Caracterização de melões transgênicos acc oxidase antisense e estudo bioquímico de álcool aciltransferases envolvidas na biossíntese de aromas

L'augmentation de la production d'éthylène est une des principales causes de l'accélération du métabolisme post-récolte de melons "Cantaloups Charentais". Dans le but de prolonger la vie post-récolte de ces fruits, les melons ont été transformés avec un clone de l´ACC oxydase (pAP4) de pomme "Royal Gala", en orientation antisens. Trois transformants ont été obtenus et le clone montrant la plus importante réduction de la production d'éthylène, appelé AS3, a été retenu pour la suite des travaux. Avec ce modèle végétal on a pu discriminer certains événements comme étant éthylène-dépendants et d´autres comme éthylène-indépendants. Par exemple, les melons AS3 ont eu un retard de maturation d’environ 10 jours et en conséquence, une accumulation de sucres plus importante. En plus, ces fruits ont préservé une plus grande fermeté de pulpe, une plus grande teneur en chlorophylles et une plus forte acidité que les non transformés. Cependant, la teneur de caroténoïdes n'a pas été modifiée par la transformation génétique. D'autre part, l'intensité aromatique des ces fruits a été réduite. Des modifications phénotypiques telles qu’une moindre sénescence des feuilles et une plus grande émission des branches latérales ont été observées. Afin de confirmer que la dégradation des chlorophylles, la perte de fermeté et la synthèse de composés volatiles étaient réellement des événements éthylène-dépendants, des fruits AS3 ont été soumis à l’action d’éthylène exogène. La restauration du processus de maturation a été seulement partielle, c'est-à-dire qu’il a y bien eu réduction de la fermeté de la pulpe mais pas de restauration complète de la production de composés volatiles, ni du jaunissement de l'écorce. Comme les plantes AS3 ont présenté des modifications de phénotype rappelant des réponses à l'action de cytokinines, on a déterminé la concentration de cette hormone dans les melons AS3 et non transformés. Nous avons ainsi trouvé que les concentrations de zéatine et de zéatine-ribose étaient 4 à 6 fois supérieures à celles des melons non transformés. Ce résultat suggère que la transformation génétique qui a conduit à une forte réduction de production d’éthylène et a eu pour conséquence de modifier le cycle végétatif des plantes, a stimulé la synthèse de cytokinines, hormones connues pour retarder la sénescence et l'action de l'éthylène. Sur d´autres melons "Cantaloup Charentais", transformés avec un clone de l´ACC oxydase de melon, appelé pMEL1, les réponses à la action d’éthylène ont été intégralement restaurées. Dans ces fruits des clones d’AAT (Cm-AAT1, Cm-AAT3 and Cm-AAT4) ont été isolés qui ont permis une caractérisation biochimique des protéines recombinantes. Ces protéines ont toutes montré une capacité à synthétiser des esters soufrés, mais la protéine Cm-AAT1 est la plus active. Ces protéines sont actives seulement sous forme tétramérique, avec un poids moléculaire autour de 200 kDa. La cinétique a montré que le CoA-SH, un des produits de la réaction, est activateur à des concentrations basses et inhibiteur à des concentrations plus élevées. L’enlèvement du CoA-SH du milieu réactionnel, via l’addition de phosphotransacétylase, s’est traduit par une réduction de la valeur du Km de 2 à 3 fois, vis-à-vis du co-substrat Acyl-CoA. Enfin, des mutations dirigées sur quelques aminoacides spécifiques dans les séquences Cm-AAT ont changé la sélectivité des enzymes et le nombre d’esters produits. ABSTRACT : The increase of ethylene production in ‘Cantaloupe Vedrantais’ melon is one of the main causes of the pre and post harvest alterations. In order to extend the shelf life of this fruit, melon plants were transformed with an ACC oxidase DNA sequence of "Royal Gala" apple in antisense orientation (pAP4). Three transformants were obtained. One of them showing the greatest reduction in ethylene production (AS3) was analysed further and used as a model to discriminate between ethylene- dependent and ethylene-independent processes during fruit ripening. AS3 melons exhibited a delay of about 10 days for ripening and accumulated more soluble solids than untransformed melons. Besides, fruit firmness, chlorophyll content and titratable acidity were higher in AS3 melons than in untransformed melons. However, the carotenoid content was unaffected and the aroma intensity was reduced in AS3 fruits. In AS3 plants the senescence of the leaves was reduced and the formation of lateral branching was increased. In order to confirm that chlorophyll degradation, cell wall degradation and synthesis of volatile compounds were ethylene-dependent events, ethylene was applied on AS3 fruits. However, the reversion of the process was limited. While the reduction of pulp firmness occurred, the production of volatiles compounds and the yellowing of the skin were not achieved. Considering that the phenotype of AS3 plants resembled a response to cytokinins action, the concentration of this phytohormone was monitored in both AS3 and untransformed melons. This hypothesis was confirmed as the cytokinins concentration in the pulp and skin of AS3 melons was fourth to eight fold higher. This result suggests that reduction in ethylene production induced changes in the vegetative cycle of the plant, and favoured the synthesis of cytokinins, hormones that are known as retardants of senescence and ethylene action. Using plants from a different lineage, "Cantaloupe" "Charentais", transformed with an ACC oxidase DNA sequence from melon, in antisense orientation (pMEL1), the responses to ethylene action were all observed. For this reason, AAT clones (Cm-AAT1, Cm-AAT3 and Cm-AAT4) were isolated for biochemical characterization. All recombinant proteins were active to synthesize sulfur-containing esters but Cm-AAT1 was the most active. Only the tetrameric form of these proteins, with molecular mass of 200 kDa, were active. The kinetic analysis indicated that CoA-SH, a product of the reaction, is an activator at low concentration and inhibitor at higher concentration. The removal of CoA-SH from the reaction medium, by adding phosphotransacetylase, resulted in Km values two to three fold lower for the co-substrate acyl-CoA. The site directed mutation of a few amino acids in the Cm-AAT sequences affected the selectivity of the original protein and the number of esters produce

