Optimization and validation of an analytical method for the determination of opiates in urine using microextraction by packed sorbent

Comunicação apresentada no 13º Encontro Nacional de Cromatografia, 2023According to the European Monitoring Centre for Drugs and Drug Addiction (EMCDDA), approximately 1.3 million individuals have used opiates, both for medical and illicit purposes1, presenting a significant public health challenge2,3. To address this issue, methods for quantifying these substances are needed. Urine is a commonly employed matrix in clinical and forensic toxicological analyses due to its ease of collection and ample availability. Its short detection window is particularly effective for monitoring recent drug exposure4,5. This study aimed to optimize a method for determining tramadol, codeine, morphine, 6-acetylmorphine, 6- acetylcodeine, and fentanyl in urine samples (250 μL). The process involved centrifugation, acid hydrolysis, and extraction using microextraction by packed sorbent (MEPS). MEPS offered a rapid, environmentally friendly, and reusable extraction technique6. All parameters that influence the extraction were previously optimized. The method was validated following international guidelines, demonstrating excellent linearity [1 to 1000 ng/mL for all compounds, except for fentanyl (10 to 1000 ng/mL), with coefficients of determination of at least 0.99], and presenting coefficients of variation and bias ≤ 15% for precision and accuracy, except for the lowest calibrator (≤ 20%). Recoveries obtained ranged from 17 to 107%, with lowest percentages for morphine (12 to 17%). Despite the low extraction efficiency obtained for morphine, it was possible to detect concentrations as low as 1 ng/mL for all compounds, except for fentanyl (10 ng/mL). The method was successfully applied to real samples from consumers of these substances. This is the first method to use MEPS and GC-MS/MS for the simultaneous determination of these six opioids in urine samples.N/

Determination of Ketamine and Norketamine in hair samples using MEPS as sample clean-up

Palestra realizada no encontro SoHT-GTFI Joint Meeting, Verona, Junho 2022Introduction and Aim: The use of hair samples to determine ketamine (K) and its metabolite, norketamine (NK), has been studied by several authors, using different clean-up approaches. However, microextraction by packed sorbent (MEPS), a miniaturized form of the classic solid-phase extraction has not been applied to date for the purpose. Therefore, a method to determine K and NK in hair samples was developed, optimized, and validated using MEPS as sample clean-up. Materials & Methods: Hair samples were scissor-cut into small fragments, and rinsed with methanol to remove dirt and externally deposited material. Following an overnight incubation with methanol at 65 ºC (no stirring), the compounds were analysed by GC-MS/MS without the need of derivatization procedures; MEPS conditions were: conditioning (5 x 250 µL of methanol and 4 x 250 µL of deionized water); load (10 x 150 µL of hair extract); washing (50 µL of 0.1% acetic acid and 50 µL of 10% methanol); and elution (100 µL of 3% ammonium hydroxide in methanol). Results & Discussion: The procedure resulted in acceptable recoveries, 39-61% for K and 32-43% for NK, and allowed reaching limits of quantification (LOQs) of 50 pg/mg for both analytes. The analytical method presented acceptable accuracy and precision with coefficients of variation typically lower than 15% and BIAS within ± 15%, except at the LOQ (20%). The method was successfully applied to 2 authentic samples, and ketamine concentrations were below 0.05 and 0.18 ng/mg. Norketamine was not detected. Conclusions: This work is the first analytical method using MEPS coupled to GC-MS/MS for the determination of K and NK in hair samples. Following a comparison with a SPE-based method using authentic samples, it was considered rapid and suitable for routine analysis. Acknowledgments: FCT (UIDB /00709/2020 and UIDP/00709/2020). A.Y. Simão acknowledges the PhD fellowship from FCT (2020.09070.BD).N/

Analysis of opiates in urine using microextraction by packed sorbent and gas Chromatography- Tandem mass spectrometry

Opiates recreational consumption has always been a concern in society, public health, and in clinical toxicology analysis. The aim of this study was to develop and fully validate an analytical method, which was simple and rapid for the determination of tramadol, codeine, morphine, 6- acetylcodeine, 6-monoacetylmorphine and fentanyl using gas chromatography coupled to tandem mass spectrometry. The procedure includes the use of microextraction by packed sorbent for sample clean-up. A mixed mode sorbent was used, allowing the minimal use of solvents. The method was validated in urine samples, with the ability to detect and quantify all analytes with satisfactory linearity (in the range of 1 – 1000 ng/mL for all analytes, except for fentanyl (10–1000 ng/mL)). Extraction efficiency varied from 17 to 107%, which did not impair sensitivity, taking into account the low LLOQs obtained (1 ng/ mL for all analytes; and 10 ng/mL for fentanyl). The developed procedure proved to be fast, selective, and accurate for use in routine analysis, with a low volume of sample (250 µL).info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Determinação de Ketamina e Norketamina em amostras de cabelo por microextração em seringa empacotada e GC-MS/MS

