Molecular and serologic diagnosis in human leptospirosis (Buenos Aires province, Argentina)

El objetivo del presente trabajo fue aplicar la técnica de PCR en tiempo real para detectar ADN de los serovares más comunes de leptospiras que infectan humanos a partir de cultivos puros de referencia, y de sueros de pacientes en distintas etapas de infección. Se realizó extracción, amplificación y cuantificación del ADN de cultivos puros de Leptospira interrogans serovares Canicola, Icterohaemorrhagiae, Pomona, Pyrogenes y Hardjo; Leptospira borgpeterseni serovares Tarassovi, Wolffi y Castellonis y Leptospira kirschneri serovar Grippotyphosa. La sensibilidad de la PCR en tiempo real in vitro fue en promedio de 8 genomas. A partir de 23 muestras de sueros de pacientes con sospecha clínica de leptospirosis se determinó por la técnica de aglutinación microscópica (MAT) la presencia de anticuerpos, y por PCR en tiempo real con dos pares de cebadores diferentes, la presencia de ADN bacteriano. En el período agudo de la enfermedad (1 a 7 días) MAT fue positivo en 9/10 muestras y PCR en tiempo real en 8/10. Fue llamativo que 3/4 muestras de período tardío (superior a 14 días) fueran PCR positivas, lo cual no concuerda con la patogenia aceptada para la leptospirosis Debido a estas consideraciones, por el momento, y en nuestro medio, la utilidad de la técnica de PCR es complementaria a la MAT y no debe reemplazarla.The aim of this study was to apply the technique of real-time PCR to detect DNA of the most common Leptospira serovars that infect humans from pure cultures of reference, and sera from patients at different stages of infection. Extraction, amplification and quantification of DNA from pure cultures of Leptospira interrogansserovars Canicola, Icterohaemorrhagiae, Pomona,Hardjo and Pyrogenes performed; Leptospira serovars borgpeterseniTarassovi, Wolffi and Castellonis and Leptospira serovar kirschneri serovar Grippotyphosa. The in vitro sensitivity of real-time PCR averaged 8 genomes. From 23 serum samples from patients suspected of leptospirosis the presence of antibodies was determined by microscopic agglutination technology (MAT), and the presence of bacterial DNA by real-time PCR with two different primer pairs. In the acute stage of the disease (1-7 days) MAT was positive in 9/10 samples and real-time PCR in 8/10. It was interesting that 3/4 of late period samples (over 14 days) were PCR positive, which is inconsistent with the accepted pathogenesis for leptospirosis. Because of these considerations, for the moment, and in our field, the usefulness of the PCR technique is complementary to the MAT and should not replace it.Fil: Recavarren, Mariana Ines. Instituto de Análisis Bioquímicos Fares Taie; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Scialfa, Exequiel Alejandro. Ministerio de Salud de la Provincia de Buenos Aires. División de Zoonosis Rurales; ArgentinaFil: Rivero, Mariana Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto de Análisis Bioquímicos Fares Taie; Argentin

Efeito do tempo de gestação em expressão de arnm de transportadores de ácidos graxos mRNA em placenta bovinos

The objective of the study was to evaluate the effect of time of gestation on fatty acid transporter mRNA expression in maternal and fetal bovine placenta. Placentas from twelve cows at different thirds of gestation (n=4 per third) were sampled at slaughter to measure FATP-1, FATP-4, FABP-1 mRNA concentration in maternal (caruncles) and fetal (cotyledons) side. Once the placenta was removed, 1cm2 was dissected and, divided into caruncles and cotyledons, stored in sterile tubes, dropped into liquid nitrogen and kept at -80° C until rtPCR analysis. Data were analyzed as a complete randomized design with a 3 x 2 factorial arrangement, using the mixed procedure (SAS 9.3) with repeated measurements on space. Time of gestation, side of the placenta and their interaction were fixed factors, whereas animal was a random factor. There was a time by treatment interaction (P 0.1). We conclude that FATP-1 might play an important role in fatty acid transport during early fetal development.Fil: Desantadina, Ramiro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Laboratorio Bioquímico Fares Taie; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Recavarren, Mariana Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Laboratorio Bioquímico Fares Taie; ArgentinaFil: Relling, Alejandro Enrique. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico CONICET- La Plata. Instituto de Genética Veterinaria "Ing. Fernando Noel Dulout". Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Genética Veterinaria; Argentin

