Transient Expression of Hemagglutinin Antigen from Low Pathogenic Avian Influenza A (H7N7) in Nicotiana benthamiana

The influenza A virus is of global concern for the poultry industry, especially the H5 and H7 subtypes as they have the potential to become highly pathogenic for poultry. In this study, the hemagglutinin (HA) of a low pathogenic avian influenza virus of the H7N7 subtype isolated from a Swedish mallard Anas platyrhynchos was sequenced, characterized and transiently expressed in Nicotiana benthamiana. Recently, plant expression systems have gained interest as an alternative for the production of vaccine antigens. To examine the possibility of expressing the HA protein in N. benthamiana, a cDNA fragment encoding the HA gene was synthesized de novo, modified with a Kozak sequence, a PR1a signal peptide, a C-terminal hexahistidine (6×His) tag, and an endoplasmic retention signal (SEKDEL). The construct was cloned into a Cowpea mosaic virus (CPMV)-based vector (pEAQ-HT) and the resulting pEAQ-HT-HA plasmid, along with a vector (pJL3:p19) containing the viral gene-silencing suppressor p19 from Tomato bushy stunt virus, was agro-infiltrated into N. benthamiana. The highest gene expression of recombinant plant-produced, uncleaved HA (rHA0), as measured by quantitative real-time PCR was detected at 6 days post infiltration (dpi). Guided by the gene expression profile, rHA0 protein was extracted at 6 dpi and subsequently purified utilizing the 6×His tag and immobilized metal ion adsorption chromatography. The yield was 0.2 g purified protein per kg fresh weight of leaves. Further molecular characterizations showed that the purified rHA0 protein was N-glycosylated and its identity confirmed by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. In addition, the purified rHA0 exhibited hemagglutination and hemagglutination inhibition activity indicating that the rHA0 shares structural and functional properties with native HA protein of H7 influenza virus. Our results indicate that rHA0 maintained its native antigenicity and specificity, providing a good source of vaccine antigen to induce immune response in poultry species

Kvinnors problem efter en hjärtinfarkt samt deras behov av stöd från sjukvård och sociala nätverk - En litteraturstudie

Sammanfattning Syfte: Syftet med föreliggande litteraturstudie var att beskriva behov av stöd hos kvinnor som drabbats av hjärtinfarkt samt deras upplevelser av problem i det dagliga livet. Ett ytterligare syfte är att bedöma kvaliteten på studiernas urvalsmetod. Metod: Författarna gjorde en beskrivande litteraturstudie som är baserad på elva vetenskapliga artiklar som söktes i databaserna Pubmed och Cinahl. Artiklarnas urvalsmetod granskades ur en kvalitetsaspekt. Huvudresultat: Studier visade att det var vanligt att kvinnor upplevde oro, osäkerhet och rädsla inför livet efter en hjärtinfarkt. Rädslan att råka ut för en ny hjärtinfarkt visade sig vara en stark känsla hos många. Dessa känslor upplevdes som stora problem för kvinnorna. Den fysiska energin efter sjukdomen var tydligt försämrad och begränsade kvinnorna vardagligen.Något tydligt framträdande var hur viktigt det är att få stöd efter en hjärtinfarkt. Inte bara stödet från sin familj och sina vänner i sitt dagliga liv utan också det professionella stödet från sjukvården. Studien belyser också att rehabilitering var ett gott stöd för dessa kvinnor. Med den hjälpen upplevde kvinnorna sig själva säkrare. Slutsats: Att insjukna i hjärtinfarkt kan för de allra flesta kvinnor vara svårt och medföra en stor livsförändring. Stora problem i nuvarande forskning kan ses i form av att många kvinnor inte får den information eller det stöd som krävs för att lyckas. Stödet från familj och närstående är minst lika viktigt som stödet från sjukvården. Hjärtinfarktdrabbade kvinnor efterfrågar adekvat information om sin hjärtinfarkt, samt att deras anhöriga får den rätta informationen för att de tillsammans ska kunna fullfölja förändringarna som bör göras för att livet ska bli lättare att leva. Detta medför att mer forskning behövs för att sjuksköterskor ska kunna tillgodose kvinnornas behov. Nyckelord: Hjärtinfarkt, kvinnor, socialt stöd, dagligt liv och patienters upplevelse

