The effect of low glucose and high lactic acid on the survival of Hela

目的:探讨低糖高乳酸环境对宫颈癌细胞生存的影响,以及对EGFR-mTOR通路的调节作用。方法:将Hela细胞培养于常糖(葡萄糖10mmol/L); 、低糖(葡萄糖3mmol/L)、高乳酸(葡萄糖10mmol/L,乳酸2.5mmol/L)、低糖高乳酸(葡萄糖3mmol/L,乳酸2.5mmol/; L)4种环境下,CCK-8法测定Hela细胞的生长抑制率,流式细胞术测定细胞周期。荧光实时定量PCR法检测EGFR和mTOR; mRNA水平表达。结果:与常糖组相比,高乳酸组的细胞抑制率显著升高(P<0.01),48h细胞G_1/G_0期比例显著升高(P<0.01),细胞; 凋亡率、EGFR和mTOR; mRNA表达水平均无变化。与常糖组相比,低糖组的细胞抑制率显著升高(P<0.01),48h细胞凋亡率显著降低(P<0.01),细胞各周期比例变化; 与常糖组无差异,EGFR表达水平降低(P<0.05)。与常糖组相比,低糖高乳酸组的细胞抑制率显著升高(P<0.01),但低于低糖组(P<0.01; )和高乳酸组(P<0.05),48h G_1/G_0期比例显著升高(P<0.01),细胞诱导凋亡率显著升高(P<0.01),EGFR和mTOR; mRNA表达水平均显著升高(P<0.01)。结论:Hela细胞在低糖高乳酸环境中的存活状况好于单纯低糖和单纯高乳酸环境,且伴随着EGFR和mTO; R基因表达水平上升。Objective:To explore the effect of the low glucose and high lactic acid; environment of survival of cervical carcinoma cells,and the regulation; of EGFR-mTOR signal way.Methods:Hela cells were cultured in four; conditions:normal glucose (glucose 10mmol/L),low glucose (glucose; 3mmol/L),high lactic acid (lactic acid 2.5mmol/L) and low glucose add; high lactic acid (glucose 3mmol/L,lactic acid 2.5mmol/L).Growth; inhibition rate of Hela cell was determined by CCK-8.Flow cytometry; (FCM)were performed to evaluate the cell cycle.The expression levels of; EGFR and mTOR mRNA were detected using real-time quantitative polymerase; chain reaction (real-time PCR).Results:Compared with those in regular; sugar environment,the cell growth inhibition rates were significantly; increased in high lactic acid environment(P<0.01).At 48h,the rate of; G_1/G_0 was significantly increased (P<0.01),while the apoptosis rate of; the cells and the expressions of EGFR and mTOR mRNA had no; change.Compared with those in regular sugar environment,the cell growth; inhibition rates were significantly increased in high lactic acid; environment,(P<0.01),while lower than those in low glucose; environment(P<0.01) and in high acid environment(P<0.05).The rates of; G_1,G_2 and S phase had no change.The expressions of EGFR mRNA was; reduced (P<0.05).The cell growth inhibition rates were significantly; increased in high lactic acid add low glucose environment (P<0.01).At; 48h,the apoptosis rate and the rate of G_1/G_0 were significantly; increased (P<0.01),while the EGFR and mTOR expression levels were also; increased (P<0.05).Conclusion:Hela in the low glucose add high lactic; acid survives better than those in low glucose and in high lactic acid; environment,while the expression of EGFR and mTOR is increased.泉州市科技计划立项项目; 国家面上项

氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响

选用L Ala、L Val、L Leu等15种氨基酸为效应物,研究它们对杂色鲍(Haliotisdiversicolor)碱性磷酸酶(EC.3.1.3.1)催化pNPP水解反应的影响.结果表明:上述这些氨基酸对鲍鱼碱性磷酸酶均有一定程度的抑制作用,抑制程度随着试剂浓度增大而加剧.当浓度为10.0mmol/L时,分别可以使酶活力下降:7.77%、36.75%、22.79%、39.86%、16.16%、19.33%、94.77%、20.19%、17.02%、40.15%、31.08%、17.52%、30.56%、36.77%和12.59%.尤其以L Cys对酶的抑制作用最为显著(抑制率为94.77%),其次是L Ile和L His,它们均能使酶活力下降40%;对酶抑制率在30%以上的氨基酸还有L Val、L Trp、L Phe和L Lys,其它选用的氨基酸对酶的抑制率小于25%.选择对杂色鲍ALP具有较明显的抑制作用的氨基酸L Val、L Ile、L Trp和L Cys等氨基酸为研究对象,研究它们对酶催化pNPP水解反应的抑制作用机理,并测定其抑制常数.结果表明L Cys的抑制作用为混合型效应,其KI和KIS值分别为0.042mmol/L和0.139mmol/L;而L Val、L Ile、L Trp为反竞争性,其KIS分别为9.56、8.55、8.09mmol/L