Comparación entre PCR en tiempo real, serología y cultivo en leptospirosis, a partir de muestras de animales silvestres capturados en la provincia de Buenos Aires, Argentina

The definitive diagnostic test for leptospirosis is the recovery of leptospires from the culture of clinical samples. The micro- agglutination test (MAT) which has high sensitivity and specificity, is a reference standard test for serum diagnostic. The advent of molecular methods has facilitated the diagnosis of leptospirosis by PCR reaction. The aim of this study was to compare the results obtained by using bacteriology (culture), serology and molecular biology, from samples of wild animals. The 8.8% of positive samples was obtained by MAT (two R. norvegicus and L. griseus positives). Kidneys from all animals were cultured, and two isolate (2/34) of L. interrogans from R. norvegicus was obtained (6.9%). Serum sample was studied by real-time PCR and 17/34 was positive (50%). Isolation of leptospires from clinical samples is strong evidence to confirm the diagnosis in order to identify the serotypes circulating in a particular geographic region, and in turn be used as antigens in MAT. In real-time PCR from serum samples time, proved to have high sensitivity, being an important tool for the diagnosis of leptospirosis, especially in acute cases of disease, in which the other techniques often provide negative results.La recuperación de leptospiras a partir del cultivo de muestras clínicas es el diagnóstico definitivo de la enfermedad. La prueba de micro aglutinación (MAT) que tiene una alta sensibilidad y especificidad, es la prueba de referencia. La llegada de los métodos moleculares ha facilitado el diagnóstico de la leptospirosis mediante técnicas de PCR. El objetivo del presente trabajo fue comparar los resultados de bacteriología (cultivo), serología y biología molecular, a partir de muestras de animales salvajes. Por medio MAT se detectó un 8.8% de positividad (dos R. norvegicus y un L. griseus). Se aislaron leptospiras en 2/34 cultivos de riñón (6.9%). Mediante PCR en tiempo real se detecta 17/34 animales positivos (50%). El aislamiento de leptospiras a partir de muestras clínicas es la evidencia para confirmar el diagnóstico, permitiendo identificar los serotipos que circulan en una región geográfica determinada, y a su vez ser utilizados como antígenos en MAT. La PCR en tiempo real a partir de muestras de suero, demostró tener una alta sensibilidad, siendo una herramienta importante para el diagnóstico de la leptospirosis en casos agudos de enfermedad, donde las otras técnicas a menudo proporcionan resultados negativos.Fil: Scialfa, Exequiel Alejandro. Division Zoonosis Rurales; ArgentinaFil: Recavarren, Mariana Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Giamperetti, Sergio Alberto. Hospital F. J. Muñiz. Servicio de Zoonosis; Argentin

Molecular diagnosis of Trichinella spiralis in pig sera

El objetivo de este proyecto fue generar una herramienta preventiva de diagnóstico, sensible y específica, basada en técnicas de avanzada en biología molecular para la triquinelosis, una de las enfermedades zoonóticas más importantes de nuestro país, con el fin de evitar el consumo de carnes infectadas con el parásito y proponer un programa epidemiológico de erradicación en piaras. Para ello, fueron inoculados con larvas de T. spiralis cerdos recién destetados, y se extrajeron muestras de sangre durante 31 días para su posterior diagnóstico por biología molecular y ELISA.The objective of this project was generated a sensitive and specific preventive diagnostic tool for one of the most important zoonotic diseases in our country, trichinellosis, based on advanced techniques in molecular biology, aiming at avoid consumption of Trichinella spiralis in infected meat, and proposing a future epidemiological eradication program in herds. Weaned pigs were inoculated with larvae of T. spiralis, and blood samples were taken for 31 days for further diagnostic molecular biology and ELISA.Fil: Recavarren, Mariana Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Fares Taie Instituto de Análisis; ArgentinaFil: Scialfa, Exequiel Alejandro. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud. Dirección Provincial de Epidemiología y de Información Sistematizada; ArgentinaFil: Viera, Ivana. Fares Taie Instituto de Análisis; ArgentinaFil: Di Gerónimo, Vanesa. Fares Taie Instituto de Análisis; ArgentinaFil: Krivokapich, Silvio Jesús. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud “Dr. C. G. Malbrán”; Argentin

