IN VITRO VIABILITY AFTER VITRIFICATION OF Mus domesticuts domesticus VLATOCYSTS CULTURED FROM ONE-CELL

Foram realizados três experimentos para se avaliar o desenvolvimento in vitro de blastocistos de Mus domesticus domesticus (CF1xSWISS) cultivados a partir de embriões de 1-célula, após exposição e vitrificação em solução crioprotetora contendo 9,0 M de EG acrescido ou não de 0,3 M de SAC. No experimento 1, após o cultivo de 755 embriões de 1-célula, foram observadas taxas de eclosão de 53,0% para o meio HTF e de 61,7% para o meio KSOM (P>0,05), suplementados com 4 mg/ml de BSA + 20 e 25 mM de HEPES. No experimento 2 testaram-se os possíveis efeitos tóxicos ds soluções crioprotetoras propostas: VS1 = 1,8 M EG em PBS + 6% BSA (60 s) seguido de 9,0 M EG em PBS + 6% BSA (imersão direta) e VS2 = 9,0 M EG + 0,3 M SAC em PBS + 6% BSA (imersão direta) em 152 blastocistos cultivdos a partir de embriões de 1-célula em meio KSOM com 25 mM de HEPES. Não houve diferença significativa (P>0,05) entre os grupos controle (86%), VS1 (82,3%) e VS2 (78,4%). No experimento 3, 140 blastocistos cultivados por 72 h em meio KSOM com 4 mg/ml modificadas (OPSm) nas soluções crioprotetoras acima descritas, alcançando taxas de eclosão de 45,7 e 41,4% para VS1 e VS2 (P>0,05), respectivamente. Portanto, concluiu-se que ambos os meios, HTF e KSOM acrescidos de BSA e HEPES, proporcionaram o completo desenvolvimento embrionário in vitro. Apesar de não ter ocorrido diferença estatística (P>0,05), no meio KSOM observou-se que os embriões tiveram uma curva de crescimento mais homogênea e melhores taxas de eclosão, representando mais uma alternativa para o cultivo de embriões de 1-célula. Igualmente, não houve variação significativa (P>0,05) nas taxas de eclosão para os blastocistos de Mus domesticus domesticus vitrificados nas soluções crioprotetoras contendo 9,0 M de EG com ou sem o acréscimo de 0,3 M de SAC.Three experiments were carried out in order to evaluate the in vitro development of Mus domesticus domesticus (CF1xSWISS) blastocysts cultured from one-cell embryos after exposition and vitrification in a cryoprotectant solution composed of 9.0 M EG additioned or no of 0.3 M SAC. In the first experiment, after the culture of 755 one-cell embryos, were observed the hatching rates of 53.0% for HTF medium and 61.7% for KSOM medium (P>0,05) supplemented with 4 mg/ml BSA + 20 and 25 mM HEPES, respectively. In the second experiment were evaluated the capacity of the embryos to hatching after exposition to the cryoprotectant solutions proposed (VS1 = 1.8 M EG in PBS + 6% BSA (120 s) followed by 9.0 M EG in PBS + 6% BSA and VS2 = 9.0 M EG + 0.3 M SAC in PBS + 6% BSA). First the embryos were cultured from one-cell to blastocyst stage and after 152 blastocysts were exposed to the vitrification solutions (VS1 and VS2). The exposition dont showed significant difference (P>0.05) among the control (86.0%), VS1 (82.3%) and VS2 (78.4%) groups. In the third experiment 140 blastocysts cultured for 72 h in KSOM with 4 mg/ml BSA + 25 mM HEPES were vitrified in 0.25 ml modified straws (OPSm) in the cryoprotectant solutions previously described, reaching hatching rates of 45.7 an 41.4% in VS1 and VS2 (P>0.05), respectively. Then, it was concluded that both HTF and KSOM + BSA and HEPES produced a complete in vitro preimplantation embryos development. However, the embryos cultured in KSOM medium showed a homogeneous growing curvature and higher hatching rates, which can be another alternative for culture of one-cell embryos. Equally, there were no differences (P>0.05) in the hatching rates between Mus domesticus domesticus vitrified blastocysts in cryoprotectant solutions containing 9.0 m EG with or without the addition of 0.3 M SAC