Poster apresentado no 20º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, 5ª Reunião da rede de Serviços médico-legais e Forenses de Língua Portuguesa, Coimbra, 2022As novas substâncias psicoativas (NSP) continuam a representar um desafio considerável para a saúde pública e um problema para a sociedade. A ketamina (KET) é uma destas substâncias. O cabelo tem vindo a ser utilizado como uma matriz complementar à urina e ao sangue nas análises toxicológicas. A microextração em seringa empacotada (MEPS) tem vindo a ser mais utilizada em análises toxicológicas pelas diversas vantagens que apresenta, nomeadamente a redução do uso de solventes, rapidez e possibilidade de reutilização do adsorvente, sendo por isso economicamente mais apelativa que a clássica extração em fase sólida. Neste trabalho apresenta-se o desenvolvimento de um método de clean-up com recurso à MEPS para a determinação de KET e o seu metabolito norketamina (NK) em amostras de cabelo por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massa em tandem (GCMS/ MS)N/

Otimização de uma metodologia por microextração em seringa empacotada e cromatografia gasosa-espetrometria de massa em tandem para a identificação de arilciclohexaminas em amostras de cabelo

Poster apresentado no 12º Encontro Nacional de Cromatografia, Aveiro, dezembro de 2022As novas substâncias psicoativas (NPS) têm vindo a tornar-se um problema cada vez mais um problema de saúde pública. Em Portugal, a ketamina (KET) entrou para a lista de NSP com o Decreto-Lei nº 54/2013. Inicialmente sintetizada com o intuito de substituir a fenciclidina (PCP) como anestésico, acabou por ser usada recreativamente devido aos seus efeitos alucinogénios e estimulantes. Recentemente, a esketamina (análogo da KET) foi introduzida com finalidade terapêutica no tratamento de depressão major refractária a outra terapêutica. Para distinguir o consumo terapêutico do recreativo é necessário que existam métodos que para a sua deteção e quantificação. Neste trabalho foi desenvolvido e otimizado um método para a deteção de KET e seu metabolito (norketamina – NK) em amostras de cabelo com recurso à microextração em seringa empacotada (MEPS) e cromatografia de gases acoplada à espetrometria de massa em tandem (GC-MS/MS). (1) Foi desenvolvido um método analítico para a determinação de KET e NK em amostras de cabelo com recurso à MEPS; (2) A GC-MS/MS foi crucial para deteção inequívoca dos analitos, aumentando a sensibilidade e seletividade do método; (3) As recuperações obtidas são adequadas e foram alcançados LODs baixos (alcançando os cut-offs (0,2 ng/mg) propostos pela Society of Hair Testing) (4) Primeiro método analítico que permite a determinação de KET e NK em amostras de cabelo com recurso a MEPS e GC-MS/MSN/

An Update on the Implications of New Psychoactive Substances in Public Health

Funding: The Associate Laboratory Institute for Health and Bioeconomy–i4HB (project LA/P/0140/2020) which are financed by National Funds from FCT/MCTES. Ana Y. Simão and Mónica Antunes acknowledge the PhD fellowships from FCT (2020.05765.BD). Publisher Copyright: © 2022 by the authors. Licensee MDPI, Basel, Switzerland.The emergence of new psychoactive substances has earned a great deal of attention, and several reports of acute poisoning and deaths have been issued involving, for instance, synthetic opiates. In recent years, there have been profound alterations in the legislation concerning consump-tion, marketing, and synthesis of these compounds; rapid alert systems have also been subject to changes, and new substances and new markets, mainly through the internet, have appeared. Their effects and how they originate in consumers are still mostly unknown, primarily in what concerns chronic toxicity. This review intends to provide a detailed description of these substances from the point of view of consumption, toxicokinetics, and health consequences, including case reports on intoxications in order to help researchers and public health agents working daily in this area.publishersversionpublishe

Desenvolvimento de um método por LC/MS-MS para a determinação de novas substâncias psicoativas e contaminantes de drogas em cabelo

