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    Bases moleculares de la interacci贸n de la E3 ubiquitina ligasa TRIM7 con glucogenina-1 y su potencial relevancia en el contexto de la glucogenosis tipo XV

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    Tesis (Doctor en Ciencias Qu铆micas) - - Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas, 2021Resumen: La ubiquitinaci贸n es un tipo de modificaci贸n postraduccional caracter铆stico de organismos eucariotas, que requiere de la acci贸n conjunta de las enzimas E1 activadora, E2 conjugadora y E3 ligasa para mediar la transferencia de ubiquitina a una prote铆na sustrato. TRIM7 es una E3 ligasa que recientemente ha adquirido inter茅s por su rol en diversas patolog铆as, y pertenece a la familia de prote铆nas TRIM, caracterizadas por un motivo conservado tripartito (TRIM) N-terminal y una regi贸n C-terminal variable que puede mediar el reconocimiento de sustratos. Inicialmente, fue identificada como una prote铆na que interacciona a trav茅s de su dominio C-terminal B30.2 (TRIM7B30.2) con glucogenina-1 (GN1). Dicha prote铆na es responsable de la iniciaci贸n de la bios铆ntesis del gluc贸geno, por lo que las mutaciones que afectan al gen que la codifica se traducen en un trastorno extremadamente raro denominado glucogenosis tipo XV. El presente trabajo se centr贸 en caracterizar a TRIM7B30.2 por cristalograf铆a de rayos X, y describir detalles sobre las regiones relevantes para la interacci贸n con GN1. La estructura de TRIM7B30.2 revel贸 un plegamiento de tipo s谩ndwich-尾 formado por dos l谩minas 尾 antiparalelas caracter铆stico de este tipo de dominios, adem谩s de presentar una cavidad con carga positiva en la cara c贸ncava de dicho plegamiento. Adicionalmente, se logr贸 identificar a residuos clave que delimitan la zona involucrada en la interacci贸n con GN1, adem谩s de obtener indicios de que el extremo C-terminal de esta 煤ltima es necesario para su reconocimiento por TRIM7B30.2 y la prote铆na TRIM7 entera. Otra parte de este estudio se dedic贸 a conocer el impacto de la mutaci贸n patol贸gica Ala16Pro sobre GN1 de conejo, que presenta una alta homolog铆a con la prote铆na humana, mediante el uso de un amplio conjunto de t茅cnicas bioqu铆micas y biof铆sicas. El an谩lisis revel贸 un cambio estructural significativo que ocasion贸 una disminuci贸n de la afinidad por su sustrato y, en consecuencia, de la actividad de la prote铆na; adem谩s de una marcada p茅rdida de estabilidad. Por 煤ltimo, se busc贸 conocer si GN1 y sus mutantes patol贸gicas Ala16Pro y Thr83Met, son sustrato de su actividad E3 ligasa; y si esto podr铆a tener un rol relevante en la glucogenosis tipo XV. Los resultados de la reacci贸n in vitro mostraron que la transferencia de ubiquitina no ocurre bajo las condiciones empleadas, sin embargo, se encontr贸 que TRIM7 interacciona con la mutante patol贸gica GN1 Ala16Pro pese al cambio estructural de la prote铆na, lo que podr铆a implicar a TRIM7 en la v铆a de degradaci贸n de esta mutante, y por ello el estudio ser谩 continuado en cultivos celulares.Abstract : Ubiquitination is a common post translational modification in eukaryotes, which involves an E1 activating enzyme, an E2 conjugating enzyme, and an E3 ligase enzyme; in a process that mediates the transfer of ubiquitin to a substrate protein. TRIM7 is an E3 ligase member of the TRIM protein family, characterized by an N-terminal tripartite motif (TRIM) and a variable C-terminal region that can mediate substrate recognition, that has been recently linked to diverse pathological processes. TRIM7 was initially identified as a glycogenin-1 (GN1) interacting protein, and this interaction involves the C-terminal B30.2 domain of TRIM7 (TRIM7B30.2). GN1 is the protein that initiates glycogen biosynthesis, and mutations in the gene that encodes for this enzyme are involved in the onset of an extremely rare disease known as type XV glycogen storage disease. This work was mainly focused on the characterization of TRIM7B30.2, through the use of X-ray crystallography, and the details of the region involved in the interaction with GN1. The structure of TRIM7B30.2 revealed the characteristic B30.2 domain fold consisting of two 尾-sheets arranged as a distorted 尾-sandwich, and a positively charged cavity in the hypervariable region of this domain. Besides, key residues that define the zone of interaction with GN1 were identified, and evidence for the requirement of the latter鈥檚 C-terminal region in the binding was found. This study was also focused on the effect of the pathogenic Ala16Pro mutation on rabbit GN1, which displays a high sequence homology with the human protein; and to this end, a wide range of biophysical and biochemical techniques were applied. The analysis revealed a significant structural change which resulted in a decrease in substrate affinity and protein activity, besides a considerable loss of stability. Finally, the thesis was oriented towards analyzing the potential E3 ligase activity of TRIM7 on GN1 and the pathological mutants Ala16Pro and Thr83Met, and its possible functional role on type XV glycogen storage disease. The results have shown that in vitro, TRIM7 does not transfer ubiquitin to GN1 or the mutants in this experimental setup. However, it was found that despite the structural change caused by the mutation, TRIM7 still interacts with the Ala16Pro mutant of human GN1, which might implicate the intervention of TRIM7 in the degradation pathway of this mutant, and for this reason, this study will be continued in cell cultures.2023-08-30Fil: Mu帽oz Sosa, Christian Javier. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas; Argentina.Fil: Carrizo Garcia, Mar铆a Elena. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas. Departamento de Qu铆mica Biol贸gica; Argentina.Fil: Carrizo Garcia, Mar铆a Elena. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro de Investigaciones en Qu铆mica Biol贸gica de C贸rdoba; Argentina.Fil: Genti de Raimondi, Susana Del Valle. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas. Departamento de Bioqu铆mica Cl铆nica; Argentina.Fil: Genti de Raimondi, Susana del Valle. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Centro de Investigaciones en Bioqu铆mica Cl铆nica e Inmunolog铆a; Argentina.Fil: Carbonio, Raul Ernesto. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas. Departamento de Fisicoqu铆mica; Argentina.Fil: Carbonio, Raul Ernesto. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Instituto de Investigaciones en Fisicoqu铆mica de C贸rdoba; Argentina.Fil: Romero, Jorge Miguel. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Qu铆micas; Argentina.Fil: Erm谩cora, Mario Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Instituto Multidisciplinario de Biolog铆a Celular; Argentina