Viabilidade in vitro apos vitrificação de blastocitos de Mus domesticus domesticus cultivados a partir de embriões de 1-celula

Orientador: Jose Luiz RodriguesDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias AgrariasResumo: Foram realizados três experimentos para se avaliar o desenvolvimento in vitro de blastocistos de Mus domesticus domesticus (CF1xSWISS) cultivados a partir de embriões de 1-célula, após exposição e vitrificação em solução crioprotetora contendo 9,0M de EG acrescido ou não de 0,3M de SAC. No experimento 1, após o cultivo de 755 embriões de 1-célula, foram observadas taxas de eclosão de 53,0% para o meio HTF e de 61.7% para o meio KSOM (P>0,05), suplementados com 4mg/ml de BSA + 20 e 25mM de HEPES. No experimento 2 testaram-se os possíveis efeitos tóxicos das soluções crio protetoras propostas: VS1 = 1,8M EG em PBS + 6%BSA (60s) seguido de 9,0M EG em PBS + 6%BSA (imersão direta) e VS2 = 9,0M EG + 0,3M SAC em PBS + 6%BSA (imersão direta) em 152 blastocistos cultivados a partir de embriões de 1-célula em meio KSOM com 25mM de HEPES. Não houve diferença significativa (P>0,05) entre os grupos controle (86,0%), VS1 (82,3%) e VS2 (78,4%). No experimento 3, 140 blastocistos cultivados por 72h em meio KSOM com 4mg/ml de BSA e 25mM de HEPES foram vitrificados em palhetas de 0,25ml modificadas (OPSm) nas soluções crioprotetoras acima descritas, alcançando taxas de eclosão de 45,7 e 41,4% para VS1 e VS2 (P>0,05), respectivamente. Portanto, concluiu-se que ambos os meios, HTF e KSOM acrescidos de BSA e HEPES, proporcionaram o completo desenvolvimento embrionário in vitro. Apesar de não ter ocorrido diferença estatística (P>0,05), no meio KSOM observou-se que os embriões tiveram uma curva de crescimento mais homogênea e melhores taxas de eclosão, representando mais uma alternativa para o cultivo de embriões de 1-célula. Igualmente, não houve variação significativa (P>0,05) nas taxas de eclosão para os blastocistos de Mus domesticus domesticus vitrificados nas soluções crioprotetoras contendo 9,0M de EG com ou sem o acréscimo de 0,3M de SACAbstract: Three experiments were carried out in order to evaluate the in vitro development of Mus domesticus domesticus (CF1 x SWISS) blastocysts cultured from one-cell embryos after exposition and vitrification in a cryoprotectant solution composed of 9.0M EG additioned or no of 0.3M SAC. In the first experiment, after the culture of 755 one-cell embryos, were observed the hatching rates of 53.0% for HTF medium and 61.7% for KSOM medium (P>0.05) supplemented with 4mg/ml BSA + 20 and 25mM HEPES, respectively. In the second experiment were evaluated the capacity of the embryos to hatching after exposition to the cryoprotectant solutions proposed (VS1 = 1.8M EG in PBS + 6% BSA (120s) followed by 9.0M EG in PBS + 6% BSA and VS2 = 9.0M EG + 0.3M SAC in PBS + 6% BSA). First the embryos were cultured from one-cell to blastocyst stage and after 152 blastocysts were exposed to the vitrification solutions (VS1 and VS2). The exposition don't showed significant difference (P>0.05) among the control (86.0%), VS1 (82.3%) and VS2 (78.4%) groups. In the third experiment 140 blastocysts cultured for 72h in KSOM with 4mg/ml BSA + 25mM HEPES were vitrified in 0.25ml modified straws (OPSm) in the cryoprotectant solutions previously described, reaching hatching rates of 45.7 and 41.4% in VS1 and VS2 (P>0.05), respectively. Then, it was concluded that both, HTF and KSOM + BSA and HEPES produced a complete in vitro preimplantation embryos development.. However, the embryos cultured in KSOM medium showed a homogeneous growing curvature and higher hatching rates, which can be another alternative for culture of one-cell embryos. Equally, there were no differences (P>0.05) in the hatching rates between Mus domesticus domesticus vitrifed blastocysts in cryoprotectant solutions containing 9.0M EG with or without the addition of 0.3M SA

