Ação antioxidante de extrato padronizado de Ginkgo biloba em eritrócitos de indivíduos normais e de portadores de anemia falciforme, submetidos à sobrecarga oxidativa, in vitro

Orientador : Prof. Dr. Aguinaldo José do NascimentoCoorientadora : Profa. Drª Maria Suely Soares LeonartDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 30/03/2011Bibliografia: fls. 109-118Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatosResumo: O eritrocito e um modelo celular adequado para o estudo do efeito das especies reativas de oxigenio (ERO) e para a triagem inicial de substancias antioxidantes, devido a sua simplicidade estrutural, acessibilidade e vulnerabilidade a oxidacao. As ERO sao formadas fisiologicamente nas celulas, porem seu excesso esta relacionado com o envelhecimento celular e eventos patologicos. A doenca falciforme promove uma anemia hemolitica caracterizada pela presenca de alta concentracao de hemoglobina S, cujas consequencias incluem a producao aumentada de ERO e a diminuicao da capacidade de defesa antioxidante, acarretando disfuncao endotelial, disturbios de coagulacao e hemolise intravascular. No presente trabalho, comparou-se o estado oxidativo dos eritrocitos de pacientes com anemia falciforme (genotipo SS) e de individuos normais (genotipo AA) atraves da determinacao de glutationa reduzida (GSH), metahemoglobina (meta-Hb) e dosagem de substancias reativas ao acido tiobarbiturico (TBARS). Os eritrocitos dos pacientes com anemia falciforme apresentaram um aumento da oxidacao da hemoglobina em 1,4 vezes e da peroxidacao lipidica em 1,8 vezes, nos seus estados basais. O estudo do estresse oxidativo foi realizado apos inducao de danos pelos oxidantes terc-butil-hidroperoxido (t-BHP) e 2,2 - azobis (amidinopropano) dihidrocloreto (AAPH), geradores de radicais livres em modelos celulares. Os eritrocitos de pacientes com anemia falciforme apresentaram maior suscetibilidade ao estresse oxidativo, com maior oxidacao da hemoglobina e um dano a membrana lipidica aproximadamente 1,4 vezes maior do que eritrocitos normais. Por fim, testou-se o efeito antioxidante do extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb 761) na prevencao dos danos oxidativos induzidos pelos oxidantes, in vitro. Os resultados obtidos ilustram que o EGb 761 apresenta acao antioxidante dose-dependente tanto em eritrocitos de individuos normais quanto de pacientes com anemia falciforme, prevenindo parcialmente a peroxidacao lipidica da membrana induzida por t-BHP (IC50 de 138,4 e 257,0 ƒÊg/ml, em eritrocitos AA e SS, respectivamente) inibindo a formacao de radicais livres induzida pelo t-BHP (IC50 de 4,22 e 13,0 ƒÊg/ml, respectivamente) e prevenindo a hemolise induzida por AAPH (IC50 de 2,6 e 6,0 ƒÊg/ml, respectivamente). De acordo com os resultados, em eritrocitos de pacientes com anemia falciforme a dose necessaria para realizar o mesmo efeito foi no minimo 2 vezes maior do que nos eritrocitos de individuos normais. Por outro lado, o EGb 761 nao conseguiu prevenir a oxidacao da hemoglobina e da molecula de GSH nas concentracoes testadas. Ensaios clinicos sao necessarios para investigar os possiveis beneficios do EGb 761 como adjuvante terapeutico na anemia falciforme.Abstract: The erythrocyte is a model for the study of the effect of reactive oxygen species (ROS) and the initial antioxidant screening due to its structural simplicity, accessibility and vulnerability to oxidation. ROS are formed physiologically in cells, but its excess is related to cellular aging and pathological events. Sickle cell disease promotes a hemolytic anemia characterized by the presence of high concentrations of hemoglobin S, whose consequences include the increased production of ROS and decreased antioxidant defense capacity, resulting in endothelial dysfunction, coagulation disorders and intravascular hemolysis. In this work, we compared the oxidative status of erythrocytes from patients with sickle cell anemia (SS genotype) and in normal controls (genotype AA) through the determination of reduced glutathione (GSH), methemoglobin (met-Hb) and serum substances reactives to thiobarbituric acid (TBARS). Erythrocytes of patients with sickle cell anemia had an increase of 1.4 in hemoglobin oxidation and 1.8 times in lipid peroxidation over their basal state. The study on oxidative stress was performed after induction of oxidative damage by terc-butylhydroperoxide (t-BHP) and 2,2 - azobis (amidinopropane) dihidrochloride (AAPH), generators of free radicals in cell models. The erythrocytes of sickle cell patients showed increased susceptibility to oxidative stress, with higher hemoglobin oxidation and lipid membrane damage approximately 1.4 times higher than normal ones. Finally, we tested the antioxidant effect of standardized extract of Ginkgo biloba extract (EGb 761) in preventing oxidative damage induced by oxidants in vitro. The results illustrate that EGb 761 has ntioxidant activity in erythrocytes from both normal subjects and patients with sickle cell disease, partially preventing membrane lipid peroxidation (IC50 of 138.4 ìg/ml and 257.0 ìg/ml, respectively), inhibiting the formation of free radicals (IC50 of 4.22 ìg/ml in AA and 13.0 ìg/ml in SS) and preventing hemolysis (IC50 de 2.6 ìg/ml in AA and 6.0 ìg/ml in SS). According to the results, extract antioxidant action was ose-dependent, and in erythrocytes from sickle cell patients the dose required to achieve the same effect was at least twice higher than in erythrocytes of normal individuals. Moreover, EGb 761 failed to prevent oxidation of the hemoglobin and GSH, at the concentrations tested. Clinical trials are needed to investigate the possible benefits of EGb 761 as an adjuvant in sickle cell anemia therapy

