Actividad de la β-galactosidasa en células de Kluyveromyces sp. permeabilizadas con etanol a diferentes concentraciones, temperaturas y tiempos.

En el presente trabajo se realizó la permeabilización de la membrana de Kluyveromyces sp. para determinar la actividad de la β - galactosidasa presente en esta levadura. La permeabilización se llevó a cabo en tubos de ensayo conteniendo la masa celular fresca de Kluyveromyces sp. y agregando diferentes concentraciones de etanol a respectivos tiempos y temperaturas. Las concentraciones de etanol fueron de 30, 50 y 70%; las temperaturas de 20, 40 y 60° C; y los tiempos de 5, 15 y 30 minutos, obteniéndose 27 combinaciones con las cuales se realizó la permeabilización de la membrana de Kluyveromyces sp.. Se centrifugaron los contenidos de cada tubo, colocando el sedimento celular enplacas de vidrio para su desecación en frío y finalmente, las placas fueron dejadas en una campana de vidrio conteniendo cloruro de calcio para completar la desecación. La actividad de β - galactosidasa fue determinada usando una solución de buffer fosfato citrato con pH 6.5 suplementado con lactosa 5%; MgSO4 .7H2O al 0.12%; MnSO4 al 0.02%. La glucosa fue cuantificada por el método de la glucosa oxidasa. Los resultados obtenidos demostraron que el tratamiento de la levaduras desecadas a concentraciones de 30% de alcohol, 20°C y 5 min de exposición presentaron mayor actividad enzimática, con un valor de 2.9642 µmol de glucosa /min. seguida de las combinaciones de 30% dealcohol, 20°C y 15 min, 30% de alcohol, 20°C y 30 min con valores de 2.863 y 1.4815 µmol de glucosa/min. respectivamente. Las concentraciones de 50 y 70% de alcohol a las diferentes temperaturas y tiempos de exposición ensayados demuestran una nula o casi nula actividad enzimática.Palabras clave: Kluyveromyces sp, β – galactosidasa, permeabilización

Efecto de la variación del pH en un medio de cultivo a base de salvado de trigo para la producción de amilasa por Paecilomyces lilacinus

En el presente trabajo se evaluó el efecto de la variación del pH en cultivos a base de salvado de trigo para la producción de amilasa por Paecilomyces lilacinus, los cultivos se realizaron en botellas planas de 250 mL conteniendo 20 gramos de salvado de trigo, solución tampón Acetato 0.1 M pH 5, Fosfato 0.1 M pH 7 y Carbonato 0.1 M pH 9; controlándose las variables temperatura, tiempo y contenido de humedad. Las amilasas producidas en el medio se extrajeron con 80 mL de la solución buffer respectiva, agitando durante 30 minutos a temperatura ambiente. Luego se filtró al vacío y se conservó el eluato. La actividad amilásica se determinó usando una solución de almidón tamponada (0.05 % almidón, 0.15 M NaCl, 0,1 M acetato de sodio pH 5.0) como sustrato. Las lecturas se hicieron en un espectrofotómetro a 540 nm para obtener las unidades enzimáticas. En valores promedios se determinó que a pH 5 se obtuvo la mayor producción de unidades amilolíticas con un valor de 614.94 UA/dL, en contraste con los obtenidos a pH 7 y pH 9 que fueron de 508.77 y 488.86UA/dL respectivamente. Los resultados del análisis de varianza, determinaron que existe diferencia altamente significativa en el tratamiento a pH 5 en comparación con los otros tratamientos ensayados.Palabras clave: Amilasa, Paecilomyces lilacinus, Almidón, Salvado de trigo, pH.ABSTRACTThis work was aimed at determining the effect of the change in pH in a culture medium based on wheat bran for the production of amylase by Paecilomyces lilacinus underexperimental conditions, crops were flat in bottles of 250 mL containing 20 grams Wheat bran, 0.1 M acetate buffer pH 5, phosphate and carbonate PH 7 M0.1 M 0.1 pH 9; thevariables of temperature, time and moisture content were managed in their values more suitable for this process. The amylases produced in the middle were extracted with 80 mL ofthe respective buffer solution, stirring for 30 minutes at room temperature. It then leaked to the vacuum and the eluate was retained. The amylase activity was determined using a starch solution buffered (0.05% starch, 0.15 M NaCl, 0.1 M sodium acetate, pH 5.0) as a substrate.The readings were performed in a spectrophotometer to an absorbance of 540 nm to obtain the units enzyme. On average values are determined that at pH 5 was obtained by the increased production of amilolytic units with a value of 614.94 AU / dL, higher than those obtained at pH 7 and pH 9, which were 508.77 and 488.86 AU/dL respectively. The results of all experiments were analyzed by the statistical method analysis of variance determined that there is a highly significant difference in treatment at pH 5 compared with the other treatments tested.Key words: Amylase, Paecilomyces lilacinus, Starch, Wheat Bran, pH

LECTINAS DE Phaseolus vulgarisL. var ñuña “ñuña” Y SU ESPECIFICIDAD HEMOAGLUTINANTE FRENTE A GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y LEVADURAS

RESUMENUna lectina de Phaseolus vulgaris L. var. ñuña “ñuña” que se obtuvo a partir de una extracción ácida, presentó su efecto aglutinante en una suspensión fresca de Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae y Levadura roja en PBS a temperatura ambiente y observadas después de una hora de incubación. Asimismo, esta lectina tuvo efecto hemaglutinante en suspensiones de glóbulos rojos de los grupos sanguíneos ABO. Las suspensiones de las levaduras tuvieron una concentración de 2,4 ×108 comparada con el tubo 8 de Mac Farland. El efecto aglutinante se demostró tanto en extracto crudo como en pre- purificado con alcohol de 95º. Cuando la suspensiones de Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae o Levadura roja son tratadas con glicina – HCl y sometidas aebullición por 15 minutos pierden la capacidad de aglutinarse con el extracto crudo de semillas de “ñuña” y conextracto pre – purificado con alcohol. Las especies de levaduras fueron cultivadas en agar sabouraud y cosechadacon PBS. Los extractos de “ñuña” se obtuvieron a partir de semillas que fueron molidas a polvo fino, tamizados y extraída la lectina con ácido clorhídrico 0.1N, centrifugada y el sobrenadante (extracto crudo) fue precipitado con alcohol, el precipitado fue separado por centrifugación, y redisuelto con PBS (extracto pre purificado). Se determinó la concentración de proteínas por los métodos de Biuret y Lowry.Palabras clave: Lectinas, Extracción, Purificación, Phaseolus vulgaris L. var. ñuña “ñuña”, Candida albicans,Saccharomyces cerevisiae y levadura roja.ABSTRACTPhaseolus vulgaris L. var. ñuña “ñuña” the lectins which was obtained by acid extraction, showed a binding agglutinating effect against Candida albicans suspensionin PBS to at room temperature and observed after one hour. C. albicans suspension had a concentration of 2, 4 *108 compared with Farland Mac tube 8. Binding effect demonstrated so much in crude extract as pre-purified with alcohol of 95º. “Ñuña” seeds were worn out to fine dust, sifted and extracted with hydrochloric acid 0.1N, centrifuged and the supernatant (crude extract) it was precipitated with alcohol, the precipitated one was separated by centrifugation and suspended with PBS (extract pre purified). The protein concentration was determined by Candida albicans was cultivated in agar sabouraud and harvested with PBS. When Candida albicans is treated with glicina - HCl and submitted boiling by 15 minutes, agglutination did not present the crude extract of seeds of “ñuña” or pre-purified extract with alcohol.Key words: Lectins, Extraction, Purification, Phaseolus vulgaris L. var. ñuña “ñuña”, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae

Efecto de Beauveria bassiana sobre la mosca Anastrepha sp. y larvas del cogollero Spodoptera frugiperda en condiciones de laboratorio

El objetivo de este trabajo de investigación fue evaluar el efecto entomopatógeno de Beauveria bassiana sobre la mosca de fruta Anastrepha sp. recolectada de huertos del Distrito de Simbal y sobre el gusano cogollero del maíz Spodoptera frugiperda extraído del campo de cultivo de la Facultad de Ciencias Biológicas. Se preparó PDA (Agar Papa Dextrosa) como medio de cultivo para el crecimiento de Beauveria bassiana. Para comprobar la patogenicidad de este hongo sobre las larvas de Spodoptera frugiperda se utilizaron seis placas de Petri con PDA colocándose una larva en cada una y posteriormente se inocularon las esporas del hongo sobre la superficie de éstas, observándose, luego de un proceso de incubación bajo condiciones de temperatura y humedad controlada, la formación de micelio blanco, comprobándose de esta manera el efecto insecticida de Beauveria bassiana; el mismo procedimiento se llevó a cabo para la evaluación de la patogenicidad en la  mosca de la fruta Anastrepha sp. Se demostró que Beauveria bassiana es una alternativa clave para el manejo integrado de plagas, siendo de gran ayuda para reducir las pérdidas de los cultivos y por lo tanto puede ser utilizado para amortiguar el efecto de insecticidas químicos en el medio ambiente.Palabras clave: Maíz, B. bassiana, S. frugiperda, Anastrepha sp., entomopatógeno

