Cultura Primária de Explant de Hiperplasia Prostática Benigna

A Hiperplasia Prostática Benigna (HPB) é um crescimento patológico e não maligno da próstata causada principalmente pela proliferação exacerbada das células epiteliais e, principalmente, estromais. Essa neoplasia benigna acomete a maioria dos homens de idade avançada, sendo a condição crônica mais prevalente entre a população masculina. Como mostrado em estudos, o desenvolvimento prostático é intimamente dependente da interação entre as variantes celulares estromais e epiteliais presentes nesta glândula. Entretanto, a cocultura de ambos os tipos celulares é de difícil estabelecimento, uma vez que os dois tipos celulares têm diferentes características de adesão à placa de cultivo celular

Identificação da presença de isoformas do receptor de androgênios (AR) em tumores da próstata e a sua possível associação com a agressividade do tumor

O câncer de próstata (CaP) e a hiperplasia prostática benigna (HPB) são as doenças da próstata mais comuns, e ambas são alterações do controle do crescimento prostático, compartilhando uma prevalência aumentada com o avanço da idade. A deprivação androgênica é uma das opções de tratamento mais comuns para o CaP e, embora resulte em um período de regressão clínica, muitos pacientes acabam progredindo para uma condição refratária à terapia hormonal, conhecida como CaP independente de androgênios (resistente à castração). Alterações moleculares no receptor de androgênios (AR) têm sido associadas à progressão do CaP. Neste estudo, buscamos identificar a presença de isoformas do AR derivadas de splicing alternativo tanto em tecido benigno de HPB (n = 30) quanto em tecido maligno de CaP (n = 27). As isoformas estudadas foram o AR3, AR4, AR5 e AR6. A expressão gênica do AR não apresentou diferença entre os tecidos estudados (P = 0,160). O AR4 apresentou maior expressão nos pacientes com CaP (P = 0,029) e, dentre estes, os níveis de expressão foram maiores nos pacientes que apresentaram recidiva bioquímica (P = 0,049). Dada a similaridade entre as moléculas de cDNA das isoformas AR3, AR5 e AR6, diferentes estratégias de detecção do mRNA foram utilizadas. A amplificação conjunta do AR3, AR5 e AR6 (AR3/5/6) foi maior no grupo CaP (P = 0,021), enquanto que a expressão das isoformas AR5 e AR6 (AR5/6) não foi diferente entre os grupos (P = 0,184). Com o objetivo de inferir um valor para a expressão do AR3, também foi analisada a razão (AR3/5/6) / (AR5/6), que apresentou maiores níveis de expressão no grupo CaP em relação ao grupo HPB (P < 0,0001). Nas amostras de CaP, foi encontrada uma correlação positiva entre o escore de Gleason e os níveis de mRNA das isoformas AR5/6 (0,524; P = 0,006) e uma correlação negativa entre o escore de Gleason e a razão (AR3/5/6) / (AR5/6) (-0,429; P = 0,029). A expressão gênica do AR4 correlacionou-se positivamente com a expressão gênica das isoformas AR3/5/6 e AR5/6 (0,646; P < 0,001 e 0,518; P = 0,006). Nas amostras de HPB, foi encontrada uma correlação positiva entre a expressão gênica do AR e os níveis plasmáticos de PSA pré-operatório (0,479; P = 0,013). Também foi encontrada uma correlação positiva entre a expressão