欧洲鳗鲡淋巴细胞转化试验条件的建立

通过对培养时间、培养温度、刀豆蛋白A(ConA)质量浓度和鳗鲡血清质量分数4个参数的测定,确定欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的实验条件。结果表明,在培养时间为42-90 h,培养温度分别为15.0℃、20.0℃、25.0℃和30.0℃时,细胞培养液中ConA质量浓度分别为0、10μg/mL、20μg/mL和30μg/mL,鳗鲡血清质量分数分别为0、5%、10%和15%时,淋巴细胞于20.0℃、含10μg/mL ConA,10%鳗鲡血清的RPM

水分逆境及低溫貯藏對玫瑰切花生理代謝之影響

Cut flower of Rosa hybrida L. cv. 'Noblesse' was studied to investigate the physiological change of cut rose flowers of transient water stress and dry cold storage duration. Transient water stress followed by a recovery period, resulted in a decline in the quality of cut flower. After 8 hours without water uptake on the fifth day in the vase, the flower fresh weight and water uptake rate dramaticly declined and cannot fuly blossom. It started to wilting on the sixth day. The rehydration after transient water stress resulted in a higher respiration rate. After 8 hours without water uptake, the ethylene reached its peak to 0.75 nl/g/hr. During the wilting stage, after 4 or 8 hours without water supply, the electrolyte leakage showed significantly differences compared to other treatmens. During the early rehydration stage, the water potential and petal water content increased. However, while the flower was fully bloomed, decreased respectively, which is especially obvious in the treatment which rehydrated both significantly after transient water stress. During cold storage, the increase in the storing temperature resulted in a higher respiration rate. Under 8℃ storage, the ethylene reached its utmost at 0.69 nl/g/hr and the corresponding ACC content and ACO activity are consistent while under 2℃ storage, there were no ACC accumulation and ethylene production.本試驗利用黛安娜'Noblesse'玫瑰切花商業栽培品種作為試驗材料，探討短暫離水處理後切花老化生理，以及低溫乾藏期間生理代謝之變化。切花離水後經低溫乾藏會造成品質的降低，離水8小時於瓶插第5天鮮重及吸水量皆呈現大幅下降趨勢，花朵無法完全綻放，並於瓶插第6天後萎凋。離水處理後呼吸率均會昇高，離水8小時於乙烯高峰達最大生成量0.7Snl/g/hr，萎凋期離水4、8小時離子滲漏率與其他處理組呈現顯著差異。復水初期水分潛勢及花瓣水分含量大幅上升，盛開期後皆逐漸下降，尤其離水處理組更加顯著。切花乾藏期間隨著貯藏溫度的增加，呼吸率越旺盛，8C貯藏期間於第8天產生乙烯高峰值0.69 nl/g/hr，對應ACC含量及ACO活性有相同趨勢，而2於貯藏期間皆無ACC的累積及乙烯生成

交易成本视角下深圳生态线内社区的改造困境和策略

生态控制线是生态空间管控的重要举措之一,也是保护城市生态环境和提升生态环境质量的有效手段。但是,由于复杂的产权纠纷和历史遗留问题,它的划定在实际操作过程中面临着诸多挑战。妥善处理生态线内已建社区和合理进行社区改造已成为重要议题。本文以深圳市为例,系统梳理生态线内社区的特征,并引入交易成本的概念,分析生态线内社区改造过程中政府、社区、居民和开发商等利益主体的成本与收益,指出生态线内社区改造的难点在于交易成本过高以及收益与成本缺口巨大,并在此基础上提出一系列针对性的改造策略,以期更好地推进生态线内社区改造,逐步完成生态修复工作,更好地实现生态价值与社会经济价值,并为其他城市提供借鉴和参考

肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响

目的研究中药有效成分肉桂酸对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和分化的影响。方法肉桂酸处理MG-63细胞前后,台盼蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞仪检测细胞周期时相变化;光镜和电镜观察细胞形态和超微结构;VanGieson染色检测细胞Ⅰ型胶原表达;茜素红染色观察钙化骨结节形成;免疫细胞化学检测骨粘素和骨钙蛋白表达。结果肉桂酸明显抑制MG-63细胞增殖,D7抑制率达54.94%±4.69%。周期分析结果显示,肉桂酸处理后G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P<0.01)。光镜和电镜结果显示,肉桂酸处理组MG-63细胞形态和超微结构发生明显改变,呈现相应正常细胞的形态和超微结构特征。肉桂酸促进成骨细胞分化标志物Ⅰ型胶原、骨粘素和骨钙蛋白的表达与钙沉积以及典型骨结节的形成。结论肉桂酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖并诱导其向成骨细胞分化