EFECTO DEL COMPLEJO ENZIMÁTICO PRODUCIDO POR Aspergillus oryzae SOBRE PRODUCCIÓN DE ETANOL POR Saccharomyces cerevisiae

RESUMENPara determinar el efecto del complejo enzimático producido por Aspergillus oryzae CECT 2094 y CECT 2095 sobre la producción de etanol por Saccharomyces cerevisiae en condiciones de laboratorio, se acondicionaron cuatro sistemas de fermentación empleando botellas con 400 ml de caldo melaza, a las que se adicionó extracto enzimático a las concentraciones de 2, 4, y 6% (v/v), y un control sin extracto enzimático. Los sistemas fueron inoculados con S. cerevisiae e incubados a temperatura ambiente durante 48h. en condiciones de anaerobiosis, luego se procedió a medir la concentración de alcohol expresada en porcentaje, en cada uno de los sistemas de fermentación. El mayor porcentaje de alcohol se obtuvo en el tratamiento con 4% de extracto enzimático, con una media de 4,47% de alcohol y una biomasa final de 1,36 x 108 cel/ml a diferencia del control en el que se obtuvo 3,73% de alcohol y la biomasa final de 9,92X107 cel/ml. En todos los tratamientos se observó una disminución del Brix (14 a 6,57ºB). Se concluye que el complejo enzimático producido por A. oryzae tiene efecto positivo sobre la producción de etanol por S. cerevisiae en condiciones de laboratorio.Palabras clave: Aspergillus oryzae, complejo enzimático, producción de etanol.ABSTRACTIn order to determine the effect of the concentration of the enzyme complex produced by Aspergillus oryzae CECT 2094 and CECT 2095 on the production of ethanol by Saccharomyces cerevisiae in laboratory conditions, four fermentation’s systems were conditioned using bottle with 400 ml molasses broth, which was added enzymatic extract at concentrations of 2, 4, and 6% (v / v) and a control without enzyme extract. The systems were inoculated with S. cerevisiae and incubated at environment temperature for 48hrs under anaerobicconditions, then it was proceeded to measure the concentration of alcohol expressed in percent in each of thefermentation systems. The highest percentage of alcohol was obtained in the treatment with 4% extract enzyme,with an average of 4,47% alcohol and a biomass at the end of 1,36 x 108 cells / ml as opposed to the control which was obtained 3,73% and its biomass at the end of fermentation was 9,92 X107 cel / ml. In all treatments was observed a decrease of the Brix (14 a 6,57ºB). The conclusion was that the enzyme complex produced by A. oryzae has an positive effect on ethanol production by S. cerevisiae under laboratory conditions.Key words: Aspergillus oryzae, enzyme complex, ethanol´s production

Efecto de la temperatura y pH sobre la actividad y estabilidad de pectinasas producidas por Bacillus spp.

    Las pectinasas se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza, como por ejemplo en productos de desecho, y su utilidad industrial es de gran importancia. En la presente investigación se trata de establecer algunos parámetros cinéticos a nivel de laboratorio para la producción de pectinasas por Bacillus spp. Se aisló y seleccionó cultivos puros de Bacillus spp. productores de la enzima a partir de muestras de tierra de cultivo de papa y naranja en medio agar nutritivo con sales y pectina como sustrato, se incubó y se realizó la lectura agregando alícuotas de una solución de lugol y aquellos cultivos que presentaban mayor halo de hidrólisis de pectina fueron seleccionados. Estos cultivos se sembraron en medio líquido nutritivo más sales y pectina y se incubaron por 24 – 48 horas; luego se centrifugaron y se obtuvo el sobrenadante denominado extracto crudo de pectinasa (ECP), el cual sirvió para realizar los ensayos de actividad y estabilidad del ECP a pHs y temperaturas variables.  Se encontró que el pH y temperatura de máxima actividad del ECP está alrededor de 6,5 y 35°C, respectivamente. El ECP es estable a pH 6,5 y 8,5 a 35°C por 120 minutos, lo mismo es cierto a temperatura de 50°C hasta por 129 minutos y pierde su estabilidad a 70°C a los 120 minutos.Palabras clave: Bacillus, pectinasas, pH, temperatura, actividad y estabilidad

Evaluation of different concentrations of rectified ethanol in the production of the “Bioaroma” ethyl acetate and single cell protein from Candida utilis var. major C.E.C.T. 1430

