Systematic review and new insights into the molecular characterization of the Candida rugosa species complex

Recently, Candida rugosa was characterized as a species complex comprising four taxa: C rugosa sensu stricto, Candida pseudorugosa, Candida neorugosa and Candida mesorugosa. Although considered relatively rare, several clusters of candidemia due to C rugosa complex had been reported presenting mortality rates close to 70%. in this work we discuss the systematization, phenotyping and molecular methods based on internal transcribed spacer region (ITS) sequencing and proteomic analyses for species identification, as well as clinical aspects of the C rugosa complex. We performed a Bayesian phylogenetic analysis using 72 ITS sequences representative of C rugosa complex isolates and related species within the genus. Biochemical, morphological and MALDI-TOF MS analyses were processed with C rugosa complex type strains and related species isolates. We described that the phylogeny showed four distinct clades inferred with high posterior probabilities, corresponding to the four species within the C. rugosa complex, excluding C. pararugosa. Biochemical and morphological aspects distinguished only C rugosa sensu strict but were not sufficient to accurately identify species within the rest of the complex. Protein spectrum profiles differentiated all reference strains from different species analyzed. To our knowledge, we presented the first phylogenetic analysis using a large collection of ITS sequences as well as proteomic profiles generated from isolates of the C rugosa complex and related species that can enlighten systematics, diagnostics and clinical research fields. (C) 2013 Elsevier Inc. All rights reserved.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Universidade Federal de São Paulo, Disciplina Infectol, Lab Especial Micol, BR-04039032 São Paulo, BrazilUniversidade Federal de São Paulo, Disciplina Infectol, Lab Especial Micol, BR-04039032 São Paulo, BrazilFAPESP: 2007/08575-1FAPESP: 2009/10155-6CAPES: PNPD 02640-09-0Web of Scienc

Fungemia por espécies de Candida em Hospital Pediátrico da cidade de São Paulo, Brasil: estudo no período de 2007 a 2010

Candidemia remains a major cause of morbidity and mortality in the health care environment. The epidemiology of Candida infection is changing, mainly in relation to the number of episodes caused by species C. non-albicans. The overall objective of this study was to evaluate the frequency of yeasts of the genus Candida, in a four-year period, isolated from blood of pediatric patients hospitalized in a public hospital of the city of São Paulo, Brazil. In this period, yeasts from blood of 104 patients were isolated and, the identified species of Candida by phenotypic and genotypic methods were: C. albicans (39/104), C. tropicalis (25/104), C. parapsilosis (23/104), Pichia anomala (6/104), C. guilliermondii (5/104), C. krusei (3/104), C. glabrata (2/104) and C. pararugosa (1/104). During the period of the study, a higher frequency of isolates of C. non-albicans (63.55%) (p = 0.0286) was verified. In this study we verified the increase of the non-albicans species throughout the years (mainly in 2009 and 2010). Thus, considering the peculiarities presented by Candida species, a correct identification of species is recommended to lead to a faster diagnosis and an efficient treatment.Candidemia permance como a maior causa de morbidade e mortalidade em ambiente hospitalar. A epidemiologia de infecções por Candida vem se alterando, principalmente em relação ao número de episódios causados por espécies não-albicans. Este estudo teve como objetivo avaliar a frequência, em um período de quatro anos, de leveduras do gênero Candida isoladas de sangue de pacientes pediátricos internados em hospital público da cidade de São Paulo, Brasil. Neste período foram isoladas leveduras de sangue de 104 pacientes, e as espécies de Candida identificadas, por métodos fenotípicos e genotípicos, foram: C. albicans (39/104), C. tropicalis (25/104), C. parapsilosis (23/104), Pichia anomala (6/104), C. guilliermondii (5/104), C. krusei (3/104), C. glabrata (2/104) e C. pararugosa (1/104). Em todo período do estudo foi observada maior frequência de isolamento de C. não-albicans (63,55%) (p = 0,0286). Neste estudo verificou-se aumento das espécies não-albicans ao longo dos anos (principalmente em 2009 e 2010), assim, ressalta-se que correta identificação em nível de espécie é recomendável, para que isso acarrete diagnóstico rápido e tratamento eficaz

