Modificación de la membrana de los espermatozoides de verraco para mejorar su supervivencia a la crioconservación

El objetivo de este trabajo es desarrollar un protocolo de adición de ciclodextrinas saturadas de colesterol adecuado para la especie porcina, con el fin de aumentar la cantidad de colesterol en la membrana de los espermatozoides, incrementando así su supervivencia a la congelación.Blanch Torres, E. (2007). Modificación de la membrana de los espermatozoides de verraco para mejorar su supervivencia a la crioconservación. http://hdl.handle.net/10251/12474Archivo delegad

Efecto de anandamida sobre la capacitación prematura de espermatozoides porcinos sometidos a congelación

El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de diferentes concentraciones de Anandamida (AEA) como factor anticapacitante del espermatozoide congelado-descongelado. Se usó el semen de 12 reproductores porcinos, cada eyaculado se dividió en 4 fracciones correspondientes a 4 tratamientos, de los cuales hubo un control y tres concentraciones de AEA (1 μM-A1-, 10 μM-A10- y 100 μM-A100-), Se procedió a la congelación. En el semen pos-descongelación se evaluaron los siguientes parámetros: movilidad total (MT), movilidad progresiva (MP), integridad de membrana plasmática (IMP), funcionalidad de membrana plasmática (HOST), espermatozoides sin reacción acrosómica (NRA), espermatozoides no capacitados (NCAP), parámetros de velocidad, parámetros de angularidad y oscilación de la cabeza . En los resultados obtenidos del semen congelado – descongelado, no se encontraron diferencias significativas en las variables evaluadas (p0,05). Se encontró correlación de NCAP, HOST, NRA y IMP con los parámetros cinéticos, indicando la importancia de la integridad y funcionalidad de las membranas espermáticas para activar su función de capacitarse, tener reacción acrosómica y fertilizar. No hubo correlación entre HOST con NCAP, NRA e IMP. Como conclusión, la AEA puede ser utilizada en los procesos de crio-congelación de espermatozoides porcinos para controlar la presentación de crio–capacitación de espermatozoides congelados - descongelados.Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of different concentrations of anandamide (AEA) as decapacitation factor of frozen-thawed sperm. Semen from 12 boar was used, each ejaculate was divided into 4 fractions corresponding to 4 treatments, one as control and three levels of AEA (1 μM-A1-, 10 μM-A10- y 100 μM-A100-), after treatment, semen was frozen. Semen after thawing was valued using the following parameters: Total motility (TM), progressive motility (PM), plasma membrane integrity (PMI) functionality plasma membrane (HOST), sperm without acrosome reaction (NAR), sperm do not capacitated (NCAP), speed parameters, angularity and swing parameters of the head. No significant differences in the variables assessed (p0,05), There was correlation between NCAP, HOST, NAR and PMI with the kinetic parameters, indicating the importance of integrity and functionality of sperm membrane to activate its role capacitating, have acrosome reaction and fertilizing. No correlation between HOST with NCAP, NRA and PMI. In conclusion, the AEA can be used in the process of freeze pig sperm to control the presentation of cryo – capacitation of frozen - thawed sperm.Maestrí

Respuesta a la congelación-descongelación del esperma de macho cabrío

La congelación del esperma, permite preservar por tiempo indefinido su viabilidad y capacidad fecundante; facilitando, entre otros, el control sanitario, optimización en el uso de sementales de alto valor genético, aceleración de programas de selección y mejora de razas y conservación de recursos zoogenéticos. Sin embargo, el proceso de congelación-descongelación altera al movimiento y la velocidad del espermatozoide, así como, provoca una desestabilización de su membrana plasmática y activa la reacción acrosómica, disminuyendo su capacidad fecundante. Con el fin de conocer, la respuesta a la congelación-descongelación del macho cabrío de la raza Florida, planteamos un estudio para valorar la influencia del mes, estación del año y temperatura ambiental, utilizando dos diluyentes de diferente composición, siguiendo el mismo protocolo de refrigeración y congelación del esperma en los dos machos durante un año. Asimismo, se realizó una prueba in vivo de la capacidad fertilizante, mediante la espermatización manuel (EM) de un lote de 42 cabras, sincronizadas con esponjas vaginales. Los resultados obtenidos revelan que el macho cabrío de la raza Florida, muestra variaciones individuales en los parámetros espermáticos analizados, así como una ligera estacionalidad de los mismos, pero sin llegar a comprometer la viabilidad de los eyaculados durante los 14 meses de estudio. El proceso de congelación-descongelación, afectó fundamentalmente a los parámetros de movimiento e integridad de acrosoma, apreciándose además variaciones entre individuos. Por otro lado, el diluyente influyó sobre el grado de protección del acrosoma durante el proceso de congelación-descongelación. Se determinó la gestación, mediante exploración ecográfica interna el día 25 post-espermatización, con un índice de fertilidad total del 47,62%, apreciándose una ligera tendencia a existir variaciones individuales, así como resultados ligeramente superiores para el diluyente lácte

Efecto de la incubación postdescongelación sobre la calidad de espermatozoides crioconservados de cerdo

Titulo en ingles: Effect of post-thawing incubation on cryoconserved porcine semen qualityRESUMEN: La crioconservación seminal juega un papel importante en la introducción y preservación de características genéticas de tipo productivo y reproductivo las cuales son expresadas por un grupo particular de animales; sin embargo, en cerdos su eficiencia ha sido frecuentemente comprometida por la reducida capacidad fertilizante del espermatozoide después del proceso de crioconservación. Algunos autores han descrito el efecto positivo de la incubación seminal postdescongelación a diferentes temperaturas, permitiendo alcanzar porcentajes de movilidad mayores a los mostrados por muestras recién obtenidas, lo cual podría mejorar significativamente su capacidad de fertilización. Por lo anterior, el presente estudio evaluó la calidad del semen crioconservado de cerdo con base en la viabilidad y morfología espermática, así como en la movilidad y velocidad espermática individual después de su incubación postdescongelación. Para esto, pajillas de 0.25 mL de semen crioconservado de las razas Pietran y Landrace fueron utilizadas (n=13). Las pajillas fueron descongeladas en baño de agua a 55 ºC por 12 seg, posteriormente diluidas (1:40) con solución BTS (Beltsville Thawing Solution) y llevadas a incubación en baño de agua a 37 ºC por 4 h. La calidad del semen durante el periodo de incubación fue determinado cada hora con base en la movilidad y velocidad espermática individual utilizando un sistema de análisis espermático computarizado (CASA), así como en su morfología espermática. Durante el periodo de incubación, no se observaron cambios significativos en la morfología espermática; sin embargo, la viabilidad disminuyó significativamente (p<0.05) entre la hora 0 y 4 de incubación (70.6±1.9 y 57.8±3.2 %, respectivamente).La movilidad progresiva lineal rápida y la velocidad en línea recta fueron significativamente mayores (36.4±2.6 % y 26.8±2.0 µm.seg-1, respectivamente) después de una hora de incubación del semen postdescongelación cuando comparadas con la hora 0 (4.4±1.8 % y 5.3±1.70 µm.seg-1, respectivamente) y 4 de incubación (21.5±3.0 % y 14.7±2.2 µm.seg-1, respectivamente). La movilidad total mostró un comportamiento similar a las anteriores sin diferencias significativas entre la hora 1 y 2 de incubación (63.5±3.1 y 58.9±3 %, respectivamente). En conclusión, se observó que el semen crioconservado de cerdo presenta mejores características espermáticas, en cuanto a movilidad y velocidad después de 1 hora de incubación a 37 ºC, no obstante, este resultado necesita ser evaluado en términos de fertilidad para su recomendación.Palabras clave: calidad seminal, verraco, crioconservación, espermatozoide, incubación, movilidad espermáticaABSTRACT:  Sperm cryopreservation plays an important role in introducing and preserving productive and reproductive genetic characteristics which are expressed by a particular group of animals; however, in pigs its efficiency has been frequently compromised by the semen’s reduced fertilizing ability following cryoconservation. Some au- thors have described the positive effect of post-thawing semen incubation at different temperatures, allowing achieve motility percentage higher than those showed by recently obtained samples, which could signifi- cantly improve their fertilization ability. The present study thus evaluated the boar cryopreserved sperm quality based on spermatic viability and morphology, as well as individual spermatic motility and velocity following its post-thawing incubation. 0.25 mL cryopreserved from Pietran and Landrace were used (n=13). Straws were thawed in a water bath at 55ºC for 12 sec, then diluted (1:40) with BTS (Beltsville Thawing Solution) and incubated in a water bath at 37ºC for 4 h. Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) was used for determining semen quality every hour during the incubation period based on individual spermatic motility and velocity as well as spermatic morphology. No significant changes were observed in spermatic morphology during the incubation period; however, viability became significantly reduced (p<0.05) between incubation hour 0 and 4 (70.6±1.9 and 57.8±3.2 %, respectively). Rapid lineal progressive motility and straight-line velocity were significantly greater (36.4±2.6 % and 26.8±2.0 µm.seg-1, respectively) after one hour’s incubation of semen post-thawing when compared to incubation hour 0 (4.4±1.8 % and 5.3±1.70 µm.seg-1, respectively) and 4 (21.5±3.0 % and 14.7±2.2 µm.seg-1, respectively). Total motility presented a similar pattern to the foregoing, presenting no significant differences between incubation hours 1 and 2 (63.5±3.1 and 58.9±3 %, respectively). It was thus observed that pig’s cryoconserved semen presented better spermatic characteristics (i.e. motility and velocity) following 1 hour’s incubation at 37ºC; nevertheless, this result needs to be evaluated in terms of fertility for it to be fully recommended.Key words: seminal