Antibacterial and anti-biofilm potential of Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng essential oil and Carvacrol against Staphylococcus aureus and Escherichia coli

Introduction: S. aureus and E. coli are pathogen that can cause persistent infections due to antibiotic resistance mechanisms and to its ability to adhere and form biofilm.The search for new agents from natural resources to counter microbial biofilm is an urgent priority in healthcare. Objetive: Chemical composition and antibacterial and anti-biofilm activity of Plectranthus amboinicus essential oil (PAEO) and of carvacrol were investigated against Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Methodology: PAEO chemical analysis was performed by gas chromatography coupled to a mass spectrometer. Antimicrobial activity was assessed by disc diffusion method and broth microdilution method to determine minimum inhibitory concentrations (MICs). Antibiofilm activities were investigated using 96-well plates with crystal violet assay. Results: Carvacrol (85.25%) was the major component in the PAEO. According to disc diffusion test the ability of PAEO and carvacrol for inhibition of bacteria in planktonic form was confirmed. Minimum inhibitory concentration (MIC) of PAEO for S. aureus and E. coli were 0.31 and 1.25%, respectively, with bactericidal effect. Carvacrol demonstrated a significant antibacterial property (MIC = 0.31%), exhibiting bacteriostatic effect against S. aureus and bactericidal effect against E. coli. Carvacrol significantly inhibited the formation of E. coli biofilm (58.9%). Moreover, carvacrol inactivated a mature biofilm. Conclusion: The data obtained are promising, making it possible to develop new therapeutic alternatives. These results denote the potentiality of carvacrol as a source for the treatment of diseases caused by E. coli and S. aureus.Introduction: Staphylococcus aureus and Escherichia coli are pathogens that cause chronic infections due to antibiotic resistance mechanisms and their ability to adhere to surfaces and to form biofilms. The search for new agents from natural resources to counter microbial biofilms is an urgent priority in healthcare. Objetive: chemical composition, antibacterial and anti-biofilm activity of Plectranthus amboinicus essential oil (PAEO) and carvacrol were investigated against E. coli and S. aureus. Methodology: PAEO was chemically analyzed using gas chromatography coupled to a mass spectrometer. Antimicrobial activity was assessed by the disc diffusion method and broth microdilution method to determine minimum inhibitory concentrations (MICs). Antibiofilm activity was investigated using 96-well plates with a crystal violet assay. Results: carvacrol (85.25%) was the major component of PAEO. The disc diffusion test confirmed the ability of PAEO and carvacrol in inhibiting bacteria in their planktonic form. The MICs of PAEO against S. aureus and E. coli were 0.31 and 1.25%, respectively, with bactericidal effect. Carvacrol demonstrated a significant antibacterial property (MIC = 0.31%), exhibiting bacteriostatic effects against S. aureus and bactericidal effects against E. coli. Carvacrol considerably inhibited E. coli biofilm formations (58.9%). Moreover, carvacrol inactivated the mature biofilms. Conclusion: the data obtained are promising, and facilitates the development of new therapeutic alternatives. These results indicate the potential of carvacrol in treating diseases caused by E. coli and S. aureus

