Caracterización, diseño y producción recombinante de bacteriocinas y otros péptidos antimicrobianos, secuenciación genómica y efecto en la microbiota de péptidos bioactivos producidos por enterococos

Abstract

El trabajo desarrollado en esta tesis doctoral ha empleado técnicas de microbiología y bioquímica clásicas, así como técnicas recientes de ingeniería genética, genómica y proteómica y describe en capítulos diferenciados, los siguientes objetivos: En el capítulo III, se describe la identificación y caracterización de bacterias lácticas (BAL) aísladas de heces de buitres leonados (Gyps fulvus subesp. fulvus) por su actividad antimicrobiana, genes que codifican bacteriocinas, factores potenciales de virulencia, susceptibilidad a antibióticos, genotipado por las técnicas de ERIC-PCR y MLST y caracterización bioquímica de las bacteriocinas purificadas por MALDI-TOF MS, secuenciación aminoacídica N-terminal por degradación de Edman y secuenciación de novo de las bacteriocinas purificadas por MALDI TOF/TOF MS. De interés ha sido el aislamiento y caracterización de E. faecium M3K31, productor de la enterocina HF (EntHF) y de E. faecalis M3M42, que podría postularse como potencialmente productora de péptidos bioactivos. En el capítulo IV, se describe la clonación y expresión de genes sintéticos que codifican las bacteriocinas de amplio espectro de acción SRCAM 602, OR-7, E-760 y L-1077, previamente descritas por su actividad antimicrobiana frente a bacterias Gram-positivas y Gram-negativas incluyendo Campylobacter spp. y producidas por levaduras recombinantes, derivadas de P. pastoris. No obstante, las levaduras recombinantes no mostraron una actividad antimicrobiana directa y la potencialmente presente en los sobrenadantes de los cultivos productores, sólo pudo evaluarse mediante un procedimiento multicromatográfico de purificación. Sin embargo, el análisis de las fracciones purificadas por MALDI-TOF MS y MALDI TOF/TOF, reveló la presencia en las mismas de fragmentos peptídicos no relacionados con la masa molecular deducida de las bacteriocinas clonadas..