Molecular diagnosis of trichinella spiralis in pig sera samples

El objetivo de este proyecto es generar una herramienta preventiva de diagnóstico, sensible y específica, basada en técnicas de avanzada en biología molecular, para la triquinelosis, una de las enfermedades zoonóticas más importantes de nuestro país, con el fin de evitar el consumo de carnes infectadas con el parásito Trichinella spiralis y proponer a futuro un programa epidemiológico de erradicación en piaras. Para ello se cuenta con muestras de músculos y chacinados de cerdo y suidos silvestres y se contará con muestras de suero de cerdos inoculados con larvas recién nacidas de T. spiralis.The objective of this project is to generate a sensitive and specific preventive diagnostic tool for one of the most important zoonotic diseases in our country, trichinosis, based on advanced techniques in molecular biology, aiming at avoiding consumption of Trichinella spiralis-infected meat and proposing a future epidemiological eradication program in herds. The work will be done on samples of pork and wild swine muscle and sausages, as well as blood samples of pigs inoculated with newborn larvae of T. spiralis.Fil: Recavarren, Mariana Ines. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigaciones en Fisica e Ingenieria del Centro de la Provincia de Buenos Aires. - Consejo Nacional de Investigaciones Cientificas y Tecnicas. Centro Cientifico Tecnologico Conicet - Tandil. Centro de Investigaciones en Fisica e Ingenieria del Centro de la Provincia de Buenos Aires. - Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigaciones en Fisica e Ingenieria del Centro de la Provincia de Buenos Aires; Argentina. Instituto de Análisis Fares Taie. Mar del Plata; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Instituto de Análisis Fares Taie. Mar del Plata; ArgentinaFil: Krivokapich, Silvio Jesús. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud; ArgentinaFil: Scialfa, Exequiel Alejandro. Ministerio de Salud Provincia de Buenos Aires; ArgentinaFil: Viera, Ivana. Instituto de Análisis Fares Taie. Mar del Plata; ArgentinaFil: Di Gerónimo, Vanesa. Instituto de Análisis Fares Taie. Mar del Plata; Argentin

Resistance to antimicrobials in poultry production chain isolated bacteria

La resistencia bacteriana a los antimicrobianos es un problema global. Una posible causa de aparición de resistencia es su uso como promotores de crecimiento en aves. Esto puede producir fallos terapéuticos e incrementar la transmisión de bacterias resistentes al hombre. El objetivo de este trabajo es determinar la sensibilidad a antimicrobianos en bacterias aisladas de aves y subproductos para consumo humano. Se estudiaron 60 muestras, aislándose Escherichia coli, Salmonella spp. y Enterococcus faecalis. Un 80% de las muestras de granja presentaron recuentos >103 UFC/g para E. coli y 95% para E. faecalis; 70% de las de frigorífico tuvieron recuentos >103 UFC/g de E. coli y 85% de las de supermercado presentaron recuentos >103 UFC/g de E. faecalis, 15% de E. coli; y 5% presentó desarrollo de Salmonella spp. De 53 aislamientos de E. coli, 47,1% fueron resistentes a fluoroquinolonas, 9,4% resistentes a cefalosporinas de tercera generación, y 3,8% a colistina. De 39 cepas de E. faecalis, una fue resistente a ciprofloxacina, y ninguna a vancomicina. El aislamiento de Salmonella spp. fue resistente a ciprofloxacina. Nuestros resultados revelarían la necesidad de intensificar los controles higiénico-sanitarios en la cadena de manipulación de aves, e implementar mejoras para la reducción de patógenos.Bacterial resistance to antimicrobials is a global problem. A possible cause of the emergence of resistance is their use as growth promoters. This can cause therapeutic failures and increase the transmission of resistant bacteria. The objective of this work was to determine the sensitivity to antimicrobials of isolated bacteria from poultry and products for human consumption. Sixty samples were studied and Escherichia coli, Salmonella spp. and Enterococcus faecalis were isolated. Around 80 % of the farm samples showed counts of >103 UFC/g for E. coli and 95 % for E. faecalis; 70 % of the refrigerated samples showed counts of >103 UFC/g for E. coli, and 85 % of the market samples showed counts of > 103 CFU /g for E. faecalis, 15 % for E. coli; and 5 % developed Salmonella spp. Of the 53 E. coli isolations, 47.1 % were resistant to fluoroquinolones, 9.4 % to third-generation cephalosporins, and 3.8 % to colistin. Of the 39 E. faecalis iso- lated strains, one was resistant to ciprofloxacin, and none to vancomycin. The isolated Salmonella spp. was resistant to ciprofloxacin. Our results reveal the need to intensify sanitary and higyene controls poultry manipulation chain and implement improvements to pathogens reduction.Fil: López, Victoria. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Guerrier, Leonor. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Elorza, Victoria. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Krüger, Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Colello, Rocío. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Medici, Sandra Karina. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Espinosa, Mónica. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Casado, Paula. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Recavarren, Mariana Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Keller, L.. Instituto de Análisis Fares Taie; Argentin