gênica do AR4 e a expressão gênica do AR3/5/6 (0,818; P < 0,001), do AR5/6 (0,387; P = 0,035) e a razão (AR3/5/6) / (AR5/6) (0,394; P = 0,031) nesse grupo. Embora em níveis diferentes, todas as isoformas estudadas foram expressas tanto em tecido benigno (HPB) quanto em tecido maligno (CaP). Desta forma, estes resultados permitem assumir que estas isoformas constitutivamente ativas estejam envolvidas no desenvolvimento destas doenças prostáticas. E, ainda, a expressão do AR4 pode ser associada com a recidiva do CaP após o tratamento cirúrgico.Prostate cancer (PCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH) are the most common prostatic diseases and both are disorders in prostatic growth, whose prevalence increase with age. The androgen deprivation is one of the most common therapies for PCa, and, although there is a period of clinical remission, many patients occasionally progress to a condition refractory to hormone therapy, known as androgen-independent CaP (castration-resistant). Molecular changes in the androgen receptor (AR) have been associated with progression of PCa. This study aimed at identifying the presence of AR isoforms derived from alternative splicing both in benign tissue of BPH (n = 30) and in malignant tissue of PCa (n = 27). The isoforms studied were AR3, AR4, AR5 and AR6. AR gene expression did not differ between the studied groups (P = 0.160). AR4 showed higher expression in PCa patients (P = 0.029) and, among these, the expression levels were higher in patients with biochemical recurrence (P = 0.049). Given the similarity between the molecules of cDNA from AR3, AR5 and AR6, their detection was performed using a different strategy for mRNA amplification. The expression of AR3, AR5 and AR6 (AR3/5/6), together, was higher in PCa group (P = 0.021), while the expression of only AR5 and AR6 (AR5/6) was not different between the groups (P = 0.184). Aiming at inferring a value for the expression of AR3, it was also analyzed the ratio (AR3/5/6) / (AR5/6), which showed higher expression levels in PCa group compared to BPH group (P <0.001). In PCa samples, we found a positive correlation between the Gleason score and the levels of mRNA isoforms AR5/6 (0,524; P = 0,006), and a negative correlation between the Gleason score and the ratio (AR3/5/6) / (AR5/6) (-0.429, P = 0.029). AR4 gene expression was positively correlated with the expression of gene isoforms AR3/5/6 and AR5/6 (0.646, P < 0.001 and 0.518, P = 0.006) in this group. In the BPH group, we found a positive correlation between the gene expression of AR and plasmatic levels of preoperative PSA (0.479, P = 0.013). We also found a positive correlation between AR4 and AR3/5/6 gene expression (0.818, P = 0.0001), AR5/6 (0.387, P = 0.035) and the reason (AR3/5/6) / (AR5/6) (0.394, P = 0.031) in this group. Although at different levels, all investigated isoforms were expressed both in benign tissue (BPH) and in malignant tissue (PCa). These results support the assumption that these constitutively active isoforms of AR are involved in the development of prostatic diseases. Furthermore, AR4 expression may be associated with recurrence after radical prostatectomy

