PPV) of 86% and a negative predictive value (NPV) of 57%. HIV-positive cervices revealed a decreasing expression of MCM-2 in both LGCIN and HGCIN compared with HIV-negative specimens (p,0.0001). Conclusions:The present study suggests that immunohistochemical MCM-2 may not be a promising biomarker for diagnosing high-grade CIN and invasive cance

Metabolismo como alvo terapêutica na leucemia mieloide aguda - Glicólise ou Fosforilação oxidativa

Dissertação de Mestrado em Investigação Biomédica apresentada à Faculdade de MedicinaAs células tumorais necessitam de alterar o seu metabolismo de forma a conseguirem manter taxas elevadas de crescimento e proliferação. Uma das alterações metabólicas mais frequentes nas células tumorais é o efeito de Warburg. Nesta situação, as células tumorais alteram o seu metabolismo de oxidação fosforilativa (OXPHOS) para glicólise, independentemente da presença de oxigénio. Na glicólise as células obtêm menos ATP por molécula de glicose. Desta forma as células aumentam a taxa glicolítica, o consumo e transportadores de glicose (GLUTs), a fermentação de lactato assim como as enzimas glicolíticas, como as hexocinases. Este é um processo regulado que tem como principais responsáveis o HIF-1, o p53 e o MYC. Neste sentido, as alterações metabólicas podem constituir um novo alvo terapêutico no cancro, como a leucemia mieloide aguda (LMA). Nesta patologia já se encontram descritas mutações em genes do metabolismo, nomeadamente no isocitrato desidrogenase 1/2 (IDH1/2). A LMA é uma neoplasia hematológica heterogénea caracterizada por bloqueio da diferenciação mieloide e proliferação de progenitores mieloides que se acumulam na medula óssea e no sangue. Esta neoplasia continua a ser uma doença com prognóstico variado e com elevada taxa de mortalidade. Assim, este estudo pretendeu caracterizar metabolicamente linhas celulares de LMA e avaliar o potencial da glicólise e da OXPHOS como alvos terapêuticos nestes modelos in vitro. Para tal, estudaram-se quatro linhas celulares de subtipos diferentes de LMA: K 562, uma linha celular de eritroleucemia com o gene de fusão BCR-ABL1; KG 1, uma linha celular de eritroleucemia com os genes de fusão FGFR1 e FGFR1OP2 ; NB 4, uma linha celular de leucemia promielocítica aguda com o gene de fusão PML-RARA; THP 1, uma linha de leucemia monocítica aguda com o gene de fusão KMT2A-MLLT3. A viabilidade e proliferação celular foram avaliadas através do teste de exclusão do azul de tripano. A deteção de mutações no exão 4 dos genes IDH1/2 foi efetuada por sequenciação de Sanger. Os níveis intracelulares de peróxidos e de anião superóxido e o potencial membranar mitocondrial foram analisados por fluorimetria com recurso às sondas fluorescentes, DCFH2-DA, DHE e JC-1, respetivamente. Para avaliar o efeito da inibição da glicólise e da OXPHOS, as células foram incubadas na presença e na ausência de 2 desoxi d glicose (2-DG; inibidor da glicólise) ou de oligomicina (oligo; inibidor da OXPHOS). A atividade metabólica foi avaliada através do ensaio metabólico com resazurina e a morte celular por citometria de fluxo usando dupla marcação de Anexina V e 7-AAD. O ciclo celular foi avaliado por citometria de fluxo, usando iodeto de propídeo/RNase. A captação de glicose foi medida através da captação de 18F-FDG e os níveis de expressão de 8 genes que codificam os GLUTs, SLC2A, 2 hexocinases e HIF-1α foram avaliados por RT-PCR. Os resultados mostraram que a linha celular NB-4 apresenta a maior captação de 18F-FDG e a THP-1 a menor, apesar de ser a única em que se encontravam expressos todos os genes testados. As células NB-4 apresentaram os níveis mais elevados de peróxidos e anião superóxido. As linhas celulares K-562 e KG-1 apresentam captação de 18F-FDG semelhante assim como peróxidos e anião superóxido. Nestas linhas foi ainda encontrada uma variante sinónima no exão 4 da IDH1 em heterozigotia. A inibição da glicólise induziu diminuição da atividade metabólica de forma dependente da dose e da linha celular, sendo a linha celular KG-1 a mais sensível. A inibição da OXPHOS também diminuiu a atividade metabólica de forma dependente da linha celular. Neste caso, as células K-562 foram as mais sensíveis. As células THP-1 são as mais resistentes a ambos os