Eficiência de protocolos de extração de RNA em diferentes tecidos do cafeeiro

In order to use sensitive techniques of molecular biology, such as the study of differentially expressed genes, a highqualityRNA in suitable quantities is necessary. Due to the presence of several varieties and often expressive quantities of secondarycompounds in plants, there is no standard method for the isolation of nucleic acids that can be used for all species. Polyphenols andpolysaccharides are the compounds that interfere the most in the extraction process, and when they are present, a low-quality RNAis produced. Four RNA extraction methods (CTAB method, Hot Borate, CONCERT and Tri Reagent), in four different coffee tissues(root, leaf, flower and fruit) were tested in this work, aiming at determining which method is more efficient. It was observed that theCTAB and Hot Borate methods, in which PVP and/or -mercaptoethanol were added and precipitation with LiCl was performed,presented more pure RNA, with no degradation observed in any of the tissues, being suitable for further gene expression analysis.High-quality RNA was not obtained from any tissue in the extraction with Tri Reagent, which includes the use of phenol, and thusexpression analysis was disturbed. The CTAB macroextraction method presented samples with the highest RNA quality and largestquantities in all tissues. Future works need to be carried out aiming the standardization of this macroextraction method.Para a utilização de técnicas sensíveis de biologia molecular, como o estudo de genes diferencialmente expressos, énecessário a obtenção de um RNA de boa qualidade e em quantidades adequadas. Devido à presença de grandes variedades, efrequentemente grande quantidade de compostos secundários em plantas, não existe um método padrão para o isolamento de ácidosnucléicos que possa ser utilizado para todas as espécies. Os polifenóis e os polissacarídeos são os compostos de maior interferênciano processo de extração, e quando presentes geram um RNA de baixa qualidade. Nesse trabalho foram testados quatro métodos deextração de RNA (Método CTAB, Borato quente, CONCERT e Tri Reagente), em quatro diferentes tecidos de café (raiz, folha, flor efruto), objetivando-se determinar qual método é mais eficiente. Foi observado que os métodos, CTAB e Borato quente, que possuíama adição PVP e/ou -mercaptoetanol, e precipitação com LiCl, foram os que apresentaram RNAs mais puros e sem degradação emtodos os tecidos, e puderam ser utilizados para a análise de expressão gênica. Com a extração utilizando o TriReagente, que tem comobase o fenol, não foi obtido RNA de boa qualidade em todos os tecidos e consequentemente não foi possível a análise de expressão. Ométodo de macroextração CTAB foi o que apresentou amostras com RNA de melhor qualidade e em grandes quantidades em todosos tecidos. Trabalhos posteriores precisam ser realizados a fim de padronizar esse método para microextração

Protective effect and expression of defense-related ESTs induced by acibenzolar-S-methyl and a phosphorylated mannan oligosaccharide-based product against Moniliophthora perniciosa in Theobroma cacao

Witches’ broom disease (WBD), caused by the fungus Moniliophthora perniciosa, is one of the main diseases in cocoa (Theobroma cacao) and has caused severe economic losses. Integrated disease management has been the focus for its control and therefore, the identification of new inducers of plant resistance is desirable. Thus, the goal of this work was to evaluate two potential inducers of resistance against WBD. A phosphorylated mannan oligosaccharide-based product (PMO) and acibenzolar S-methyl (ASM) were tested on M. perniciosa inoculated seedlings and in field experiments and showed a reduction on the incidence of WBD. The expression of two defense-related expressed sequence tags (ESTs) in cocoa, coding for peroxidase (Pox) and chitinase (Chi), were accessed by qPCR. Both products induced the expression of the Pox defense-related EST. In general, ASM induced the expression of chitinase (Chi) and peroxidase (Pox) in earlier time-points than PMO. However, PMO provided long-lasting and higher levels of expression. Chi expression was triggered in the time-points succeeding the spraying but was very low. On the other hand, peaks of Pox transcripts were detected in later time-points for both inducers. ASM and PMO modes of action might be explained, at least partially, by the overexpression of defense-related ESTs.Keywords: Cocoa, witches’ broom disease, disease control, peroxidase, chitinase, induced resistance, elicitors, quantitative reverse transcriptase PCR (qRT-PCR)African Journal of Biotechnology Vol. 12(12), pp. 1311-131