Níveis de atividade enzimática da glicose 6-fosfato desidrogenase em crianças, no Laboratório Escola da Universidade Federal do Paraná

Orientador : Prof. Paulo Henrique da SilvaMonografia (especialização) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências, Curso de Especialização em Análise ClínicasInclui referênciasResumo: - O objetivo do trabalho foi estabelecer média, desvio padrão e intervalo de referência da atividade da enzima glicose 6-fosfato desidrogenase (G6-PD) em crianças saudáveis atendidas no Laboratório Escola da Universidade Federal do Paraná. Foram analisadas amostras de 100 crianças (9 a 11 anos) consideradas normais após análise do hemograma e eletroforese de hemoglobinas. A atividade enzimática foi determinada quantitativamente nas hemácias utilizando-se os reagentes do kit G6-PD da Randox, em analisador automático Cobas Mira (Roche). A média da atividade da G6-PD em crianças foi de 6,16 ± 1,14 U/g Hb, e o valor de referência estabelecido foi de 3,84 a 8,51 U/g Hb. O intervalo de referência encontrado foi menor do que os valores estabelecidos na bula do kit

Ginkgo biloba extract (EGb 761) attenuates oxidative stress induction in erythrocytes of sickle cell disease patients

Sickle cell disease promotes hemolytic anemia and occlusion of small blood vessels due to the presence of high concentrations of hemoglobin S, resulting in increased production of reactive oxygen species and decreased antioxidant defense capacity. The aim of this study was to evaluate the protective action of a standardized extract of Ginkgo biloba (EGb 761), selected due to its high content of flavonoids and terpenoids, in erythrocytes of patients with sickle cell anemia (HbSS, SS erythrocytes) subjected to oxidative stress using tert-butylhydroperoxide or 2,2-azobis-(amidinepropane)-dihydrochloride, in vitro. Hemolysis indexes, reduced glutathione, methemoglobin concentrations, lipid peroxidation, and intracellular reactive oxygen species were determined. SS erythrocytes displayed increased rates of oxidation of hemoglobin and membrane lipid peroxidation compared to normal erythrocytes (HbAA, AA erythrocytes), and the concentration of EGb 761 necessary to achieve the same antioxidant effect in SS erythrocytes was at least two times higher than in normal ones, inhibiting the formation of intracellular reactive oxygen species (IC50 of 13.6 µg/mL), partially preventing lipid peroxidation (IC50 of 242.5 µg/mL) and preventing hemolysis (IC50 of 10.5 µg/mL). Thus, EGb 761 has a beneficial effect on the oxidative status of SS erythrocytes. Moreover, EGb 761 failed to prevent oxidation of hemoglobin and reduced glutathione at the concentrations examined.A doença falciforme promove anemia hemolítica e oclusão dos pequenos vasos, causados pela presença de altas concentrações de hemoglobina S, cujas consequências incluem a produção aumentada de espécies reativas de oxigênio e diminuição da capacidade de defesa antioxidante. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação protetora de um extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb 761), selecionado devido ao seu alto conteúdo de flavonóides e terpenóides, em eritrócitos de pacientes com anemia falciforme (HbSS, eritrócitos SS) submetidos ao estresse oxidativo usando terc-butil-hidroperóxido e 2,2-azobis-(amidinopropano)-diidrocloreto, in vitro. Índices de hemólise, glutationa reduzida, concentração de metemoglobina, peroxidação lipídica e espécies reativas de oxigênio foram determinados. Eritrócitos de pacientes com anemia falciforme apresentaram taxas aumentadas de oxidação da hemoglobina e peroxidação lipídica e a concentração de EGb 761 necessária para atingir o mesmo efeito antioxidante foi pelo menos duas vezes maior em relação aos eritrócitos normais (HbAA, eritrócitos AA), inibindo a formação de espécies reativas de oxigênio (IC50 de 13.6 µg/mL), prevenindo parcialmente a peroxidação lipídica (IC50 de 242.5 µg/mL) e prevenindo a hemólise (IC50 de 10.5 µg/mL). Portanto, EGb 761 possui um efeito benéfico no estado oxidativo dos eritrócitos SS. Entretanto, o EGb 761 não preveniu a oxidação da hemoglobina e da glutationa reduzida, nas concentrações examinadas

Avaliação do perfil lipídico de servidores da Universidade Federal do Paraná após a pandemia de COVID-19

Dislipidemia é um distúrbio metabólico caracterizado pelo acúmulo de lípidos na corrente sanguínea. A doença arterial coronariana (DAC) é uma das principais complicações deste distúrbio metabólico, sendo um dos importantes fatores de morbimortalidade da população mundial e sobrecarga dos sistemas de saúde, tanto para tratamento como para internamento. O presente estudo teve como objetivo avaliar o perfil lipídico de servidores da Universidade Federal do Paraná (UFPR) a partir dos dados analíticos e pré-analíticos, avaliando o impacto do tratamento farmacológico para dislipidemias relatado pelos pacientes, além de avaliar mudanças no perfil lipídico antes e depois da pandemia pelo coronavírus. Foram incluídos no estudo 1216 pacientes que realizaram exames em 2022 e 1128 pacientes que realizaram exames em 2018. Foram observadas mudanças no perfil lipídico dos servidores pré e pós pandemia, onde os valores de colesterol não-LDL tiveram aumento significativo, enquanto o HDL teve redução significativa nas dosagens pós pandemia (P < 0,05). Outro ponto de análise foi o uso e não uso de estatinas pelos pacientes diagnosticados com dislipidemia, o perfil lipídico daqueles que utilizavam estatinas demonstrou-se mais próximo aos valores de referência, ao realizar a estratificação de risco cardiovascular pelo escore de risco global, observou-se que os pacientes de risco cardiovascular alto e intermediário em sua maioria não atingiram o alvo terapêutico, sendo necessário verificar a adesão ao tratamento e revisar a farmacoterapia. Em relação àqueles que não utilizam as estatinas, verificou-se que muitos pacientes se encontraram no risco intermediário e 13 pacientes em risco alto, os quais poderiam ser beneficiados pelo uso de estatinas. Na análise dos resultados dos pacientes não diagnosticados, observou-se que 73 pacientes apresentaram valores de HDL menores que 40 mg/dL, 48 pacientes com valores de LDL acima de 160 mg/dL e 103 pacientes com valores de triglicerídeos acima de 150 mg/dL, sugerindo que alguns servidores podem apresentar dislipidemia não diagnosticada. Tendo em vista a relevância do diagnóstico e tratamento das dislipidemias a realização dos exames periódicos demonstrou-se importante para o rastreamento e acompanhamento farmacoterapêutico para esta condição de saúde, além de trazer informações sobre mudanças ocasionadas pela pandemia de COVID-19