    Desarrollo de papeles biocativos por injerto de mol茅culas espec铆ficas en celulosa

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    Tesis (DCI)--FCEFN-UNC, 2019En la presente tesis se presenta el desarrollo de papeles bioactivos con potencial aplicaci贸n en el envasado activo de alimentos. Para tal fin, se propuso el injerto de eugenol, un compuesto de origen natural con propiedades antimicrobiana, antioxidante y repelente de insectos, en celulosa, utilizando 谩cido policarbox铆lico como agente ligante. Con el objetivo de evaluar la escalabilidad del proceso propuesto, se estudiaron distintas tecnolog铆as de curado, tales como calentamiento por convecci贸n, infrarrojo, microondas y conducci贸n. En todos los casos, se analizaron la influencia de las variables operativas sobre el avance de la reacci贸n y propiedades finales del papel preparado, utilizando un dise帽o de experimentos Doehlert para elegir las experiencias a realizar, y analizando los resultados mediante metodolog铆a de superficie de respuesta y an谩lisis estad铆stico ANOVA. Se pudo comprobar que la reacci贸n de injerto de eugenol en papel comercial se produjo con 茅xito en todas las tecnolog铆as estudiadas. Asimismo, se encontraron las condiciones 贸ptimas de reacci贸n para cada una de las tecnolog铆as, para lo cual se busc贸 un compromiso entre el avance de la reacci贸n y las propiedades finales del material (mec谩nicas y color). A partir de estas condiciones, se prepararon papeles y se realiz贸 una caracterizaci贸n m谩s espec铆fica para su aplicaci贸n como envase de alimentos comparando los papeles modificados con el papel virgen. Se analizaron las propiedades mec谩nicas por ensayo de tracci贸n, rasgado y punzonado y se midi贸 la absorci贸n de agua y la capacidad de degradaci贸n. Por otro lado, las propiedades bioactivas analizadas fueron la actividad antioxidante, antimicrobiana, repelente e insecticida de gorgojos (T. castaneum y R. dominica). Una vez probado que el papel modificado presenta buenas caracter铆sticas f铆sicas y bioactivas para su posible aplicaci贸n en el envasado de alimentos, se realizaron prototipos de envasado para harina, como alimento representativo de alimentos derivados de cereales, susceptibles al ataque de plagas. En este estudio se analiz贸 la migraci贸n de reactivos, propiedades organol茅pticas y conservaci贸n del alimento, arrojando resultados promisorios para la industria de envases de alimentos. Finalmente, se realiz贸 una comparaci贸n de las tecnolog铆as de curado ensayadas, analizando diferentes aspectos como avance de reacci贸n, propiedades finales, apariencia, tiempo de reacci贸n, consumo de energ铆a, entre otros, como as铆 tambi茅n disponibilidad y uso de estas tecnolog铆as a escala industrial, seleccionando la tecnolog铆a de conducci贸n como la m谩s adecuada para una propuesta de escalado industrial.Fil: Muratore, Florencia. Universidad Nacional de C贸rdoba. Facultad de Ciencias Exactas, F铆sicas y Naturales; Argentina.Fil: Muratore, Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Cient铆ficas y T茅cnicas. Instituto de Investigaci贸n y Desarrollo en Ingenier铆a de Procesos y Qu铆mica Aplicada; Argentina

    Identification of Hindbrain Neural Substrates for Motor Initiation in the hatchling Xenopus laevis Tadpole