Influência de reguladores de crescimento no desenvolvimento radicular de sementes de Coffea arabica L. Rubi in vitro

It was evaluated the effect of plant growth regulators in the root development in coffee seeds cv. Rubi (Coffea arabica L. Rubi) grown in vitro. Coffee seeds from adult plants were established on medium MS/2 + sucrose (20 g L-1) + agar (6 g L-1). Four treatments were tested: T1 - control; T2 -BAP (6 mg L-1) + NAA (0,1 mg L-1); T3 -BAP (6 mg L-1); T4 - GA3 (5 mg L-1). The highest rooting response was observed on the control (MS/2 + agar + sucrose). This suggest that rooting can be achieved without the use of plant growth regulators.Avaliou-se o efeito de reguladores de crescimento na germinação e enraizamento in vitro de sementes de cafeeiro Rubi (Coffea arabica L. Rubi ). Sementes de plantas adultas de cafeeiro foram inoculadas em meio MS/2 + 20 g L-1 de sacarose e 6 g L-1 de ágar. Foram testados quatro tratamentos: T1 - controle; T2 - 6 mg L-1 de BAP + 0,1 mg L-1 de ANA; T3- 6 mg L-1 de BAP; T4 - 5 mg L-1 de GA3. O melhor tratamento obtido para enraizamento de sementes de cafeeiro foi o controle (MS/2 + ágar + sacarose), tornando-se desnecessária a adição de reguladores de crescimento

Alterações celulares em ápices caulinares e estabilidade genética de plantas de Eucaliptos submetidos à criopreservação / Cellular alterations in kaolinitic apexes and genetic stability of Eucalyptus plants submitted to cryopreservation

O eucalipto é amplamente explorado, principalmente para produção de papel e na construção civil , o que gera uma alta demanda por mudas de eucalipto, tendo-se a necessidade de buscar técnicas biotecnológicas para aumentar a produtividade e conservar o germoplasma de híbridos elite. Dentre essas técnicas a criopreservação apresenta alto potencial para conservação em longo prazo de genótipos de interesse. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver um protocolo de criopreservação por meio da técnica droplet-vitrification para o híbrido comercial Eucalyptus grandis X Eucalyptus urophylla, identificar alterações celulares nos ápices caulinares cripreservados, e verificar estabilidade genética das plantas. Ápices caulinares foram pré-cultivados em meio MS com sacarose a 0,2 M e 0,5 M, por 24 horas. Posteriormente, os ápices foram dispostos em papel alumínio contendo uma gota de PVS2 à 0 ºC, antes da imersão em nitrogênio líquido (NL), em  diferentes tempos (20, 40, 60, 80, 100 e 120 minutos). Os ápices foram reaquecidos por 10 minutos em solução de descarregamento a 25ºC e transferidos para o meio de regeneração MS suplementado com 0,14 µM de BAP. Após 60 dias, avaliaram-se a sobrevivência, brotações e a estabilidade genética das plantas por citometria de fluxo. Os ápices caulinares nos tempos: recém excisados, submetidos à criopreservação, e após uma semana de recuperação foram coletados para análise de histologia e Microscopia Eletrônica de Varredura. O tempo de 60 minutos de PVS2 seguido de imersão em nitrogênio líquido proporcionou as maiores taxas de sobrevivência  (66%), e número de brotações (6 brotos/ápice). O conteúdo estimado de DNA nuclear das plantas de eucalipto tratadas com PVS2 e criopreservadas não apresentaram diferenças estatísticas, quando comparado com as plantas do controle. As observações histológicas e ultraestruturais revelaram que o protocolo de Droplet-vitrification estabelecido com 60 minutos de exposição ao PVS2 causou menores danos celulares dos ápices caulinares.Alterações celulares em ápices caulinares e estabilidade genética de plantas de Eucaliptos submetidos à criopreservação / Cellular alterations in kaolinitic apexes and genetic stability of Eucalyptus plants submitted to cryopreservatio

