Binding of N-terminal fragments of anthrax edema factor (EFN) and lethal factor (LFN) to the protective antigen pore

AbstractAnthrax toxin consists of three different molecules: the binding component protective antigen (PA, 83 kDa), and the enzymatic components lethal factor (LF, 90 kDa) and edema factor (EF, 89 kDa). The 63 kDa C-terminal part of PA, PA63, forms heptameric channels that insert in endosomal membranes at low pH, necessary to translocate EF and LF into the cytosol of target cells. In many studies, about 30 kDa N-terminal fragments of the enzymatic components EF (254 amino acids) and LF (268 amino acids) were used to study their interaction with PA63-channels. Here, in experiments with artificial lipid bilayer membranes, EFN and LFN show block of PA63-channels in a dose, voltage and ionic strength dependent way with high affinity. However, when compared to their full-length counterparts EF and LF, they exhibit considerably lower binding affinity. Decreasing ionic strength and, in the case of EFN, increasing transmembrane voltage at the cis side of the membranes, resulted in a strong decrease of half saturation constants. Our results demonstrate similarities but also remarkable differences between the binding kinetics of both truncated and full-length effectors to the PA63-channel

Cross-Reactivity of Anthrax and C2 Toxin: Protective Antigen Promotes the Uptake of Botulinum C2I Toxin into Human Endothelial Cells

Binary toxins are among the most potent bacterial protein toxins performing a cooperative mode of translocation and exhibit fatal enzymatic activities in eukaryotic cells. Anthrax and C2 toxin are the most prominent examples for the AB(7/8) type of toxins. The B subunits bind both host cell receptors and the enzymatic A polypeptides to trigger their internalization and translocation into the host cell cytosol. C2 toxin is composed of an actin ADP-ribosyltransferase (C2I) and C2II binding subunits. Anthrax toxin is composed of adenylate cyclase (EF) and MAPKK protease (LF) enzymatic components associated to protective antigen (PA) binding subunit. The binding and translocation components anthrax protective antigen (PA(63)) and C2II of C2 toxin share a sequence homology of about 35%, suggesting that they might substitute for each other. Here we show by conducting in vitro measurements that PA(63) binds C2I and that C2II can bind both EF and LF. Anthrax edema factor (EF) and lethal factor (LF) have higher affinities to bind to channels formed by C2II than C2 toxin's C2I binds to anthrax protective antigen (PA(63)). Furthermore, we could demonstrate that PA in high concentration has the ability to transport the enzymatic moiety C2I into target cells, causing actin modification and cell rounding. In contrast, C2II does not show significant capacity to promote cell intoxication by EF and LF. Together, our data unveiled the remarkable flexibility of PA in promoting C2I heterologous polypeptide translocation into cells

Intergroup contact and social change: Implications of negative and positive contact for collective action in advantaged and disadvantaged groups

Previous research has shown that (1) positive intergroup contact with an advantaged group can discourage collective action among disadvantaged-group members and (2) positive intergroup contact can encourage advantaged-group members to take action on behalf of disadvantaged outgroups. Two studies investigated the effects of negative as well as positive intergroup contact. Study 1 (N = 482) found that negative but not positive contact with heterosexual people was associated with sexual-minority students’ engagement in collective action (via group identification and perceived discrimination). Among heterosexual students, positive and negative contact were associated with, respectively, more and less LGB activism. Study 2 (N = 1,469) found that only negative contact (via perceived discrimination) predicted LGBT students’ collective action intentions longitudinally while only positive contact predicted heterosexual/cisgender students’ LGBT activism. Implications for the relationship between intergroup contact, collective action, and social change are discussed

Retrospective evaluation of whole exome and genome mutation calls in 746 cancer samples

Funder: NCI U24CA211006Abstract: The Cancer Genome Atlas (TCGA) and International Cancer Genome Consortium (ICGC) curated consensus somatic mutation calls using whole exome sequencing (WES) and whole genome sequencing (WGS), respectively. Here, as part of the ICGC/TCGA Pan-Cancer Analysis of Whole Genomes (PCAWG) Consortium, which aggregated whole genome sequencing data from 2,658 cancers across 38 tumour types, we compare WES and WGS side-by-side from 746 TCGA samples, finding that ~80% of mutations overlap in covered exonic regions. We estimate that low variant allele fraction (VAF < 15%) and clonal heterogeneity contribute up to 68% of private WGS mutations and 71% of private WES mutations. We observe that ~30% of private WGS mutations trace to mutations identified by a single variant caller in WES consensus efforts. WGS captures both ~50% more variation in exonic regions and un-observed mutations in loci with variable GC-content. Together, our analysis highlights technological divergences between two reproducible somatic variant detection efforts

