Detección de mutaciones en los genes K-ras, H-ras y EGFR en muestras de plasma sanguíneo y cepillado cervical de pacientes con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) III y cáncer de cuello uterino

Introduction: Cervical cancer is the second most important cancer in women worldwide, and the second cause of cancer death in women. It has been shown that the process of cervical carcinogenesis presents as genetic and epigenetic components as environmental issues. At present, many studies are addressed in searching for molecular markers such as mutations in oncogenes and/or tumor suppressor genes that are associated with the progression of this disease, the most studied candidate genes in cervical cancer in different populations have been H-ras, K-ras, EGFR among others. Objective: The present study identified human papilloma virus (HPV) generic and specific in DNA-free plasma and cervical smears of invasive cervical cancer patients and patients with cervical intraepithelial neoplasia (CIN) III in addition to assessing genetic alterations, such as mutations in the genes H-ras, EGFR and K-ras. Methods: To do so generic HPV was detected by PCR with primers GP5+/GP6+, and specific HPV 16 and 18 in E6/E7 region; to detect mutations in codon 12 of H-ras, codons 12 and 13 of K-ras and EGFR exon 21 was conducted by direct sequencing of PCR products of these gene fragments. Results: Getting a good correlation between samples of blood plasma and cervical smears for both; the findings of HPV p=0.0374 and evaluated mutations p=0. In general, for EGFR in exon 21 mutations were not found, as for codons 12 and 13 in K-ras and codon 12 in H-ras. Conclusion: The use of DNA in plasma may be relevant to the analysis of mutations and the presences of tumor markers are not available from other samples. Introducción: El cáncer cervical es el segundo cáncer más importante en mujeres a nivel mundial y la segunda causa de muerte en mujeres por cáncer. Se ha demostrado que el proceso de carcinogénesis cervical presenta componentes tanto genéticos, epigenéticos y medio ambientales. En la actualidad, muchos estudios se encaminan en la búsqueda de marcadores moleculares como mutaciones en oncogenes y/o genes tumor supresor que se asocien con la progresión de esta entidad. Los genes candidatos más estudiados en cáncer cervical en distintas poblaciones han sido H-ras, K-ras, EGFR entre otros. Objetivos: Se identificó el virus de papiloma humano (VPH) genérico y específico en el ADN libre de plasma y de cepillado cervical de pacientes con cáncer cervical invasivo y con neoplasia intraepitelial cervical (NIC) III además de evaluar alteraciones genéticas, como mutaciones en los genes H-ras, K-ras y EGFR. Metodología: Para ello se detectó el VPH genérico mediante PCR con los iniciadores GP5+/GP6+, y específico para VPH 16 y 18 en la región E6/E7. Para detectar las mutaciones en el codón 12 de H-ras, codones 12 y 13 de K-ras y el exón 21 de EGFR se realizó mediante secuenciación directa de los productos de PCR de estos fragmentos génicos. Resultados: Obteniendo una buena correlación entre las muestras de plasma sanguíneo y los cepillados cervicales, tanto para los hallazgos de VPH p=0.0374 como para las mutaciones evaluadas p=0. En general, para EGFR en el exón 21 no se encontraron mutaciones, al igual que para los codones 12 y 13 en K-ras y codón 12 en H-ras. Conclusión: El uso del ADN presente en el plasma puede ser relevante para el análisis de mutaciones y de la presencia de marcadores tumorales cuando no se dispone de otras muestras