鳗鲡病原菌的分类鉴定及相关免疫基础研究

鳗鲡是我国最重要的养殖经济鱼类之一，目前我国主要养殖种类为欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)、日本鳗鲡(Anguilla japonica)以及少量的美洲鳗鲡(Anguilla rostrata)，在养殖过程中，细菌性疾病是养殖鳗鲡尤其是欧洲鳗鲡的主要病害。但是，目前对鳗鲡病原菌的分类鉴定和防治还缺乏有效的方法。本论文主要研究了鳗鲡病原菌的分类鉴定及相关的免疫基础。在病原菌的分类鉴定方面，我们以患病鳗鲡的肝脏为主，分离细菌并研究其致病性，结合细菌的形态、生理生化和分子生物学特征建立了鳗鲡病原菌的分类鉴定方法。在相关免疫基础研究方面，探讨了病原菌人工感染鳗鲡后，其在鳗鲡不同脏器内的定位和由此引起的组织病理学变化，同时对病原菌感染后，鳗鲡血清中蛋白质的变化及其抗菌活性进行了测定。本论文还研究了鳗鲡主要病原菌外膜蛋白成分间的交叉抗原，探讨了最佳的鳗鲡淋巴细胞转化条件。主要研究内容及结果如下： 1. 从福建部分地区发病鳗鲡脏器中共分离到116株细菌，经初步鉴定，筛选了其中的44株菌用于人工感染试验。结果表明22株细菌的毒力较强，其中病原菌阴沟肠杆菌和梅氏弧菌国内外均未见报道。 2. 经染色处理后，采用光学和电子显微镜观察了20株病原菌的形态，初步研究了这些细菌的菌落和菌体特征，并建立了有参考价值的分类标准。根据菌落大小可分为微小型（直径2mm）四类菌落。分离的鳗鲡病原菌主要为无芽孢革兰氏阴性细菌。据鞭毛染色特征可分为无鞭毛，周生多鞭和端生单鞭三类。据菌体的长短轴之比值可分为球状（1-1.1）、短杆状（1.2-2.5）和长杆状（>2.5）三类。 3. 从鳗鲡分离的病原菌主要是弧菌科细菌。本文参考伯杰氏细菌鉴定手册的生理生化指标对弧菌科细菌进行了鉴定，同时与弧菌科快速检测试剂盒的鉴定结果进行了比较，采用纸片法药物敏感试验进行了辅助鉴定。结果表明，除2株细菌不能鉴定到种外，其余14株病原菌可被鉴定为嗜水气单胞菌、温和气单胞菌和海鱼弧菌3个菌种。抗生素敏感试验结果表明，生理生化指标相同的细菌对抗生素敏感性相似，但指标存在差异时鉴定为同种的病原菌对一些抗生素的敏感性也存在差异。这14株菌中有12株菌采用伯杰氏手册鉴定与试剂盒鉴定结果相同。 4. 本研究应用PCR法扩增病原菌的16S rDNA片段并进行序列分析。在细菌生化鉴定的基础上，我们选择了16株鱼类病原菌（其中13株从鳗鲡分离）进行研究，探讨该方法鉴定未知菌的可行性。结果表明，这些细菌经16S rDNA片段序列分析后可分为气单胞菌属、假单胞菌属和肠道菌属等三个属，同属间的细菌16S rDNA片段序列相似性大于97%，而不同属细菌的16S rDNA片段序列相似性小于90%。16株细菌中的12株16S rDNA序列分析结果与生化鉴定结果相同。本研究结果表明，较为简便经济的16S rDNA片段序列分析可替代全长序列分析方法和生化鉴定方法用于初步鉴定未知菌。 5.本研究拟建立一种快速的嗜水气单胞菌检测方法。据该菌编码的溶血素(Hemolysin)和外膜蛋白(Ompts)基因设计了两对引物进行扩增。结果表明，32株被检测细菌中，5株既有溶血素基因又有外膜蛋白基因的细菌均为嗜水气单胞菌，13株仅具有外膜蛋白基因的细菌中有5株为嗜水气单胞菌，表明双重PCR法可用于快速检测同时具有两个基因的嗜水气单胞菌。 6. 以6.7×105cfu/g剂量的嗜水气单胞菌感染鳗鲡后探讨其在鳗鲡脏器内的定位和由此引起的组织病理学变化。结果表明三个时期(6h，24h和48h)的临床症状和病理变化相同。肾脏组织病理变化较肝脏，肠道和鳃部明显，主要表现为肾小管上皮细胞肿胀和肾小球坏死脱落。肝脏损伤表现为严重充血，肠道和鳃部病理变化不明显。免疫组化研究结果表明，感染的细菌主要分布在鳗鲡肾脏内，其它三个脏器中较少。 7. 本试验采用健康鳗鲡分别注射病原菌和生理盐水后对欧洲鳗鲡血清中的抗菌肽进行了研究。结果表明，注射嗜水气单胞菌后在分子量为6kD和20kD处存在差异蛋白，注射鳗鲡爱德华氏菌后在分子量为14kD和20kD处存在差异蛋白，其中6kD处的差异蛋白被证实有抑制嗜水气单胞菌生长的活性。 8. 研究了16株鳗鲡病原菌间的交叉抗原。结果发现，8种被检免疫血清中有5种免疫血清与1-6株细菌存在明显的交叉反应；1种血清与7株细菌存在明显的交叉反应。提取这7株细菌的外膜蛋白，并确定了它们的交叉抗原成分，从而为其后的免疫原性研究准备了基础。 9.动物的细胞免疫水平通常采用淋巴细胞转化试验进行检测。本研究对该转化试验的培养温度（15.0-30.0℃）、培养时间（42-90h）、ConA (0 -30μg/ml)、小牛血清（0-15%）和鳗鲡血清（0-15%）浓度五个重要参数进行了优化。结果表明，鳗鲡淋巴细胞于20.0℃、含10μg/ml ConA, 10％鳗鲡血清和10%小牛血清的RPMI1640细胞培养液中培养90h后可获得最好的转化效果

