Histopatologia, sorologia e cultivo no diagnóstico da criptococose

Cryptococcosis is one of the most common opportunistic fungal infections in patients with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). We report 13 cases of cryptococcal infection based on histopathology, serology and cultures. Epidemiological analysis, histochemical techniques of hematoxilin and eosin (HE) and Grocot's silver (GMS), as well special histochemical techniques such as Mayer's mucicarmine (MM) and Fontana-Masson (FM), cryptococcal antigen test (CrAg) and isolation on fungal media: Sabouraud's (SAB), brain-heart infusion agar (BHI) and canavanine-glycine-bromothymol blue (CGB) agar were analyzed. Unsatisfactory staining results by MM stain associated to negative titers by CrAg test, which FM stain confirmed that capsule-deficient Cryptococcus infections were observed in four cases. Eight isolated cases were identified as follows: six cases were infection with Cryptococcus neoformans and two cases were Cryptococcus gattii.A criptococose é a mais comum infecção fúngica oportunística observada em pacientes com síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). Relatamos 13 casos da infecção baseados no diagnóstico histopatológico, sorológico e cultivo. Foram analisadas: a epidemiologia, as técnicas histoquímicas básicas de hematoxilina-eosina (HE) e coloração pela prata (GMS), bem como as técnicas histoquímicas especiais de mucicarmim de Mayer (MM) e Fontana-Masson (FM), o teste do antígeno criptocóccico (CrAg) e o isolamento em cultivos em ágar-Sabouraud (SAB), ágar infusão de cérebro-coração (BHI) e meio com canavanina azul de bromotimol (CGB). Em quatro casos, resultados tintoriais insatisfatórios pela coloração de MM associados a títulos negativos pelo teste do CrAg, a coloração de FM confirmou a infecção pelo Cryptococcus deficiente de cápsula. Oito isolados foram identificados: seis casos apresentaram a infecção por Cryptococcus neoformans e dois casos apresentaram a infecção por Cryptococcus gattii

ANÁLISE DA MICROBIOTA AERÓBICA ENDODÔNTICA DE DENTES COM E SEM LESÃO PERIAPICAL

As bactérias são o principal agente etiológico das patologias pulpares e perirradiculares, exercendo importante papel tanto na indução quanto na perpetuação de processos infamatórios da polpa e do periápice. Conhecer a microbiota envolvida nas  diferentes  fases  de  evolução  da  infecção  endodôntica  é,  portanto,  de  extrema  importância  para  o  correto  tratamento de cada caso. O presente estudo  teve como objetivo qualifcar e quantifcar os microrganismos envolvidos nas  infecções endodônticas de dentes com e sem  lesão periapical visível ao exame radiográfco de pacientes da clínica odontológica da Faculdade da Serra Gaúcha (FSG) atendidos de fevereiro à maio de 2015. Para tal se coletou material necrótico do interior dos canais radiculares destes elementos com o auxílio de limas endodônticas #15 que foram acondicionadas em tubos de ensaio contendo caldo BHI que foram incubados em aerobiose à 37º por 48h. Posteriormente se utilizou estes caldos para semeadura em placas de Petri com Ágar BHI para identifcação das espécies e contagem das UFC/ml. No grupo dos dentes sem lesão periapical foi encontrada menor variedade de espécies bacterianas cultiváveis, mas um maior número de bactérias quando comparado ao grupo de dentes com lesão periapical (p<0,01). Conclui-se, portanto, que dentes com infecções endodônticas primárias apresentam rica microbiota endodôntica que sofre alterações de quantidade e variedade conforme a doença evolui, com diminuição dos microrganismos aeróbios e anaeróbios facultativos e aumento dos anaeróbios estritos.Descritores: Endodontia. Microbiologia. Polpa dentária. Lesão Periapical.AbstractBacteria are the main agent of pulp and periradicular diseases, playing an important role in both the induction and perpetuation of  infammatory processes of  the pulp and periapex. Knowing  the microbiota  involved  in diferent stages of evolution of endodontic infection is therefore extremely important for the correct treatment of each case. This study aimed to qualify and quantify the microorganisms involved in endodontic infections of teeth with and without periapical lesion visible to  the radiographic examination of patients of  the dental clinic of  the Serra Gaucha College (FSG) met from February  to May 2015. For this necrotic material from the root canal these elements was collected with the aid of endodontic fles # 15 witch were put in test tubes containing BHI broth and incubated aerobically at 37ºC for 48h. Subsequently these broths were used for seeding Petri dishes with agar BHI for species identifcation and counting of CFU / ml. In the group of teeth without periapical lesion was found smaller variety of bacterial species, but a larger number of bacteria compared to group of teeth with periapical lesions (p <0.01). It follows, therefore, that primary teeth with endodontic infections feature rich endodontic microbes sufering quantity and variety changes as the disease progresses with decrease of aerobic and facultative anaerobic microorganisms and the increase of strict anaerobes.Keywords: Endodontic. Microbiology. Tooth polp. Periapical lesion

