Studies on reverse transcription ofMortierella alpina elongase gene and its homologous expression

花生四烯酸（Arachidonicacid，ARA）是人体一种必需的多不饱和脂肪酸，它 不仅在营养代谢中起重要作用，而且还被广泛应用于医药、食品和饲料等各种领 域，有着广阔的应用前景。但是传统的发酵工艺并不能满足日益增加的市场需求， 需要从分子水平进行改造以提高ARA的发酵生产水平。 本文首先以高山被孢霉的总RNA为模板，通过PCR反转录技术扩增出高山被 孢霉延长酶基因（GLELO），将其克隆到simpleTVector，构建重组质粒TGLELO 。由于GLELO序列上有含有BamHI酶切位点，与要插入pD4质粒所用酶切 位点一致，需敲除GLELO基因上的BamHI酶切位点，实验...Arachidonic acid (ARA) is one of the essential polyunsaturated fatty acids in human, which plays an important role in nutrition metabolism. ARA has a wide application prospect in the field of medicine, food industry and feed additive. While ARA yield produced by traditional fermentation strategy cannot meet the increasing market demand, it is necessary to improve the production of ARA through ...学位：工学硕士院系专业：化学化工学院化学工程与生物工程系_生物化工学号：2062009115129

Domestication of the high-sugar-tolerant Mortierella alpina on arachidonic acid(ARA) production

通讯作者：Tel: 86-592-2186038; : [email protected][中文摘要]【目的】提高花生四烯酸(Arachidonic acid,ARA)产量,克服ARA产生菌高山被孢霉(Mortierella alpina)在长期的保存及使用过程中易受到外界条件影响发生退化,从而导致菌种耗糖量降低、影响菌种摄入营养的能力和不利于工业化生产的缺点。【方法】首先采用固体培养基驯化,将菌种逐级涂布于梯度高糖PDA平板(含糖量分别为2%、5%、7%、10%和15%)培养,挑选经固体驯化后能耐受10%高糖浓度平板的菌种,转接到两种含不同氮源的梯度高糖(含糖量分别为3%、4%、5%和6%)液体培养基中进行驯化,最后对驯化后的菌种进行2 L发酵罐放大实验。【结果】当培养基中以酵母粉为氮源时,驯化后菌体的最高耗糖量由3 g/(L.d)提高到12 g/(L.d);当培养基中以玉米浆为氮源时,驯化后菌体的最高耗糖量由7 g/(L.d)提高到12 g/(L.d)。摇瓶驯化实验结果表明以玉米浆为氮源驯化的菌种发酵效果较好,发酵罐实验结果显示菌体生物量为50 g/L,总油脂为18 g/L,目的产物ARA产量为8 g/L。相比未驯化之前的发酵结果,生物量和总油脂含量提高了近3倍,ARA产量提高了近4倍。【结论】经过高糖驯化, 菌种的耗糖能力得到提高, 生物量、总油脂及ARA 的产量也都有所增加, 从而可以使菌种在保存和使用过程中不易退化,保持稳定。[英文摘要][Objective] In order to improve arachidonia acid(ARA) production,and prevent the degeneration of ARA-producing strain Mortierella alpina in long-term culture preservation and cultivation,which could lead to low consumption rate of substrates like carbon source.[Methods] Mortierella alpina strain was first domesticated in high-sugar PDA plate with gra-dient sugar content(2%、5%、7%、10% and 15%).The strain which grew better in the solid medium containing 10% sugar was then selected and transferred to two liquid high-sugar media with different nitrogen sources to domesticate. The gradient sugar contents were 3%、4%、5% and 6%, respectivlely. Finally, the domesticated strain was used to produce ARA in a 2 L bioreactor. [Results] The experimental results show that the consumption of sugar increased from 3 g/(L·d) up to 12 g/(L·d) in the medium with yeast extract, and from 7 g/(L·d) up to 12 g/(L·d) in the medium with corn steep liquor. After cultivation for 144 h in a 2 L bioreactor,the yield of ARA reached 8 g/L, which was 4 times higher than that obtained with the original strain. [Conclusion] The domestication of the high-sugar-tolerant Mortierella alpina increased the consumption of sugar, biomass, total fatty acid and ARA production. The domesticated strain could maintain the high sugar resistance in the preserving process and turn to be more stable.福建省科技厅重大专项项目(No.2010NZ0001-4);; 国家自然科学基金项目(No.31071488

从中国非甲-庚型肝炎病人中克隆到TT病毒样DNA序列

从中国非甲－庚型肝炎病人中克隆到ＴＴ病毒样ＤＮＡ序列张军１杨海杰１苏智军２张奕返２林长青１黄鹤１郭庆１王颖１曾定１夏宁邵１（１厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室厦门３６１００５２福建省泉州市第一医院泉州３６２０００）肝炎是严重危害我国人民身体健康的疾..