Transposable elements of class II in Crinipellis perniciosa

Este trabalho relata o isolamento e caracterização de dois elementos transponíveis da classe II no fungo Crinipellis perniciosa a partir de seqüências disponibilizadas no banco de dados do projeto “Genoma da Vassoura-de-Bruxa”. Este fungo é de grande importância econômica, uma vez que é o causador da mais séria enfermidade da cacauicultura. O prévio acesso ao banco de dados do projeto “Genoma da Vassoura-de-Bruxa” disponibilizou seqüências que apresentaram homologia a conhecidos elementos transponíveis pertencentes às superfamílias Tc1/mariner e hAT. Estas seqüências foram utilizadas para a construção de oligonucleotídeos. Um fragmento de DNA específico para cada elemento foi utilizado como sonda para o isolamento de elementos completos. Estes elementos foram isolados a partir do banco genômico de C. perniciosa construído no vetor λEMBL3 (Stratagene), sendo denominados Mico e Guppy. A análise da seqüência parcial do elemento Mico no banco de dados NCBI demonstrou alta similaridade com o domínio funcional DDE, domínio catalítico presente em transposases da superfamília Tc1/mariner. Para a seqüência parcial do elemento Guppy, foram evidenciadas regiões de conservação de aminoácidos, apesar de não indicar a presença dos domínios conservados I, II e III (hATC), essenciais para a atividade de transposição dos elementos da superfamília hAT. A análise da expressão destes elementos realizada neste trabalho não forneceu evidências da atividade destes elementos, sob condições de estresse por temperatura e concentração salina. A análise de distribuição dos elementos Mico e Guppy, em diferentes isolados pertencentes a diferentes biótipos de C. perniciosa, pelas técnicas de PCR e hibridização sugere a presença de cópias polimórficas e a ocorrência de subfamília destes elementos no genoma de C. perniciosa. O perfil de hibridização homogêneo do elemento Guppy fornece indícios de que este seja um elemento não-nativo e tenha sido adquirido por um ancestral comum dos biótipos. Já o perfil de hibridização do elemento Mico permitiu o agrupamento dos diferentes isolados do biótipo C, relacionando com as diferentes regiões geográficas das quais os fungos foram isolados, demonstrando, assim, o seu potencial para o uso como marcador molecular.This study reports the isolation and characterization of two class II transposable elements in the fungus Crinipellis perniciosa from sequences available in the data bank of the "Witch's Broom Genome" project. This fungus is of great economic importance once it is the causal agent of the most serious disease in cocoa crop. Previous acess to the data bank of the "Witch's Broom Genome" project allowed the identification of sequences with homology to known transposable elements belonging to the superfamilies Tc1/mariner and hAT. These sequences were used for the construction of oligonucleotides. An specific DNA fragment for each element was used as a probe for the isolation of the complete elements. These elements were isolated from C. perniciosa genomic bank constructed in the vector λEMBL3 (Stratagene) and named Mico and Guppy. The analysis of the partial sequence of Mico element in NCBI database showed high similarity to the DDE functional domain, which is a catalytic domain present in transposases of the superfamily Tc1/mariner. Conserved aminoacids regions were evidenced in the analysis of the partial sequence of Guppy element, although they did not indicate the presence of the I, II or III conserved domains (hATC), essential for the transposition activity of the elements of the superfamily hAT. The analysis of the expression of these elements performed in this study did not give evidence of the activity of these elements under stress conditions of temperature and salt concentration. The analysis xof distribution of Mico and Guppy elements in different isolates from different biotypes of C. perniciosa by PCR and hybridization techniques suggests the presence of polymorfic copies and the occurrence of subfamilies of these elements in C. perniciosa genome. The homogenic hybridization profile of Guppy element offers proofs that it may be a non-native element and may be acquired by a common ancestor of the biotypes. The hybridization profile of Mico element allowed the grouping of the different isolates of the biotype C relating to the different geographic regions from which the fungi were isolated, showing its potential as a molecular mark.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic

LEVANTAMENTO MALACOLÓGICO DE MOLUSCOS DO GÊNERO Biomphalaria, NO DISTRITO DE ANUTIBA - ALEGRE, ES, BRASIL.