低糖高乳酸环境下吉非替尼诱导HeLa细胞EGFR-TKI耐药的研究

目的探讨低糖高乳酸微环境对表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)抑制HeLa细胞的影响和可能机制。方法HeLa细胞在常糖(葡萄糖10; mmol/L)和低糖高乳酸(葡萄糖3 mmol/L +乳酸2.5 mmol/L)环境下培养,并分别给予2.67; mumol/L吉非替尼干预。采用CCK-8法测定HeLa细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,荧光定量RT-PCR检测EGFR和mTOR; mRNA水平的表达。结果与常糖组比较,低糖乳酸组24 h和72 h细胞抑制率均显著升高(P < 0.01),48; h细胞抑制率略高于常糖组。与吉非替尼阴性组比较,常糖+吉非替尼组和低糖乳酸+吉非替尼组在24、48、72 h三个时点细胞抑制率均显著上升(P <; 0.01)。与常糖组相比,低糖乳酸组48 h细胞诱导凋亡率显著上升(P <; 0.01),低糖乳酸+吉非替尼组细胞诱导凋亡率较低糖乳酸组显著降低(P < 0.01)。与常糖组比较,低糖乳酸组存活细胞的EGFR和mTOR; mRNA表达水平上调(P < 0.05)。常糖+吉非替尼组的EGFR和mTOR mRNA水平均上调(P <; 0.05)。与低糖乳酸组比较,低糖乳酸+吉非替尼组的EGFR和mTOR mRNA上调水平有显著差异(P <; 0.01)。结论高乳酸低糖环境下吉非替尼可大幅度上调存活HeLa细胞EGFR和mTOR表达水平,可能是诱导HeLa细胞抵抗EGFR-TKI的机制; 。泉州市第一医院青年科研; 泉州市科技计划项目; 国家面上项

乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明,酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降,乙醇浓度40%可使酶活力完全丧失,说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用,IC50为13%.含较低浓度乙醇(30%)的失活过程是可逆的反应.测定乙醇对酶的失活作用机理,结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制,说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用.应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化,发现乙醇对酶分子构象有显著的影响,酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强,荧光发射峰逐渐发生红移.紫外吸收光谱在276 nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强.这些结果表明,酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化

潜在血源传播梅毒患者血清抵抗特性分析

目的研究潜在血源传播梅毒患者血清抵抗特性,探讨其传染性和复发的血清学指标。方法在回顾性分析2005年6月-2009年5月厦门大学附属中山医院收治的714例潜在血源传播梅毒患者的血清抵抗特性基础上,采用荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)进行梅毒特异性IgM抗体(TP-IgM)检测。结果 714例潜在血源传播梅毒患者中,有242例患者经1年梅毒规范治疗后,其反应素仍保持阳性,血清抵抗率33.89%,其中男性患者血清抵抗率28.08%,显著低于女性患者(40.54%),差异有统计学意义(χ2=12.306,P<0.05);不同检测年度、不同年龄患者血清抵抗率差异无统计学意义;采用FTA-ABS法,242例血清抵抗患者中检出TP-IgM的阳性率为32.23%,显著高于梅毒血清治愈组(10.70%)和献血员组(0)。结论潜在血源传播梅毒患者有着较高的血清抵抗率,是梅毒治疗失败的重要表现,并容易复发和具有传染性,TP-IgM可作为其复发和具有传染性的血清学指标

鲍鱼碱性磷酸酶的分离纯化和性质研究

以杂色鲍(Haliotis diversicolor)内脏为原料,经Tris HCl缓冲液(pH 7.5,含0.1mol/L NaCl)抽提,正丁醇处理,硫酸铵分级沉淀分离,DE 32离子交换、Sephadex G 150分子筛、DE 32纯化,得到电泳单一纯的碱性磷酸酶制剂,比活力为1 226 U/mg.酶学性质和动力学性质研究表明:该酶催化对硝基苯磷酸水解反应的最适 pH值为 10.08,最适温度为48℃.米氏常数Km 值为0.80 mmol/L,Vm 值为20.1 mmol/L·min-1(pH 10.0,37℃).酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 7~11区间和在温度低于55℃下稳定.金属离子对酶活力的影响结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有影响,Mg2+、Ca2+、Ba2+、Mn2+和Co2+对酶有不同程度的激活作用,而Cu2+、Cd2+、Zn2+、Hg2+、Ag+、Bi2+和Pb2+等对酶起抑制作用

