Caracterización, diseño y producción recombinante de bacteriocinas y otros péptidos antimicrobianos, secuenciación genómica y efecto en la microbiota de péptidos bioactivos producidos por enterococos

El trabajo desarrollado en esta tesis doctoral ha empleado técnicas de microbiología y bioquímica clásicas, así como técnicas recientes de ingeniería genética, genómica y proteómica y describe en capítulos diferenciados, los siguientes objetivos: En el capítulo III, se describe la identificación y caracterización de bacterias lácticas (BAL) aísladas de heces de buitres leonados (Gyps fulvus subesp. fulvus) por su actividad antimicrobiana, genes que codifican bacteriocinas, factores potenciales de virulencia, susceptibilidad a antibióticos, genotipado por las técnicas de ERIC-PCR y MLST y caracterización bioquímica de las bacteriocinas purificadas por MALDI-TOF MS, secuenciación aminoacídica N-terminal por degradación de Edman y secuenciación de novo de las bacteriocinas purificadas por MALDI TOF/TOF MS. De interés ha sido el aislamiento y caracterización de E. faecium M3K31, productor de la enterocina HF (EntHF) y de E. faecalis M3M42, que podría postularse como potencialmente productora de péptidos bioactivos. En el capítulo IV, se describe la clonación y expresión de genes sintéticos que codifican las bacteriocinas de amplio espectro de acción SRCAM 602, OR-7, E-760 y L-1077, previamente descritas por su actividad antimicrobiana frente a bacterias Gram-positivas y Gram-negativas incluyendo Campylobacter spp. y producidas por levaduras recombinantes, derivadas de P. pastoris. No obstante, las levaduras recombinantes no mostraron una actividad antimicrobiana directa y la potencialmente presente en los sobrenadantes de los cultivos productores, sólo pudo evaluarse mediante un procedimiento multicromatográfico de purificación. Sin embargo, el análisis de las fracciones purificadas por MALDI-TOF MS y MALDI TOF/TOF, reveló la presencia en las mismas de fragmentos peptídicos no relacionados con la masa molecular deducida de las bacteriocinas clonadas..

Antifungal Peptides as Therapeutic Agents

peer-reviewedFungi have been used since ancient times in food and beverage-making processes and, more recently, have been harnessed for the production of antibiotics and in processes of relevance to the bioeconomy. Moreover, they are starting to gain attention as a key component of the human microbiome. However, fungi are also responsible for human infections. The incidence of community-acquired and nosocomial fungal infections has increased considerably in recent decades. Antibiotic resistance development, the increasing number of immunodeficiency- and/or immunosuppression-related diseases and limited therapeutic options available are triggering the search for novel alternatives. These new antifungals should be less toxic for the host, with targeted or broader antimicrobial spectra (for diseases of known and unknown etiology, respectively) and modes of actions that limit the potential for the emergence of resistance among pathogenic fungi. Given these criteria, antimicrobial peptides with antifungal properties, i.e., antifungal peptides (AFPs), have emerged as powerful candidates due to their efficacy and high selectivity. In this review, we provide an overview of the bioactivity and classification of AFPs (natural and synthetic) as well as their mode of action and advantages over current antifungal drugs. Additionally, natural, heterologous and synthetic production of AFPs with a view to greater levels of exploitation is discussed. Finally, we evaluate the current and potential applications of these peptides, along with the future challenges relating to antifungal treatments

Draft genome sequence of Bacillus thuringiensis DPC6431, producer of the bacteriocin thuricin CD

We report the draft genome sequence of Bacillus thuringiensis DPC6431, a producer of the anticlostridial bacteriocin thuricin CD and isolated from a human fecal sample. The assembly comprises 96 contigs for a total of 5,581,839 bp, with 32.5% G+C content

Draft genome sequence of the bacteriocinogenic strain Enterococcus faecalis DBH18, isolated from mallard ducks (Anas platyrhynchos)