Integración viral y cáncer de cuello uterino

El cáncer de cuello uterino (CCU) constituye un problema generalizado de salud que ocupa el segundo lugar a nivel mundial entre las neoplasias malignas de la mujer.  Las infecciones persistentes con virus del papiloma humano (VPH) de alto riesgo son reconocidas actualmente como un factor necesario en el desarrollo de CCU y sus lesiones precursoras. Uno de los procesos que parece estar más involucrado en el origen de las células malignas, es el evento de integración del virus al genoma del huésped, relacionado también con la progresión de lesiones preinvasivas y el mantenimiento del fenotipo transformado. Estos eventos de integración, especialmente de VPH tipo 16 se dan en secuencias específicas del genoma viral, principalmente en su región E1/E2, interrumpiendo la secuencia y permitiendo que exista desregulación de las actividades de transcripción, conduciendo a la sobreexpresión de las oncoproteínas virales E6 y E7 que normalmente inactivan genes supresores de tumores, como p53 y pRb, responsables del control en importantes puntos de chequeo del ciclo celular. Actualmente el proceso de integración viral, es considerado como una alteración genética importante que caracteriza las displasias malignas, con potenciales aplicaciones como marcador de progresión de lesiones precursoras y herramienta de diagnóstico.Cervical cancer is the second most prevalent cancer worldwide and is the second leading cause of cancer deaths in women. Persistent infection with high-risk human papillomaviruses (HPVs) types are the causative agents of cervical cancer, since 99% of tumors are positive for HPV DNA, HPV is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide. One of the key events of HPV-induced carcinogenesis is the integration of the HPV genome into a host chromosome, related with precancerous lesions progression. Integration follows a more specific pattern with respect to the HPV genome, expression of the viral E6 and E7 genes is consistently maintained, whereas other positions of the viral DNA are deleted or their expression is disturbed, like E2 gene. Loss of expression of the HPV E2 transcriptional repressor is significant and may be critical for malignant progression, as it may result in increased HPV E6 and E7 expression. The HPV E6 and E7 oncoproteins inactivate the p53 and pRB tumor suppressors; expression of high-risk HPV E6/E7 oncogenes provides a subset of the minimally required carcinogenic hits for full transformation of human epithelial cells. There is also evidence for deregulated HPV-16 E6-E7 mRNA stability after integration and specific alterations of host cellular gene expression have been detected upon HPV genome integration. Currently, integration of HPV is considered to be an important genetic alteration for the progression of intraepithelial lesions to invasive disease with potential clinical applications like mark tumour progression and diagnostic tool

Revisión sobre el hongo microcyclus ulei, agente causal del mal suramericano de la hoja del caucho

El hongo ascomycete Microcyclus ulei es el agente causal del SALB que es una de las enfermedades más importan­tes del árbol de caucho natural (Hevea brasiliensis) en América Latina y ha sido responsable de numerosas pérdidas económicas. Este hongo ha presentado alta variabilidad fisiológica y se sugiere su alta adaptabilidad, dentro de los mecanismos asociados a su virulencia se ha descrito la tolerancia al HCN. Se han obtenido clones de Hevea resistentes mediante mejoramiento genético, sin embargo, aun no son bien conocidos los mecanismos asociados a ésta. Un mayor conocimiento de este patógeno permitirá el desarrollo de nuevas estrategias de control así como el mayor entendimiento de los mecanismos asociados a resistencia del hospedero. Palabras clave: Microcyclus ulei, SALB, Hevea brasiliensis.The Microcyclus ulei Ascomycetes fungus is the causal agent of south-American leaf blight (SALB), this being one of the most important diseases affecting the natural rubber tree (Hevea brasiliensis) in Latina-America and has been responsible for numerous economic losses. This fungus has presented high physiological variability, suggesting its great adaptability. HCN tolerance has been described as being one of the mechanisms associated with its virulence. Resistant Hevea clones have been obtained by genetic improvement; however, the mechanisms associated with this are still not well known. Greater knowledge of this pathogen will lead to developing new control strategies and better understanding of the mechanisms associated with host resistance. Key words: Microcyclus ulei, SALB, Hevea brasiliensis

Development and validation of a taqman multiplex pcr assay for the gene dosage quantification in cancer

Gene dosage tests are very important for the molecular diagnosis of diseases caused by either deletion or amplification of a specific DNA region containing certain genes. Changes in gene copy number may lead to under- or over expression of genes responsible for the disease phenotype. Discovering these defects and understanding their biological meaning can lead to improved therapeutic opportunities in cancer. Fluorescent in situ hybridization (FISH) still remains the gold standard method for gene dosage analysis. However have several limitations since locus specific probes are expensive, the procedure is significantly time-consuming and tandem microduplications may be undetected as a result of the limited resolution on metaphase spreads. Quantitative Real-time PCR is a rapid assay with results available in 24h, has advantages in terms of sensitivity and specificity. In the present study, we have developed an assay using TaqManTM multiplex Real-time PCR for gene dosage analysis of oncogenes EGFR, ERBB2, AKT2, CMYC, MYCN, MYCL1, PI3KCA and REL in human cell lines. This method calculates the copy number of each oncogen and is a promising alternative technique to FISH and Southern blot. Therefore, this technique could be considered as a powerful method gene dosage quantitation in clinical and research genetic surveys.La evaluación de la dosis génica constituye una herramienta importante para el diagnóstico molecular de enfermedades causadas tanto por la pérdida o amplificación de una región específica de ADN. El cambio en el número de copias génicas, puede conllevar a la pérdida o sobreexpresión de los genes responsables de fenotipo de la enfermedad. El descubrimiento de estas alteraciones y la comprensión de su significado biológico pueden conducir al incremento de las oportunidades terapéuticas en cáncer. La hibridación fluorescente in situ (FISH) es el método de referencia para el análisis de la dosis génica “amplificación”. Sin embargo, presenta algunas limitaciones relacionadas con el costo de las sondas locus específicas; el procedimiento es demorado y las microduplicaciones en tándem podrían no ser detectadas como resultado de la limitada resolución de las metafases. En este sentido, la PCR cuantitativa es una metodología rápida y tiene ventajas en términos de sensibilidad y especificidad. En el presente estudio, se estandarizó la PCR multiplex en tiempo real para el análisis de la dosis génica de los oncogenesEGFR, ErbB2, AKT2, cMYC, MYCN, MYCL1, PI3KCA y REL en líneas celulares tumorales humanas, como una técnica alternativa al FISH para evaluar la dosis génica en muestras clínicas de cáncer

Amplificación oncogénica como marcador tumoral en un grupo de pacientes con cáncer pulmonar

Introduction: In spite of recent treatment advances, lung cancer continues to be the first world cancer related death cause; its mortality associated occupied the fifth place in Colombia in 2004. Complete surgical resection is the therapeutic option with the greatest cure probability, however it results frequently ineffective given the current incapacity in Colombia to an early detection of the disease. This study reports the characterization of a group of 30 lung cancer patients regarding the gene dose (gene copy number) found at the loci corresponding to genes EGFR (erb B1), PIK3CA and C-myc in tumor samples, and compares the results with the dose found in adjacent lung from the same patients. Methods: The gene dose of EGFR (erbB1), PIK3CA, and C-myc were measured by real time PCR in matched tumor and normal lung tissue samples. Results are expressed as the multiplicity of each gene dose with respect to a single copy reference gene. In this case the gene HHB (human hemoglobin). Antiquity of the cases ranged from 5 to 10 years. Results: An increased gene dose for EGFR and PIK3CA was a feature clearly associated to the tumor phenotype of the sample (found in 96 and 100% of the tumors respectively). Quantitative measure of this feature demonstrated for both genes a high sensitivity and specificity for tumor/normal discrimination as confirmed by the ROC analysis. On the other hand, the Spearman test showed a great correlation between EGFR and PIK3CA doses (ρ=0.75). C-myc was the gene whose dose was less consistently correlated to the tumor phenotype, however most of the patients with amplified C-myc presented distant spread of tumor cells (metastasis) at diagnosis. Conclusion: Quantitative measurement of EGFR, PIK3CA, and C-myc gene dose by real time PCR provides a method for tumor phenotype recognition in DNA samples from lung tissue. These markers can be considered at the construction of a marker panel for lung cancer detection on alternative, non-invasive clinical samples. However clinical value will depend on the use of additional molecular markers, some of which could be of epigenetic character. Introducción: A pesar de los avances terapéuticos actuales, el cáncer de pulmón sigue como la primera causa de muerte por cáncer en el mundo, ocupando Colombia el quinto lugar en mortalidad por este tipo de afección en el 2004. La resección quirúrgica total es la alternativa terapéutica con mayores probabilidades de curaciones, pero resulta poco efectiva en el país por la incapacidad actual para detectar tempranamente la enfermedad. Este trabajo informa la caracterización de un grupo de 30 pacientes con cáncer de pulmón con referencia a la dosis génica hallada en los loci correspondientes a los genes EGFR (erb B1), PIK3CA y C-myc en muestras tumorales, comparada con la dosis encontrada en el tejido normal adyacente de los mismos enfermos. Métodos: La dosis génica se midió en cada caso por PCR en tiempo real sobre ADN aislado de tejido tumoral y normal preservado en parafina de cada paciente. Los resultados se expresan como el número de veces que la dosis de cada gen sobrepasa la dosis de un gen de referencia, en este caso el HHB (hemoglobina humana β). El rango de antigüedad de los casos fue de 5 a 10 años. Resultados: Una dosis génica incrementada para los genes EGFR, PIK3CA demostró ser una característica claramente asociada con el fenotipo tumoral (96% y 100% de los tumores respectivamente). La medición cuantitativa de dicho fenómeno demostró en ambos casos gran sensibilidad y especificidad para la discriminación tumor/normal como lo confirma el análisis ROC. Por otro lado, la amplificación simultánea de ambos genes en el mismo paciente fue un hecho observado con alta frecuencia (Spearman=0.75). La dosis de C-myc mostró una asociación menos consistente con el carácter tumoral, sin embargo todos los pacientes con C-myc amplificado presentaron dispersión distante de células tumorales (metástasis). Conclusión: La detección cuantitativa del estado de amplificación de los genes EGFR, PIK3CA y C-myc por PCR en tiempo real provee un medio sensible para reconocer el fenotipo tumoral en muestras de ADN extraído de tejido pulmonar. Estos marcadores podrían considerarse en el desarrollo de sistemas de detección (paneles) orientados a muestras clínicas alternativas como el plasma sanguíneo. Sin embargo, la definición de un panel de marcadores con valor clínico requiere el estudio de marcadores adicionales entre los cuales podrían incluirse algunos de tipo epigenético