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    Animal survival profoundly depends on the ability to detect stimuli in the environment, process them and respond accordingly. In this respect, motor responses to a sensory stimulation evolved into a variety of coordinated movements, which involve the control of brain centres over spinal locomotor circuits. The hatchling Xenopus tadpole, even in its embryonic stage, is able to detect external sensory information and to swim away if the stimulus is considered noxious. To do so, the tadpole relies on well-known ascending sensory pathway, which carries the sensory information to the brain. When the stimulus is strong enough, descending interneurons are activated, leading to the excitation of spinal CPG neurons, which causes the undulatory movement of swimming. However, the activation of descending interneurons that marks the initiation of motor response appears after a long delay from the sensory stimulation. Furthermore, the long-latency response is variable in time, as observed in the slow-summating excitation measured in descending interneurons. These two features, i.e. long-latency and variability, cannot be explained by the firing time and pattern of the ascending sensory pathway of the Xenopus tadpole. Therefore, a novel neuronal population has been proposed to lie in the hindbrain of the tadpole, and being able to 'hold' the sensory information, thus accounting for the long and variable delay of swim initiation. In this work, the role of the hindbrain in the maintenance of the long and variable response to trunk skin stimulation is investigated in the Xenopustadpole at developmental stage 37/38. A multifaceted approach has been used to unravel the neuronal mechanisms underlying the delayed motor response, including behavioural experiments, electrophysiology analysis of fictive swimming, hindbrain extracellular recordings and imaging experiments. Two novel neuronal populations have been identified in the tadpole's hindbrain, which exhibit activation patterns compatible with the role of delaying the excitation of the spinal locomotor circuit. Future work on cellular properties and synaptic connections of these newly discovered populations might shed light on the mechanism of descending control active at embryonic stage. Identifying supraspinal neuronal populations in an embryonic organism could aid in understanding mechanisms of descending motor control in more complex vertebrates

    Bioinformatic characterization of a triacylglycerol lipase produced by Aspergillus flavus isolated from the decaying seed of Cucumeropsis mannii

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    Lipases are enzymes of industrial importance responsible for the hydrolysis of ester bonds of triglycerides. A lipolytic fungus was isolated and subsequently identified based on the ITS sequence analysis as putative Aspergillus flavus with accession number LC424503. The gene coding for extracellular triacylglycerol lipase was isolated from Aspergillus flavus species, sequenced, and characterised using bioinformatics tools. An open reading frame of 420 amino acid sequence was obtained and designated as Aspergillus flavus lipase (AFL) sequence. Alignment of the amino acid sequence with other lipases revealed the presence GHSLG sequence which is the lipase consensus sequence Gly-X1-Ser-X2-Gly indicating that it a classical lipase. A catalytic active site lid domain composed of TYITDTIIDLS amino acids sequence was also revealed. This lid protects the active site, control the catalytic activity and substrate selectivity in lipases. The 3-Dimensional structural model shared 34.08% sequence identity with a lipase from Yarrowia lipolytica covering 272 amino acid residues of the template model. A search of the lipase engineering database using AFL sequence revealed that it belongs to the class GX-lipase, superfamily abH23 and homologous family abH23.02, molecular weight and isoelectric point values of 46.95鈥塊Da and 5.7, respectively. N-glycosylation sites were predicted at residues 164, 236 and 333, with potentials of 0.7250, 0.7037 and 0.7048, respectively. O-glycosylation sites were predicted at residues 355, 358, 360 and 366. A signal sequence of 37 amino acids was revealed at the N-terminal of the polypeptide. This is a short peptide sequence that marks a protein for transport across the cell membrane and indicates that AFL is an extracellular lipase. The findings on the structural and molecular properties of Aspergillus flavus lipase in this work will be crucial in future studies aiming at engineering the enzyme for biotechnology applications

    Medicina personalizada en lactantes con c谩ncer: Estudio farmacogen茅tico de polimorfismos relacionados con toxicidad y respuesta a la quimioterapia