潜在血源传播患者梅毒血清学TRUST/TPPA与IgM抗体联合检测

目的为潜在血源传播患者筛选梅毒血清学传染病指标。方法采用回顾性研究,对2006年6月1日～2009年12月31日本院23720例潜在血源传播患者与门诊患者的TRUST/TPPA联合检测结果进行分析比较;分析不同年度潜在血源传播患者TRUST-/TPPA+的百分率变化;对其中118份TRUST-/TPPA+的潜在血源传播患者血清标本同时采用TPPA法和FTA-ABS法进行Tp-IgM抗体检测。结果潜在血源传播患者和门诊患者的梅毒抗体阳性率分别为8.62%和26.69%,二者差异有显著性;在梅毒抗体阳性标本中,TRUST-/TPPA+占有相当的比例,二者分别为3.12%和7.50%;潜在血源传播患者中TRUST-/TPPA+的百分率呈逐年上升趋势;118份TRUST-/TPPA+的潜在血源传播患者血清,经TPPA法和FTA-ABS法检出TP-IgM抗体阳性分别为13例和10例。结论潜在血源传播患者的梅毒传染性指标的监测应至少包含特异性抗体试验,如TPPA;TP-IgM检测有助于判断其传染性

The Characterization of InGaN and InGaN/GaN Quantum Wells Grown by LP-MOCVD

【中文摘要】 利用 MOCVD系统在 Al2 O3衬底上生长 In Ga N材料和 In Ga N/ Ga N量子阱结构材料。研究发现 ,In Ga N材料中 In组份几乎不受 TMG与 TMI的流量比的影响 ,而只与生长温度有关 ,生长温度由 80 0℃降低到 74 0℃ ,In组份的从 0 .2 2增加到 0 .4 5 ;室温 In Ga N光致发光光谱 (PL)峰全半高宽 (FWH M)为 15 .5 nm;In Ga N/ Ga N量子阱区 In Ga N的厚度 2 nm,但光荧光的强度与 10 0 nm厚 In Ga N的体材料相当。 【英文摘要】 InGaN bulk material and InGaN/GaN quantum well were grown by low pressure metal organic chemical vapor deposition(LP MOCVD),and they were characterized by X ray and photo luminescence(PL) maximum at room temperature.The PL full width of half of InGaN grown at 800 ℃ is 15.5 nm at room temperature and the peak wavelength is 437 nm.The In composition in InGaN did not dependent on the ratio of TMG and TMI but on the growth temperature and the In content increases from 0.22 at 800 ℃ to 0.45 at 740 ℃.The In com...福建省自然科学基金资助项目 (E9820001) ; 国家教育部高等学校骨干教师资助计划项目资

环氧合酶-2单克隆抗体的制备和初步应用

以合成肽COX-2-KLH为完全抗原免疫BALB/c小鼠,通过脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合的杂交瘤技术,筛选获得4株(1E10、3D6、5B11、6G4)稳定分泌抗COX-2单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株.采用ELISA的方法鉴定McAb效价、亚型及特异性.各株McAb均属IgG1亚型,其中1E10腹水纯化后MCAb效价在1∶107以上,SDS-PAGE电泳为单一条带,与同源异构体蛋白不发生交叉反应.获得的McAb被成功应用于COX-2生物学研究中的免疫组织化学(IHC)和Western Blot试验中.本研究获得的单抗具有特异、高效的特点,为COX-2生物学相关研究提供理论依据

The Study of Photoluminescence Spectra of Porous Silicon Characterized with Double Peaks

【中文摘要】采用阳极腐蚀法制备了多孔硅 (PS) ,用原子力显微镜 (AFM)照片对其表面和结构做了分析 ,观察到多孔硅纳米尺寸的微结构 ;并进行了多孔硅层 (PSL )的光致发光谱 (PL)测量 ,观察到PL谱峰的”蓝移”和双峰现象 ,符合量子尺寸效应和发光中心理论 ,红外吸收谱进一步证明了发光中心的存在 【英文摘要】In this article, a porous silicon was fabricated by electrochemical anodizing using our self-designed apparatus, and its surface morphology was observed with an atomic force microscope. From the photoluminescence spectra of porous silicon layers, the phenomenon of blue shift and double peaks can be seen. It was concluded that the quantum confinement theory and luminescence centers were responsible for these phenomena.. The Infrared Spectrum proves the existence of luminescence centers.国家自然科学基金 (60006004)，福建省青年重点基金资助项