Ação antioxidante de extrato padronizado de Ginkgo biloba em eritrócitos de indivíduos normais e de portadores de anemia falciforme, submetidos à sobrecarga oxidativa, in vitro

Orientador : Prof. Dr. Aguinaldo José do NascimentoCoorientadora : Profa. Drª Maria Suely Soares LeonartDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 30/03/2011Bibliografia: fls. 109-118Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatosResumo: O eritrocito e um modelo celular adequado para o estudo do efeito das especies reativas de oxigenio (ERO) e para a triagem inicial de substancias antioxidantes, devido a sua simplicidade estrutural, acessibilidade e vulnerabilidade a oxidacao. As ERO sao formadas fisiologicamente nas celulas, porem seu excesso esta relacionado com o envelhecimento celular e eventos patologicos. A doenca falciforme promove uma anemia hemolitica caracterizada pela presenca de alta concentracao de hemoglobina S, cujas consequencias incluem a producao aumentada de ERO e a diminuicao da capacidade de defesa antioxidante, acarretando disfuncao endotelial, disturbios de coagulacao e hemolise intravascular. No presente trabalho, comparou-se o estado oxidativo dos eritrocitos de pacientes com anemia falciforme (genotipo SS) e de individuos normais (genotipo AA) atraves da determinacao de glutationa reduzida (GSH), metahemoglobina (meta-Hb) e dosagem de substancias reativas ao acido tiobarbiturico (TBARS). Os eritrocitos dos pacientes com anemia falciforme apresentaram um aumento da oxidacao da hemoglobina em 1,4 vezes e da peroxidacao lipidica em 1,8 vezes, nos seus estados basais. O estudo do estresse oxidativo foi realizado apos inducao de danos pelos oxidantes terc-butil-hidroperoxido (t-BHP) e 2,2 - azobis (amidinopropano) dihidrocloreto (AAPH), geradores de radicais livres em modelos celulares. Os eritrocitos de pacientes com anemia falciforme apresentaram maior suscetibilidade ao estresse oxidativo, com maior oxidacao da hemoglobina e um dano a membrana lipidica aproximadamente 1,4 vezes maior do que eritrocitos normais. Por fim, testou-se o efeito antioxidante do extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb 761) na prevencao dos danos oxidativos induzidos pelos oxidantes, in vitro. Os resultados obtidos ilustram que o EGb 761 apresenta acao antioxidante dose-dependente tanto em eritrocitos de individuos normais quanto de pacientes com anemia falciforme, prevenindo parcialmente a peroxidacao lipidica da membrana induzida por t-BHP (IC50 de 138,4 e 257,0 ƒÊg/ml, em eritrocitos AA e SS, respectivamente) inibindo a formacao de radicais livres induzida pelo t-BHP (IC50 de 4,22 e 13,0 ƒÊg/ml, respectivamente) e prevenindo a hemolise induzida por AAPH (IC50 de 2,6 e 6,0 ƒÊg/ml, respectivamente). De acordo com os resultados, em eritrocitos de pacientes com anemia falciforme a dose necessaria para realizar o mesmo efeito foi no minimo 2 vezes maior