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    Introducci贸n La farmacogen茅tica es una herramienta de la 鈥淢edicina personalizada鈥 que contribuye a optimizar los tratamientos antineopl谩sicos, adapt谩ndolos a las caracter铆sticas gen茅ticas particulares de cada individuo, maximizando su eficacia y minimizando su toxicidad. El lactante con c谩ncer es un paciente de particular vulnerabilidad y sus comorbilidades tiene una especial repercusi贸n vital. El estudio farmacogen茅tico en esta poblaci贸n resulta pionero y novedoso en nuestro medio. La identificaci贸n de marcadores predictivos espec铆ficos permitir谩 individualizar m谩s la terap茅utica en esta poblaci贸n tan fr谩gil y mejorar en consecuencia su calidad de vida y su pron贸stico vital. Material y m茅todos Estudio de cohortes ambispectivo de pacientes oncol贸gicos entre 1 y 18 meses de edad, receptores de quimioterapia en el Hospital La Fe de Valencia, en el periodo comprendido entre enero 2007 y agosto 2019. La parte retrospectiva comprende hasta diciembre 2015, el estudio prospectivo desde enero 2016 hasta agosto 2019. En primer lugar, se realiza un an谩lisis descriptivo de variables epidemiol贸gicas, cl铆nico/biol贸gicas, terap茅uticas y pron贸sticas de 72 pacientes con dichas caracter铆sticas. Se describe la toxicidad derivada de sus 578 ciclos de quimioterapia (37 variables cl铆nicas), el tiempo de seguimiento y su supervivencia (meses). En segundo lugar, se realiza un estudio anal铆tico cuyo objetivo es correlacionar los polimorfismos gen茅ticos relacionados con la quimioterapia de 64 de los pacientes, la toxicidad grave secundaria al tratamiento (鈮 grado 3 seg煤n CTAE 4.0) y su supervivencia. El genotipado se realiza en el Centro Nacional de Genotipado (CEGEN) mediante la tecnolog铆a MassArray (AgenaBioscience), previa configuraci贸n de un panel farmacogen茅tico pedi谩trico en base a las evidencias recogidas en la base de datos PharmGKB, fichas t茅cnicas de los medicamentos y consorcios internacionales expertos. El an谩lisis estad铆stico descriptivo se realiza con los programas Excel 2016 y R: las variables cualitativas con el recuento num茅rico (porcentaje) y las variables cuantitativas como mediana +/- rango intercuart铆lico ante ausencia de normalidad en la distribuci贸n de los datos (p <0,05, prueba de Kolmogorov-Smirnov). En el an谩lisis de supervivencia se utiliza el estimador Kaplan-Meier. El an谩lisis estad铆stico anal铆tico de correlaci贸n entre polimorfismos y toxicidad se realiza mediante regresi贸n log铆stica penalizada por Elastic Net empleando R. El an谩lisis estad铆stico anal铆tico de correlaci贸n entre polimorfismos y reca铆da/muerte se realiza mediante regresi贸n de Cox penalizada por Elastic Net. Resultados Las variables epidemiol贸gicas, cl铆nico/biol贸gicas y terap茅uticas de los pacientes de la muestra son consecuentes con las descritas en la literatura del lactante con c谩ncer. Las neoplasias con mayor impacto negativo en la supervivencia son la leucemia mielobl谩stica aguda y los tumores del sistema nervioso central. La toxicidad m谩s prevalente es hematol贸gica, digestiva e infecciosa. Existe correlaci贸n entre la toxicidad grave secundaria a los quimioter谩picos en forma de anemia, neutropenia y/o trombopenia y 46 polimorfismos gen茅ticos diferentes. As铆 mismo se encuentra asociaci贸n estad铆sticamente significativa entre la supervivencia global y la supervivencia libre de enfermedad y ciertos polimorfismos gen茅ticos (26 y 13 respectivamente). Los polimorfismos obtenidos pertenecen a genes encargados del transporte (6 genes) y metabolismo (17 genes) de los f谩rmacos, de la reparaci贸n del material gen茅tico y la supresi贸n tumoral (5 genes) y de otras funciones biol贸gicas (4 genes). Conclusi贸n Los resultados del presente estudio muestran correlaci贸n estad铆stica entre 46 polimorfismos de genes implicados en la cin茅tica farmacol贸gica y la reparaci贸n del material gen茅tico y la variabilidad en la toxicidad quimioter谩pica y supervivencia de pacientes lactantes con c谩ncer. En definitiva, aportaciones de la farmacogen茅tica que pueden contribuir a la optimizaci贸n del tratamiento antineopl谩sico en esta poblaci贸n particular y a la predicci贸n de sus riesgos, de especial impacto en los supervivientes del c谩ncer infantil

    Uso de las histonas circulantes y sus modificaciones post-traduccionales como biomarcadores en sepsis y shock s茅ptico

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    La sepsis es una afecci贸n potencialmente mortal causada por una respuesta anormal del hu茅sped a una infecci贸n, produciendo respuestas fisiol贸gicas alteradas que da帽an los propios tejidos del paciente y pueden provocar disfunci贸n org谩nica e incluso la muerte. Asimismo, algunos pacientes s茅pticos progresan a shock s茅ptico, caracterizado por alteraciones circulatorias, celulares y metab贸licas sustanciales que aumentan el riesgo de mortalidad. A pesar de que la sepsis se caracteriza por un mal funcionamiento del sistema inmunol贸gico, lo que a su vez conduce a una respuesta inmune alterada e inmunosupresi贸n, la alta complejidad de la fisiopatolog铆a de la sepsis requiere una mayor investigaci贸n para comprender las respuestas inmunes que ocurren durante la sepsis. Asimismo, las histonas extracelulares circulantes han ganado relevancia como mediadores citot贸xicos en la sepsis, ya que act煤an como patrones moleculares asociados a da帽o, que inducen estr茅s oxidativo y activan el inflamasoma NLRP3. Estos mecanismos median la activaci贸n de la piroptosis, un mecanismo de muerte celular programada que produce inflamaci贸n mediante la expresi贸n de IL-18, IL-1尾 and IL-1伪. Sin embargo, a pesar de la evidencia de activaci贸n del inflamasoma en las c茅lulas inmunes durante la sepsis, se desconoce si las histonas extracelulares son capaces de activar los inflamasomas endoteliales y sus consecuencias. En este trabajo destacamos el papel previamente desconocido de las histonas extracelulares, mediando la activaci贸n del inflamasoma NLRP3 y la piroptosis en las c茅lulas endoteliales, contribuyendo a la disfunci贸n endotelial y la desregulaci贸n de la respuesta inmune mediada por el endotelio. Asimismo, tambi茅n demostramos c贸mo la acetilaci贸n de histonas disminuye la activaci贸n de la piroptosis. Adem谩s, demostramos que la piroptosis se produce en pacientes con shock s茅ptico y los niveles de histonas circulantes se correlacionan con la expresi贸n de citoquinas proinflamatorias y citoquinas piropt贸ticas, la liberaci贸n de factores de adhesi贸n endotelial y la gravedad de la enfermedad. Proponemos la piroptosis mediada por histonas como un nuevo objetivo para desarrollar intervenciones cl铆nicas. De manera similar, hemos analizado las respuestas inmunorelacionadas que ocurren durante las primeras etapas de la sepsis con el objetivo de proporcionar nuevos datos comparando las cantidades de citoquinas, inmunomoduladores y otros mediadores endoteliales en pacientes cr铆ticamente enfermos no s茅pticos, s茅pticos y de shock s茅ptico. Nuestro enfoque ayudar谩 a caracterizar r谩pidamente las respuestas inmunes alteradas en pacientes s茅pticos y de shock s茅ptico ingresados en la Unidad de Cuidados Intensivos. Finalmente analizamos el papel de la metilaci贸n del ADN en el control del sistema inmune s茅ptico. Nuestros resultados demostraron el papel central de la metilaci贸n del ADN modulando la respuesta molecular en los pacientes de shock s茅ptico y contribuyendo a la inmunosupresi贸n, a trav茅s de la alteraci贸n de los patrones de metilaci贸n de los promotores de IL-10 y TREM-2.Sepsis is a life-threatening condition caused by an abnormal host response to an infection that produce altered physiological responses which damages own tissues of the patient and can result in organ dysfunction and in some cases death. Likewise, a subset of septic patients progresses to septic shock, characterized by substantial circulatory, cellular and metabolic abnormalities, which substantially increase the risk of mortality. Sepsis is characterized by a malfunction of the immune system and it can lead to an altered immune response and immunosuppression. Moreover, the high complexity of the pathophysiology of sepsis requires of further investigation to characterize the immune responses in sepsis and septic shock. Likewise, circulating extracellular histones have gained relevance as cytotoxic mediators in sepsis pathophysiology, since they act as damage-associated molecular patterns, which induce oxidative stress and activate NLRP3 inflammasome. Subsequently, inflammasome mediates pyroptosis activation, a programmed cell death mechanism that produces inflammation through the release of IL-18, IL-1尾 and IL-1伪. However, despite inflammasome activation may occur in immune cells during sepsis, it is unknown if this process also takes place in endothelial cells and particularly whether extracellular histones are capable of activating endothelial inflammasomes and their consequences. In this work we highlight a previously unknown role for extracellular histones, that mediates the activation of NLRP3 inflammasome and pyroptosis in endothelial cells by contributing to endothelial dysfunction and the dysregulation of the immune response mediated by endothelium. Likewise, we demonstrated how histone acetylation decreases pyroptosis activation. Furthermore, we show how pyroptosis occurs in septic shock patients and how circulating histone levels correlate with the expression of pro-inflammatory and pyroptotic cytokines, the release of endothelial adhesion factors and septic shock severity. We propose histone-mediated pyroptosis as a new target to develop clinical interventions. Similarly, we have analyzed the immune-related responses occurring during the early stages of sepsis with the aim of providing new data by comparing the amounts of cytokines, immune modulators and other endothelial mediators in critically-ill non-septic patients, septic and septic shock patients. Our approach will help to rapidly characterize the altered immune responses in septic and septic shock patients admitted in the Intensive Care Unit. Finally, we also analyzed the role of DNA methylation in the control of septic immune system. Our results demonstrated the central role of DNA methylation modulating the molecular response in septic shock patients and contributing to immunosuppression, through the alteration of DNA methylation patterns of IL-10 and TREM2 promoters