庚型肝炎病毒基因在大肠杆菌中表达的初步研究

利用原核表达载体 pRSET或 (和 )pGEX在大肠杆菌内表达了覆盖庚型肝炎病毒 (HGV)C NS3和NS5区的多段基因。CE1、E2、NS3、NS5及NS3 NS5嵌合基因等的 8段基因均有高效表达 ,各重组蛋白产量与菌体总蛋白之比在 10 %～ 35 %之间。对以上重组蛋白进行免疫学筛选 ,证实其中 7个重组蛋白均具免疫学活性 ,在一定程度上确定了重组HGV抗原表位的分布 ,为HGV的血清学和免疫学诊断试剂的研究奠定了坚实基

Abnormal Prediction Error in Reward Processing in Food Addiction and Its Underlying Cognitive Neural Mechanisms

近年来，我国肥胖率不断上升，其中暴饮暴食相关的食物成瘾被认为是肥胖发生的重要原因之一。食物成瘾（Food Addiction）是指对特定食物（通常是富含 高糖、高脂肪的食物）的依赖性已经发展到难以自我控制的程度，表现出一系列成瘾样的行为学变化和神经机制的变化，特别表现为在饱腹状态下仍然存在对食 物的渴望。强烈的食欲是一种奖赏预期过高的表现。早期研究仅考虑线索反应，认为食物成瘾的本质是对可口食物更渴望；但当研究考虑状态的影响后，发现从 饥饿到饱腹状态的食欲不降低，可能与奖赏维持有关。这些结果提示进一步研究 需要考虑动态奖赏加工，把进食看作一个不断获得食物和调整进食的过程。奖赏调整的过程依靠于预测误差，从饥饿到饱腹的过程是预测误差趋于负，预期逐渐 降低的过程。基于此，研究一旨在探讨食物成瘾者饱腹状态下在食物奖赏加工中负性预测误差信号（Feedback-Related Negative，FRN）较低是否与较高的奖赏预 期信号（Stimulus Preceding Negativity，SPN）有关，以及与食物成瘾严重程度的关系。奖赏加工中的预测误差与背侧前扣带回的监测错误功能有关食物成瘾者 的背侧前扣带回活动低导致不能在从饿到饱的过程中把预期降下来。基于背侧前扣带回与监测错误相关的激活在颅内表现为 theta 振荡，研究二旨在通过时频分 析，进一步验证饱腹状态下食物相关的 FRN 与 theta 之间的关系。近而，研究三通过 theta 频段的经颅时域干涉刺激（tTIS, Temporally Interference Stimulation） 调控背侧前扣带回，旨在验证食物成瘾者背侧前扣带回的作用，并改变奖赏加工 中的预测误差信号。 年来，我国肥胖率不断上升，其中暴饮暴食相关的食物成瘾被认为是肥胖发生的重要原因之一。食物成瘾（Food Addiction）是指对特定食物（通常是富含 高糖、高脂肪的食物）的依赖性已经发展到难以自我控制的程度，表现出一系列成瘾样的行为学变化和神经机制的变化，特别表现为在饱腹状态下仍然存在对食 物的渴望。强烈的食欲是一种奖赏预期过高的表现。早期研究仅考虑线索反应，认为食物成瘾的本质是对可口食物更渴望；但当研究考虑状态的影响后，发现从 饥饿到饱腹状态的食欲不降低，可能与奖赏维持有关。这些结果提示进一步研究 需要考虑动态奖赏加工，把进食看作一个不断获得食物和调整进食的过程。奖赏 调整的过程依靠于预测误差，从饥饿到饱腹的过程是预测误差趋于负，预期逐渐 降低的过程。基于此，研究一旨在探讨食物成瘾者饱腹状态下在食物奖赏加工中负性预测误差信号（Feedback-Related Negative，FRN）较低是否与较高的奖赏预 期信号（Stimulus Preceding Negativity，SPN）有关，以及与食物成瘾严重程度的关系。奖赏加工中的预测误差与背侧前扣带回的监测错误功能有关，食物成瘾者 的背侧前扣带回活动低导致不能在从饿到饱的过程中把预期降下来。基于背侧前 扣带回与监测错误相关的激活在颅内表现为 theta 振荡，研究二旨在通过时频分 析，进一步验证饱腹状态下食物相关的 FRN 与 theta 之间的关系。近而，研究三通过 theta 频段的经颅时域干涉刺激（tTIS, Temporally Interference Stimulation） 调控背侧前扣带回，旨在验证食物成瘾者背侧前扣带回的作用，并改变奖赏加工中的预测误差信号。 年来，我国肥胖率不断上升，其中暴饮暴食相关的食物成瘾被认为是肥胖发生的重要原因之一。