International Society of Human and Animal Mycology (ISHAM)-ITS reference DNA barcoding database - the quality controlled standard tool for routine identification of human and animal pathogenic fungi

Human and animal fungal pathogens are a growing threat worldwide leading to emerging infections and creating new risks for established ones. There is a growing need for a rapid and accurate identification of pathogens to enable early diagnosis and targeted antifungal therapy. Morphological and biochemical identification methods are time-consuming and require trained experts. Alternatively, molecular methods, such as DNA barcoding, a powerful and easy tool for rapid monophasic identification, offer a practical approach for species identification and less demanding in terms of taxonomical expertise. However, its wide-spread use is still limited by a lack of quality-controlled reference databases and the evolving recognition and definition of new fungal species/complexes. An international consortium of medical mycology laboratories was formed aiming to establish a quality controlled ITS database under the umbrella of the ISHAM working group on "DNA barcoding of human and animal pathogenic fungi." A new database, containing 2800 ITS sequences representing 421 fungal species, providing the medical community with a freely accessible tool at http://www.isham.org and http://its.mycologylab.org/ to rapidly and reliably identify most agents of mycoses, was established. The generated sequences included in the new database were used to evaluate the variation and overall utility of the ITS region for the identification of pathogenic fungi at intra-and interspecies level. The average intraspecies variation ranged from 0 to 2.25%. This highlighted selected pathogenic fungal species, such as the dermatophytes and emerging yeast, for which additional molecular methods/genetic markers are required for their reliable identification from clinical and veterinary specimens.This study was supported by an National Health and Medical Research Council of Australia (NH&MRC) grant [#APP1031952] to W Meyer, S Chen, V Robert, and D Ellis; CNPq [350338/2000-0] and FAPERJ [E-26/103.157/2011] grants to RM Zancope-Oliveira; CNPq [308011/2010-4] and FAPESP [2007/08575-1] Fundacao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP) grants to AL Colombo; PEst-OE/BIA/UI4050/2014 from Fundacao para a Ciencia e Tecnologia (FCT) to C Pais; the Belgian Science Policy Office (Belspo) to BCCM/IHEM; the MEXBOL program of CONACyT-Mexico, [ref. number: 1228961 to ML Taylor and [122481] to C Toriello; the Institut Pasteur and Institut de Veil le Sanitaire to F Dromer and D Garcia-Hermoso; and the grants from the Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecnologico (CNPq) and the Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Goias (FAPEG) to CM de Almeida Soares and JA Parente Rocha. I Arthur would like to thank G Cherian, A Higgins and the staff of the Molecular Diagnostics Laboratory, Division of Microbiology and Infectious Diseases, Path West, QEII Medial Centre. Dromer would like to thank for the technical help of the sequencing facility and specifically that of I, Diancourt, A-S Delannoy-Vieillard, J-M Thiberge (Genotyping of Pathogens and Public Health, Institut Pasteur). RM Zancope-Oliveira would like to thank the Genomic/DNA Sequencing Platform at Fundacao Oswaldo Cruz-PDTIS/FIOCRUZ [RPT01A], Brazil for the sequencing. B Robbertse and CL Schoch acknowledge support from the Intramural Research Program of the NIH, National Library of Medicine. T Sorrell's work is funded by the NH&MRC of Australia; she is a Sydney Medical School Foundation Fellow.info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Identification of pathogenic yeasts in clinical samples using RAPD (Randomly Amplified Polymorphic DNA)