Este estudo teve com principal objetivo, avaliar a presença de moluscos do gênero Biomphalaria, hospedeiros intermediários do parasito Schsitosoma mansoni, no distrito de Anutiba, pertencente ao município de Alegre, localizado no sul do Estado do Espírito Santo. Durante os trabalhos de campo, foram avaliados 84 pontos, sendo que 14 apresentaram moluscos classificados como da espécie Biomphalaria tenagophila. A taxa de infecção média foi de 7,7% sendo que no córrego do óleo a taxa de infecção ficou em 13%. Foram encontrados dejetos humanos, em todos os pontos positivos para os moluscos. No intuito de avaliarmos o grau de conhecimento das pessoas que residem nesta área, foi realizado aplicação de um questionário em 48 famílias, a respeito da doença. Dentre as informações obtidas, 49% responderam que alguém da família já teve esquistossomose. Assim, podemos concluir que esses resultados demonstraram a presença de condições ideais para a manutenção do ciclo evolutivo do parasito S. mansoni, que é dependente de água contaminada com fezes de indivíduos infectados e a presença dos moluscos do gênero Biomphalaria, hospedeiros invertebrados para o parasito

PLANTAS DO CERRADO BRASILEIRO COMO POSSÍVEIS AGENTES MOLUSCICIDAS

O bioma Cerrado é caracterizado como a savana mais diversificada do mundo, encerrado certa de um terço da biodiversidade brasileira. Neste estudo utilizamos as espécies vegetais típicas desse bioma, Davilla elliptica, Davilla nítida com o intuito de obtenção de extratos hidroalcoólicos para testes contra moluscos de espécie Lymnaea columella, hospedeiros intermediários do parasito Fasciola hepática, causador da fasciolose. Esta parasitose é uma enfermidade com elevada importância na área da medicina veterinária devido as grandes perdas econômicas que causa. Dentre os vários métodos utilizados, objetivando reduzir o número de casos da doença, o controle das populações de moluscos do gênero Lymnaea pode ser medida promissora. Além disso, a busca por moluscicidas de origem vegetal vem aumentando, uma vez que a utilização do moluscicida sintético niclosamida (N-(2'-cloro-4'nitrofenil) - 5 clorosalicilanilida), a única substância recomendada para combater moluscos vetores de doenças tem gerado preocupação em relação a fatores como toxicidade para outras espécies, devido à sua baixa seletividade, podendo acarretar sérios problemas de ordem ambiental. Assim, este estudo teve por finalidade analisar a eficiência de extratos hidroalcoólicos das plantas D. elliptica, D. nitida, como possíveis agentes moluscicidas para a espécie L. columella. Os extratos hidroalcoólicos de D elliptica e D. nitida apresentaram atividade moluscicida contra a espécie L. columella, sendo que D. elliptica apresentou resultados mais promissores, desencadeando efeitos tanto moluscicidas como e ovicidas, o que sugere que este extrato pode ser utilizado, em testes de campo, como alternativa para o controle desta parasitose.  

Prevalence of Ehrlichia canis using the nested-PCR, correlation with the presence of morulae and thrombocytopenia in dogs treated in Veterinary Hospital of the Federal University of Espirito Santo

ABSTRACT. Sales M.R.R.P., Ignacchiti M.D.C., Mendes Junior A.F., Suhett W.G., Porfírio L.C., Marins M., Aptekmann K.P. & Pereira Júnior O.S. [Prevalence of Ehrlichia canis using the nested-PCR, correlation with the presence of morulae and thrombocytopenia in dogs treated in Veterinary Hospital of the Federal University of Espirito Santo.] Prevalência de Ehrlichia canis pela Nested- -PCR, correlação com a presença de mórula e trombocitopenia em cães atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal do Espírito Santo. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 37(1):47-51, 2015. Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Espírito Santo, Rua Projetada s/nº, Caixa Postal 25, Pontal, Marataízes, ES 29349-000, Brasil. E-mail: [email protected] Ehrlichia canis, is the primary etiologic agent of canine monocytic ehrlichiosis. The disease is mainly transmitted by the brown dog ticks Rhipicephalus sanguineus in different endemic regions of Brazil. The purpose of this study was determinated using the Nested Polymerase Chain Reaction (nested-PCR) the prevalence of Ehrlichia canis in 85 dogs, regardless of race, age, sex or health status, treated at the Veterinary Hospital of Federal University of Espirito Santo, in Alegre-ES and evaluate its correlation with the presence of morulae and thrombocytopenia. It was observed that 1.17% of the samples were positive by blood smear, for the presence of morulae. However, the nested-PCR showed 5.88% positivity of samples. And 17.64% samples showed thrombocytopenia. By analyzing all the techniques, it was concluded that the introduction of diagnostic techniques such as nested-PCR is an important method for aid in early diagnosis of pathologies