    The effect of preservation regime on the physiology and genetic stability of economically important fungi

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    The long-term preservation of fungi has been carried out using several different methods, depending on resources and laboratory. Isolates have been deposited in culture collections for preservation and storage for periods of many years. Despite the widespread use of preservation regimes, little attention has been paid to the poststorage stability of the physiological and genetic characters of strains. The loss of viability of a biological control agent or the failure of an isolate to produce a secondary metabolite pivotal in the production of drugs or food could result in substantial economic loss for the manufacturing organisation. In this investigation the effects of five preservation protocols on fungal characters were assessed: continual sub-culture, lyophilisation, storage in water, storage at -20掳C and cryopreservation in liquid nitrogen The physiology and genetic stability of three species of economically important fungi (Metarhizium anisopliae, Fusarium oxysporum and Serpula lacrymans) were examined by analysis of culture characteristics, secondary metabolite profiling, extracellular enzyme tests and PCR fingerprinting over a two-year testing period. It was found that preservation regime can influence the resultant characters of the test fungi. Radial growth rate and conidial production was changed from the original isolates after preservation and storage. Secondary metabolite profiles from all of the test fungi were susceptible to change by the preservation protocols assessed. Production of some metabolites was lost, whereas others remained stable after preservation and storage. Extracellular enzyme production was also affected in a similar way. For example, some replicates of an isolate of Metarhizium anisopliae lost ~-galactosidase activity after one year of preservation. Genetic stability was also compromised is some isolates. Polymorphisms were detected after PCR fingerprinting with a micro-satellite primer in replicates of two isolates of Metarhizium anisopliae that had been stored for one and two years by cryopreservation and lyophilisation and in two replicates of an isolate of Fusarium oxysporum maintained by continual sub-culture for sixteen weeks. The results indicate that response to preservation and storage is species- and strain-specific. Therefore, there is a need to develop new and existing preservation regimes with emphasis on strain-specific criteria. Scientists should preserve their important isolates by more than one preservation method to protect organisms from the stresses encountered during preservation and storage

    Metabolic phenotyping of opioid and psychostimulant addiction: A novel approach for biomarker discovery and biochemical understanding of the disorder.