Preschool teachers use of digital tools : A qualitative study on how and why preschool teachers use digital tools to develop children's language

Syftet med studien är att öka kunskapen om förskollärares perspektiv på sitt arbete med digitala verktyg för att stimulera barns språkutveckling. Studien är kvalitativ och insamlingen av den empiriska datan genomfördes genom tre semistrukturerade intervjuer med tre förskollärare i varje grupp. Respondenterna kom från fyra olika kommuner för att öka studiens tillförlitlighet. Resultatet som den insamlade datan gav, analyserades utifrån ett sociokulturellt och utvecklingspedagogiskt ramverk samt tidigare forskning inom området. Följande frågeställningar har använts för att kunna uppfylla studiens syfte; Hur använder förskollärare digitalisering för att utveckla barnens språk?, Vilka argument har förskollärare för att arbeta med digitala verktyg i syfte att stimulera barns språkutveckling?. I resultatet framkommer vilka metoder förskollärarna använder sig av för att stimulera barns språkutveckling med hjälp av digitala verktyg. Vidare synliggörs förskollärarnas argument för varför de använder sig av digitala verktyg i verksamheten. I resultatet framgår att det finns en stor variation av digitala verktyg att tillgå i förskolanmen de som är mest förekommande är iPads och projektorer. Förskollärare i svenska förskolor är positivt inställda till användning av digitala verktyg då de är ett stöd för att nå målen samt ger möjlighet att erbjuda ett varierat innehåll i verksamhetens undervisning. Resultatet visar även att det inte spelar någon roll vilket digitalt verktyg barnen använder då det är det sociala samspelet, kommunikation och interaktion runt verktyget som utmanar och stimulerar barnens språkutveckling

Preschool teachers use of digital tools : A qualitative study on how and why preschool teachers use digital tools to develop children's language

Syftet med studien är att öka kunskapen om förskollärares perspektiv på sitt arbete med digitala verktyg för att stimulera barns språkutveckling. Studien är kvalitativ och insamlingen av den empiriska datan genomfördes genom tre semistrukturerade intervjuer med tre förskollärare i varje grupp. Respondenterna kom från fyra olika kommuner för att öka studiens tillförlitlighet. Resultatet som den insamlade datan gav, analyserades utifrån ett sociokulturellt och utvecklingspedagogiskt ramverk samt tidigare forskning inom området. Följande frågeställningar har använts för att kunna uppfylla studiens syfte; Hur använder förskollärare digitalisering för att utveckla barnens språk?, Vilka argument har förskollärare för att arbeta med digitala verktyg i syfte att stimulera barns språkutveckling?. I resultatet framkommer vilka metoder förskollärarna använder sig av för att stimulera barns språkutveckling med hjälp av digitala verktyg. Vidare synliggörs förskollärarnas argument för varför de använder sig av digitala verktyg i verksamheten. I resultatet framgår att det finns en stor variation av digitala verktyg att tillgå i förskolanmen de som är mest förekommande är iPads och projektorer. Förskollärare i svenska förskolor är positivt inställda till användning av digitala verktyg då de är ett stöd för att nå målen samt ger möjlighet att erbjuda ett varierat innehåll i verksamhetens undervisning. Resultatet visar även att det inte spelar någon roll vilket digitalt verktyg barnen använder då det är det sociala samspelet, kommunikation och interaktion runt verktyget som utmanar och stimulerar barnens språkutveckling

Fusion of farnesyldiphosphate synthase and epi-aristolochene synthase, a sesquiterpene cyclase involved in capsidiol biosynthesis in Nicotiana tabacum.