Histopatologia, sorologia e cultivo no diagnóstico da criptococose

Ten cases of cryptococcosis due to unusual microscopic forms of Cryptococcus sp. observed over a twenty-eight year period (1981-2009) are presented. The most important clinicopathological and laboratory data are tabulated. The uncommon forms of cryptococcal cells given are: structures resembling germ tube (one case), chains of budding yeasts (one case), pseudohyphae (two cases) and nonencapsulated yeast-like organisms (eight cases). The diagnosis was based on the histopathological findings. The causative organism was isolated and identified in seven cases; five were due to C. neoformans, and two to C. gattii. In addition, the importance of using staining histochemical techniques - Grocott's silver stain (GMS), Mayer's mucicarmine stain (MM) and Fontana-Masson stain (FM) - in the diagnosis of cryptococcosis is argued.A criptococose é a mais comum infecção fúngica oportunística observada em pacientes com síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS). Relatamos 13 casos da infecção baseados no diagnóstico histopatológico, sorológico e cultivo. Foram analisadas: a epidemiologia, as técnicas histoquímicas básicas de hematoxilina-eosina (HE) e coloração pela prata (GMS), bem como as técnicas histoquímicas especiais de mucicarmim de Mayer (MM) e Fontana-Masson (FM), o teste do antígeno criptocóccico (CrAg) e o isolamento em cultivos em ágar-Sabouraud (SAB), ágar infusão de cérebro-coração (BHI) e meio com canavanina azul de bromotimol (CGB). Em quatro casos, resultados tintoriais insatisfatórios pela coloração de MM associados a títulos negativos pelo teste do CrAg, a coloração de FM confirmou a infecção pelo Cryptococcus deficiente de cápsula. Oito isolados foram identificados: seis casos apresentaram a infecção por Cryptococcus neoformans e dois casos apresentaram a infecção por Cryptococcus gattii

Unusual morphologies of Cryptococcus spp. in tissue specimens: report of 10 cases

Ten cases of cryptococcosis due to unusual microscopic forms of Cryptococcus sp. observed over a twenty-eight year period (1981-2009) are presented. The most important clinicopathological and laboratory data are tabulated. The uncommon forms of cryptococcal cells given are: structures resembling germ tube (one case), chains of budding yeasts (one case), pseudohyphae (two cases) and nonencapsulated yeast-like organisms (eight cases). The diagnosis was based on the histopathological findings. The causative organism was isolated and identified in seven cases; five were due to C. neoformans, and two to C. gattii. In addition, the importance of using staining histochemical techniques - Grocott's silver stain (GMS), Mayer's mucicarmine stain (MM) and Fontana-Masson stain (FM) - in the diagnosis of cryptococcosis is argued