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    Despite the progress in characterising the pharmacological profile of drugs of abuse, their precise biochemical impact remains unclear. The metabolome reflects the multifaceted biochemical processes occurring within a biological system. This includes those encoded in the genome but also those arising from environmental/exogenous exposures and interactions between the two. Using metabolomics, the biochemical derangements associated with substance abuse can be determined as the individual transitions from recreational drug to chronic use (dependence). By understanding the biomolecular perturbations along this time course and how they vary across individuals, metabolomics can elucidate biochemical mechanisms of the addiction cycle (dependence/withdrawal/relapse) and predict prognosis (recovery/relapse). In this review, we summarise human and animal metabolomic studies in the field of opioid and psychostimulant addiction. We highlight the importance of metabolomics as a powerful approach for biomarker discovery and its potential to guide personalised pharmacotherapeutic strategies for addiction targeted towards the individual's metabolome

    Cirug铆a ambulatoria: estudio de la morbilidad tard铆a

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    La cirug铆a ambulatoria es una actividad rutinaria de la mayor铆a de los hospitales de nuestro pa铆s. Su implantaci贸n y desarrollo en los 煤ltimos a帽os ha supuesto una soluci贸n para los grandes retos de la asistencia sanitaria actual, permitiendo reducir considerablemente la lista de espera quir煤rgica bajo criterios de calidad, eficiencia y seguridad. Uno de los aspectos con mayor oportunidad de mejora es el control postoperatorio domiciliario en la fase tard铆a de la recuperaci贸n, especialmente m谩s all谩 de las 24 horas tras la intervenci贸n. El m茅todo m谩s utilizado actualmente en Espa帽a para la evaluaci贸n del estado domiciliario es la entrevista telef贸nica estandarizada. Esta herramienta es 煤til para resolver gran n煤mero de complicaciones; sin embargo, cuando esto no es posible, se remite al paciente a los servicios de urgencias. El an谩lisis cuantitativo y cualitativo de las visitas a urgencias y los reingresos son sucesos objetivos a partir de los cuales identificar factores que puedan alterar la calidad en el postoperatorio y est谩n reconocidos por los organismos oficiales nacionales e internacionales como indicadores de calidad de la asistencia en cirug铆a ambulatoria. En nuestro pa铆s carecemos de estudios que eval煤en el porcentaje de visitas a urgencias como complicaci贸n en el postoperatorio de cirug铆a ambulatoria y existe poca literatura respecto a los reingresos. A nivel internacional, el porcentaje de visitas a urgencias var铆a entre 0.62% y 3.18% y el porcentaje de reingresos se sit煤a entre 0.10% y 2.5%. Llama la atenci贸n la gran variabilidad en los resultados de los diferentes trabajos y la ausencia de criterios de medida homog茅neos entre los diferentes estudios. El objetivo principal de este trabajo es conocer el porcentaje de visitas a urgencias y de reingresos relacionados con la intervenci贸n quir煤rgica tras cirug铆a ambulatoria en el Hospital Universitari i Polit猫cnic La Fe en el a帽o 2014. Los objetivos secundarios son: - Conocer las principales causas de visitas a urgencias y de reingresos relacionados con la intervenci贸n quir煤rgica tras cirug铆a ambulatoria en el Hospital La Fe. - Describir los motivos de la visita a urgencias en los 20 procedimientos de cirug铆a ambulatoria m谩s frecuentes en el Hospital La Fe. - Conocer el tiempo transcurrido en d铆as desde la intervenci贸n hasta que los pacientes acuden a urgencias o reingresan por motivo relacionado con la intervenci贸n. - Describir los procedimientos de cirug铆a ambulatoria del Hospital La Fe donde existe mayor probabilidad de que se produzca una visita a urgencias tras el alta a domicilio. - Describir las variables del paciente y de la intervenci贸n que influyen en el tiempo que se tarda en acudir a urgencias tras el alta a domicilio. - Analizar estad铆sticamente la relaci贸n entre la probabilidad de acudir a urgencias despu茅s del alta domiciliaria con variables perioperatorias como el score telef贸nico, el ASA, el sexo, la edad, la duraci贸n de la intervenci贸n, el tiempo de estancia en la UCSI y el tipo de anestesia. METODOLOG脥A: Se realiz贸 un estudio retrospectivo observacional anal铆tico de casos-controles, con pacientes intervenidos en la UCSI del Hospital La Fe de Valencia. Se incluyeron los datos de todos los episodios quir煤rgicos de pacientes mayores de 15 a帽os, intervenidos en el a帽o 2014 por especialidad quir煤rgica y procedimiento mayor, que se dieron de alta a domicilio el mismo d铆a de la intervenci贸n. Se clasificaron en casos o controles seg煤n presentaran o no respectivamente visita a urgencias en los 30 d铆as posteriores, por motivo relacionado con la intervenci贸n. Este trabajo ha sido posible gracias a la colaboraci贸n de los servicios de documentaci贸n cl铆nica y sistemas de la informaci贸n. A partir de la base de datos del CMBD de los pacientes sometidos a cirug铆a ambulatoria en 2014 se obtuvo informaci贸n sobre 11093 episodios quir煤rgicos codificados. Esa base de datos se cruz贸 con el programa inform谩tico Access con otra base de datos a partir del programa Mizar, que recog铆a los pacientes mayores de 15 a帽os sometidos a cirug铆a ambulatoria en 2014 