EVALUACIÓN DE SEIS SISTEMAS DE SANGRÍA PARA CUATRO CLONES DE Hevea brasiliensis (Willd. ex Adr. de Juss.) Muell.-Arg., EN LA ALTILLANURA COLOMBIANA

The rubber yield of four Hevea brasiliensis (Willd. ex Adr. de Juss.) Muell.-Arg. clones was evaluated on the Colombian high plains in the Meta department: ian 873 and rrim 600 (third year of tapping being done) and pb 260 and gt 1 (first year of tapping). Six tapping systems were used, including a combination of different tapping frequencies (d/4 and d/5), Ethephon concentrations (0%, 2.5%, 3.3% and 5%) and a number of applications per year (4 to 8) were also used depending on the clone. The production figures for one commercial year were obtained from assays, using a completely randomblock design (having four repetitions) independently defined for each clone: having on average 4446 g rubber/tree of produce per year for the rrim 600 clone within a system ½S, d/4, 6d/7, 10m/12, et 2.5%, Pa 7/y; 2696 g rubber/tree for the pb 260 clone with ½S, d/4, 6d/7, 10m/12, et 2.5%, Pa 5/y; 3822 g rubber/tree for the ian 873 clone, ½S, d/4, 6d/7, 10m/12, et 3.3%, Pa 8/y, and 3472 g rubber/ tree for the gt 1 clone, ½S, d/4, 6d/7, 10m/12, et 2.5%, Pa 5/y. The highest produce was obtained with a four-day tapping frequency.Este trabajo evaluó el desempeño productivo de cuatro clones de caucho natural (Hevea brasiliensis [Willd. ex Adr. de Juss.] Muell.-Arg.), sometidos a seis diferentes sistemas de sangría, los cuales incluyeron la combinación de dos diferentes frecuencias de sangrado cada cuatro y cinco días (d/4 y d/5) y cuatro concentraciones de Ethefon (0%, 2.5%, 3.0% y 5%) con un número de aplicaciones entre 4 a 8 veces por año. Los ensayos se realizaron en la plantación de la empresa mavalle s.a., ubicada en la altillanura colombiana, bajo un diseño de bloques completos al azar con cuatro repeticiones. Se obtuvieron producciones promedio por año de 4446 g de caucho/árbol para el clon rrim 600 en un sistema ½S, d/4, 6d/7, 10m/12, et 2.5%, Pa 7/y; 2696 g de caucho/árbol para el clon pb 260 bajo un sistema ½S, d/4, 6d/7, 10m/12, et 2.5%, Pa 5/y; 3822 g de caucho/árbol para el clon ian 873 en un sistema ½ S, d/4, 6d/7, 10m/12, et 3.3%, Pa 8/y, y 3472 g de caucho/árbol para el clon gt 1 bajo una sistema ½ S, d/4, 6d/7, 10m/12, et 2.5%, Pa 5/y. Se obtuvo la mayor producción en una frecuencia de sangrado cada cuatro días para los clones RRIM 600, gt 1 y pb 260

Primer reporte de susceptibilidad del clon de caucho natural fx-3864 a microcyclus ulei en la altillanura colombiana