compostos. Estes compostos induziram morte celular, principalmente por apoptose, e bloqueio do ciclo celular em fase G0/G1. No entanto, a 2-DG apresentou um efeito citotóxico, principalmente, nas linhas K-562 e NB-4, e um efeito citostático mais evidente nas KG-1 e THP-1. Por outro lado, a oligomicina induziu sobretudo morte celular nas linhas K-562 e KG-1 e bloqueio do ciclo celular nas NB-4, THP-1 e K-562. A inibição da glicólise diminuiu a captação de 18F-FDG, principalmente nas linhas celulares KG-1 e NB-4, aumentou a expressão de SLC2A11 e diminuiu a expressão de HK1. A inibição da OXPHOS aumentou a captação de 18F-FDG, especialmente nas K-562, e aumentou a expressão dos genes SLC2A1 e HK2. Em conclusão, os resultados sugerem que o metabolismo celular poderá ser um alvo terapêutico na LMA. No entanto, as linhas celulares de LMA são metabolicamente diferentes, sendo as KG-1 e as NB-4 as células mais glicolíticas. Por outro lado, as K-562 aparentam ser mais dependentes da OXPHOS e as THP-1 parecem ser independentes desta via metabólica. Perante a inibição da OXPHOS as células parecem reprogramar o metabolismo celular de modo a obter energia por outra via metabólica, o que sugere que a glicólise poderá ser um melhor alvo terapêutico na LMA.To sustain the high levels of growth and proliferation, cancer cells need to alter their metabolic program. One of the most common metabolic alterations observed in cancer cells is the Warburg effect, where cancer cells shift their metabolism from oxidative phosphorylation (OXPHOS) to glycolysis, regardless of the presence of oxygen. Shifting from OXPHOS to glycolysis results in lower ATP production. Therefore, this alteration is associated with enhanced glycolytic rates, increased glucose uptake, through glucose transporters (GLUTs), and lactate fermentation as well as upregulation of glycolytic enzymes, such as hexokinases. The metabolic shift is a regulated process with HIF-1, p53 and MYC as the main responsible. Therefore, metabolic reprogramming may constitute a new molecular target for cancer therapy, namely in acute myeloid leukemia (AML) where mutations in metabolism genes, such as isocitrate dehydrogenase 1/2 (IDH1/2), were already describe. AML is a heterogeneous hematologic neoplasia characterized by myeloid differentiation arrest and uncontrolled proliferation of abnormal myeloid progenitors that accumulate in the bone marrow and blood. Despite the progress made, AML still has a variable prognosis and high mortality rate. Therefore, the aims of this study were to metabolically characterize AML cell lines and assess the potential of glycolysis and OXPHOS metabolism as a therapeutic target in AML in these in vitro models. To this end four AML cell lines of different subtypes were used: K-562, an erythroleukemia cell line carrying BCR-ABL1 fusion gene; KG-1, an erythroleukemia cell line with FGFR1 and FGFR1OP2 fusion genes; NB-4, an acute promyelocytic leukemia cell line with PML-RARA fusion gene; THP-1, an acute monocytic leukemia cell line carrying KMT2A-MLLT3 fusion gene. Trypan blue exclusion test was used to evaluate cell viability and proliferation. The presence of IDH1/2 exon 4 mutations was assessed using sanger sequencing. Intracellular peroxides and superoxide anion levels as well as mitochondrial membrane potential were measured by fluorimetry using DCFH2-DA, DHE and JC-1 florescent probes, respectively. To evaluate the effects of glycolysis and OXPHOS inhibition cells were incubated in the presence or absence of 2-deoxy-D-glucose (2-DG; glycolysis inhibitor) or oligomycin complex (oligo; OXPHOS inhibitor). Metabolic activity was assessed by resazurin assay and cell death was determined by flow cytometry using Annexin V and 7-AAD double staining. Cell cycle was also assessed by flow cytometry, using propidium iodide/RNAse. Additionally, glucose intake was measured by 18F-FDG uptake and expression levels of 8 SLC2A (genes that encode GLUTs), 2 hexokinases and HIF-1α were assessed using RT-PCR. The results showed that NB-4 cell line has the highest 18F-FDG, whereas THP-1 cells showed the lowest uptake. NB-4 cell line also had the highest peroxide and superoxide anion levels. THP 1, unlike the remaining cell lines, expressed the 8 SLC2A genes tested. K-562 and KG-1 cell lines had similar 18F-FDG uptake values, ROS levels and IDH1 genotype (the single nucleotide variant rs11554137 in heterozygosity in exon 4). Glycolysis inhibition reduced metabolic activity in a dose- and cell line dependent manner. KG-1 cell line was the most sensitive. OXPHOS inhibition also led to a decrease in metabolic activity, in a cell line-dependent manner. K-562 cells were the most sensitive ones to this inhibition. THP-1 cell line was the most resistant to these two compounds. Both inhibitions appeared to induce cell death, mainly by apoptosis, and cell cycle arrest in G0/G1 phase. 