A clone encoding farnesyl diphosphate synthase (FPPS) was obtained by PCR from a cDNA library made from young leaves of Artemisia annua. A cDNA clone encoding the tobacco epi-aristolochene synthase (eAS) was kindly supplied by J. Chappell (University of Kentucky, Lexington, KY, USA). Two fusions were constructed, i.e. FPPS/eAS and eAS/FPPS. The stop codon of the N-terminal enzyme was removed and replaced by a short peptide (Gly-Ser-Gly) to introduce a linker between the two ORFs. These two fusions and the two single cDNA clones were separately introduced into a bacterial expression vector (pET32). Escherichia coli was transformed with the expression vectors and enzymatically active soluble proteins were obtained after induction with isopropyl thio-beta-d-thiogalactoside. The recombinant enzymes were purified using immobilized metal affinity chromatography on Co2+ columns. The fusion enzymes produced epi-aristolochene from isopentenyl diphosphate through a coupled reaction. The Km values of FPPS and eAS for isopentenyl diphosphate and farnesyl diphosphate, respectively, were essentially the same for the single and fused enzymes. The bifunctional enzymes showed a more efficient conversion of isopentenyl diphosphate to epi-aristolochene than the corresponding amount of single enzymes

Tuning the binding interface between Machupo virus glycoprotein and human transferrin receptor

Machupo virus, known to cause hemorrhagic fevers, enters human cells via binding with its envelope glycoprotein to transferrin receptor 1 (TfR). Similarly, the receptor interactions have been explored in biotechnological applications as a molecular system to ferry therapeutics across the cellular membranes and through the impenetrable blood-brain barrier that effectively blocks any such delivery into the brain. Study of the experimental structure of Machupo virus glycoprotein 1 (MGP1) in complex with TfR and glycoprotein sequence homology has identified some residues at the interface that influence binding. There are, however, no studies that have attempted to optimize the binding potential between MGP1 and TfR. In pursuits for finding therapeutic solutions for the New World arenaviruses, and to gain a greater understanding of MGP1 interactions with TfR, it is crucial to understand the structure-sequence relationship driving the interface formation. By displaying MGP1 on yeast surface we have examined the contributions of individual residues to the binding of solubilized ectodomain of TfR. We identified MGP1 binding hot spot residues, assessed the importance of posttranslational N-glycan modifications, and used a selection with random mutagenesis for affinity maturation. We show that the optimized MGP1 variants can bind more strongly to TfR than the native MGP1, and there is an MGP1 sequence that retains binding in the absence of glycosylation, but with the addition of further amino acid substitutions. The engineered variants can be used to probe cellular internalization or the blood-brain barrier crossing to achieve greater understanding of TfR mediated internalization

Studies on the Expression of Sesquiterpene Synthases Using Promoter-β-Glucuronidase Fusions in Transgenic <i>Artemisia annua</i> L

<div><p>In order to better understand the influence of sesquiterpene synthases on artemisinin yield in <i>Artemisia annua</i>, the expression of some sesquiterpene synthases has been studied using transgenic plants expressing promoter-GUS fusions. The cloned promoter sequences were 923, 1182 and 1510 bp for β-caryophyllene (CPS), <i>epi</i>-cedrol (ECS) and β-farnesene (FS) synthase, respectively. Prediction of <i>cis</i>-acting regulatory elements showed that the promoters are involved in complex regulation of expression. Transgenic <i>A. annua</i> plants carrying promoter-GUS fusions were studied to elucidate the expression pattern of the three sesquiterpene synthases and compared to the previously studied promoter of amorpha-4,11-diene synthase (ADS), a key enzyme of artemisinin biosynthesis. The CPS and ECS promoters were active in T-shaped trichomes of leaves and stems, basal bracts of flower buds and also in some florets cells but not in glandular secretory trichome while FS promoter activity was only observed in leaf cells and trichomes of transgenic shoots. ADS, CPS, ECS and FS transcripts were induced by wounding in a time depended manner. The four sesquiterpene synthases may be involved in responsiveness of <i>A. annua</i> to herbivory. Methyl jasmonate treatment triggered activation of the promoters of all four sesquiterpene synthases in a time depended manner. Southern blot result showed that the <i>GUS</i> gene was inserted into genomic DNA of transgenic lines as a single copy or two copies. The relative amounts of CPS and ECS as well as germacrene A synthase (GAS) transcripts are much lower than that of ADS transcript. Consequently, down-regulation of the expression of the <i>CPS</i>, <i>ECS</i> or <i>GAS</i> gene may not improve artemsinin yield. However, blocking the expression of <i>FS</i> may have effects on artemisinin production.</p></div