用荧光双链引物特异扩增并定量核酸

描述了一种利用特殊的双链引物———突触引物 ,用于核酸扩增的特异定量检测 .在传统的引物的 5’端标记荧光物质 ,而在引物的互补序列的 3’端标记荧光淬灭剂以封闭其延伸 .二者杂交即成双链突触引物 .在制备PCR反应混合物阶段以及加热的初期 ,突触引物保持稳定的双链结构而不能引导扩增 ,在退火阶段 ,突触引物部分解链导致引物延伸 ,荧光物质与淬灭剂分开而产生荧光 .利用人 β珠蛋白基因对此方法进行了验证 .这种可自行退火的荧光引物不仅简单地实现了实时扩增 ,同时比常规的热启动PCR更有效地提高了扩增的特异

双链探针同步荧光技术快速筛查C282Y点突变

以荧光染料Fam和Joe分别标记野生型和突变型双链探针作为均相检测探针,以构建的DNA模板作为研究模型,采用固定波长差同步荧光分析法对PCR反应产物进行终点检测。通过对HFE基因C282Y点突变的检测,并以限制性内切核酸酶RsaI证实,该方法是一种廉价、快速、可靠的筛查遗传性血色病基因C282Y突变的方法,该法可扩展到各种基因的突变检测

单管实时PCR快速检验ABO基因型

目的建立快捷特异的ABO基因分型检测方法。方法根据ABO基因结构特点,设计特异性引物和四色双链探针,采用单管实时PCR方法检测ABO基因,结果与传统免疫学方法相对比。结果该方法可检出常见的3个等位基因,区分常见的6种基因型,全部检测过程可在100min内完成。110例中国人的随机个体定型结果与传统免疫学方法一致。结论实时PCR法进行ABO基因分型,简便快捷,灵敏度高,可以有效地为侦查破案服务

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子 (Nos)的序列特点 ,设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针 ,建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分 35S启动子和Nos终止子的方法 .并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等 11份实物样品进行了检测 ,其中有 5份样品结果阳性 .结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测出 35S和Nos双组分 ,较常规PCR技术更为简便、快速、准确 ,有很好的应用前景

PCR Method for Assaying Transgenic Component 35S and NOS in Foods

根据转基因农作物中最常用的花椰菜叶病毒启动子(CaMV35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针(FDCP),分别建立了常规PCR、应用FDCP的新型实时荧光PCR检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法。利用该套方法对冷冻马铃薯条、大豆、冷冻玉米棒、甜椒、番茄等实物样品进行了检测,发现11份样品中有5份检出35S启动子、NOS终止子,6份样品结果为阴性。结果表明我们建立的两种PCR方法均能有效检测出35S和NOS片段,其中常规PCR方法具有灵敏度高、特异性好的特点;应用FDCP的新型实时荧光PCR方法则更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。The article was is to establish PCR method for assaying transgenic component 35S promoter derived from Cauliflower Mosaic Virus and NOS terminator derived from Agrobacterium tumefaciens in foods.According to the specific sequence of 35S and NOS Which have been used in transgenic crops frequently,two pairs of primers and two pairs of corresponding Fluorophore double-chain probes (FDCP) were designed to amplify parts of 35S promoter and NOS terminator,to allow for general screening of foods.PCR & Fluorescence PCR(FPCR)methods were established for the assay of transgenic component 35S and NOS.11 samples were tested with PCR & FPCR.The results showed that 5 samples were positive,6 samples were negative.The described methods enabled a sensitive、specific、simple and accurate assay of transgenic component and thus provided & a useful tool for routine analysis of raw and processed food products

荧光PCR同时检测转基因成分35S和NOS

根据转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒启动子 (CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子 (NOS)基因序列 ,设计并合成了两对不同的引物和相对应的两种荧光双链探针 ,建立一种应用荧光双链探针的实时PCR定量检测转基因成分 35S启动子和NOS终止子的方法。并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测 ,发现 11份样品中有 5份检出 35S和NOS基因成分 ,其余 6份样品结果为阴性。结果表明本文建立的荧光PCR方法能有效检测出 35S和NOS两种转基因成分 ,较常规PCR技术更为简便、快速、准确 ,有很好的应用前景和研究价值