Identificação da presença de isoformas do receptor de androgênios (AR) em tumores da próstata e a sua possível associação com a agressividade do tumor

O câncer de próstata (CaP) e a hiperplasia prostática benigna (HPB) são as doenças da próstata mais comuns, e ambas são alterações do controle do crescimento prostático, compartilhando uma prevalência aumentada com o avanço da idade. A deprivação androgênica é uma das opções de tratamento mais comuns para o CaP e, embora resulte em um período de regressão clínica, muitos pacientes acabam progredindo para uma condição refratária à terapia hormonal, conhecida como CaP independente de androgênios (resistente à castração). Alterações moleculares no receptor de androgênios (AR) têm sido associadas à progressão do CaP. Neste estudo, buscamos identificar a presença de isoformas do AR derivadas de splicing alternativo tanto em tecido benigno de HPB (n = 30) quanto em tecido maligno de CaP (n = 27). As isoformas estudadas foram o AR3, AR4, AR5 e AR6. A expressão gênica do AR não apresentou diferença entre os tecidos estudados (P = 0,160). O AR4 apresentou maior expressão nos pacientes com CaP (P = 0,029) e, dentre estes, os níveis de expressão foram maiores nos pacientes que apresentaram recidiva bioquímica (P = 0,049). Dada a similaridade entre as moléculas de cDNA das isoformas AR3, AR5 e AR6, diferentes estratégias de detecção do mRNA foram utilizadas. A amplificação conjunta do AR3, AR5 e AR6 (AR3/5/6) foi maior no grupo CaP (P = 0,021), enquanto que a expressão das isoformas AR5 e AR6 (AR5/6) não foi diferente entre os grupos (P = 0,184). Com o objetivo de inferir um valor para a expressão do AR3, também foi analisada a razão (AR3/5/6) / (AR5/6), que apresentou maiores níveis de expressão no grupo CaP em relação ao grupo HPB (P < 0,0001). Nas amostras de CaP, foi encontrada uma correlação positiva entre o escore de Gleason e os níveis de mRNA das isoformas AR5/6 (0,524; P = 0,006) e uma correlação negativa entre o escore de Gleason e a razão (AR3/5/6) / (AR5/6) (-0,429; P = 0,029). A expressão gênica do AR4 correlacionou-se positivamente com a expressão gênica das isoformas AR3/5/6 e AR5/6 (0,646; P < 0,001 e 0,518; P = 0,006). Nas amostras de HPB, foi encontrada uma correlação positiva entre a expressão gênica do AR e os níveis plasmáticos de PSA pré-operatório (0,479; P = 0,013). Também foi encontrada uma correlação positiva entre a expressão gênica do AR4 e a expressão gênica do AR3/5/6 (0,818; P < 0,001), do AR5/6 (0,387; P = 0,035) e a razão (AR3/5/6) / (AR5/6) (0,394; P = 0,031) nesse grupo. Embora em níveis diferentes, todas as isoformas estudadas foram expressas tanto em tecido benigno (HPB) quanto em tecido maligno (CaP). Desta forma, estes resultados permitem assumir que estas isoformas constitutivamente ativas estejam envolvidas no desenvolvimento destas doenças prostáticas. E, ainda, a expressão do AR4 pode ser associada com a recidiva do CaP após o tratamento cirúrgico.Prostate cancer (PCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH) are the most common prostatic diseases and both are disorders in prostatic growth, whose prevalence increase with age. The androgen deprivation is one of the most common therapies for PCa, and, although there is a period of clinical remission, many patients occasionally progress to a condition refractory to hormone therapy, known as androgen-independent CaP (castration-resistant). Molecular changes in the androgen receptor (AR) have been associated with progression of PCa. This study aimed at identifying the presence of AR isoforms derived from alternative splicing both in benign tissue of BPH (n = 30) and in malignant tissue of PCa (n = 27). The isoforms studied were AR3, AR4, AR5 and AR6. AR gene expression did not differ between the studied groups (P = 0.160). AR4 showed higher expression in PCa patients (P = 0.029) and, among these, the expression levels were higher in patients with biochemical recurrence (P = 0.049). Given the similarity between the molecules of cDNA from AR3, AR5 and AR6, their detection was performed using a different strategy for mRNA amplification. The expression of AR3, AR5 and AR6 (AR3/5/6), together, was higher in PCa group (P = 0.021), while the expression of only AR5 and AR6 (AR5/6) was not different between the groups (P = 0.184). Aiming at inferring a value for the expression of AR3, it was also analyzed the ratio (AR3/5/6) / (AR5/6), which showed higher expression levels in PCa group compared to BPH group (P <0.001). In PCa samples, we found a positive correlation between the Gleason score and the levels of mRNA isoforms AR5/6 (0,524; P = 0,006), and a negative correlation between the Gleason score and the ratio (AR3/5/6) / (AR5/6) (-0.429, P = 0.029). AR4 gene expression was positively correlated with the expression of gene isoforms AR3/5/6 and AR5/6 (0.646, P < 0.001 and 0.518, P = 0.006) in this group. In the BPH group, we found a positive correlation between the gene expression of AR and plasmatic levels of preoperative PSA (0.479, P = 0.013). We also found a positive correlation between AR4 and AR3/5/6 gene expression (0.818, P = 0.0001), AR5/6 (0.387, P = 0.035) and the reason (AR3/5/6) / (AR5/6) (0.394, P = 0.031) in this group. Although at different levels, all investigated isoforms were expressed both in benign tissue (BPH) and in malignant tissue (PCa). These results support the assumption that these constitutively active isoforms of AR are involved in the development of prostatic diseases. Furthermore, AR4 expression may be associated with recurrence after radical prostatectomy

Análise da expressão gênica e proteica de isoformas do receptor de androgênios e sua modulação em hiperplasia prostática benigna e câncer de próstata