Effect of season on embryo transfer in superovulated Holstein cows with PMSG

The authors tried to evaluate the effect of environmental factors on the embryo transfer of 21 Holstein cows, in a 30 months period, submitted to 37 superovulatory treatments with 3.000 I.U. of PMSG. The results were analyzed considering two seasons: wet period (October to March) with an average maximum temperature = 30.0 ± 0.8ºC and an average absolute precipitation = 153.1 ± 78.8 mm³ and dry period (April to September) with an average maximum temperature = 26.5 ± 1.6ºC and an average absolute precipitation = 59.2 ± 53.8 mm³. Climatic differences between seasons were demonstrated (P<0.05), but there were no significant differences between seasons in the average number of structures per superovulation: 5.4 ± 2.63 and 4.3 ± 4.00; in the viable embryos percentage: 50.0% and 57.6% and the pregnancy rates in the recipients: 44.4% and 35.2%, respectively. Then, the climatic variations between wet and dry periods did not appear to adversely affect the embryo transfer performance in superovulated Holstein cows with PMSG.Estudou-se a influência de fatores sazonais na performance de 21 vacas da raça Holandesa submetidas a 37 superovulações com 3.000 U.I. de PMSG. Os resultados das transferências de embriões foram analisados segundo o efeito da época do ano: chuvosa (outubro a março) com temperatura máxima média = 30,0 ± 0,8ºC e precipitação pluviométrica mensal = 153,1 ± 78,8 mm³ e seca (abril a setembro) com temperatura máxima média = 26,5 ± 1,6ºC e precipitação pluviométrica mensal = 59,2 ± 53,8 mm³. Registrou-se variação climática entre as estações (P<0,05), mas não houve diferença significativa (P>;0,05) entre épocas do ano quando foi comparado o número médio de estruturas por superovulação (5,4 ± 2,63 e 4,3 ± 4,00), o percentual de embriões viáveis (50,0% e 57,6%) e o percentual de prenhezes obtidas: 44,4% e 35,2%, respectivamente. Concluiu-se, portanto, que as diferentes condições climáticas das épocas do ano não influíram nas transferências de embriões em vacas holandesas superovuladas com PMSG

Viabilidade in vitro apos vitrificação de blastocitos de Mus domesticus domesticus cultivados a partir de embriões de 1-celula