First report of susceptibility of natural rubber clone FX-3864 a Microcyclus ulei en la altillanuera colombiana ResumenEl mal suramericano de las hojas (SALB), enfermedad endémica del caucho (Hevea brasiliensis), es causado por Microcyclus ulei (forma imperfecta Fusicladium macrosporum) y constituye el principal limitante del cultivo en América, área donde el microorganismo patógeno es endémico. En forma semejante al de otros cultivos agrícolas, el manejo de esta enfermedad está condicionado a la disponibilidad de resistencia genética en el hospedero. En razón de su productividad y condición de resistencia genética, el clon FX 3864 ha sido ampliamente plantado en zonas con diferente potencialidad epidémica a la incidencia del SALB en Colombia, particularmente las denominadas de “no escape” a la enfermedad. Durante el 2010, plantaciones con el clon FX 3864 en fase productiva presentaron síntomas de SALB en zonas de escape ubicadas en la altillanura colombiana (departamento del Meta). En parcelas trampa ubicadas en áreas aledañas a los cultivos se estableció que la severidad promedio de la enfermedad alcanzó niveles de 5,78% en este clon. Verificada la causalidad de la enfermedad mediante observaciones al microscopio se procedió a confirmar el origen del material sobre el cual se desarrollaban las lesiones, utilizando marcadores moleculares (4 microsatélites específicos). Los resultados de la prueba permitieron confirmar la susceptibilidad del hasta hace poco resistente clon FX 3864 al SALB en Colombia. Se sugiere tomar en consideración la nueva condición de este clon y, en concordancia, reorientar los programas de fomento del cultivo advirtiendo a los agricultores sobre los riesgos potenciales de ocurrencia de la enfermedad en las nuevas áreas programadas. Palabras clave: SALB, Hevea brasiliensis, Fusicladium macrosporum, cultivo de caucho. AbstractSouth American Leaf Blight (SALB), caused by Microcyclus ulei (anamorph Fusicladium macrosporum), is an endemic major disease of the rubber tree (Hevea brasiliensis) in America. As well as in other crop systems, its management on rubber plantations relies on plant genetic resistance availability, among other means. FX 3864 is a rubber tree clone widely planted in Colombia due to its production capability and disease resistance. During 2010 SALB symptoms developed in commercial crops at the Meta region of Colombia. Crop traps located nearby the plantations showed mean disease severity levels of 5.78%. Once the causal organism was microscopically confirmed as responsible for the diseased tissue, their origin was characterized by molecular means using 4 microsatellites specific to the rubber tree. The procedure confirmed that FX 3864 was the clone of origin of the leaf tissue. SALB occurring over FX 3864 implies the need to redirect crop disease management measures to be followed on the new development areas of rubber cultivation, warning growers about potential hazards of disease incidence. Key words: SALB, Hevea brasiliensis, Fusicladium macrosporum, rubber crop

Efecto citotóxico de algunos compuestos naturales aislados de plantas Laureaceae y derivados sintéticos