As doenças da próstata atingem cerca de 80% dos homens com idade superior a 50 anos, o que equivale a 14 milhões de brasileiros. Dentre elas, estão os tumores da próstata, classificados em hiperplasia prostática benigna (HPB) e câncer de próstata (CaP), que são alterações do controle de crescimento das células prostáticas. Diversas alterações celulares têm sido propostas para explicar essas alterações de crescimento. Dentre estas, a expressão de variantes do receptor de androgênios (AR-Vs) parece ter papel fundamental. Entretanto, o exato mecanismo pelo qual as AR-Vs participam da fisiopatologia da HBP e do CaP hormôniosensível necessita ser melhor elucidado. O objetivo do presente trabalho foi identificar a presença das AR-Vs no tecido benigno de HPB e no carcinoma hormônio-sensível e avaliar a possível associação com a agressividade tumoral e a recorrência bioquímica do câncer. Além disso, o presente estudo também teve como objetivo o estudo da modulação androgênica das AR-Vs em cultura celular, bem como avaliar os níveis intrateciduais e circulantes de esteroides em amostras de pacientes com CaP e HPB. Os níveis de expressão do AR full-lenght (AR-FL) e das AR-Vs (AR-V1, AR-V4 e AR-V7) foram avaliados por RT-qPCR. A expressão proteica do AR-FL (AR-CTD e AR-NTD) e do AR-V7 foi avaliada pela técnica de imunohistoquímica, utilizando o escore H (H-Score) para quantificação. Todos as AR-Vs investigadas foram expressas nos tecidos de CaP e HPB. Os níveis de mRNA do AR-FL foram similares em ambos grupos. A expressão do mRNA do AR-V4 apresentou maiores níveis no grupo HPB, enquanto que os níveis de mRNA de AR-V1 e AR-V7 foram maiores no grupo CaP. A expressão proteica de AR-V7 apresentou H-Score similar nos grupos avaliados, enquanto que AR-CTD e AR-NTD foram maiores no núcleo das células epiteliais do grupo HPB. A partir das dosagens de esteroides, foram encontrados menores níveis intrateciduais de testosterona, 4- androstenediona e progesterona nas amostras de CaP quando comparadas a amostras de HPB. A partir do cultivo celular foi possível observar o efeito da modulação androgênica das AR-Vs, onde foi demonstrado que altos níveis de androgênios modulam negativamente a expressão do AR-FL e das AR-Vs. Ainda que as AR-Vs não apresentem o dominio de ligação para a DHT, elas apresentam importantes alterações dinâmicas sob tratamento com este hormônio. Também foi observado que o tratamento com flutamida isolada ou associada à baixa dose DHT estimula a proliferação das células prostáticas. Os resultados apresentados na presente tese suportam a hipótese de que há envolvimento destas isoformas constitutivamente ativas na fisiopatologia do CaP hormônio-sensível e também da HPB. Alem disso, estes resultados fornecem evidências de a resposta à modulação androgênica é diferente entre as AR-Vs. Juntos, estes achados colaboram para o entendimento da tumorigênese prostática.Prostatic diseases account for about 80% of men over the age of 50, which is equivalent to 14 million Brazilians. Among them are prostate tumors, classified as benign prostatic hyperplasia (BPH) and prostate cancer (PCa), which are changes in the growth control of prostatic cells. Several cellular alterations have been proposed to explain these alterations of prostate growth. Among these, the expression of variants of the androgen receptor (AR-Vs) seems to play a fundamental role. However, the exact mechanism by which AR-Vs participate in the pathophysiology of BPH and hormone-naïve PCa needs to be better elucidated. The aim of the present study was to identify the presence of AR-Vs in BPH and hormone-naïve carcinoma and to evaluate the possible association with tumor aggressiveness and biochemical recurrence of PCa. In addition, the present work also aimed to study the androgenic modulation of AR-Vs in cell culture as well as to evaluate the intraprostatic and circulating levels of steroids in samples of patients with PCa and BPH. The expression levels of full-lenght AR (AR-FL) and AR-Vs (ARV1, AR-V4 and AR-V7) were assessed by RT-qPCR. Protein expression of AR-FL (AR-CTD and AR-NTD) and AR-V7 was assessed by the immunohistochemistry using the H-score for quantification. All investigated AR-Vs were expressed in PCa and BPH tissues. AR-FL mRNA levels were similar in both groups. Expression of AR-V4 mRNA showed higher levels in the BPH group, whereas AR-V1 and AR-V7 mRNA levels were higher in the PCa group. Protein expression of AR-V7 showed similar H-Score, whereas AR-CTD and AR-NTD were higher in the epithelial cell nucleus of BPH. Regarding the steroid dosages, were observed lower intraprostatic levels of testosterone, 4-androstenedione and progesterone in the PCa samples when compared to BPH samples. In cell culture experiments, it was possible to observe the effect of the androgenic modulation on AR-Vs, where high levels of androgens negatively modulated AR-FL and AR-V expression. Although AR-Vs do not exhibit the binding domain for DHT, they showed significant dynamic changes under treatment with this hormone. It has also been observed that treatment with flutamide alone or associated with low dose DHT stimulates the proliferation of prostatic cells. The results presented in this thesis support the hypothesis that these constitutively active isoforms are involved in the pathophysiology of hormone-naïve CaP and also of BPH. In addition, these results provide evidence that the response to androgen modulation is different between AR-Vs. Together, these findings contribute to the understanding of prostatic tumorigenesis