2-DG treatment had a more evident cytotoxic effect on K-562 and NB-4 and a cytostatic effect on KG-1 and THP-1 cell lines. On the other hand, oligomycin induced mainly a cytotoxic effect on K-562 and KG-1 cells and a cytostatic effect on NB-4, THP-1 and K 562. Glycolysis inhibition led to a decrease of 18F-FDG uptake, mainly in KG-1 and NB-4 cell lines, as well as to an increase of SLC2A11 and decrease of HK1 gene expression levels. Lastly, OXPHOS inhibition increased 18F-FDG uptake, particularly in K-562 cells, SLC2A1 and HK2 expression levels. In conclusion, the results suggest that cellular metabolism may be a therapeutic target in AML. However, AML cell lines have different metabolic preferences, with KG-1 and NB-4 cell lines appearing to be more glycolytic, whereas K 562 appears to be more dependent on OXPHOS. In contrast, THP-1 cell line does not appear to be dependent on OXPHOS. These cell lines seem to reprogram their metabolism in order to overcome the OXPHOS inhibition, suggesting that glycolysis is a better therapeutic target in AML

Estimation of multivariate distributions under right censoring

Dissertação de mestrado em EstatísticaEm diversos estudos longitudinais, os indivíduos ou itens em observação podem experimentar vários eventos de interesse ao longo de um determinado período de seguimento. Quando o evento de interesse pode ocorrer mais do que uma vez num indivíduo, estes eventos são designados de eventos recorrentes. Este tipo de dados é frequentemente observado em estudos de investigação médica, economia, engenharia e sociologia. Em estudos de investigação médica, os eventos recorrentes podem corresponder a múltiplas ocorrências de hospitalização de um grupo de doentes, múltiplos episódios de recorrência em estudos de cancro, ataques cardíacos repetidos ou múltiplas recaídas de remissão de pacientes com leucemia. A análise destes dados pode ser focada no tempo entre eventos ("gap times") ou nos modelos para o tempo até aos eventos. Nestes estudos, os eventos ordenados sequencialmente e os correspondentes intervalos de tempo constituem tópicos de particular interesse. Neste trabalho, foram consideradas estimativas para a função de distribuição marginal e conjunta de dois intervalos de tempo, na presença de censura aleatória univariada pela direita. Também foram consideradas estimativas para a função de sobrevivência bivariada. A presente dissertação está dividida em seis capítulos. No primeiro capítulo são introduzidos alguns conceitos e notações fundamentais da análise de sobrevivência, que servirão de suporte para os outros capítulos. Assim, são definidas algumas quantidades de interesse, alguns conceitos de estimação pontual e o estimador de Kaplan-Meier. No segundo e terceiro capítulos são apresentados vários estimadores para a função de distribuição e sobrevivência bivariada de tempos sequenciais, na presença de censura pela direita. As extensões destes estimadores, para vários intervalos de tempo, são também discutidas. Novos estimadores para as funções conjuntas (função de distribuição bivariada e função de sobrevivência bivariada) são propostos e as suas extensões para vários intervalos de tempo são também discutidas. Os novos estimadores são baseados na abordagem "landmark" (van Houwelingen, 2007) e na função de risco cumulativa ponderada. O quarto capítulo descreve detalhadamente os estudos de simulação realizados para estudar o comportamento dos estimadores propostos. Nestes estudos de simulação, foram exploradas algumas propriedades desejáveis dos estimadores, recorrendo à média, ao desvio padrão, ao viés e ao erro quadrático