Avaliação da capacidade de redução de desoxinivalenol pelo processo de limpeza de trigo em grãos em mesa densimétrica / Evaluation of the decoxinivalenol reduction capacity by the wheat cleaning process in grains in densimetric table

Desoxinivalenol (DON) é a toxina com maior ocorrência em trigo. Para o processamento deste cereal é recomendável a utilização de ferramentas de controle de perigos para segurança de alimentos, como por exemplo, HACCP (Hazard Analysis and Critical Control Points), que é útil para identificar, avaliar e propor medidas preventivas para eliminar ou minimizar perigos a níveis aceitáveis. Além disso, há a obrigatoriedade de atendimento ao requisito legal proposto pela RDC n°138/2017 da ANVISA, que apresenta limites máximos toleráveis para DON de 1000 e 750 ppb em farinha de trigo integral e branca respectivamente, o que têm demonstrado a preocupação pública aos efeitos desta contaminação para a saúde dos consumidores. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a capacidade de redução de DON em trigo em grãos por meio da limpeza realizada em uma mesa densimétrica como parte do plano HACCP na produção de farinhas de trigo. Para isso, foi realizada uma amostragem de acordo com recomendação do Regulamento CE n°401/2006, adaptado para coleta em processo contínuo. As coletas foram realizadas separadamente em pontos específicos do processo de limpeza em mesa densimétrica, denominados como “entrada”, “fração leve” e “fração intermediária/pesada”. Cada amostra global obtida foi analisada, em duplicata, para quantificação de desoxinivalenol utilizando Cromatografia Líquida de Ultra Pressão acoplada a detector de massa/massa (UPLC-MS/MS) no equipamento UPLC ACQUITY Waters®. Os resultados encontrados demonstraram que a “fração leve” separada é a porção mais contaminada (8627,90 e 11634,95 ppb), contra a “entrada” (354,70 e 683,10 ppb) e a “fração intermediária/pesada” (926,55 e 2045,00 ppb). Deste modo, foi verificado que a mesa densimétrica é capaz de reduzir o teor de desoxinivalenol pela separação dos grãos avariados com elevados teores da micotoxina dos grãos sadios, que efetivamente seguem para a moagem, assegurando níveis aceitáveis legais em farinhas, além de reduzir riscos à segurança de alimentos

Uso de aditivos químicos na redução de escurecimento de conservas de cebola branca (Allium cepa L) / Use of chemical additives to reduce browning in white onion canned