que hab铆an acudido a urgencias en los 30 d铆as posteriores a la intervenci贸n y en la cual aparecen 1049 pacientes. Una vez eliminados los registros que cumpl铆an los criterios de exclusi贸n se obtuvo una base de datos con 5420 registros de episodios quir煤rgicos con o sin urgencias correspondientes a 4693 pacientes. En la base de datos obtenida se distinguen dos grupos en funci贸n de si se ha producido o no visita a urgencias, de forma que existe un grupo con episodios de urgencias y otro grupo control sin episodios de urgencias. Cada paciente puede tener uno o varios episodios quir煤rgicos y a su vez cada episodio quir煤rgico puede no tener o tener uno o m谩s episodios de urgencias. Para cada episodio se han recogido los siguientes datos: n煤mero de historia del paciente (cifrada y anonimizada), n煤mero de episodio quir煤rgico, presencia de episodio de urgencias, edad, sexo, grado ASA, grado de agresi贸n quir煤rgica (ASI), fecha de intervenci贸n, especialidad, diagn贸stico, procedimiento, tipo de anestesia, duraci贸n de la intervenci贸n, tiempo de estancia en UCSI, score telef贸nico, fecha de visita a urgencias, motivo de visita a urgencias, destino del paciente. Para el an谩lisis de los datos recogidos se emple贸 el programa inform谩tico R. La mayor铆a de los objetivos se resolv铆an con estad铆sticos descriptivos. Se aplicaron modelos estad铆sticos para resolver los dos 煤ltimos objetivos. El primer modelo estad铆stico se refiere a la variable respuesta 鈥淭iempo Urgencias鈥, que sigue una distribuci贸n log normal. As铆 pues, se ha creado un modelo de regresi贸n lineal con la variable respuesta transformada mediante el logaritmo, incluyendo las variables SCORE, ASA, estancia UCSI, edad, y duraci贸n de la intervenci贸n para ver qu茅 efecto tienen en el tiempo que tardan los pacientes en acudir a urgencias. En segundo lugar, se ha creado un modelo de regresi贸n binomial para predecir la probabilidad de que vayan a urgencias en funci贸n de variables como el score telef贸nico, el ASA, el sexo, la duraci贸n de la intervenci贸n, la edad, el tipo de anestesia y el tiempo de estancia en la UCSI. Se obtienen los p-valores y los intervalos de confianza al 95%. RESUMEN DE LOS RESULTADOS: De los 5420 episodios que conforman la muestra, 677 tuvieron visita a urgencias y 4743 no la tuvieron. Ello supone un porcentaje global de visitas a urgencias del 12.5%. De los 677 episodios de urgencias 74 episodios tuvieron como destino la hospitalizaci贸n y 603 fueron remitidos al domicilio; por tanto, el porcentaje de reingresos global ha sido del 1.36%. Las causas de las visitas a urgencias han sido por este orden: infecci贸n (17.3%), motivo m茅dico (16.5%), sangrado (15.7%), dolor (13.4%), alteraci贸n de la herida (8.1%), medidas higi茅nico-diet茅ticas (7.5%), edema (7.4%), hipertensi贸n ocular (4.4%), retenci贸n urinaria (2.7%), reacci贸n adversa medicamentosa (2.4%), alteraci贸n de la visi贸n (1.8%), trombosis (1.2%), ansiedad (0.7%), n谩useas y v贸mitos (0.7%), anestesia (0.1%). Las causas de los reingresos han sido por este orden: motivo m茅dico (43.55%); infecci贸n (30.6%); alteraci贸n de la herida (6.45%); sangrado y dolor (4.8%); anestesia, retenci贸n urinaria, reacci贸n adversa medicamentosa y n谩useas y v贸mitos (1.6%). La edad media de los pacientes es de 57.17 a帽os, el sexo de los pacientes es femenino en un 48.9% y masculino en un 51.1%, la duraci贸n de la intervenci贸n media es de 54.16 minutos, la estancia en UCSI media es de 313.88 minutos. El estado f铆sico de los pacientes medido por la clasificaci贸n ASA es de 1 en un 24%, de 2 en un 36%, de 3 en un 9%, de 4 en un 1%, y ausente en 30%. Los procedimientos m谩s frecuentes son: cataratas, extracci贸n de ureterostom铆a, biopsia de pr贸stata transrectal, fleboextracci贸n de varices, cateterismo ureteral, procedimiento de pies, circuncisi贸n, vasectom铆a, t煤nel carpiano, cistoscopia, exodoncia, excisi贸n de lesi贸n mamaria, turbinectom铆a de cornetes, colecistectom铆a laparosc贸pica, excisi贸n de lesi贸n uterina, vitrectom铆a, meniscectom铆a artrosc贸pica, realizaci贸n de f铆stula arteriovenosa, hemorroidectom铆a, sustituci贸n de nefrostom铆a. El tiempo medio en acudir a urgencias es de 10.96 d铆as. El mayor n煤mero de registros de visitas a urgencias se produce en los cuatro d铆as posteriores a la intervenci贸n, siendo el d铆a 1 de postoperatorio el que mayor frecuentaci贸n presenta. El 52% de las visitas a urgencias en 30 d铆as se producen a partir del octavo d铆a postoperatorio. Aunque va disminuyendo progresivamente su asiduidad, siguen registr谩ndose visitas a urgencias hasta el d铆a 30 tras la cirug铆a. El tipo de anestesia m谩s frecuentemente empleada es la sedaci贸n (41.6%), seguida de la anestesia general (23.8%), anestesia oft谩lmica (20.6%), bloqueo nervioso perif茅rico (10.1%), bloqueo nervioso central o neuroaxial (1.9%), sin anestesia (1.5%) y combinada (general m谩s locorregional, 0.6%). Los motivos de acudir a urgencias en los 20 procedimientos m谩s frecuentes siguen el mismo orden que en el an谩lisis global: infecci贸n, motivo m茅dico, sangrado, dolor, alteraci贸n de la herida, medidas higi茅nico-diet茅ticas, edema, hipertensi贸n ocular, retenci贸n urinaria, reacci贸n adversa medicamentosa, alteraci贸n de la visi贸n, trombosis, ansiedad, n谩useas y v贸mitos, anestesia. Los procedimientos con mayor probabilidad de acudir a urgencias son: f铆stula arteriovenosa (0.30), vitrectom铆a (0.24), hemorroidectom铆a (0.22), sustituci贸n de nefrostom铆a (0.16), colecistectom铆a