Analisis descritiva of the cryptococcal histopatology

A identificação histopatológica dos agentes fúngicos é um método excelente de diagnóstico, devido ao fato de que as estruturas são facilmente identificadas por meio das técnicas histoquímicas. Até o momento, não dispõem-se de métodos aceitáveis para quantificação da atividade da infecção. Esta investigação protocola um método de estimativa para atividade biológica da criptococose através da determinação dos índice de brotamentos e carminofílico do Cryptococcus. Objetivos: Descrever os aspectos histopatológicos da criptococose através das técnicas histoquímicas básicas e especiais da micologia. Métodos: Foram avaliados 33 pacientes com diagnóstico histopatológico prévio da criptococose. Resultados: Houve predominância do sexo masculino. A idade variou entre 10 a 81 anos, com média de 45,6 anos. A criptococose é doença definidora dos casos de Aids, sendo considerado seu principal fator predisponente, seguido de transplantes. O trato respiratório é o mais envolvido. O microrganismos tem tropismo para o sistema nervoso central e apresenta disseminação para outros órgãos. Resultados falso-negativos é reflexo da deficiência de material capsular. A mortalidade foi de 36%, sendo o maior índice obervado até os 3 primeiros meses após o diagnóstico. A criptococose apresenta-se sob duas formas, reativa e paucireativa. Na infecção reativa, os organismos foram menos abundantes e predominantemente intracelulares aos histiócitos e às células gigantes. Na infecção paucireativa, há um grande número de leveduras, que proliferam-se extracelularmente e estão associadas a destruição do tecido afetado. Ambos infecções, reativas e paucireativas mostraram grande variação no índice de brotamento. O índice carminofílico foi menor nas infecção reativas, quando comparados a infecção paucireativa. Discussão: A coloração de Hematoxilina-Eosina é usada para visualizar as alterações estruturais das lesões, bem como da reação tecidual. A coloração da prata é a mais utilizada para identificação dos organismos fúngicos como o Cryptococcus. A coloração de Mucicarmim de Mayer detecta a cápsula mucopolissacarídica circundante corada na cor magenta. A coloração de FM oferece diagnóstico diferencial nos casos inconclusivos à coloração de Mucicarmim de Mayer. A quantificação de IB e IC é uma escala útil na interpretação da resposta inflamatória do hospedeiro e atividade biológica da criptococose.The histopathologic identification from the fungal agents that's a method excellent of diagnostic, due the fact of what the structures são easily identified for histochemical techniques. So far, there is no methods you accepted about to measurement of biologic activity. This investigation aponta to an method of estimate of the activity biologic of cryptococcal infection by determination of the Budding Index and Carminophilic Index of the Cryptococcus. Objectives: Describes the histologic features of cryptococcosis by basic and special histochemical techniques of mycology. Methods: Have been evaluated 33 patients with previous cryptococcosis histopathologic diagnostic. Results: There is an predominance of the males. The age of the patients ranged from 10 to 81 years with a median value 45,4 years. The HIV infection was the main risk factor for disease, followg of transplants. The respiratory tract is the most frequently involved among the organ systems organs. The false-negative latex test are due to capsular deficiency. The moratlity rate was 36%, The high rate of 50% was observed between of 1 to 3 months. The cryptococcal infections is divided into two major histologic categories, reactive and paucireactive, based upon the host reaction. In reactive infection, the organisms were lessa abundant and were predominantly intracellular within histiocytes and giant cells. In paucireactive infection, thre is large numbers of yeats in the lesions, cryptococci proliferate extracellarly within the involved tissues, associated histologically with mucoid degeneration of the surrounding tissue. Both reactice and paucireactive infections showed great variation in Budding Index. The Carminophilic Inded was lower in the reactive infections, when compared with the paucireactive infection. In this Carminophilic Index presented higher measurements.. Discussion: The Hematoxilin-Eosin stain is used to look for strucutural changes of the infectd lesion, as well tissues reactions. The Gomori’s methenamine-silver stain is the more commonly used in identificatifying these organisms. The mucicarmine stain detecting the surrounding mucopolisacharides capsule of the magenta color. The Fontana-Masson staining offers differential diagnostic. The determination of IB and IC is an scale that relied, because it provides an interpretation of the host response and biological activity of the cryptoccosis