As conservas de cebola branca podem ter alterações de cor e formações de precipitado na calda, influenciando negativamente na aceitação do consumidor. Entre as estratégias para inibir estas alterações, podemos adicionar nas formulações da calda de cobertura (salmoura), ingredientes ou aditivos químicos com diferentes funções tecnológicas. Porém, o uso de um ou mais aditivos consegue garantir conservas que se mantenham dentro dos padrões almejados durante a vida de prateleira. Em geral, os conservantes sorbato de potássio, benzoato de sódio e metabissulfito de sódio, são os aditivos mais utilizados na indústria de conservas vegetais. Diante disso, este estudo buscou avaliar a influência dos aditivos químicos utilizados em conjunto na formulação da calda de cobertura de conservas de cebola branca, utilizando-se cebolas de um mesmo lote. Além destes aditivos, também testou-se a adição de ácido cítrico a formulações das caldas. Partiu-se de uma salmoura base para todos os testes, contendo vinagre, água, cloreto de sódio e açúcar cristal, analisando-se os parâmetros físico-químicos de pH, acidez total, teor de sal e sólidos totais. Nos testes de conservas de cebola, avaliou-se aos 20 e aos 240 dias de armazenamento os parâmetros físico-químicos de pH, acidez total, teor de sal, sólidos totais e física de vácuo. As formulações contendo os aditivos químicos sorbato de potássio, benzoato de sódio e metabissulfito de sódio não apresentaram formação de precipitados atribuídos à presença de fungos. No entanto, ocorreu escurecimento da salmoura durante o período de armazenamento. As formulações sem adição de metabissulfito de sódio apresentaram rápido escurecimento dos bulbos e calda durante o armazenamento. A adição de ácido cítrico (0,5% m/v), manteve o pH da salmoura mais baixo, mostrando-se eficaz o impedimento do escurecimento da calda, formação de manchas e precipitados. Esse ácido orgânico pode ser alternativa aos aditivos como o benzoato de sódio ou sorbato de potássio na formulação das caldas de cobertura

ATMOSFERA MODIFICADA E TEMPERATURA DE ARMAZENAMENTO PARA PÓS-COLHEITA DE AMEIXA DA MATA

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da atmosfera modificada e temperatura de armazenamento na conservação pós-colheita de ameixa da mata. Foram conduzidos dois experimentos, ambos em delineamento inteiramente casualizado ambos com 4 repetições de 20 frutos. O primeiro em fatorial 2x3 (embalagem x temperatura), onde os frutos foram acondicionados em bandejas de poliestireno revestidas ou não por filme de PVC, em condições de temperatura ambiente, 5±1 °C ou 15±1 °C. No segundo, em fatorial 2x3x2 (pedúnculo x embalagem x temperatura). Para o fator pedúnculo foi considerada a presença ou ausência nos frutos, sendo estes acondicionados em bandejas de poliestireno com e sem filme de PVC ou com biofilme (fécula de mandioca) e armazenados em duas temperaturas (ambiente e 5±1 °C). Foram avaliados a perda de massa de matéria fresca, murchamento, podridão, teor de sólidos solúveis, açúcares totais e redutores, teores de antocianinas e flavonoides. O uso de atmosfera modificada associada a temperatura de 5 ºC, permitiu armazenar frutos de ameixeira da mata por período de até 34 dias. Sugere-se manter o pedúnculo aderido ao fruto, pois estes mantiveram a qualidade e a aparência por mais tempo, além de conservarem as características bioquímicas dos mesmos

CARACTERIZAÇÃO FÍSICO-QUÍMICA E DE COMPOSTOS BIOATIVOS DE FOLHAS DE BATATA-DOCE COMUM E BIOFORTIFICADA

The present study aimed to compare the physical-chemical composition of bioactive compounds and the antioxidant potential present in the leaves of common and biofortified sweet potatoes (cultivar Beauregard). The average results of the physical-chemical analysis indicated expressive percentages of proteins in the leaves of common (28.98%) and biofortified sweet potato (28.41%) and, the concentrations of total carotenoids, flavonoids, anthocyanins, phenolic compounds, as well as antioxidant activity, higher mean levels were observed in the Beauregard cultivar and a significant difference (p <0.05) between the cultivars. Considering the composition of the sweet potato leaves of the two varieties evaluated in this research, it is possible to highlight the nutritional importance and relevance in bioactive components of this part of the plant, usually discarded when compared to the roots that are commonly consumed, and also evince the possibility of its introduction into human food.O presente estudo teve como objetivo comparar a composição físico-química, de compostos bioativos e o potencial antioxidante presente nas folhas de batata-doce comum (cultivar Rubissol) e biofortificada (cultivar Beauregard). Os resultados médios das análises físico-químicas indicaram percentuais expressivos de proteínas nas folhas da batata-doce comum (28,98%) e da batata-doce biofortificada (28,41%) e, em relação às concentrações de carotenoides totais, flavonoides, antocianinas, compostos fenólicos, além da atividade antioxidante, foram observados níveis médios mais elevados na cultivar Beauregard e diferença significativa (p<0,05) entre as cultivares. Considerando a composição das folhas de batata-doce das duas variedades avaliadas nesta pesquisa, é possível destacar a importância nutricional e relevância nos componentes bioativos desta parte da planta, geralmente descartada quando comparada às raízes que são comumente consumidas

Effect of NaCl replacement on physicochemical and sensory properties of the traditional cured coppa