Fitotoxicidade de extratos foliares de barbatimão [Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville] em bioensaio com alface

Chemical substances can modulate the growth and development of adjacent plants, phenomenon known as allelopathy. The aim of this work was to evaluate the phytotoxic action of barbatimão leaf extracts in lettuce bioassay. We obtained the aqueous, acetonic and water fraction extract of barbatimão leaves. To develop the bioassay parameters were used: germinability (G%), germination speed index and mitotic index were studied. Seeds of lettuce (Lactuca sativa L.) were exposed to concentrations of 5, 10, 25 and 50mg mL-1 of the extract and distilled water was used as control. All extracts reduced the G(%), delayed germination and affected cell division. The aqueous and acetone extracts inhibited germination even at lower concentrations, which was not observed for the aqueous fraction. Although the root protrusion occurred in 70% of the seeds, on average, meristematic root region proved to be oxidized and, after 72 hours, no longer increased, due to degradation of its tissues, indicating phytotoxic action of the extracts. The results obtained indicate the presence of chemical inhibitors in the extracts, indicating an allelopathic potential of the extracts evaluated.O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação fitotóxica de extratos foliares de barbatimão em bioensaio com alface. Foram obtidos extrato aquoso, acetônico e fração aquosa de folhas de barbatimão. Para compor o bioensaio foram utilizados os parâmetros: germinabilidade (G%), índice de velocidade de germinação e índice mitótico. Sementes de alface (Lactuca sativa L.) foram expostas às concentrações de 5, 10, 25 e 50 mg mL-1 dos extratos e água destilada foi utilizada como controle. Todos os extratos reduziram a G (%), atrasaram a germinação e afetaram a divisão celular. Os extratos aquoso e acetônico inibiram a germinação já nas menores concentrações, o que não foi constatado para a fração aquosa. Embora ocorresse a protrusão radicular, em 70% das sementes germinadas, em média, a região meristemática da raiz mostrava-se oxidada e, após 72 horas, não mais cresciam, devido a degradação de seus tecidos, indicando ação fitotóxica dos extratos. Os resultados obtidos apontam para a presença de substâncias químicas inibidoras nos extratos, revelando potencial alelopático para os extratos avaliados

USO DE BIORREATORES DE IMERSÃO CONTINUA, TEMPORÁRIA E MEIO DE CULTURA SEMISSÓLIDO NA PRODUÇÃO DE CLONES DE Eucalyptus camaldulensis

The plant micro-propagation in bioreactor systems is regarded as one way to reduce cost by automation and production scheduling. This research was carried out in order to obtain an efficient procedure for clone production of Eucalyptus camaldulensis on different types of bioreactor including continuous and temporary immersion bioreactor. To do so, the apical meristems (1 mm) and the apical meristems with adjacent tissue (2,5 mm) were used as initial explants. These tissues were cultured, for 60 days, in semisolid culture medium supplemented with 1 mg L-1 indole acetic acid (IAA) and 0.32 mg L-1 benzylaminopurine (BA). After 60 days, the meristems with adjacent tissue were transferred to a continuous immersion bioreactor and maintained in dark or light conditions. In order to verify the effect of the explant source on bioreactor multiplication, the explants subcultured from meristems multiplied in semisolid culture medium and the meristems multiplied in continuous immersion bioreactor were tested and maintained in dark conditions. After establishing this parameters, the multiplication experiments were carried out in continuous and temporary immersion and the multiplied explants were then rooted in MS medium supplemented with 0, 2, 4, 8 and 20 mg L-1 indole butyric acid (IBA) and kept in the dark or under controlled lighting conditions. After that, the rooting the plants were acclimatized in mist chamber. The meristem with adjacent tissue favored a greater number of buds/explants. The continuous immersion bioreactor in the dark provided higher shoots number and multiplication rate. The rooting was better on culture medium without auxin and kept in the dark for 15 days or the culture medium supplemented with auxin and maintained under light with 100% plantlet rooting. The Eucalyptus camaldulensis acclimatization was efficient, with high survival rate (76%). It was possible to establish the procedure for bioreactor micro-propagation of Eucalyptus camaldulensis large-scale clones.A micropropagação em sistemas de biorreatores é considerada como uma forma de reduzir os custos de produção por meio do escalonamento de automatização do processo. O objetivo desse trabalho foi desenvolverum protocolo eficiente de produção de mudas de Eucalyptus camaldulensis em diferentes tipos de sistema, incluindo biorreator de imersão continua e temporária. Para isso, meristemas apicais (1 mm) e meristemas apicais com tecido adjacente (2,5 mm) foram usados como explantes iniciais. Esses tecidos foram cultivados, por 60 dias, em meio de cultura suplementado com 1 mg L-1 de ácido indolacético (AIA) e 0.32 mg L-1 de benzilaminopurina (BAP). Após 60 dias, os meristemas com tecidos adjacentes foram transferidos para biorreatores de imersão contínua ou temporária e mantidos no escuro ou sob condições controladas de luminosidade. Para verificar o efeito da fonte de explante na multiplicação em biorreator foram testados explantes subcultivados de meristemas multiplicados em meio de cultura semissólido e meristemas multiplicados em biorreator de imersão contínua e mantidos no escuro. Despois de estabelecer esses parâmetros, os experimentos de multiplicação foram realizados em biorreatores de imersão contínua e temporária. Os explantes multiplicados foram enraizados em meio de cultura MS suplementado com 0, 2, 4, 8 e 20 mg L-1 de ácido indolbutírico (AIB) e mantidos no escuro ou sob condições controladas de luminosidade. Depois do enraizamento as plantas foram aclimatizadas em câmara de nebulização. Os meristemas com tecidos adjacentes favoreceram um maior número de gemas/explantes. O biorreator de imersão contínua e mantido no escuro promoveu maior número de brotações e maior taxa de multiplicação e o melhor enraizamento ocorreram no meio de cultura isento de auxina, mantido no escuro por 15 dias ou o meio de cultura suplementado com auxina, mantido na luz apresentando 100% de enraizamento. A aclimatização do Eucalyptus camaldulensis foi eficiente com taxa de sobrevivência de 76%. Portanto, foi possível desenvolver um método eficiente de micropropagação em biorreator para a produção de mudas Eucalyptus camaldulensis em larga escala

Da decisão à vivência da cesariana: a perspectiva da mulher

Objetivo: descrever o processo de decisão da mulher primípara pela via de nascimento, compreendendo a vivência da cesariana pela mesma. Método: trata-se de uma pesquisa do tipo descritiva, com abordagem qualitativa. As participantes foram dez puérperas primíparas que vivenciaram a cesariana. Na coleta de dados, utilizou-se a técnica de entrevista aberta com posterior análise temática, aplicando a técnica Laurence Bardin. Resultados: Foram levantadas duas categorias: A decisão pela via de nascimento e o momento da cesariana. Na primeira, foi possível perceber que a maioria das mulheres já chega ao consultório decidida sobre a via de nascimento, no entanto, nem todas conseguiram prosseguir com a escolha inicial. Na segunda, retrata-se como foi vivenciar a cesariana, estando a mulher amparada pelos entes queridos e apoiada pelos profissionais de saúde. Conclusão: Ressalta-se a importância de a equipe de saúde atuar efetivamente no compartilhamento de informações e na construção do vínculo, desde o pré-natal até o puerpério, em que a mulher exerce o real protagonismo do parto