Histophatological diagnosis of the cryptococosis

Freqüentemente, não é possível o isolamento do agente infeccioso em cultivo apropriado, devido à rotina de colocar os fragmentos de tecido em formalina. Isso ocorre porque esse procedimento provoca a morte das estruturas fúngicas, restringindo o diagnóstico aos achados micromorfológicos da histopatologia. Dessa forma, a identificação dos microrganismos aos cortes torna-se um importante meio de avaliação para o estabelecimento do diagnóstico da criptococose. Objetivos: descrever as características histopatológicas da criptococose por meio dos métodos histoquímicos de Hematoxilina-Eosina (H&E), Gomori-Grocott (GMS), Mucicarmim de Mayer, Fontana-Masson (FM) e a técnica Fontana-Masson/Mucicarmim de Mayer (FM/MM), a fim de diferenciar o Cryptococcus, quando da existência de possibilidade da infecção pelo fungo deficiente de cápsula. Métodos: no estudo, foram confeccionadas e analisadas setenta e nove (79) lâminas contendo fragmentos de tecido pulmonar com diagnóstico prévio da criptococose. Foram avaliados os seguintes aspectos: presença de reação tecidual e fagocitose ao H&E; existência de espaço claro indicativo de cápsula e brotamentos no GMS; presença ou ausência de material polissacarídico capsular no MM; evidência de melanina na parede celular fúngica no FM; presença de material polissacarídico capsular e de melanina na parede celular fúngica, simultaneamente ou não no FM/MM. Resultados: na linhagem deficiente de cápsula, o H&E revelou presença de reação tecidual granulomatosa com necrose, células gigantes e fagocitose; na linhagem capsular, ausência de reação inflamatória com a presença de estruturas exibindo halo claro perinuclear. Na linhagem deficiente de cápsula, o GMS detectou a presença de elementos fúngicos corados, na cor negra, e estruturas de tamanho pequeno sem espaço claro circundante, com disposição, ora intracelular, ora extracelular; na linhagem capsular, as leveduras apresentaram espaço claro circundante, indicando a presença de cápsula e brotamentos únicos ou múltiplos com estreita base de crescimento. Na linhagem deficiente, o MM detectou estruturas fúngicas fracamente reativas para cápsula; na linhagem capsular, as leveduras exibiram grande cápsula evidenciou estruturas fúngicas contendo melanina na parede celular. Na linhagem deficiente de cápsula, o FM/MM apresentou elementos fúngicos corados somente pela técnica de Fontana-Masson, evidenciando melanina na parede celular fúngica; não houve simultaneidade com Mucicarmim de Mayer. Na linhagem capsular, pela técnica de Mucicarmim de Mayer, as leveduras apresentaram espessa cápsula polissacarídica de cor magenta, com simultânea evidência de melanina na parede celular fúngica detectada pela técnica de Fontana-Masson. Conclusões: a técnica combinada permitiu a identificação de um maior número de microrganismos do que as técnicas individuais. A criptococose exibe reatividade em vários métodos histoquímicos, incluindo as colorações especiais de Fontana-Masson e de Mucicarmim de Mayer. A utilização dessas colorações, em conjunto, possibilita a identificação laboratorial do