do que nos eritrocitos de individuos normais. Por outro lado, o EGb 761 nao conseguiu prevenir a oxidacao da hemoglobina e da molecula de GSH nas concentracoes testadas. Ensaios clinicos sao necessarios para investigar os possiveis beneficios do EGb 761 como adjuvante terapeutico na anemia falciforme.Abstract: The erythrocyte is a model for the study of the effect of reactive oxygen species (ROS) and the initial antioxidant screening due to its structural simplicity, accessibility and vulnerability to oxidation. ROS are formed physiologically in cells, but its excess is related to cellular aging and pathological events. Sickle cell disease promotes a hemolytic anemia characterized by the presence of high concentrations of hemoglobin S, whose consequences include the increased production of ROS and decreased antioxidant defense capacity, resulting in endothelial dysfunction, coagulation disorders and intravascular hemolysis. In this work, we compared the oxidative status of erythrocytes from patients with sickle cell anemia (SS genotype) and in normal controls (genotype AA) through the determination of reduced glutathione (GSH), methemoglobin (met-Hb) and serum substances reactives to thiobarbituric acid (TBARS). Erythrocytes of patients with sickle cell anemia had an increase of 1.4 in hemoglobin oxidation and 1.8 times in lipid peroxidation over their basal state. The study on oxidative stress was performed after induction of oxidative damage by terc-butylhydroperoxide (t-BHP) and 2,2 - azobis (amidinopropane) dihidrochloride (AAPH), generators of free radicals in cell models. The erythrocytes of sickle cell patients showed increased susceptibility to oxidative stress, with higher hemoglobin oxidation and lipid membrane damage approximately 1.4 times higher than normal ones. Finally, we tested the antioxidant effect of standardized extract of Ginkgo biloba extract (EGb 761) in preventing oxidative damage induced by oxidants in vitro. The results illustrate that EGb 761 has ntioxidant activity in erythrocytes from both normal subjects and patients with sickle cell disease, partially preventing membrane lipid peroxidation (IC50 of 138.4 ìg/ml and 257.0 ìg/ml, respectively), inhibiting the formation of free radicals (IC50 of 4.22 ìg/ml in AA and 13.0 ìg/ml in SS) and preventing hemolysis (IC50 de 2.6 ìg/ml in AA and 6.0 ìg/ml in SS). According to the results, extract antioxidant action was ose-dependent, and in erythrocytes from sickle cell patients the dose required to achieve the same effect was at least twice higher than in erythrocytes of normal individuals. Moreover, EGb 761 failed to prevent oxidation of the hemoglobin and GSH, at the concentrations tested. Clinical trials are needed to investigate the possible benefits of EGb 761 as an adjuvant in sickle cell anemia therapy

O impacto do isolamento social durante a pandemia de COVID-19 na saúde do servidor