A identificação rápida e confiável de espécies diferentes do gênero Candida tem relevância epidemiológica e terapêutica. A identificação por métodos clássicos muitas vezes é demorada e apresenta resultados inconclusivos. A busca de novas opções na identificação baseada em perfis genotípicos é fundamental para laboratórios de referência. Para abordar este problema, nós avaliamos o desempenho do método de RAPD na identificação de espécies de Candida. Foram avaliadas um total de 78 amostras incluindo espécies de C. albicans, C. tropicalís, C. parapsilosis, C. glabrata e C. krusei. Para a identificação de espécies pelo método convencional, todas as cepas foram submetidas ao microcultivo e posteriormente à análise do perfil bioquímica com auxílio do sistema API 2OC AUX (bioMérieux). A genotipagem foi realizada por técnica de RAPD utilizando-se 3 "primers" diferentes. Numa primeira etapa, padronízou-se o ensaio com amostras de referência ATCC no sentido de obter-se padrões de bandas específicos para cada espécie estudada. Numa segunda etapa, 50 amostras representativas das 5 espécies foram avaliadas por RAPD em ensaio "cego". Um dos "primers", M2, mostrou padrão de bandas intra-específico bem conservado, de aproximadamente 10 bandas cada, variando em tamanho de 2,0 a O,1 kb e bom poder discriminativo de espécies. Para estabelecer-se os padrões de bandas de referência das 5 espécies mais comuns do gênero Candida (C. aíbicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. glabrata e C. krusei), foram utilizadas 5 cepas para cada uma delas. Dois perfis genotípicos diferentes foram encontrados entre os isolados de C. parapsilosis. As diferenças obtidas entre estes 2 padrões de bandas foram proporcionais àquelas encontradas entre 2 espécies diferentes de Candida. Quando os Resumo padrões de bandas de referência foram utilizados em experimento "cego" para identificar 50 amostras escolhidas aleatoriamente, incluindo isolados clínicos e cepas ATCC, os resultados do RAPD foram 100 por cento consistentes com os resultados produzidos pelos métodos convencionais. Como métodos ideais de identificação devem ser consistentes com fílogenia e taxonomia, o RAPD foi testado na análise de distâncias genéticas verificadas entre as diferentes amostras. A comparação entre as árvores filogenéticas construídas com os dados do RAPD e com o gene RRNA l8S, mostraram diferenças significativas em suas topologias, indicando que o RAPD não mede corretamente as distâncias relativas...(au).BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe

Identification of genes differentially expressed in hyphae of Candida albicans Identificação de gases em hifa de Candida albicans

The ability to switch from yeast to hyphal forms is essential for Candida albicans virulence. This morphological switch involves the expression of hyphal-specific genes under the control of transcriptional factors. To contribute to the discovery of hyphal-specific genes, we used a differential screening method where clones of a genomic DNA library were hybridized with yeast and hyphal cDNA probes. Two clones with increased expression in hyphae were selected for study. Sequencing these clones, we found that they encoded two important metabolic genes, CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) and CaYLL34 (member of the AAA ATPase family). CaHXT7 and CaYLL34 ORFs were completely determined. Analyses of the putative proteins show that: (1) CaHxt7p has one hexose transporter domain and (2) CaYll34p has two AAA ATPase domains. These results show, for the first time, increased expression of metabolic genes in C. albicans hyphae. Also, because the proteins encoded by CaHXT7 and CaYLL34 may be necessary for the switching to hyphae, they could be new targets for antifungal drugs.<br>A transição morfológica de levedura para hifa é essencial para a virulência de Candida albicans. Esta transição envolve a expressão de genes hifa-específicos que estão sob o controle de fatores transcricionais. Para descobrir genes hifa-específicos utilizamos um método de triagem diferencial, onde clones de biblioteca de DNA genômico foram hibridizados com sondas de cDNA de levedura e hifa. Dois clones com aumento de expressão em hifa foram selecionados. O sequenciamento dos insertos destes clones permitiu a identificação de dois genes metabólicos importantes: CaHXT7 (high-affinity hexose transporter) e CaYLL34 (da família AAA ATPase). As ORFs completas destes genes foram caracterizadas e a análise das proteínas hipotéticas revelou que: (1) CaHxt7p tem um domínio de transportador de hexose e (2) CaYll34 tem dois domínios AAA ATPase. Este é o primeiro estudo que demonstra aumento de expressão de genes metabólicos em hifas de C. albicans. Ainda, a associação dos produtos de CaHXT7 e CaYLL34 com a formação de hifas torna estas proteínas potenciais novos alvos para drogas antifúngicas