长江中下游四个湖泊鱼类与渔业研究

选择长江中下游的牛山湖、东汤逊湖、龙感湖和黄湖作为研究地点,调查了这些湖泊鱼类区系组成、鱼种放养量、渔获物组成、渔产量和渔产值,现已查明牛山湖鱼类有64种,东汤逊湖53种,黄湖76种,龙感湖80种。这些湖泊的鱼类区系组成相似,鲤科鱼类最多,占总种数的60.4%-65.6%。牛山湖主要放养草鱼,东汤逊湖主要放养鲢和鳙,黄湖除鱼类外重点放养河蟹。这三个湖泊年均鱼种放养量分别为9.5kg/hm2、36.8kg/hm2、8.1kg/hm2;年均鱼产量分别为128kg/hm2、126kg/hm2、88kg/hm2

鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验培养条件的初步研究

探讨鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验的最优条件，为鳗鲡的细胞免疫研究提供方法。通过对培养时间、培养温度、小牛血清和刀豆蛋白A（ConA）浓度4个参数的测定，初步确定了鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑（MTT）法的培养条件。结果表明，在培养时间60h和68h，培养温度为18．0℃、24．0℃、30．0℃，RPMI细胞培养液中小牛血清浓度为5％、10％和15％，ConA浓度为0μg／mL、2．5μg／mL、5μg／mL和10μg／mL的范围内，淋巴细胞于18．0℃、含10μg／mL ConA和15％小牛血清的营养液中培养68h后可获得相对最好的淋巴细胞转化效果

欧洲鳗鲡免疫球蛋白阳性细胞的组织化学定位与分布特点

采用蛋白A亲和层析法分离纯化欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla,欧鳗)血清免疫球蛋白(Ig),制备其特异性兔抗血清,并运用免疫组织化学技术研究了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染的试验组鳗鲡和未经感染的对照组鳗鲡脾脏、肾脏和肝脏Ig阳性(Ig+)细胞定位与分布特点。结果表明:纯化后的Ig经SDS-PAGE检测含有分子质量约68 ku重链和26 ku轻链的2条清晰蛋白条带,由其制备的兔抗Ig血清效价达1∶51 200。对照组欧鳗脾脏Ig+细胞数较少,肾脏相对较多,肝脏未

Key Technology of VOIP and Development of its Application System

【中文文摘】随着Internet(互联网)用户的日益普及,VOIP(Voice Over IP)已成为人们实现电话通信的重要手段之一。本文将首先介绍实现VOIP系统所采用的核心技术,然后具体说明我们所开发VOIP应用系统的实现方案和系统功能。国家自然科学基金项目(No:60076015);福建省自然科学基金项目(No:A0010019); 福建省高新技术项目等经费的资助