Kit comercial de ELISA® para a detecção de coproantígenos e exame coproparasitológico em bovinos com fígados condenados por fasciolose Commercial ELISA® kit for detection of coproantigen and coproparasitological method in bovine livers with fascioliasis convicted

Objetivou-se com o presente estudo comparar um kit comercial de ELISA para a detecção de coproantígenos e um exame coproparasitológico de sedimentação utilizando-se como padrão ouro o diagnóstico da inspeção de fígados bovinos ao abate. Além disso, avaliou-se a correlação entre a intensidade parasitária mensurada pela contagem de ovos nas fezes e a de parasitos ao abate. Foram coletadas as fezes e avaliados macroscopicamente os fígados de 81 bovinos, dos quais 45 tiveram os fígados condenados por fasciolose hepática ao abate, nos quais se realizou a contagem dos parasitos. Duas frações de cada amostra de fezes coletadas foram separadas e uma delas foi armazenada em congelador para posterior realização do ELISA e a outra processada segundo uma técnica de sedimentação fecal para diagnóstico de ovos de Fasciola hepatica. O coeficiente de correlação de Spearman e o qui-quadrado de McNemar foram utilizados, adotando-se o nível de significância de 5%. Em oito fígados bovinos condenados por apresentarem lesões características de fasciolose, não foram encontrados exemplares do parasito. O exame coproparasitológico e o ELISA para detecção de coproantígenos, respectivamente, apresentaram sensibilidade de 51,11% e 75,55%, especificidade de 100% e 91,66%, valor preditivivo positivo de 100% e 91,89%, valor preditivo negativo de 62% e 75% e kappa de 0,48 e 0,65. Os resultados obtidos pelo kit ELISA comercial não diferiram (P=0,06) dos obtidos ao abate, mas o exame coproparasitológico diferiu (P<0,0001) do abate na detecção de animais positivos. A correlação entre o número de parasitos no fígado e o número de ovos nas fezes é moderada (rs=0,5757, P<0,0001). O kit ELISA comercial foi mais sensível do que o exame coproparasitológico, embora este não deva ser descartado devido a sua eficiência.<br>The aim of this study was to compare a commercial ELISA kit for detection on coproantigen examination and fecal sedimentation using as gold standard inspection diagnosis of bovine livers at slaughter. In addition, we evaluated the correlation between the measured intensity of infection by counting eggs in the feces and the parasites in bovine livers. Feces were collected and evaluated macroscopically of 81 cattle livers, 45 of which had livers condemned by liver flukes and in these livers parasites were counted. Two fractions of stool samples collected were separated and one stored in freezer for further ELISA and other one processed according to sedimentation technique for diagnosis Fasciola hepatica. The Spearman correlation and McNemar chi-square were used, adopting the significance of 5%. In eight bovine livers condemned by the characteristic lesions of fascioliasis parasite were not found. The stool examinations and ELISA testing for detection coproantigen, respectively, had sensitivity of 51.11% and 75.55%, specificity of 100% and 91,66%, predictive positive value was 100% and 91.89%, predictive negative value 62% and 75% and kappa 0.48 and 0.65. The results obtained by commercial® ELISA kit did not differ (P=0,06) obtained at slaughterhouse, but the stool examinations differed (P<0.0001) in the detection of the positive animals. The correlation between the number of parasites in the liver and the number of eggs in the feces was moderate (rs=0.5757, P<0.0001). The commercial ELISA kit® was more sensitive than the fecal test, althought this one shoud not be discarded because of their efficiency