Androgen receptor isoforms expression in benign prostatic hyperplasia and primary prostate cancer

The role of molecular changes in the androgen receptor (AR) as AR variants (AR-Vs) is not clear in the pathophysiology of benign prostatic hyperplasia (BPH) and hormone-naïve PCa. The aim of the current work was to identify the presence of AR isoforms in benign tissue and primary PCa, and to evaluate the possible association with tumor aggressiveness and biochemical recurrence in primary PCa. The mRNA levels of full length AR (AR-FL) and AR-Vs (AR-V1, AR-V4 and AR-V7) were measured using RT-qPCR. The protein expression of AR-FL (AR-CTD and AR-NTD) and AR-V7 were evaluated by the H-Score in immunohistochemistry (IHC). All investigated mRNA targets were expressed both in BPH and PCa. AR-FL mRNA levels were similar in both groups. AR-V4 mRNA expression showed higher levels in BPH, and AR-V1 and AR-V7 mRNA expression were higher in PCa. The AR-V7 protein showed a similar H-Score in both groups, while AR-CTD and AR-NTD were higher in nuclei of epithelial cells from BPH. These results support the assumption that these constitutively active isoforms of AR are involved in the pathophysiology of primary PCa and BPH. The role of AR-Vs and their possible modulation by steroid tissue levels in distinct types of prostate tumors needs to be elucidated to help guide the best clinical management of these diseases

Progesterone Upregulates Gene Expression in Normal Human Thyroid Follicular Cells

Thyroid cancer and thyroid nodules are more prevalent in women than men, so female sex hormones may have an etiological role in these conditions. There are no data about direct effects of progesterone on thyroid cells, so the aim of the present study was to evaluate progesterone effects in the sodium-iodide symporter NIS, thyroglobulin TG, thyroperoxidase TPO, and KI-67 genes expression, in normal thyroid follicular cells, derived from human tissue. NIS, TG, TPO, and KI-67 mRNA expression increased significantly after TSH 20 μUI/mL, respectively: 2.08 times, P<0.0001; 2.39 times, P=0.01; 1.58 times, P=0.0003; and 1.87 times, P<0.0001. In thyroid cells treated with 20 μUI/mL TSH plus 10 nM progesterone, RNA expression of NIS, TG, and KI-67 genes increased, respectively: 1.78 times, P<0.0001; 1.75 times, P=0.037; and 1.95 times, P<0.0001, and TPO mRNA expression also increased, though not significantly (1.77 times, P=0.069). These effects were abolished by mifepristone, an antagonist of progesterone receptor, suggesting that genes involved in thyroid cell function and proliferation are upregulated by progesterone. This work provides evidence that progesterone has a direct effect on thyroid cells, upregulating genes involved in thyroid function and growth