Orientador: Jose Luiz RodriguesDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Parana, Setor de Ciencias AgrariasResumo: Foram realizados três experimentos para se avaliar o desenvolvimento in vitro de blastocistos de Mus domesticus domesticus (CF1xSWISS) cultivados a partir de embriões de 1-célula, após exposição e vitrificação em solução crioprotetora contendo 9,0M de EG acrescido ou não de 0,3M de SAC. No experimento 1, após o cultivo de 755 embriões de 1-célula, foram observadas taxas de eclosão de 53,0% para o meio HTF e de 61.7% para o meio KSOM (P>0,05), suplementados com 4mg/ml de BSA + 20 e 25mM de HEPES. No experimento 2 testaram-se os possíveis efeitos tóxicos das soluções crio protetoras propostas: VS1 = 1,8M EG em PBS + 6%BSA (60s) seguido de 9,0M EG em PBS + 6%BSA (imersão direta) e VS2 = 9,0M EG + 0,3M SAC em PBS + 6%BSA (imersão direta) em 152 blastocistos cultivados a partir de embriões de 1-célula em meio KSOM com 25mM de HEPES. Não houve diferença significativa (P>0,05) entre os grupos controle (86,0%), VS1 (82,3%) e VS2 (78,4%). No experimento 3, 140 blastocistos cultivados por 72h em meio KSOM com 4mg/ml de BSA e 25mM de HEPES foram vitrificados em palhetas de 0,25ml modificadas (OPSm) nas soluções crioprotetoras acima descritas, alcançando taxas de eclosão de 45,7 e 41,4% para VS1 e VS2 (P>0,05), respectivamente. Portanto, concluiu-se que ambos os meios, HTF e KSOM acrescidos de BSA e HEPES, proporcionaram o completo desenvolvimento embrionário in vitro. Apesar de não ter ocorrido diferença estatística (P>0,05), no meio KSOM observou-se que os embriões tiveram uma curva de crescimento mais homogênea e melhores taxas de eclosão, representando mais uma alternativa para o cultivo de embriões de 1-célula. Igualmente, não houve variação significativa (P>0,05) nas taxas de eclosão para os blastocistos de Mus domesticus domesticus vitrificados nas soluções crioprotetoras contendo 9,0M de EG com ou sem o acréscimo de 0,3M de SACAbstract: Three experiments were carried out in order to evaluate the in vitro development of Mus domesticus domesticus (CF1 x SWISS) blastocysts cultured from one-cell embryos after exposition and vitrification in a cryoprotectant solution composed of 9.0M EG additioned or no of 0.3M SAC. In the first experiment, after the culture of 755 one-cell embryos, were observed the hatching rates of 53.0% for HTF medium and 61.7% for KSOM medium (P>0.05) supplemented with 4mg/ml BSA + 20 and 25mM HEPES, respectively. In the second experiment were evaluated the capacity of the embryos to hatching after exposition to the cryoprotectant solutions proposed (VS1 = 1.8M EG in PBS + 6% BSA (120s) followed by 9.0M EG in PBS + 6% BSA and VS2 = 9.0M EG + 0.3M SAC in PBS + 6% BSA). First the embryos were cultured from one-cell to blastocyst stage and after 152 blastocysts were exposed to the vitrification solutions (VS1 and VS2). The exposition don't showed significant difference (P>0.05) among the control (86.0%), VS1 (82.3%) and VS2 (78.4%) groups. In the third experiment 140 blastocysts cultured for 72h in KSOM with 4mg/ml BSA + 25mM HEPES were vitrified in 0.25ml modified straws (OPSm) in the cryoprotectant solutions previously described, reaching hatching rates of 45.7 and 41.4% in VS1 and VS2 (P>0.05), respectively. Then, it was concluded that both, HTF and KSOM + BSA and HEPES produced a complete in vitro preimplantation embryos development.. However, the embryos cultured in KSOM medium showed a homogeneous growing curvature and higher hatching rates, which can be another alternative for culture of one-cell embryos. Equally, there were no differences (P>0.05) in the hatching rates between Mus domesticus domesticus vitrifed blastocysts in cryoprotectant solutions containing 9.0M EG with or without the addition of 0.3M SA

Efeito da época do ano na transferência de embriões em vacas holandesas superovuladas com PMSG

Estudou-se a influência de fatores sazonais na performance de 21 vacas da raça Holandesa submetidas a 37 superovulações com 3.000 U.I. de PMSG. Os resultados das transferências de embriões foram analisados segundo o efeito da época do ano: chuvosa (outubro a março) com temperatura máxima média = 30,0 ± 0,8ºC e precipitação pluviométrica mensal = 153,1 ± 78,8 mm³ e seca (abril a setembro) com temperatura máxima média = 26,5 ± 1,6ºC e precipitação pluviométrica mensal = 59,2 ± 53,8 mm³. Registrou-se variação climática entre as estações (P;0,05) entre épocas do ano quando foi comparado o número médio de estruturas por superovulação (5,4 ± 2,63 e 4,3 ± 4,00), o percentual de embriões viáveis (50,0% e 57,6%) e o percentual de prenhezes obtidas: 44,4% e 35,2%, respectivamente. Concluiu-se, portanto, que as diferentes condições climáticas das épocas do ano não influíram nas transferências de embriões em vacas holandesas superovuladas com PMSG

Cultivo in vitro de embriões Mus domesticus domesticus do estádio de 1-célula a blastocisto eclodido

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