食物成瘾（Food Addiction）是指对特定食物（通常是富含 高糖、高脂肪的食物）的依赖性已经发展到难以自我控制的程度，表现出一系列成瘾样的行为学变化和神经机制的变化，特别表现为在饱腹状态下仍然存在对食 物的渴望。强烈的食欲是一种奖赏预期过高的表现。早期研究仅考虑线索反应，认为食物成瘾的本质是对可口食物更渴望；但当研究考虑状态的影响后，发现从 饥饿到饱腹状态的食欲不降低，可能与奖赏维持有关。这些结果提示进一步研究 需要考虑动态奖赏加工，把进食看作一个不断获得食物和调整进食的过程。奖赏 调整的过程依靠于预测误差，从饥饿到饱腹的过程是预测误差趋于负，预期逐渐 降低的过程。基于此，研究一旨在探讨食物成瘾者饱腹状态下在食物奖赏加工中负性预测误差信号（Feedback-Related Negative，FRN）较低是否与较高的奖赏预 期信号（Stimulus Preceding Negativity，SPN）有关，以及与食物成瘾严重程度的关系。奖赏加工中的预测误差与背侧前扣带回的监测错误功能有关，食物成瘾者的背侧前扣带回活动低导致不能在从饿到饱的过程中把预期降下来。基于背侧前 扣带回与监测错误相关的激活在颅内表现为 theta 振荡，研究二旨在通过时频分 析，进一步验证饱腹状态下食物相关的 FRN 与 theta 之间的关系。近而，研究三 通过 theta 频段的经颅时域干涉刺激（tTIS, Temporally Interference Stimulation） 调控背侧前扣带回，旨在验证食物成瘾者背侧前扣带回的作用，并改变奖赏加工中的预测误差信号。 研究二结果发现，在食物奖赏反馈后正确预测（预测有实际有）和错误预测 （预测有实际无）均诱发了 theta 振荡，且负性预测错误（两个条件相减）的地 形分布在额叶中线（FCz、Fz）处，该频段振荡出现的窗口期和地形分布均与 FRN 重合。食物成瘾组在饱腹状态下 FMtheta 与对照组相比存在降低趋势，但统计未 达到显著。结果表明，食物成瘾组在饱腹状态下异常低的 FMtheta 可能和无法正 常进行监测、评估有关。该部分结果为使用 theta 频段的 tTIS 调控背侧前扣带回 提供证据。 研究三结果发现，两组仅在食物奖赏上存在差异。食物成瘾者在接受 tTIS 真 刺激后对食物奖赏的 FRN 幅度增加，而伪刺激组无显著变化。两组在 SPN 和 LPP 上均无显著改变。该结果提示，FRN 的短暂改变还不足以引起 SPN 和 LPP 的共变，或需要 FRN 稳固改变并且 FRN 的改变足够大时——即 dACC 功能转变 后——才能带来 SPN 和 LPP 的变化。后续研究需进一步探讨多次调控带来长期神经机制及神经信号表征改变的可能性。 总的来说，本研究系统性探讨了食物成瘾者的不同奖赏加工阶段异常的脑电神经信号表征，发现饱腹状态下对食物奖赏负性预测误差信号（FRN）异常是导 致对食物奖赏异常高预期（SPN）和对错误反馈较高情绪反应（LPP）的重要因 素，且 FRN 的大小与食物成瘾严重程度相关。进一步结果发现饱腹状态下食物 相关的 FRN 与额中线 theta 在时频域上重合，且能通过调控背侧前扣带回 theta 增强对食物奖赏的 FRN，表明负性预测误差信号的降低可能与背侧前扣带回 theta 振荡相关的监测错误功能有关，同时为进一步的临床干预研究提供新思路。总体而言,本研究旨在构建“食物成瘾者特异性的神经信号表征→调控相关脑区改变特异性信号”的技术路线，对理解食物成瘾的神经机制及其临床应用都具有重要科学意义

Characteristics of language disorders in children with autism spectrum disorder and rehabilitation intervention mode to improve their language ability

社交沟通缺乏是孤独症谱系障碍(ASD)的主要表现之一，而ASD儿童社交沟通能力的缺乏很大一部分原因是儿童的语言问题。本文从前语言能力、语音、语义、语法、语用等维度对ASD儿童的语言障碍特点进行回顾分析，并通过整理、分析相关文献，归纳了能提高ASD儿童的语言能力、社交沟通能力的康复干预模式。本文总结文献得出，在ASD儿童的康复干预过程中，采用能提高ASD儿童前语言能力、语音、语义、语法、语用等方面的康复干预模式，能够有效提高ASD儿童的语言能力