The rate and pattern of urea infusion into the rumen of wethers alters nitrogen balance and plasma ammonia

Changes in N balance, urinary excretion of purine derivative (PD), urea, creatinine and ammonia and plasma ammonia, glucose, urea, insulin and IGF-1 were examined in four wethers (37 ± 2.6 kg BW). The animals were fitted with permanent ruminal catheters, fed lucerne hay (9.4 MJ/day; 23 g N/day; 7 g soluble N/day, 6 equal meals/day) and treated with contrasting rates of urea infusion into the rumen: first, a continuous infusion (CT), at 3.2 mg urea-N/min for 10 days and then a discontinuous infusion (DT) at 156 mg urea-N/min for 4 min; in 6 daily doses with the meals for 7 days. N balance was calculated from pooled samples of faeces and urine. Jugular blood samples were collected before and 1.5 h after the morning meal (M1) on days CT10, DT2, DT4 and DT6. N retention decreased during DT (p = 0.01) due to a significant increase of N excretion in urine (4 g/day; p = 0.009) and faeces (1 g/day; p = 0.02). Dry matter (p < 0.001) and N digestibility in vivo (p = 0.01) decreased significantly during DT. Urinary urea and PD excretion were not altered by treatment. Significant linear (p = 0.004) and quadratic (p = 0.001) effects were observed for plasma ammonia in M1 (from 170 CT10 to 235 μm DT2 and returned to 120 μm DT6). No changes were observed in plasma glucose, urea, insulin and IGF-1. Results indicate that changes from CT to DT reduced N retention in sheep due to enhanced urinary N excretion, but it was not associated with changes in urinary urea or PD excretion; or plasma concentrations of insulin and IGF-1. As the dry matter (DM) an N digestibility could account a 0.23 of the decrease in N retention; the largest fraction of the reduction in N retention remained unexplained by the results.Fil: Recavarren, Mariana Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Fisiopatologia; ArgentinaFil: Milano, Guillermo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Fisiopatologia; Argentin

Development of a real-time PCR assay for the detection of Trichinella Spiralis in muscle tissue of swine and derivatives

Trichinellosis is an emergent zoonosis in several regions of the world and it is considered a public health problem. Trichinellosis represent one of the most important zoonotic diseases in Argentina. The purpose of this study was to develop a real-time PCR assay with internal control to detect Trichinella spiralis DNA in samples of swine muscles and its derivatives. PCR amplification of DNA from muscle samples was performed by real-time PCR with an internal porcine DNA amplification control. The developed PCR assay specifically detects T. spiralis showing no amplification with other Trichinella genotypes and showed an estimated sensitivity of 0.024 larvae per gram in swine muscle samples. From the 21 samples analyzed, five samples negative by enzymatic digestion were positive by real-time PCR, which demonstrates that this technique is capable of detecting T. spiralis in cases when enzymatic digestion cannot. In this work, a new molecular assay with internal control for T. spiralis detection was successfully developed.Fil: Quintana, Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Fares Taie Biochemical Analysis Institute; ArgentinaFil: Recavarren, Mariana Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Fares Taie Biochemical Analysis Institute; ArgentinaFil: Scialfa, Exequiel Alejandro. Rural Zoonosis Division Azul; ArgentinaFil: Viera I.. Fares Taie Biochemical Analysis Institute; ArgentinaFil: Rivero, Mariana Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Krivokapich, Silvio Jesús. Dirección Nacional de Instituto de Investigación. Administración Nacional de Laboratorio e Instituto de Salud "Dr. C. G. Malbrán"; Argentin

Epidemiological surveillance of leptospirosis in the interior of Buenos Aires province