Cryptococcus.Frequenty, the isolation of the infectious agent in appropriate culture is not possible, by the fact routine place the histologic sections in formalin. This procedure leads to death of the fungal structures, what restricts the diagnosis to the mycromorphology findings of the histopathology. Therefore, the identification of the fungal agents in the histologic sections becomes an important way to establish the diagnosis of cryptococosis. Objectives: Describe histopathogical characteristics through histochemical methods of Hematoxilineosin (H&E), Grocott methenamine silver (GMS), Mucicarmine (MM), Fontana-Masson (FM) and the Fontana-Masson/Mucicarmine technique (FM/MM), in order to differentiate the Cryptococcus, when of the existence of possibility of the infection for the deficientcapsule of Cryptococcus. Methods: In this study, has been confectioned and analyzed seventy nine (79) blades contend histologic pulmonary sections with previous diagnosis of cryptococosis. It has been evaluated aspects as: presence or absence of tecidual reaction and phagocytosis in the H&E; presence or absence of clear space indicating capsule and buddings in the GMS; presence or absence of capsular polyssacharides material in MM; presence of melanin in fungal cellular wall in the FM; presence of capsular polyssacharides material and melanin in the fungal cellular wall simultaneously or not in the FM/MM. Results: In the lineage capsule-deficient, H&E revealed presence of granulomatous reaction with necrosis, giant cell and phagocytosis; in the lineage capsular, absence of inflammatory reaction with presence of structures showing perinuclear clear space. In the lineage capsule-deficient, the GMS has detected presence of fungal elements stained in black color; structures of small size without clearl surrounding space with disposal intracellular, and or extracellular; in the lineage capsular, the yeasts presents suronding clear space, indicating presence capsule and only or multiple buddings with narrow base of growth. In the lineage capsule-deficient, MM demonstrated fungal structures with weakly reaction for capsule; in the lineage capsular, the yeasts exhibit great polyssacharides capsule, with star aspect, stained in magenta color. In both lineage, the FM evidence fungal structures contend melanin in the cellular wall. In the lineage capsule-deficient, the FM/MM present fungal elements stains only for the technique of Fontana-Masson evidencing the melanin in the fungal cellular wall, in these histologic sections did not have concurrence with Mucicarmine. In the lineage capsular, the yeasts presents great polyssacharides capsule stains in magenta color for the technique of Mucicarmine with simultaneous evidence of melanin in the fungal cellular wall for the technique of Fontan- Masson. Conclusions: Cryptococosis shows reactivity in some histochemical methods, including the colorations special of Fontana-Masson and Mucicarmine. Combinations of colorations are used in the identification of the Cryptococcus. The agreed tecnhiques allowed the identification of a bigger number of fungal agents of that the individual tecniques