Privatisierung und staatliche Regulierung: Bahn, Post und Telekommunikation, Rundfunk, Schriftenreihe Verwaltungsorganisation, Staatsaufgaben und Öffentlicher Dienst, Bd. 39

Nomos Verlagsgesellschaft, Baden-Baden 1997 652 Seiten. brosch. DM 98,- ISBN 3-7890-4960-3 Veränderungen der Aufgabenverteilung zwischen Staat und Gesellschaft durch Privatisierung sind Gegenstand tagespolitischer Auseinandersetzungen, aber auch einer fachübergreifenden wissenschaftlichen Diskussion. Der vorliegende Band befaßt sich mit Formen und Inhalten von Privatisierung und ihren Auswirkungen für staatliche Regulierung. Die theoretische Auseinandersetzung durch rechtlich, ökonomisch und politikwissenschaftlich fundierte Überlegungen zur Abgrenzung staatlichen und privaten Handelns wird verbunden mit Fallstudien zu Inhalt und Auswirkungen von Privatisierung in den Bereichen Bahn, Post und Telekommunikation sowie Rundfunk. Die Arbeit ist Ergebnis eines mehrjährigen Forschungsprojektes am Forschungsinstitut für öffentliche Verwaltung in Speyer und schließt an frühere Arbeiten zu Instrumenten und Formen staatlichen Handelns an. Durch die Beteiligung von Wissenschaftlern und Praktikern und die Verbindung disziplinübergreifender theoretischer Überlegungen mit empirischen Studien richtet sich das Buch nicht nur an Wissenschaftler, sondern auch an Praktiker in Politik und Verwaltung sowie Studierende. Inhaltsverzeichnis I. Teil Zusammenhänge von Privatisierung und Regulierung     Klaus König/Angelika Benz 1. Erscheinungsformen der Privatisierung 2. Rahmenbedingungen von Privatisierung und Regulierung 3. Verfassungsrechtliche Kriterien von Privatisierung und Regulierung 4. Marktwirtschaftliche Aspekte von Privatisierung und Regulierung II. Teil Privatisierung und Regulierung in den Bereichen Bahn, Post und Telekommunikation sowie Rundfunk A. Privatisierung und Regulierung im Bereich Bahn 1. Der Prozeß der Privatisierung und Probleme der Regulierung aus der Sicht des Bundesministeriums für Verkehr als oberster Regulierungsbehörde     Axel Holst 2. Privatisierung und Regulierung aus der Sicht des Eisenbahnbundesamtes als Regulierungsbehörde     Hans-Jürgen Kühlwetter 3. Rechtliche Probleme der Regulierung aus der Sicht des betroffenen Unternehmens     Wolfgang Born 4. Rechtliche Probleme der Privatisierung und Regulierung aus der Sicht der Rechtswissenschaften     Michael Ronellenfitsch 5. Möglichkeiten und Grenzen von Privatisierungen im Bereich Bahn aus der Sicht der Wirtschaftswissenschaften     Heike Link 6. Privatisierung und Regulierung der Bahn Angelika Benz B. Privatisierung und Regulierung im Bereich Post/Telekommunikation 1. Grundzüge der Privatisierung und Regulierung im Bereich der Post und Telekommunikation Klaus-Dieter Scheurle 2. Privatisierung und Regulierung aus der Sicht des Bundesamtes für Post und Telekommunikation als Regulierungsbehörde Hans Meierhofer 3. Privatisierung und Regulierung aus der Sicht der Deutschen Post AG als betroffenem Unternehmen Thomas Gerloff 4. Rechtliche Probleme der Privatisierung und Regulierung im Bereich Post und Telekommunikation Joachim Wieland 5. Privatisierung und Regulierung der Telekommunikation aus politikwissenschaftlicher Sicht Volker Schneider 6. Privatisierung und Regulierung im Post- und Fernmeldewesen Angelika Benz C. Privatisierung und Regulierung im Bereich Rundfunk 1. Entwicklung der Privatisierung und Regulierung im Bereich des Rundfunks Reinhold Albert 2. Privatisierung und Regulierung aus der Sicht öffentlich-rechtlicher Programmveranstalter Carl-Eugen Eberle 3. Privatisierung und Regulierung aus der Sicht der Landesmedienanstalten Helmuth Neupert 4. Rechtliche Fragen der Privatisierung und Regulierung des Rundfunks Herbert Bethge 5. Privatisierung und Regulierung des öffentlich-rechtlichen Rundfunks Franz-Xaver Bea 6. Privatisierung und Regulierung im Rundfunk Angelika Benz Teil III. Möglichkeiten und Grenzen von Privatisierung wie Regulierung - grundsätzliche und weiterführende Überlegungen 1. Vom produzierenden zum gewährleistenden Staat: Privatisierung als Veränderung staatlicher Handlungsformen Gunnar F. Schuppert 2. Vom produzierenden zum regulierenden Staat: Möglichkeiten und Grenzen von Regulierung bei Privatisierung Edgar Grande 3. Why Public Joint-Stock Companies? Jan-Erik Lane 4. Privatisierung und staatliche Regulierung - eine Zwischenbilanz Angelika Benz/Klaus König Autorenverzeichni

Einheit und Vielfalt - Verwaltung im Wandel

Am 16. Oktober 1999 fand zu Ehren von Klaus König, der am 21. April 1999 seinen 65. Geburtstag gefeiert hatte, ein Forschungssymposium statt. Nach der Konzeption der Herausgeberinnen Angelika Benz und Natascha Füchtner, die das Symposium koordiniert haben, sollten Personen teilnehmen, die als Mitarbeiter von Klaus König am Lehrstuhl oder unter dem Dach des Forschungsinstituts eine prägende Zeit erfahren haben und ihm seitdem in besonderer Weise verbunden sind. Die Herausgeberinnen waren sowohl am Forschungsinstitut als auch an der Hochschule tätig. Dem Forschungsinstitut für öffentliche Verwaltung bei der Deutschen Hochschule für Verwaltungswissenschaften Speyer ist es eine Freude, die Beiträge in der Reihe der „book“ zu veröffentlichen. Die Ehrung durch das Institut selbst wird traditionsgemäß später erfolgen.Der Verwaltungswissenschaft ist zu wünschen, dass Klaus König, der als Vorgänger des Unterzeichners das Forschungsinstitut von 1996 bis 1999 geleitet hat, seine besondere Fähigkeit, der Verwaltungsforschung ein überzeugendes interdisziplinäres und internationales Profil zu geben, in Speyer noch lange entfalten wird. Davon, dass er seinen Schülern in unterschiedlicher Akzentsetzung die Verwaltungswissenschaft als integrierende Verwaltungstheorie und Realwissenschaft vermittelt hat, mögen die nachfolgenden Beiträge zeugen

Role of N-Terminal His6-Tags in Binding and Efficient Translocation of Polypeptides into Cells Using Anthrax Protective Antigen (PA)

It is of interest to define bacterial toxin biochemical properties to use them as molecular-syringe devices in order to deliver enzymatic activities into host cells. Binary toxins of the AB7/8-type are among the most potent and specialized bacterial protein toxins. The B subunits oligomerize to form a pore that binds with high affinity host cell receptors and the enzymatic A subunit. This allows the endocytosis of the complex and subsequent injection of the A subunit into the cytosol of the host cells. Here we report that the addition of an N-terminal His6-tag to different proteins increased their binding affinity to the protective antigen (PA) PA63-channels, irrespective if they are related (C2I) or unrelated (gpJ, EDIN) to the AB7/8-family of toxins. His6-EDIN exhibited voltage-dependent increase of the stability constant for binding by a factor of about 25 when the trans-side corresponding to the cell interior was set to 270 mV. Surprisingly, the C. botulinum toxin C2II-channel did not share this feature of PA63. Cell-based experiments demonstrated that addition of an N-terminal His6-tag promoted also intoxication of endothelial cells by C2I or EDIN via PA63. Our results revealed that addition of His6-tags to several factors increase their binding properties to PA63 and enhance the property to intoxicate cells

Chloroquine Analog Interaction with C2-and Iota-Toxin in Vitro and in Living Cells

C2-toxin from Clostridium botulinum and Iota-toxin from Clostridium perfringens belong both to the binary A-B-type of toxins consisting of two separately secreted components, an enzymatic subunit A and a binding component B that facilitates the entry of the corresponding enzymatic subunit into the target cells. The enzymatic subunits are in both cases actin ADP-ribosyltransferases that modify R177 of globular actin finally leading to cell death. Following their binding to host cells’ receptors and internalization, the two binding components form heptameric channels in endosomal membranes which mediate the translocation of the enzymatic components Iota a and C2I from endosomes into the cytosol of the target cells. The binding components form ion-permeable channels in artificial and biological membranes. Chloroquine and related 4-aminoquinolines were able to block channel formation in vitro and intoxication of living cells. In this study, we extended our previous work to the use of different chloroquine analogs and demonstrate that positively charged aminoquinolinium salts are able to block channels formed in lipid bilayer membranes by the binding components of C2- and Iota-toxin. Similarly, these molecules protect cultured mammalian cells from intoxication with C2- and Iota-toxin. The aminoquinolinium salts did presumably not interfere with actin ADP-ribosylation or receptor binding but blocked the pores formed by C2IIa and Iota b in living cells and in vitro. The blocking efficiency of pores formed by Iota b and C2IIa by the chloroquine analogs showed interesting differences indicating structural variations between the types of protein-conducting nanochannels formed by Iota b and C2IIa