Poster apresentado no 21º Congresso Nacional de Medicina Legal e Ciências Forenses, Lamego, 12-14 de outubro de 2023As novas substâncias psicoativas (NPS) são desenvolvidas para mimetizar os efeitos psicotrópicos das drogas clássicas, e sua presença tem vindo a aumentar no mercado de drogas. Estes compostos são facilmente acessíveis (por exemplo, online) e geralmente não são regulamentados pelas políticas internacionais de drogas. Este trabalho descreve o desenvolvimento de um método sensível e específico por LC-MS/MS para deteção de NPS e contaminantes de crack, nomeadamente: 25C-NBOMe; 25E-NBOH; 25B-Nbome; etilona, mefedrona, UR-144, JWH 073; 5F-MDMB-PINACA; 3-MeO-PCP; 5-MeO-DMT; 2C-I; 2-C-C; cetamina, 3,4-MDPHP; canabidiol; estricnina, levamisole e fenacetina. 10 mg de cabelo foram extraídos com uma solução patenteada contendo metanol, ácido fórmico e acetonitrilo, sendo em seguida submetidos a uma filtração com pressão negativa usando placa de filtragem ISOLUTEâ. A análise foi realizada no sistema SciexTriple Quad 5500 com UPLC ExionLC AD. A separação cromatográfica foi realizada a 40 ºC numa coluna Aqcuity BEH C18 2.1x50mm; 1.7 μm i.d. A fase móvel consistiu em 0,1% de ácido fórmico em água (A) e 0,1% de ácido fórmico em acetonitrilo (B), iniciando com 2% de concentração de B até 95% em 1,5min. Esta proporção foi mantida constante até 2 min e de seguida as condições iniciais do método foram reestabelecidas por mais 0,5 minutos. O tempo total de corrida foi de 2.6 minutos. Os compostos foram ionizados por eletrospray em modo positivo em modo MRM com duas transições por analito para identificar e quantificar os compostos. Os parâmetros de ionização da fonte e de fragmentação foram otimizados para obtenção dos melhores resultados. Foi obtida linearidade entre 0,1 a 1 ng/mg para todos os analitos obtendo um coeficiente de correlação superior a 0,99. Os valores ion ratio obtidos também foram satisfatórios, reforçando a confiabilidade dos dados obtidos. Ao testar o efeito matriz, observou-se que a maioria dos analitos não apresentou interferências significativas, garantindo a precisão das análises. O método descrito demonstrou ser eficaz para a deteção de NPS e contaminantes em amostras de cabelo, permitindo a identificação e quantificação precisa de vários compostos de interesse. A utilização de amostras de cabelo como matriz de análise oferece vantagens por ser menos invasiva em comparação com outras amostras biológicas tradicionais, como sangue e urina. A aplicação desse método analítico pode contribuir para aprimorar a monitorização clínica e forense de consumidores de NPS, auxiliando na tomada de decisões relacionadas com a saúde pública e com o controlo de drogas. A crescente preocupação com o uso de NPS exige o contínuo desenvolvimento de métodos analíticos eficazes para enfrentar os desafios emergentes no campo da toxicologia.N/

SÉCULO XXI: UMA NOVA ERA PARA A EDUCAÇÃO XXI CENTURY: A NEW AGE TO EDUCATION

Após um longo período de espera chegamos ao tão desejado século XXI, uma nova era é consolidada, a era das tecnologias da informação e da comunicação. De acordo com Gutierrez, o atual contexto sócio, político econômico e cultural, globalizado e informatizado é caracterizado pela abertura, interatividade e complexidade, portanto, os processos pedagógicos devem ser igualmente abertos, dinâmicos e criativos. Pois bem, o espaço de comunicação e cooperação das redes telemáticas é sem dúvida, o ambiente que parece ter sido criado sob medida, como prolongamento das relações face-a-face, que amplia e enriquece o mundo das relações em sociedade. Portanto, em lugar da oposição entre rede e ser, a educação pode ser o elo que vai construir a historia do encontro de pessoas, sujeitos responsáveis pela elaboração de seu próprio conhecimento. A palavra técnica é de origem grega tictein, que tem como significado - criar – conceber - produzir - dar à luz. E nesta sociedade de informação estamos reaprendendo a conhecer e integrar o ser humano no uso dos diferentes meios tecnológicos. Sabe-se que vivemos na era do imperativo tecnológico, submetemo-nos a cada nova exigência da tecnologia e a escola como instituição educacional está presente nessas mudanças, mas em operação tartaruga, mesmo tendo consciência da importância de uma inovação, as tecnologias oferecem muitas possibilidades que podem trazer benefícios para educadores e educandos, basta para isso, o educador estar preparado para explorar tais recursos da melhor maneira possível, fazendo com que os alunos usufruam também dessas possibilidades em um ambiente em que as relações interpessoais são estruturadas em rede, ou seja, não há uma relação hierárquica vertical