médio. Também foram construídos diagramas de extremos e quartis, de forma a avaliar graficamente estes estimadores. No quinto capítulo os métodos propostos são aplicados a uma base de dados real, relativa ao cancro da mama em mulheres alemãs (German breast cancer). Por fim, no sexto capítulo são apresentadas as principais conclusões desta dissertação e são referidos alguns possíveis trabalhos, decorrentes deste estudo, que podem ser realizados.In many longitudinal studies, the individuals and items in observation can experience multiples events of interest during their follow-up. An event of interest can occurs more than once on a individual, when this occurs we are in presence of recurrent events. This type of data is frequently observed in medical studies, economics, engineering and sociology. In medical studies, recurrent events may correspond to multiple hospitalisations of a group of patients, multiple episodes of recurrence in cancer studies, repeated cardiac attacks or multiple remissions of leukemia patients. The analysis of these data can be focused 011 the times between events ("gap times") or on the models for the events times. On this studies, the sequentially ordered events and corresponding gap times, constitute topics of particular interest. In this work, were considered methods to estimate the marginal distribution function and joint distribution function of two gap-times, in the presence of univariate right censoring. Estimators for the bivariate survival function were also considered. The present dissertation is divided in six chapters. On the first chapter some fundamental notation and concepts of survival analysis, that will support others chapters, are introduced. Therefor, are defined some quantities of interest, some concepts of point estimation and the Kaplan-Meier estimator. On the second chapter and third chapter, several estimators are presented for the bivariate distribution and bivariate survival function, under right censoring. The extension of this estimators for various gap-times are also discussed. New estimators for joint functions are proposed and their extensions for multiple gap times are also discused. The new estimators are based on the "landmark" approach and on the weighted cumulative hazard function. The fourth chapter describes in detail the simulation studies carried out to study the behavior of the proposed estimators. In these simulation studies, some desirable properties of the estimators were explored, using the mean, standard deviation, bias and mean square error. Extremes and quartile diagrams were also constructed in order to graphically evaluate these estimators. In the fifth chapter the proposed methods are applied to a real database, concerning breast cancer in German women. Finally, in the sixth chapter, the main conclusions of this dissertation are presented and some possible studies are mentioned, that can be realized

Anti-inflammatory activity of Urera baccifera (Urticaceae) in Sprague-Dawley rats

On a preliminary test, anti-inflammatory and analgesic dose-related activities on rats were observed for the aqueous fraction of Urera baccifera; this extract was bioassay-guided fractionated and the final aqueous fraction was used according the ethnobotanical use. Carrageenan-induced edema (n=6), was used as an assay in the fractionating process. The anti-inflammatory and antinociceptive properties of the final aqueous fraction were studied using in vivo models. For the anti-inflammatory activity rat paw edema (n=6), pleurisy induced by carrageenan (n=6) and ear edema induced by topical croton oil (n=6) models were used, and tail-flick test (n=6), abdominal constrictions induced by acetic acid (n=6), and formalin test (n=6), were used for the antinociceptive activity. The tests performed showed an inhibition effect on leukocyte migration, and a reduction on pleural exudate, as well as dose-dependant peripheral analgesic activity, at a range of 25-100 mg/kg i.p. The final aqueous fraction contains most of the anti-inflammatory activity of the plant U. baccifera. A possible mechanism of action is discussed and based on the results we conclude that this plant has a potential for both anti-inflammatory and analgesic activity at the clinical level