El Departamento de Zoonosis Rurales (con cede en Azul) recibe muestras de pacientes humanos sospechosos de leptospirosis de 7/12 regiones sanitarias. Anualmente, aproximadamente 400 casos humanos sospechosos de leptospirosis (con sintomatología y epidemiología compatible) son notificados en el interior de la provincia. Los factores de riesgo se encuentran relacionados a las actividades ocupacionales, recreativas, y a una exposición domiciliaria; las personas expuestas a inundaciones presentan más riesgo de presentar la enfermedad. Además del diagnóstico humano de la enfermedad, se realizan actividades de vigilancia epidemiológica, que incluyen la detección, notificación, estudio, seguimiento de casos y defunciones. En el interior de la provincia de Buenos Aires se comprobó la circulación de L. interrogans del serogrupo Icterohaemorrhagiae serovares Copenhageni Fiocruz L1-130 y M20, y RGA (área peri-urbana y rural) y del serogrupo Canicola Hound Utrecht IV (área rural). En fauna silvestre las tasas de aislamientos variaron según la especie: R. norvegicus (44%), A. azarae (25%), C. chinga (14.3%), L. griseus (10%) y D. albiventris (2%). Los 41 aislamientos obtenidos en animales silvestres, ponen en manifiesto por un lado la circulación de diversos serogrupos de Leptospiras altamente patógenas en la región, y por el otro, la presencia de nuevos portadores que cumplirían un rol importante en la epidemiología de la enfermedad.The Department of Rural Zoonosis (with yields in Azul) receives samples of human patients suspected of leptospirosis of 7/12 health regions. Annually, approximately 400 suspected human cases of leptospirosis (with symptoms and compatible epidemiology) are reported within the province. Risk factors are related to occupational, recreational activities, and exposure to a home; people exposed to flooding have increased risk of developing the disease. In addition to human disease diagnosis, surveillance activities, including the identification, reporting, review, monitoring of cases and deaths are made. In the interior of Buenos Aires province, circulation of L. interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae Copenhageni Fiocruz L1-130 and M20 was found, and RGA (peri-urban and rural areas) and serogroup canicola Hound Utrecht IV (rural area). In wildlife, isolates rates vary by species: R. norvegicus (44%), A. azarae (25%), C. chinga (14.3%), L. griseus (10%) and D. albiventris (2%). The 41 isolates obtained from wild animals, put one hand manifest circulation of highly pathogenic various serogroups of Leptospira in the region, and on the other, the presence of new carriers that would fulfill an important role in the epidemiology of the disease.Fil: Scialfa, Exequiel Alejandro. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud; ArgentinaFil: Gallicchio, Oscar. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud; ArgentinaFil: Grunne, Sylvia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; ArgentinaFil: Recavarren, Mariana Ines. Instituto Analisis Clinicos Fares Taie; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; ArgentinaFil: Rivero, Mariana Alejandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Instituto Analisis Clinicos Fares Taie; ArgentinaFil: Aguirre, Pablo. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud; ArgentinaFil: San Anton, Dario. Provincia de Buenos Aires. Ministerio de Salud; ArgentinaFil: Brihuega, Bibiana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria; Argentin

A new method for simultaneous detection and discrimination of Bovine herpesvirus types 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) using real time PCR with high resolution melting (HRM) analysis

Bovine herpesvirus types 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are antigenically and genetically similar. The aim of this study was to develop a simple and reliable one-step real time PCR assay with high resolution melting (HRM) analysis for the simultaneous detection and differentiation of BoHV-1 and BoHV-5. Optimization of assay conditions was performed with DNA from reference strains. Then, DNA from field isolates, clinical samples and tissue samples of experimentally infected animals were studied by real time PCR-HRM. An efficient amplification of real time PCR products was obtained, and a clear melting curve and appropriate melting peaks for both viruses were achieved in the HRM curve analysis for BoHV type identification. BoHV was identified in all of the isolates and clinical samples, and BoHV types were properly differentiated. Furthermore, viral DNA was detected in 12/18 and 7/18 samples from BoHV-1- and BoHV-5-infected calves, respectively. Real time PCR-HRM achieved a higher sensitivity compared with virus isolation or conventional PCR. In this study, HRM was used as a novel procedure. This method provides rapid, sensitive, specific and simultaneous detection of bovine alpha-herpesviruses DNA. Thus, this technique is an excellent tool for diagnosis, research and epidemiological studies of these viruses in cattle.Fil: Marin, Maia Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Leunda, Maria Rosa. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Recavarren, Mariana Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Pagnuco, Inti Anabela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Späth, E.. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentin