NLR family pyrin domain containing 3 (NLRP3) and caspase 1 (CASP1) modulation by intracellular Cl– concentration

The impairment of the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) activity induces intracellular chloride (Cl–) accumulation. The anion Cl–, acting as a second messenger, stimulates the secretion of interleukin-1β (IL-1β), which starts an autocrine positive feedback loop. Here, we show that NLR family pyrin domain containing 3 (NLRP3) and caspase 1 (CASP1) are indirectly modulated by the intracellular Cl– concentration, showing maximal expression and activity at 75 mM Cl–, in the presence of the ionophores nigericin and tributyltin. The expression of PYD and CARD domain containing (PYCARD/ASC) remained constant from 0 to 125 mM Cl–. The CASP1 inhibitor VX-765 and the NLRP3 inflammasome inhibitor MCC950 completely blocked the Cl–-stimulated IL-1β mRNA expression and partially the IL-1β secretion. DCF fluorescence (cellular reactive oxygen species, cROS) and MitoSOX fluorescence (mitochondrial ROS, mtROS) also showed maximal ROS levels at 75 mM Cl–, a response strongly inhibited by the ROS scavenger N-acetyl-L-cysteine (NAC) or the NADPH oxidase (NOX) inhibitor GKT137831. These inhibitors also affected CASP1 and NLRP3 mRNA and protein expression. More importantly, the serum/glucocorticoid regulated kinase 1 (SGK1) inhibitor GSK650394, or its shRNAs, completely abrogated the IL-1β mRNA response to Cl– and the IL-1β secretion, interrupting the autocrine IL-1β loop. The results suggest that Cl– effects are mediated by SGK1, in which under Cl– modulation stimulates the secretion of mature IL-1β, in turn, responsible for the upregulation of ROS, CASP1, NLRP3 and IL-1β itself, through autocrine signalling.Fil: Clauzure, Mariangeles. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; Argentina. Universidad Nacional de La Pampa; ArgentinaFil: Valdivieso, Ángel Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaFil: Dugour, Andrea Vanesa. Fundación Pablo Cassará; ArgentinaFil: Mori, Consuelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaFil: Massip Copiz, María Macarena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaFil: Aguilar, María Á.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaFil: Sotomayor, Veronica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaFil: Asensio, Cristian Jorge Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; ArgentinaFil: Figueroa, Juan M.. Fundación Pablo Cassará; ArgentinaFil: Santa Coloma, Tomás Antonio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia. Instituto de Ciencias Biológicas y Biomédicas del Sur; Argentin

Adelante / Endavant

Séptimo desafío por la erradicación de la violencia contra las mujeres del Institut Universitari d’Estudis Feministes i de Gènere "Purificación Escribano" de la Universitat Jaume

Towards an integrative bioinformatic and bibliometric analysis of C23/NCL post-translational modifications diversity. data curation by implications on molecular size, folding, trafficking, interactions, functions and unconventional secretion

C23/NCL has multiple domains, PTMs, polyanionic stretches, repeats, functions and subcellular locations and without signal peptide is enriched on cancer cells surface acting as co-receptor, alarmin, etc. Its study is also difficulted by lack of full-length C23 expression in bacteria. C23 integrates multiple aspects of DNA and RNA metabolism and cell cycle/metabolism and senses environmental cues in cell surface, cytosol and nucleus. Its diverse PTMs coordinate interactions with proteins, nucleic acids, carbohydrates, cations, LPS and lipids as well as the trafficking from nucleolus to nucleoplasm, cytosol, microtubules, vesicles, membrane and back again. It is unconventionally secreted, clustering on membranes with receptors, extracellular factors, matrix, cations and pathogens. Most steps on its trafficking, interaction partners, or if the diverse PTMs are hierarchical and/or alternative are unclear. Understanding mechanisms should help testing anti-C23 drugs to prevent viruses/bacteria entry, to target cancer and for diagnostics. Articles have dispersed on different roles and cells, so bibliometric/bioinformatic approaches might help better in making sense on PTMs diversity. Thus, we aimed to recollect C23 PTMs from several databases, curating data by impacts on subcellular location, functions/interactomes, frequency, etc. We detected ~180 PTMs (some alternative) involving phosphoryl, acetyl, succinyl, ubiquitin, sumo, glycosyl, NO and methyl groups plus cleavage. Enzyme crosstalk data and 7 known PTMs were absent. We conclude that a curated PTM database might help in experiment and drug design and in knowledge gap identification. Studies are needed on: a) expansion of sequence/folding diversity by cleavage, isomerization, oligomerization and charge density, b) finding PTMs in cytosolic C23 as markers of shuttling to or from membranes, c) interaction motif identification, d) modeling impacts on folding, e) searching any PTM-code and epigenetic/signaling roles.Fil: Asensio, Cristian Jorge Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaLXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; LXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 3° Congreso Franco-Argentino de Inmunología; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de FisiologíaMar del PlataArgentinaSociedad Argentina de Investigación ClínicaSociedad Argentina de InmunologíaSociedad Argentina de Fisiologí

Mycobacterium avium infection-induced changes in cytosolic protein phosphorylation of THP-1 macrophages

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Epidermal growth factor receptor activity upregulates lactate dehydrogenase a expression, lactate dehydrogenase activity, and lactate secretion in cultured ib3-1 cystic fibrosis lung epithelial cells

Cystic fibrosis (CF) is caused by mutations in the CFTR gene. It has been postulated that a reduced HCO3 − transport in CF through CFTR may lead to a decreased airway surface liquid (ASL) pH. In contrast, others have reported no changes in the extracellular pH (pHe). We have recently reported that in carcinoma Caco-2/pRS26 cells (shRNA for CFTR) or CF lung epithelial IB3-1 cells, the CFTR failure decreased mitochondrial Complex I activity due to an autocrine IL1B loop, and increased lactic acid production. The secreted lactate accounted for the reduced pHe since oxamate fully restored the pHe. These effects were attributed to the IL-1β autocrine loop and the downstream signaling kinases c-Src and JNK. Here we show that the pHe of IB3-1 cells can be restored to normal pHe values (~7.4) by incubation with the epidermal growth factor receptor (EGFR, HER1, ErbB1) inhibitors AG1478 or PD168393. The inhibitor PD168393, fully restored the pHe values of IB3-1 cells, suggesting that the reduced pHe is mainly due to the increased EGFR activity and lactate. Also, in IB3-1 CF cells, the LDHA mRNA, protein expression, and activity are down-regulated under EGFR inhibition. Thus, a constitutive EGFR activation seems to be responsible for the reduced pHe in IB3-1 CF cells.La fibrose kystique (FK) est causée par des mutations dans le gène CFTR. Il a été postulé qu’un transport réduit du HCO3– à travers le CFTR dans la FK pourrait entraîner une diminution du pH du liquide à la surface des voies respiratoires. En revanche, d’autres chercheurs n’ont signalé aucune modification du pH extracellulaire (pHe). Les auteurs ont récemment signalé que dans les cellules de carcinome Caco-2/pRS26 (shARN pour le CFTR) ou les cellules d’épithélium pulmonaire de FK IB3-1, la défaillance du CFTR diminuait l’activité du complexe I mitochondrial en raison d’une boucle autocrine impliquant l’IL-1β et d’une augmentation de la production d’acide lactique. Le lactate sécrété expliquait la réduction du pHe, puisque l’oxamate rétablissait complètement le pHe. Ces effets ont été attribués à la boucle autocrine de l’IL-1β et aux kinases de signalisation c-Src et JNK agissant en aval. Ils montrent ici que le pHe des cellules IB3-1 peut être ramené à des valeurs normales (∼7,4) par une incubation avec les inhibiteurs AG1478 ou PD168393 du récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR, HER1, ErbB1). L’inhibiteur PD168393 rétablissait entièrement les valeurs du pHe des cellules IB3-1, ce qui suggère que la réduction du pHe est principalement due à l’augmentation de l’activité de l’EGFR et au lactate. De plus, dans les cellules de FK IB3-1, l’ARNm de la LDHA, l’expression et l’activité de la protéine sont régulées à la baisse par l’inhibition de l’EGFR. Ainsi, une activation constitutive de l’EGFR semble être responsable de la réduction du pHe dans les cellules de FK IB3-1.Fil: Massip Copiz, María Macarena. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Valdivieso, Ángel Gabriel. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Clauzure, Mariangeles. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Mori, Consuelo. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Asensio, Cristian Jorge Alejandro. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Aguilar, María. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Santa Coloma, Tomás Antonio. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentin

Impairment of CFTR activity in cultured epithelial cells upregulates the expression and activity of LDH resulting in lactic acid hypersecretion

Mutations in the gene encoding the CFTR chloride channel produce cystic fbrosis (CF). CF patients are more susceptible to bacterial infections in lungs. The most accepted hypothesis sustains that a reduction in the airway surface liquid (ASL) volume favor infections. Alternatively, it was postulated that a reduced HCO3 − transport through CFTR leads to a decreased ASL pH, favoring bacterial colonization. The issue is controversial, since recent data from cultured primary cells and CF children showed normal pH values in the ASL. We have reported previously a decreased mitochondrial Complex I (mCx-I) activity in cultured cells with impaired CFTR activity. Thus, we hypothesized that the reduced mCx-I activity could lead to increased lactic acid production (Warburg-like efect) and reduced extracellular pH (pHe). In agreement with this idea, we report here that cells with impaired CFTR function (intestinal Caco-2/pRS26, transfected with an shRNA-CFTR, and lung IB3-1 CF cells) have a decreased pHe. These cells showed increased lactate dehydrogenase (LDH) activity, LDH-A expression, and lactate secretion. Similar efects were reproduced in control cells stimulated with recombinant IL-1β. The c-Src and JNK inhibitors PP2 and SP600125 were able to increase the pHe, although the diferences between control and CFTR-impaired cells were not fully compensated. Noteworthy, the LDH inhibitor oxamate completely restored the pHe of the intestinal Caco-2/pRS26 cells and have a signifcant efect in lung IB3-1 cells; therefore, an increased lactic acid secretion seems to be the key factor that determine a reduced pHe in these epithelial cells.Fil: Valdivieso, Ángel Gabriel. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Clauzure, Mariangeles. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Massip Copiz, María Macarena. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Cancio, Carla Estefania. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Asensio, Cristian Jorge Alejandro. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Mori, Consuelo. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; ArgentinaFil: Santa Coloma, Tomás Antonio. Pontificia Universidad Católica Argentina "Santa María de los Buenos Aires". Instituto de Investigaciones Biomédicas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas; Argentin

Outer membrane vesicles obtained from Bordetella pertussis Tohama expressing the lipid a deacylase PagL as a novel acellular vaccine candidate

In an effort to devise a safer and effective pertussis acelullar vaccine, outer membrane vesicles (OMVs) were engineered to decrease their endotoxicity. The pagL gene from Bordetella bronchiseptica, which encodes a lipid A 3-deacylase, was expressed in Bordetella pertussis strain Tohama I. The resulting OMVs, designated OMVsBpPagL, contain tetra- instead of penta-acylated LOS, in addition to pertussis surface immunogens such as pertactin and pertussis toxin, as the wild type OMVs. The characterized pertussis OMVsBpPagL were used in murine B. pertussis intranasal (i.n.) challenge model to examine their protective capacity when delivered by i.n. routes. Immunized BALB/c mice were challenged with sublethal doses of B. pertussis. Significant differences between immunized animals and the PBS treated group were observed (p < 0.001). Adequate elimination rates (p < 0.005) were observed in mice immunized either with OMVsBpPagL and wild type OMVs. All OMV preparations tested were non toxic according to WHO criteria; however, OMVsBpPagL displayed almost no weight loss at 3 days post administration, indicating less toxicity when compared with wild type OMVs. Induction of IL6- and IL1-expression in lung after i.n. delivery as well as neutrophil recruitment to airways showed coincident results, with a lower induction of the proinflammatory cytokines and lower recruitment in the case of OMVsBpPagL compared to wild type OMVs. Given their lower endotoxic activity and retained protective capacity in the mouse model, OMVsBpPagL obtained from B. pertussis seem as interesting candidates to be considered for the development of novel multi-antigen vaccine.Fil: Asensio, Cristian Jorge Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Gaillard, María Emilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Moreno, Griselda Noemí. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Laboratorio de Investigaciones del Sistema Inmune; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bottero, Daniela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Zurita, Maria Eugenia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Rumbo, Martín. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Departamento de Ciencias Biológicas. Laboratorio de Investigaciones del Sistema Inmune; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: van der Ley, Peter. Netherlands Vaccine Institute; Países BajosFil: van der Ark, Arno. Netherlands Vaccine Institute; Países BajosFil: Hozbor, Daniela Flavia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Exactas. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; Argentin