Molecular Structure, Stability, and Novel Function of Human Serum Transferrin Revealed by MALDI-TOF Mass Spectrometry

转铁蛋白（transferrin,TF）是一类含有铁组分和糖链的金属蛋白质(80kDa)。TF的主要生理功能是输送铁给细胞，或作为生物体液的抗菌因子。TF有两个同源末端（C-和N-端），每个末端又分为两个结构域，结构域之间形成深裂（单一、高亲和力的铁结合位点）。本论文选用梯度、不连续天然凝胶电泳制备人血清转铁蛋白（HTF），并结合电转移和超滤技术进一步分离与浓缩HTF。运用SDS-PAGE、胶内与胶外酶解、MALDI-TOF质谱、数据库检索和比对法等分析技术鉴定HTF。HTF（77.1kDa）由单类型单亚基组成，但经天然和变性等电聚焦分离后，却呈现出两条蛋白带，即HTF-2Fe3+和apoHT...Transferrins are metal-binding glycoproteins (80 kDa) that transport iron from plasma to cells and act as bacteriostatic agents in a variety of biological fluids, containing two homologous lobes (N- and C-), with each lobe further divided into two domains, and there is a single, high-affinity iron-binding site located deeply in the interdomain cleft. In this article, human serotransferrin (HTF) wa...学位：理学硕士院系专业：生命科学学院生物化学与生物技术系_生物化学与分子生物学学号：K20032601

柱层析和MALDI-TOF质谱技术筛选食道癌血清标志多肽

目的探索建立柱层析和基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALD I-TOF)质谱技术筛选食道癌血清标志多肽的方法。方法选用Sephadex G-100葡聚糖作为分离介质,自制小型分离层析柱,分别采集30名健康人、30例食道良性疾病患者和30例食道癌患者血清进行多肽分离,结合MALD I-TOF质谱仪鉴定。结果通过多肽质荷比(m/z)比对技术,筛选出4种诊断食道癌疾病的潜在血清标志多肽,m/z分别为7 651.76、8 091.34、9 264.98、11 784.79。结论柱层析和质谱技术筛选食道癌血清标志多肽所建立的分析技术不仅快速简单,而且同样适合于筛选其他人类重大疾病的血清标志多肽或酶蛋白

α-羟丁酸脱氢酶与乳酸脱氢酶比值的临床意义

目的探讨α-羟丁酸脱氢酶与乳酸脱氢酶比值对心肌梗死的诊断价值。方法采用470例血清HBDH升高患者血清,分为心肌梗死组、脑部疾病组、肺部疾病组、肝脏疾病组、肾脏疾病组,测定血清中α-羟丁酸脱氢酶与乳酸脱氢酶比值。同时,设正常对照组。结果心肌梗塞组及脑部疾病组HBDH/LDH比值明显升高,与正常对照组有着显著性差异(P0.05)。结论以HBDH/LDH的比值诊断心肌梗塞较之单纯用HBDH或LDH诊断特异性高

反应温度和pH影响魟鱼肝铁蛋白释放铁速率的研究

小批量制备电泳纯魟鱼肝铁蛋白(liver ferritin ofDasyatis akajei,DALF).在不同反应温度和pH条件下,研究温度和pH对DALF释放铁速率、动力学和级数转换特性的影响.实验结果表明,随着反应温度递增(30~45℃),DALF释放铁的速率明显不同,但DALF释放铁的全过程均呈复杂途径.通过提高反应温度和增加释放铁的速率途径均无法使DALF释放铁的途径由复杂转换为简单.不同pH的反应介质直接影响DALF释放铁的速率,在弱酸介质中,DALF释放铁的速率明显高于在弱碱介质中.在pH5.0条件下,DALF以一级反应动力学的全过程途径释放铁,使释放铁的复杂途径趋于简单化.在生理pH或中性介质条件下,铁蛋白亚基之间相互作用强度起着控释DALF释放铁速率且表现出复杂动力学特性

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术研究人血清转铁蛋白稳定性及裂解产物

制备质谱纯人血清转铁蛋白(HTF),供分子结构分析。选用SDS-PAGE、胶外酶解、基质辅助激光解吸/电离质谱技术(MALDI-TOF)、数据库检索和比对技术鉴定铁饱和HTF、双铁HTF(HTF-2Fe3+)、单铁HTF(HTF-Fe3+)和脱铁HTF(apoHTF)的稳定性和裂解产物。以乙腈溶液作为洗脱相,发现铁饱和HTF在RP-HPLC分离纯化过程中产生裂解现象。铁饱和HTF和HTF-2Fe3+经乙腈处理后均能产生不同分子量的短肽裂解产物,指出HTF结构稳定性与络合铁离子数量有关。铁组分改善了HTF分子结构的稳定性。采用比对法,研究在乙腈作用下HTF裂解成为各种各样短肽的规律,初步阐明其裂解机理。在乙腈作用下,HTF可能通过蛋白质去折叠途径,形成不同多聚态HTF或多肽裂解产物。推测目前用于临床诊断先天性糖基化紊乱(CDG)和慢性酒精滥用(CAA)疾病低准确率的起因可能是受HTF裂解产物或多聚体的干扰