Here, we report the draft genome sequence of Enterococcus faecalis DBH18, a bacteriocinogenic lactic acid bacterium (LAB) isolated from mallard ducks (Anas platyrhynchos). The assembly contains 2,836,724 bp, with a G+C content of 37.6%. The genome is predicted to contain 2,654 coding DNA sequences (CDSs) and 50 RNAs

Expression, purification and antimicrobial activity of recombinant pediocin PA-1 M31L, a PA-1 derivative with enhanced stability

Meeting presentationPediocin, the prototypical class IIa bacteriocin, is an efficient antilisterial molecule. Loss of pediocin PA-1 activity is attributed to methionine oxidation at position 31 and this can be overcome by substituting methionine for leucine (pediocin M31L). The aim of this study was to produce pediocin M31L with enhanced stability by recombinant expression in E. coli cells

Design of Lactococcus lactis Strains Producing Garvicin A and/or Garvicin Q, Either Alone or Together with Nisin A or Nisin Z and High Antimicrobial Activity against Lactococcus garvieae

Lactococcus garvieae is a main ichthyopathogen in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss, Walbaum) farming, although bacteriocinogenic L. garvieae with antimicrobial activity against virulent strains of this species have also been identified. Some of the bacteriocins characterized, such as garvicin A (GarA) and garvicin Q (GarQ), may show potential for the control of the virulent L. garvieae in food, feed and other biotechnological applications. In this study, we report on the design of Lactococcus lactis strains that produce the bacteriocins GarA and/or GarQ, either alone or together with nisin A (NisA) or nisin Z (NisZ). Synthetic genes encoding the signal peptide of the lactococcal protein Usp45 (SPusp45), fused to mature GarA (lgnA) and/or mature GarQ (garQ) and their associated immunity genes (lgnI and garI, respectively), were cloned into the protein expression vectors pMG36c, which contains the P32 constitutive promoter, and pNZ8048c, which contains the inducible PnisA promoter. The transformation of recombinant vectors into lactococcal cells allowed for the production of GarA and/or GarQ by L. lactis subsp. cremoris NZ9000 and their co-production with NisA by Lactococcus lactis subsp. lactis DPC5598 and L. lactis subsp. lactis BB24. The strains L. lactis subsp. cremoris WA2-67 (pJFQI), a producer of GarQ and NisZ, and L. lactis subsp. cremoris WA2-67 (pJFQIAI), a producer of GarA, GarQ and NisZ, demonstrated the highest antimicrobial activity (5.1- to 10.7-fold and 17.3- to 68.2-fold, respectively) against virulent L. garvieae strains.Sección Dptal. de Nutrición y Ciencia de los Alimentos (Veterinaria)Fac. de VeterinariaTRUEMinisterio de Ciencia, Innovación y Universidades (MCIU)Universidad Complutense de Madrid and Banco de SantanderUniversidad Complutense de Madridpu

Dirección de proyecto en la construcción del edificio Municipal de Oyón

Busca demostrar de manera aplicada el impacto en costo y lograr el éxito de los proyectos implementando los estándares de la Guía del PMBOK®. La aplicación se realiza en el ámbito de la construcción del Edificio Municipal “Ingeniero Alberto Benavides de la Quintana” del distrito y provincia de Oyón. El proyecto consiste en la demolición de la estructura existente donde actualmente viene funcionando la sede provincial y la construcción de una edificación nueva compuesta por un sótano y 4 pisos; 2 escaleras y un ascensor, así como la instalación de servicios básicos de agua, desagüe, instalación eléctrica, teléfono e internet. Los principales interesados son: Autoridades de la Municipalidad Provincial de Oyón, Supervisión Técnica del proyecto, Supervisión Financiera del proyecto - FIDUCIARIA S.A, Consorcio San Nicolás, Pobladores de Oyón y Autoridades del Gobierno Regional.TesisEn proceso de revisió