Introduction. The antiproliferative effect of eleven neolignans, two lignans and one diterpene isolated from three Lauraceae plants, four benzofurans and two bicyclooctanes synthetic derivatives was evaluated in vitro on a set of five human cancer cells from solid tumors with a high incidence in Colombia.Objective. To evaluate the cytotoxic effect of twenty compounds on the tumor cell lines HeLa, A-549, Hep-2, PC-3, and MCF-7.Materials and methods. Fourteen natural compounds were isolated by chromatographic techniques from three native colombian plants (Pleurothyrium cinereum, Ocotea macrophylla and Nectandra amazonum), whose structures were established by spectroscopic methods; six synthetic derivatives were prepared by oxyarylation and diazomethane methylation. Antiproliferative effect and cell recovery were performed by means of in vitro treatment of tumor cell lines with test compounds, evaluating cell viability by resazurin staining.Results. Among test compounds, only neolignans ocophyllal A, cinerin D, kaurenoic acid, two benzofuran-derivatives, and synthetic (-)-cinerin A were found to have antiproliferative effect at different levels. Bicyclooctanoids as well as kaurenoic acid exhibited activity against all human cancer cells while benzofuranoids showed selective activity against HeLa. Furthermore, compounds (-)-cinerin A and kaurenoic acid exhibited total lethal effect against all-five cell lines and PC-3, Hep-2, and A549 cell lines, respectively.Conclusion. Test compounds exhibiting antiproliferative activity showed interesting results, which would promote their use as lead compounds on further studies for anticancer agents development.Introducción. El efecto contra la proliferación celular de once neolignanos, dos lignanos y un diterpeno, aislados de tres plantas de la familia Lauraceae, y cuatro benzofuranos y dos biciclooctanos sintéticos, fue evaluado in vitro sobre cinco líneas celulares derivadas de tumores sólidos de alta incidencia en Colombia.Objetivo. Evaluar el efecto citotóxico de veinte compuestos sobre las líneas tumorales HeLa, A-549, Hep-2, PC-3 y MCF-7.Materiales y métodos. Los 14 compuestos de origen natural fueron aislados de tres plantas nativas colombianas (Pleurothyrium cinereum, Ocotea macrophylla y Nectandra amazonum) por técnicas cromatográficas y se establecieron sus estructuras por métodos espectroscópicos, y los seis derivados sintéticos fueron preparados mediante reacción de oxiarilación y metilación con diazometano. El efecto contra la proliferación y la recuperación celular se hicieron mediante tratamiento in vitro de las líneas tumorales con los compuestos , evaluando la viabilidad celular por tinción con resazurina.Resultados. Entre los compuestos evaluados, solamente ocofilal A, cinerina D, ácido kaurenoico, dos benzofuranos y la (-)-cinerina A sintética presentaron actividad contra la proliferación celular en diferentes niveles. Los biciclooctanos, así como el ácido kaurenoico, fueron activos contra todas las líneas celulares, mientras que los benzofuranoides mostraron actividad selectiva contra HeLa. Además, la (-)-cinerina A exhibió un efecto letal total contra todas las líneas celulares, mientras que el ácido kaurenóico presentó efecto letal total contra PC-3, Hep-2 y A549.Conclusión. Los compuestos evaluados que exhibieron actividad contra la proliferación celular mostraron resultados interesantes, lo cual sugiere su potencial uso como cabezas de serie o moléculas plantilla en el desarrollo de agentes anticancerígenos

Análisis bioinformático y predicción de genes en secuencias genómicas de clostridium sp. ibun22a

Este trabajo tuvo como propósito identificar secuencias de genes en clones obtenidos en una librería genómica de la cepa colombiana de Clostridium sp. IBUN 22A. Los insertos de nueve clones con tamaæos superiores a 500 pb fueron secuenciados y analizados por medio de bÅ“squedas de los insertos completos o de sus marcos abiertos de lectura (ORFs) traducidos en GenBank 141.0 y Uniprot 6.6 con BLAST 2.2.8. Se identificaron seis genes con alta similaridad a genes de metabolismo bÆsico (housekeeping) en diferentes especies de Clostridium. En el clon pBsIBUN22A-1 se localizó una secuencia de 851 pb con una identidad del 99.74% respecto al gen codificante de la enzima glicerol deshidratasa (DhaBl) de Clostridium butyricum (AY968605) involucrada en la producción de 1,3 Propanodiol (1,3-PD). La identifica­ción de genes presentes en la cepa nativa Clostridium IBUN 22A abre la puerta a la investigación básica y a la ingeniería metabólica para hacer más rentable el proceso de producción de 1,3-PD junto al conocimiento de los genes presentes en la cepa nativa. Palabras clave: análisis de secuencias, librería genómica, Clostridium, glicerol deshidratasa, 1,3-propanodiol.This work was aimed at identifying gene sequences in recombinant clones obtained from a genomic library from the Colombian Clostridium sp. IBUN 22A native strain. Nine clones greater than 500 bp were sequenced and analysed using BLAST 2.2.8 to search for complete inserts or their translated open reading frames (ORFs) in GenBank 141.0 and Uniprot 6.6. Seven genes having high similarity to housekeeping genes from different Clostridium species were identified. An 851 bp sequence was located in the pBsIBUN22A-1 clone, having 99.74% identity with the gene encoding the Clostridium butyricum enzyme glycerol dehydratase (DhaBl) which is involved in 1,3-propanediol (1,3-PD) production. Identifying genes in the native IBUN 22A strain formed the starting point for basic research and metabolic engineering aimed at making 1,3-PD production more profitable and increasing knowledge of genes present in the native strain. Key words: glycerol dehydratase, 1,3-propanediol, genomic library, Clostridium, sequence analysis