quality, boar, cryopreservtaion, sperm, incubation, spermatic motilityTitulo en ingles: Effect of post-thawing incubation on cryoconserved porcine semen qualityRESUMEN: La crioconservación seminal juega un papel importante en la introducción y preservación de características genéticas de tipo productivo y reproductivo las cuales son expresadas por un grupo particular de animales; sin embargo, en cerdos su eficiencia ha sido frecuentemente comprometida por la reducida capacidad fertilizante del espermatozoide después del proceso de crioconservación. Algunos autores han descrito el efecto positivo de la incubación seminal postdescongelación a diferentes temperaturas, permitiendo alcanzar porcentajes de movilidad mayores a los mostrados por muestras recién obtenidas, lo cual podría mejorar significativamente su capacidad de fertilización. Por lo anterior, el presente estudio evaluó la calidad del semen crioconservado de cerdo con base en la viabilidad y morfología espermática, así como en la movilidad y velocidad espermática individual después de su incubación postdescongelación. Para esto, pajillas de 0.25 mL de semen crioconservado de las razas Pietran y Landrace fueron utilizadas (n=13). Las pajillas fueron descongeladas en baño de agua a 55 ºC por 12 seg, posteriormente diluidas (1:40) con solución BTS (Beltsville Thawing Solution) y llevadas a incubación en baño de agua a 37 ºC por 4 h. La calidad del semen durante el periodo de incubación fue determinado cada hora con base en la movilidad y velocidad espermática individual utilizando un sistema de análisis espermático computarizado (CASA), así como en su morfología espermática. Durante el periodo de incubación, no se observaron cambios significativos en la morfología espermática; sin embargo, la viabilidad disminuyó significativamente (p<0.05) entre la hora 0 y 4 de incubación (70.6±1.9 y 57.8±3.2 %, respectivamente).La movilidad progresiva lineal rápida y la velocidad en línea recta fueron significativamente mayores (36.4±2.6 % y 26.8±2.0 µm.seg-1, respectivamente) después de una hora de incubación del semen postdescongelación cuando comparadas con la hora 0 (4.4±1.8 % y 5.3±1.70 µm.seg-1, respectivamente) y 4 de incubación (21.5±3.0 % y 14.7±2.2 µm.seg-1, respectivamente). La movilidad total mostró un comportamiento similar a las anteriores sin diferencias significativas entre la hora 1 y 2 de incubación (63.5±3.1 y 58.9±3 %, respectivamente). En conclusión, se observó que el semen crioconservado de cerdo presenta mejores características espermáticas, en cuanto a movilidad y velocidad después de 1 hora de incubación a 37 ºC, no obstante, este resultado necesita ser evaluado en términos de fertilidad para su recomendación.Palabras clave: calidad seminal, verraco, crioconservación, espermatozoide, incubación, movilidad espermáticaABSTRACT:  Sperm cryopreservation plays an important role in introducing and preserving productive and reproductive genetic characteristics which are expressed by a particular group of animals; however, in pigs its efficiency has been frequently compromised by the semen’s reduced fertilizing ability following cryoconservation. Some au- thors have described the positive effect of post-thawing semen incubation at different temperatures, allowing achieve motility percentage higher than those showed by recently obtained samples, which could signifi- cantly improve their fertilization ability. The present study thus evaluated the boar cryopreserved sperm quality based on spermatic viability and morphology, as well as individual spermatic motility and velocity following its post-thawing incubation. 0.25 mL cryopreserved from Pietran and Landrace were used (n=13). Straws were thawed in a water bath at 55ºC for 12 sec, then diluted (1:40) with BTS (Beltsville Thawing Solution) and incubated in a water bath at 37ºC for 4 h. Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) was used for determining semen quality every hour during the incubation period based on individual spermatic motility and velocity as well as spermatic morphology. No significant changes were observed in spermatic morphology during the incubation period; however, viability became significantly reduced (p<0.05) between incubation hour 0 and 4 (70.6±1.9 and 57.8±3.2 %, respectively). Rapid lineal progressive motility and straight-line velocity were significantly greater (36.4±2.6 % and 26.8±2.0 µm.seg-1, respectively) after one hour’s incubation of semen post-thawing when compared to incubation hour 0 (4.4±1.8 % and 5.3±1.70 µm.seg-1, respectively) and 4 (21.5±3.0 % and 14.7±2.2 µm.seg-1, respectively). Total motility presented a similar pattern to the foregoing, presenting no significant differences between incubation hours 1 and 2 (63.5±3.1 and 58.9±3 %, respectively). It was thus observed that pig’s cryoconserved semen presented better spermatic characteristics (i.e. motility and velocity) following 1 hour’s incubation at 37ºC; nevertheless, this result needs to be evaluated in terms of fertility for it to be fully recommended.Key words: seminal quality, boar, cryopreservtaion, sperm, incubation, spermatic motilit