This study aimed to reduce sodium content in pork coppa without affecting consumer acceptance. NaCl reduction, partial replacement with KCl, and reduction in salting process time were evaluated. Six treatments were performed: Standard - 100% NaCl with a 2-day salting process and a 5-day re-salting process; T1 - a mixture of 70% NaCl/30% KCl; T2, T3, T4 - mixtures of 85% NaCl/15% KCl; T5 - 100% NaCl. T1 to T5 applied a 2-day salting process and a 2-day re-salting process. All treatments complied with Brazilian sodium guidelines. No statistically significant difference in consumer acceptance was observed. A reduction of 4 days in salting and re-salting processes maintained sensory characteristics and reduced sodium content by 50%. Even with reduced salt content, no changes in physicochemical parameters or effects on product preservation and microbiological quality were observed. NaCl reduction and replacement up to 30% KCl did not affect coppa characteristics or acceptance

UVAS: FORMAS DE USO, CONSUMO E ATIVIDADES BIOLÓGICAS - UMA REVISÃO

A vitivinicultura é uma atividade economicamente importante no mundo globalizado, gerando emprego, renda e investimentos. As uvas são consideradas como uma das maiores fontes de compostos fenólicos, contendo ainda compostos flavonoides e não-flavonoides na sua composição, a se destacar o resveratrol. O consumo das uvas pode ser in natura, ou na forma de derivados como vinhos, sucos, geleias, dentre outros. Entretanto, o processamento das uvas gera vários resíduos, como o engaço, a borra e em maior quantidade o bagaço, que é formado principalmente de cascas e sementes. Da mesma forma que existem compostos benéficos na polpa da fruta, muitos antioxidantes e outros compostos ainda permanecem nestes resíduos. Assim, dentre as inúmeras propriedades medicinais das uvas e dos extratos produzidos desta ou de seus resíduos, pode-se citar: auxiliar no tratamento de hemorragias, dor de garganta, diarreia, cólera, varíola, náuseas, infecções nos olhos e pele, doenças cardiovasculares, hipertensão, auxílio do tratamento da doença de Alzheimer e Parkinson, dentre outras. Além disso, apresentam atividade citotóxica contra células cancerígenas, efeito quimiopreventivo, proteção contra os radicais livres, a peroxidação lipídica e a danos no ácido desoxirribonucleico, além de atividade antimutagênica...

Aplicação de mucilagem de chia (salvia hispânica, l.) Em processamento de biscoitos / Chia mucilage application (salvia hispanica, l.) In biscuit processing

A mucilagem de chia é um hidrocolóide e têm sido vistos como um ingrediente com potencial para utilização no segmento de alimentos. O presente estudo teve como objetivo avaliar seu potencial tecnológico em biscoitos salgados isentos de glúten. Para a extração da mucilagem foi aplicado o método de extração aquosa, na concentração de 1:40 semente: água (m/m) durante 90 minutos, posterior filtração simples e secagem por 20 horas a 50ºC. Foram produzidas três formulações de biscoito, um padrão (FP), uma adicionada de mucilagem (FM) e outra adicionada de goma xantana (FX), sendo mantido fixos os outros ingredientes na formulação. As analises de composição centesimal dos biscoitos indicaram que não houve diferença significativa entre a FP e a FM. Ao aplicar a mucilagem no biscoito salgado produzido com farinhas isentas de glúten, os efeitos obtidos em relação a textura foram em menor escala comparados aos da goma xantana

Produtividade e qualidade de uva, cv. Isabel, em dois sistemas de produção

Estudou-se a produtividade e a qualidade da uva, cv. Isabel, produzida em dois sistemas de produção, convencional e alternativo. O sistema convencional corresponde àquele empregado pela maioria dos produtores dessa cultivar, que consiste no controle de plantas concorrentes com o emprego de capinas e/ou herbicidas e no controle de doenças com fungicidas sintéticos orgânicos e não orgânicos. O sistema alternativo corresponde àquele onde se manteve a cobertura do solo e se inseriu a aveia como complemento, e o controle de doenças foi feito apenas com o emprego de calda bordalesa. Essas práticas foram realizadas desde 1998 e, nas safras 2001-2002 e 2002-2003, avaliaram-se a produtividade e a qualidade da uva produzida nos dois sistemas. Pelos resultados, observou-se que a produtividade e a qualidade da uva são mais afetadas pelas condições climáticas de safra do que pelo sistema de produção, indicando que o sistema de produção alternativo, onde se empregou menor número de pulverizações, não se usou herbicida, nem fungicida orgânico sintético, tem elevado potencial de adoção para essa cultivar