The present research was carried out with the purpose to evaluate the different concentrations of rectified ethanol in the production of “bioaroma” ethyl acetate and single cell protein from Candida utilis var.major for it a stirred – tank reactor of 16 cm of height with turbine Rushton was built. The preparation of the inoculum was carried out starting from Candida utilis var. major C.E.C.T. 1430. The broth of culture was formulated starting from rectified ethanol dilutions from 10 to 35 g/L each 5 units. The bioprocess was carried out at 25ºC to pH 4.5 – 5.5 and during a time of 60 hours. It was found that the biomass productivity increase progressively from 4.82 to 7.90 g/L and from 0.082 a 0.108 g/L-h) respectively. Such as increase the rectified ethanol concentration (g/L) the production and the yield was down. The yield acetate ethyl was top to concentrations of 15 g/L of rectified ethanol (5.7%) and smallest to concentrations of 35 (g/L) of rectified ethanol (1.97%). Finally, the increase of rectified ethanol concentrations does not influence increasing the production of acetate ethyl and the single cell protein Candida utilis var. major

Evaluation of different concentrations of rectified ethanol in the production of the “Bioaroma” ethyl acetate and single cell protein from Candida utilis var. major C.E.C.T. 1430

The present research was carried out with the purpose to evaluate the different concentrations of rectified ethanol in the production of “bioaroma” ethyl acetate and single cell protein from Candida utilis var.major for it a stirred – tank reactor of 16 cm of height with turbine Rushton was built. The preparation of the inoculum was carried out starting from Candida utilis var. major C.E.C.T. 1430. The broth of culture was formulated starting from rectified ethanol dilutions from 10 to 35 g/L each 5 units. The bioprocess was carried out at 25ºC to pH 4.5 – 5.5 and during a time of 60 hours. It was found that the biomass productivity increase progressively from 4.82 to 7.90 g/L and from 0.082 a 0.108 g/L-h) respectively. Such as increase the rectified ethanol concentration (g/L) the production and the yield was down. The yield acetate ethyl was top to concentrations of 15 g/L of rectified ethanol (5.7%) and smallest to concentrations of 35 (g/L) of rectified ethanol (1.97%). Finally, the increase of rectified ethanol concentrations does not influence increasing the production of acetate ethyl and the single cell protein Candida utilis var. major

Evaluación de diferentes concentraciones de etanol rectificado en la producción del "bioaroma" acetato de etilo y proteína unicelular por Candida utilis var. major C.E.C.T. 1430

The present research was carried out with the purpose to evaluate the different concentrations of rectified ethanol in the production of �bioaroma� ethyl acetate and single cell protein from Candida utilis var.major for it a stirred � tank reactor of 16 cm of height with turbine Rushton was built. The preparation of the inoculum was carried out starting from Candida utilis var. major C.E.C.T. 1430. The broth of culture was formulated starting from rectified ethanol dilutions from 10 to 35 g/L each 5 units. The bioprocess was carried out at 25ºC to pH 4.5 � 5.5 and during a time of 60 hours. It was found that the biomass productivity increase progressively from 4.82 to 7.90 g/L and from 0.082 a 0.108 g/L-h) respectively. Such as increase the rectified ethanol concentration (g/L) the production and the yield was down. The yield acetate ethyl was top to concentrations of 15 g/L of rectified ethanol (5.7%) and smallest to concentrations of 35 (g/L) of rectified ethanol (1.97%). Finally, the increase of rectified ethanol concentrations does not influence increasing the production of acetate ethyl and the single cell protein Candida utilis var. major.El trabajo tuvo como objetivo evaluar diferentes concentraciones de etanol rectificado en la producción del �bioaroma� acetato de etilo y proteína unicelular por Candida utilis var.major. Se construyó un biorreactor de 16 cm de altura tipo tanque agitado con turbina Rushton. La preparación del inóculo fue realizada a partir de la cepa Candida utilis var.major C.E.C.T. 1430. El medio de cultivo fue formulado a partir de diluciones de etanol rectificado desde 10 hasta 35 g/L en intervalos de cada 5 unidades. El bioproceso se llevó a cabo a 25 ºC, pH de 4.5 � 5.5 y durante 60 horas. Se encontró que la biomasa y la productividad aumentan progresivamente, de 4.82 a 7.90 g/L y de 0.082 a 0.108 g/L-h respectivamente. Así mismo se determinó que a medida que aumenta la concentración (g/L) de etanol rectificado, la producción y la productividad disminuyen. El rendimiento de acetato de etilo, fue máximo a la concentración de 15 g/L de etanol rectificado (5.7%) y mínimo a 35 g/L y (1.97%) respectivamente. Se concluye que el incremento de la concentración de etanol rectificado no influye aumentando la producción y rendimiento del �bioaroma� acetato de etilo y de la proteína unicelular de Candida utilis var. major