A despeito das pesquisas de alto impacto na ciência brasileira estarem concentradas nas instituições públicas, existem poucos dados publicados sobre a avaliação da saúde dos servidores, com especial escassez de dados laboratoriais sobre os técnicos administrativos em educação (TAE). No presente estudo foram avaliados os efeitos do isolamento social realizado durante a pandemia de COVID-19 no metabolismo dos TAE e professores da Universidade Federal do Paraná submetidos a exames laboratoriais ocupacionais no Laboratório Escola de Análises Clínicas, cuja equipe compõe a autoria do trabalho. Foram comparadas as concentrações de glicose, colesterol total e frações e triglicerídeos dos servidores em 2018 (n=1128) e 2022 (n=1216), após dois anos de isolamento social. As análises foram realizadas no equipamento Labmax 400 (Labtest). A normalidade da distribuição dos parâmetros numéricos investigados foi avaliada pelo teste de Shapiro Wilk. Os parâmetros analisados não apresentaram distribuição normal. Os dados foram expressos em mediana e intervalo interquartil. Diferenças entre as medianas foram testadas pelo teste U de Mann Whitney. A variável categórica (sexo) foi representada pelo número de indivíduos e a frequência percentual, e a diferença entre os grupos foi analisada pelo teste de Chi-quadrado (χ²). Valores de P inferiores a 0.05 foram considerados significativos. A análise estatística foi realizada no software Jamovi versão 2.3.21.No presente estudo, houve aumento significativo nas concentrações de glicose e colesterol total e diminuição significativa nas concentrações de HDL colesterol dos servidores após a pandemia. Não houve diferença significativa entre os valores de LDL colesterol e triglicerídeos.De acordo com os resultados, a pandemia de COVID-19 pode ter impactado significativamente na saúde dos servidores. Esses dados mostram a importância do acompanhamento laboratorial da saúde dos servidores no desenvolvimento de ações que promovam a qualidade de vida dos servidores

Protective effect of flavonoids against reactive oxygen species production in sickle cell anemia patients treated with hydroxyurea

OBJECTIVE: The aim of this study was to evaluate the protective effects of quercetin, rutin, hesperidin and myricetin against reactive oxygen species production with the oxidizing action of tert-butylhydroperoxide in erythrocytes from normal subjects and sickle cell anemia carriers treated with hydroxyurea. METHODS: Detection of intracellular reactive oxygen species was carried out using a liposoluble probe, 2',7'-dichlorfluorescein-diacetate (DCFH-DA). A 10% erythrocyte suspension was incubated with flavonoids (quercetin, rutin, hesperidin or myricetin; 30, 50, and 100 µmol/L), and then incubated withtert-butylhydroperoxide (75 µmol/L). Untreated samples were used as controls. RESULTS: Red blood cell exposure to tert-butylhydroperoxide resulted in significant increases in the generation of intracellular reactive oxygen species compared to basal levels. Reactive oxygen species production was significantly inhibited when red blood cells were pre-incubated with flavonoids, both in normal individuals and in patients with sickle cell anemia. Quercetin and rutin had the highest antioxidant activity, followed by myricetin and hesperidin. CONCLUSION: Flavonoids, in particular quercetin and rutin, showed better antioxidant effects against damage caused by excess reactive oxygen species characteristic of sickle cell anemia. Results obtained with patients under treatment with hydroxyurea suggest an additional protective effect when associated with the use of flavonoids

Prevalence of anemia in schools of the metropolitan region of Curitiba, Brazil

Background: Anemia during childhood is one of the biggest public health problems worldwide, including Brazil. Insufficient or abnormal production of hemoglobin, loss of iron and excessive destruction of red blood cells are the most common causes of anemia. Among the reasons of anemia, iron deficiency accounts for 50% of anemia cases in developing countries. Affected individuals present a wide range of clinical problems, including delayed neuropsychomotor progression, impaired cellular immunity and reduction of intellectual capacity. This study aimed to evaluate the prevalence of anemia in children attending public schools in the metropolitan region of Curitiba, Paraná, Brazil. Method: A retrospective study was conducted of 409 children aged 8–12 years old included in an extension project of the Universidade Federal do Paraná. The results of complete blood count and hemoglobin electrophoresis of all children were evaluated. Anemia was considered when the hemoglobin levels were <11.5 g/dL. Results: The prevalence of anemia was found to be 2.2% of the population studied, with hypochromic microcytic anemia being the most common type. Seven children had sickle cell trait and one had β-thalassemia. Conclusion: The prevalence of anemia in this study was considered normal according the World Health Organization classification, which is different from the data found in other Brazilian regions. Keywords: Anemia, Complete blood count, Iron-deficiency anemia, Hypochromic microcytic anemia, Prevalence studie