质谱技术在筛选肺癌血清差异多肽与蛋白质的应用

采用凝胶排阻层析(SEC)与MALD I-TOF质谱非在线联用技术研究男性血清中多肽与蛋白质的组成与分布.实验结果表明,分离介质Sephadex G-75比Sephadex G-50和Sephadex G-100更加适合血清多肽与蛋白质的预分离.男性血清经Sephadex G-75层析柱预分离和MALD I-TOF质谱分析后,可获得56个多肽与蛋白质的分子离子峰.差异比对实验表明,在正常人与患有肺癌疾病的男性血清中,正常男性血清存在着7种不同质荷比(m/z)的差异多肽与蛋白质,其m/z的比值分别为4 808,6 867,6 912,7 036,27 990,28 120,50 687;反之,在肺癌患者血清中发现差异的m/z值为6 139,6 544,8 417,8 480,11 109.这些差异多肽与蛋白质为临床诊断正常人和患有肺癌疾病患者的标记物提供一条途径

复杂性后尿道狭窄81例治疗分析

目的探讨复杂性后尿道狭窄或闭锁的手术治疗方法,提高手术治疗效果。方法 1991～2008年收治的81例复杂性后尿道狭窄/闭锁患者,狭窄/闭锁段长度为3～10cm,其中>5cm者27例;66例曾有1～4次手术史;62例行改良尿道套入术,19例尿道端端吻合术;73例经会阴或腹会阴切口,8例经耻骨或切除部分耻骨下缘切口。15例应用尿道替代物成形。结果 76例(93.8%)术后排尿满意,5例失败,其中改良尿道套入术和尿道端端吻合术成功率分别为95.2%(59/62)、89.5%(17/19)(P>0.05)。15例应用尿道替代物成形术均取得成功。结论复杂性后尿道狭窄/闭锁的治疗应根据尿道病变情况选择不同的手术径路及术式,改良尿道套入术具有创伤小、操作简便、成功率高等优点。尿道狭窄段>5cm者应考虑应用尿道替代物成形

中国海及邻近区域碳库与通量综合分析

中国海总面积约470万平方公里,纵跨热带、亚热带、温带、北温带等多个气候带.其中,南海北依\"世界第三极\"青藏高原、南邻\"全球气候引擎\"西太平洋暖池,东海拥有全球最宽的陆架之一,跨陆架物质运输显著,黄海是冷暖流交汇区域,渤海则是受人类活动高度影响的内湾浅海.中国海内有长江、黄河、珠江等大河输入,外邻全球两大西边界流之一的黑潮.这些鲜明的特色赋予了中国海碳储库和通量研究的典型代表意义.文章从不同海区（渤海、黄海、东海、南海）、不同界面（陆-海、海-气、水柱-沉积物、边缘海-大洋等）,以及不同生态系统（红树林、盐沼湿地、海草床、海藻养殖、珊瑚礁、水柱生态系统等）多层面对海洋碳库与通量进行了较系统地综合分析,初步估算了各个碳库的储量与不同碳库间的通量.就海气通量而言,渤海向大气中释放CO2约0.22Tg Ca-1,黄海吸收CO2约1.15Tg Ca-1,东海吸收CO2约6.92～23.30Tg Ca-1,南海释放CO2约13.86～33.60Tg Ca-1.如果仅考虑海-气界面的CO2交换,中国海总体上是大气CO2的\"源\",净释放量约6.01～9.33Tg Ca-1.这主要是由于河流输入以及邻近大洋输入所致.河流输入渤黄海、东海、南海的溶解无机碳（DIC）分别为5.04、14.60和40.14Tg Ca-1,而邻近大洋输入DIC更是高达144.81Tg Ca-1,远超中国海向大气释放的碳量.渤海、黄海、东海、南海的沉积有机碳通量分别为2.00、3.60、7.40、7.49Tg Ca-1.东海和南海向邻近大洋输送有机碳通量分别为15.25～36.70和43.39Tg Ca-1.就生态系统而言,中国沿海红树林、盐沼湿地、海草床有机碳埋藏通量为0.36Tg Ca-1,海草床溶解有机碳（DOC）输出通量为0.59Tg Ca-1;中国近海海藻养殖移出碳通量0.68Tg Ca-1,沉积和DOC释放通量分别为0.14和0.82Tg Ca-1.总计,中国海有机碳年输出通量为81.72～103.17Tg Ca-1.中国海的有机碳输出以DOC形式为主,东海向邻近大洋输出的DOC通量约15.00～35.00Tg Ca-1,南海输出约31.39Tg Ca-1.综上,尽管从海-气通量看中国海是大气CO2的\"源\",但考虑了河流、大洋输入、沉积输出以及微型生物碳泵（DOC转化输出）作用后,中国海是重要的储碳区.需要指出的是,文章数据是基于中国海各海区碳循环研究报道,鉴于不同研究方法上的差异,所得数据难免有一定的误差范围,亟待将来统一方法标准下的更多深入研究和分析.国家重点研发计划项目(编号:2016YFA0601400);;国家自然科学基金项目(批准号:91751207、91428308、41722603、41606153、41422603);;中央高校基础研究项目(编号:20720170107);;中海油项目(编号:CNOOC-KJ125FZDXM00TJ001-2014、CNOOCKJ125FZDXM00ZJ001-2014)资