Histophatological diagnosis of the cryptococosis

Freqüentemente, não é possível o isolamento do agente infeccioso em cultivo apropriado, devido à rotina de colocar os fragmentos de tecido em formalina. Isso ocorre porque esse procedimento provoca a morte das estruturas fúngicas, restringindo o diagnóstico aos achados micromorfológicos da histopatologia. Dessa forma, a identificação dos microrganismos aos cortes torna-se um importante meio de avaliação para o estabelecimento do diagnóstico da criptococose. Objetivos: descrever as características histopatológicas da criptococose por meio dos métodos histoquímicos de Hematoxilina-Eosina (H&E), Gomori-Grocott (GMS), Mucicarmim de Mayer, Fontana-Masson (FM) e a técnica Fontana-Masson/Mucicarmim de Mayer (FM/MM), a fim de diferenciar o Cryptococcus, quando da existência de possibilidade da infecção pelo fungo deficiente de cápsula. Métodos: no estudo, foram confeccionadas e analisadas setenta e nove (79) lâminas contendo fragmentos de tecido pulmonar com diagnóstico prévio da criptococose. Foram avaliados os seguintes aspectos: presença de reação tecidual e fagocitose ao H&E; existência de espaço claro indicativo de cápsula e brotamentos no GMS; presença ou ausência de material polissacarídico capsular no MM; evidência de melanina na parede celular fúngica no FM; presença de material polissacarídico capsular e de melanina na parede celular fúngica, simultaneamente ou não no FM/MM. Resultados: na linhagem deficiente de cápsula, o H&E revelou presença de reação tecidual granulomatosa com necrose, células gigantes e fagocitose; na linhagem capsular, ausência de reação inflamatória com a presença de estruturas exibindo halo claro perinuclear. Na linhagem deficiente de cápsula, o GMS detectou a presença de elementos fúngicos corados, na cor negra, e estruturas de tamanho pequeno sem espaço claro circundante, com disposição, ora intracelular, ora extracelular; na linhagem capsular, as leveduras apresentaram espaço claro circundante, indicando a presença de cápsula e brotamentos únicos ou múltiplos com estreita base de crescimento. Na linhagem deficiente, o MM detectou estruturas fúngicas fracamente reativas para cápsula; na linhagem capsular, as leveduras exibiram grande cápsula evidenciou estruturas fúngicas contendo melanina na parede celular. Na linhagem deficiente de cápsula, o FM/MM apresentou elementos fúngicos corados somente pela técnica de Fontana-Masson, evidenciando melanina na parede celular fúngica; não houve simultaneidade com Mucicarmim de Mayer. Na linhagem capsular, pela técnica de Mucicarmim de Mayer, as leveduras apresentaram espessa cápsula polissacarídica de cor magenta, com simultânea evidência de melanina na parede celular fúngica detectada pela técnica de Fontana-Masson. Conclusões: a técnica combinada permitiu a identificação de um maior número de microrganismos do que as técnicas individuais. A criptococose exibe reatividade em vários métodos histoquímicos, incluindo as colorações especiais de Fontana-Masson e de Mucicarmim de Mayer. A utilização dessas colorações, em conjunto, possibilita a identificação laboratorial do Cryptococcus.Frequenty, the isolation of the infectious agent in appropriate culture is not possible, by the fact routine place the histologic sections in formalin. This procedure leads to death of the fungal structures, what restricts the diagnosis to the mycromorphology findings of the histopathology. Therefore, the identification of the fungal agents in the histologic sections becomes an important way to establish the diagnosis of cryptococosis. Objectives: Describe histopathogical characteristics through histochemical methods of Hematoxilineosin (H&E), Grocott methenamine silver (GMS), Mucicarmine (MM), Fontana-Masson (FM) and the Fontana-Masson/Mucicarmine technique (FM/MM), in order to differentiate the Cryptococcus, when of the existence of possibility of the infection for the deficientcapsule of Cryptococcus. Methods: In this study, has been confectioned and analyzed seventy nine (79) blades contend histologic pulmonary sections with previous diagnosis of cryptococosis. It has been evaluated aspects as: presence or absence of tecidual reaction and phagocytosis in the H&E; presence or absence of clear space indicating capsule and buddings in the GMS; presence or absence of capsular polyssacharides material in MM; presence of melanin in fungal cellular wall in the FM; presence of capsular polyssacharides material and melanin in the fungal cellular wall simultaneously or not in the FM/MM. Results: In the lineage capsule-deficient, H&E revealed presence of granulomatous reaction with necrosis, giant cell and phagocytosis; in the lineage capsular, absence of inflammatory reaction with presence of structures showing perinuclear clear space. In the lineage capsule-deficient, the GMS has detected presence of fungal elements stained in black color; structures of small size without clearl surrounding space with disposal intracellular, and or extracellular; in the lineage capsular, the yeasts presents suronding clear space, indicating presence capsule and only or multiple buddings with narrow base of growth. In the lineage capsule-deficient, MM demonstrated fungal structures with weakly reaction for capsule; in the lineage capsular, the yeasts exhibit great polyssacharides capsule, with star aspect, stained in magenta color. In both lineage, the FM evidence fungal structures contend melanin in the cellular wall. In the lineage capsule-deficient, the FM/MM present fungal elements stains only for the technique of Fontana-Masson evidencing the melanin in the fungal cellular wall, in these histologic sections did not have concurrence with Mucicarmine. In the lineage capsular, the yeasts presents great polyssacharides capsule stains in magenta color for the technique of Mucicarmine with simultaneous evidence of melanin in the fungal cellular wall for the technique of Fontan- Masson. Conclusions: Cryptococosis shows reactivity in some histochemical methods, including the colorations special of Fontana-Masson and Mucicarmine. Combinations of colorations are used in the identification of the Cryptococcus. The agreed tecnhiques allowed the identification of a bigger number of fungal agents of that the individual tecniques