laparosc贸pica (0.14) y cataratas (0.14). La influencia de variables en el tiempo en acudir a urgencias ha resultado ser: - El score telef贸nico alto se relaciona con un tiempo en acudir a urgencias mayor. - Apenas se presenta variaci贸n en el tiempo en ir a urgencias en funci贸n de la clasificaci贸n ASA. Los pacientes ASA 4 presentan un rango de tiempo m谩s amplio en las visitas a urgencias. - La edad, la duraci贸n de la intervenci贸n y el tiempo de estancia en UCSI no influyen de manera significativa en el tiempo en acudir a urgencias. El modelo realizado para predecir la probabilidad de que el paciente acuda a urgencias en funci贸n de diferentes variables no ha superado la validaci贸n. Esto significa que los resultados no son estad铆sticamente significativos, aunque s铆 tengan valor descriptivo. - El score telef贸nico alto reduce la probabilidad de acudir a urgencias (p <0.001). - El grado de clasificaci贸n ASA alto aumenta la probabilidad de ir a urgencias pero no de forma significativa (p=0.15). - El sexo no tiene influencia significativa (p=0.88). - La variable edad est谩 cerca del umbral de significaci贸n, existiendo mayor probabilidad de ir a urgencias en pacientes j贸venes (p=0.072). - A mayor duraci贸n de la intervenci贸n y a mayor tiempo de estancia en la UCSI se da mayor probabilidad de acudir a urgencias (p=0.25 y p=0.025 respectivamente). - La variable 鈥渢ipo de anestesia鈥 ha sido significativa (p=0.002), con mayor probabilidad de acudir a urgencias en el bloqueo neuroaxial y la anestesia oft谩lmica. CONCLUSIONES La morbilidad tard铆a o domiciliaria detectada en este estudio a partir de las visitas a urgencias es mayor de la esperada y el tiempo en el que los pacientes acuden a urgencias es m谩s prolongado de lo previsto. Las causas por las que se acude a urgencias son similares a las descritas en la literatura. Sin embargo, el tipo de causa predominante es diferente dependiendo del procedimiento quir煤rgico realizado. En general la mayor铆a de visitas a urgencias se resuelven y no generan reingreso, por ello nuestra cifra de reingresos no es tan alta en comparaci贸n con otras publicaciones. Ser铆a conveniente analizar la morbilidad en muestras de poblaci贸n espec铆ficas por procedimiento; incluso dentro de las especialidades, existe diversidad en la agresi贸n quir煤rgica para cada tipo de intervenci贸n. Tambi茅n son diferentes las complicaciones seg煤n el momento del postoperatorio que nos encontremos; siendo el sangrado, el dolor y las NVPO m谩s probables en la primera semana, mientras que la causa m茅dica y las infecciones se pueden mantener elevadas hasta la cuarta semana despu茅s de la cirug铆a. La llamada telef贸nica reduce las visitas a urgencias, pero en pacientes seleccionados deber铆an a帽adirse nuevos controles m谩s tard铆os. A pesar de las limitaciones, los datos obtenidos en este trabajo son de utilidad para establecer puntos de referencia en la autoevaluaci贸n y mejora de la calidad asistencial de nuestros pacientes sometidos a cirug铆a ambulatoria.AMBULATORY SURGERY: STUDY OF HOME MORBIDITY Ambulatory surgery provides a solution to reduce surgical waiting lists but holding quality, efficiency and security criteria. Postoperative home control is a field that needs improvement. Emergency unit visits and readmissions are indicators recognized by official organisms for this stage of assistance. These events happen when telephone control cannot solve a complication. Our main objective is to know the rate of emergency visits and readmissions related to the procedure after 30 days of ambulatory surgery in Hospital La Fe during 2014. Secondary outcomes are to describe the reasons for those visits and readmissions, to describe how long it takes from the surgery to the visit, to see which procedures have more probability of going to emergency department and to investigate if there is any influence of perioperative variables in the time to the visit or in the probability for a visit. A retrospective case-control study was conducted. A cross-match of two hospital databases provided a sample of 5420 surgical episodes. Descriptive statistics, calculation of probabilities and two regression models (lineal and binomial) were used. Analysis was solved with the software R. The emergency visit rate was higher than expected (12.5%) and the time of the visit more prolonged (mean 10.96 days). The reasons for the visits were similar of those in the literature: infection (17.3%), medical condition (16.5%), bleeding (15.7%) and pain (13.4%). However, they had different distribution depending on type of surgery. Most of the emergency visits could be solved and did not cause readmission, so our readmission rate is more like previous studies (1.36%). It would be convenient to perform more exhaustive analysis, separated for each type of procedure given that even in the same specialty we see different levels of surgical harm. We also found different complications depending on the time after surgery: bleeding, pain and nausea were more probably the first week, while medical condition and infection remain higher until the fourth week. Telephone control reduces emergency visits but additional calls should be established after the first week in selected patients. Despite some limitations, this study is useful as a benchmark of self-assessment and healthcare quality improvement of our ambulatory surgery unit
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