欧洲鳗鲡淋巴细胞转化试验条件的建立

通过对培养时间、培养温度、刀豆蛋白A(ConA)质量浓度和鳗鲡血清质量分数4个参数的测定,确定欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的实验条件。结果表明,在培养时间为42-90 h,培养温度分别为15.0℃、20.0℃、25.0℃和30.0℃时,细胞培养液中ConA质量浓度分别为0、10μg/mL、20μg/mL和30μg/mL,鳗鲡血清质量分数分别为0、5%、10%和15%时,淋巴细胞于20.0℃、含10μg/mL ConA,10%鳗鲡血清的RPM

浅议非指导性教学在体育教学中的应用

针对当前教学中存在的根本性问题,为进一步推动素质教育,培养更多的高素质人才,引入罗杰斯的非指导性教学原则。借以说明在“以学生为中心”的教学过程中,教师的情感作用和投入程度,对建立师生之间的和谐关系和发挥学生的积极主动性具有关键性作用,并倡导在体育教学中积极开展非指导性教学

基于卷积神经网络的单色布匹瑕疵快速检测算法

针对布匹生产企业存在人工检测布匹瑕疵效率低、误检率、漏检率高的问题,提出一种基于深度卷积神经网络的单色布匹瑕疵检测算法.首先由于布匹瑕疵的数据规模远小于大型深度卷积神经网络的数据规模,如果采用大型卷积神经网络,计算量大且容易导致过拟合,因此设计了浅层的卷积神经网络结构;然后提出双网络并行的模型训练方法,用一个大网络指导小网络的训练过程,提高模型的训练效果;最后为了使得深度卷积神经网络模型脱离GPU的限制,能够在普通电脑、移动设备、嵌入式设备中高速运行,且保证模型检测精度,提出结合特征图优化卷积核参数的模型压缩算法.实验结果表明该算法可实现高准确率、高检测速度,在PC机的CPU模式下,检测速度为135 m/min,准确率可达到96.99%.国家自然科学基金(51605403);;2016年工信部智能制造综合标准化与新模式应用项目(2016-213

御寒暖胃膏穴位贴敷对胃癌前病变大鼠胃黏膜的影响

目的:研究御寒暖胃膏贴敷胃经穴对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜的影响,探讨御寒暖胃膏贴敷胃经穴对慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜损伤修复的作用机制。方法:大鼠随机分为正常组、模型组、御寒暖胃膏贴敷胃经穴组、御寒暖胃膏贴敷对照点组、药物对照组,采用综合干预方法复制慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠模型,肉眼下观察大鼠胃黏膜损伤指数,光镜下观察胃黏膜组织的病理变化,彩色多普勒观察胃黏膜的血流量。结果:与模型组比较,御寒暖胃膏贴敷胃经穴组和药物对照组大鼠胃黏膜损伤指数值均显著降低(P0.05),胃黏膜组织的病理损伤未得到明显修复,胃黏膜血流量未见显著升高(P>0.05)。结论:御寒暖胃膏贴敷胃经穴可以促进慢性萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜损伤的修复,增加胃黏膜的血流量,并且存在经脉-脏腑特异相关性。深圳市科技研发资金项目(JCYJ20130401105615482

类泛素蛋白及其中文命名

泛素家族包括泛素及类泛素蛋白,约20种成员蛋白.近年来,泛素家族领域取得了迅猛发展,并已与生物学及医学研究的各个领域相互交叉.泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬机制的发现分别于2004和2016年获得诺贝尔奖.但是,类泛素蛋白并没有统一规范的中文译名. 2018年4月9日在苏州召开的《泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬》专著的编委会上,部分作者讨论了类泛素蛋白的中文命名问题,并在随后的\"泛素家族、自噬与疾病\"(Ubiquitinfamily,autophagy anddiseases)苏州会议上提出了类泛素蛋白中文翻译草案,此草案在参加该会议的国内学者及海外华人学者间取得了高度共识.冷泉港亚洲\"泛素家族、自噬与疾病\"苏州会议是由美国冷泉港实验室主办、两年一度、面向全球的英文会议.该会议在海内外华人学者中具有广泛影响,因此,参会华人学者的意见具有一定的代表性.本文介绍了10个类别的类泛素蛋白的中文命名,系统总结了它们的结构特点,并比较了参与各种类泛素化修饰的酶和它们的生物学功能.文章由45名从事该领域研究的专家合作撰写,其中包括中国工程院院士1名,相关学者4名,长江学者3名,国家杰出青年科学基金获得者18名和美国知名高校华人教授4名.他们绝大多数是参加编写即将由科学出版社出版的专著《泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬》的专家

Cloning and Expression of the Genes Encoding the Immunoglobulin of European Eel, Anguilla.anguilla

欧洲鳗鲡（Anguilla anguilla Linnaeus 1758）简称欧鳗，是我国重要的水产养殖鱼类，对其免疫系统的研究在理论和应用方面都具有重要意义。本文研究了欧鳗血清免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)的分离纯化、 Ig 阳性细胞的组织定位、Ig 重链（Immunoglobulin heavy chain, IgH）、Ig 轻链（Immunoglobulin light chain, IgL） cDNA 的克隆与分析、原核表达以及时空表达等。研究结果为进一步阐明欧鳗免疫应答机理、制备基因工程抗体以及抗体基因转移育种等提供重要的参考依据。主要研究内容及结果如下： 1. 采用蛋白 A 亲和层析和山羊 IgG-琼脂糖免疫亲和层析两种方法对欧鳗血清 Ig 进行分离纯化，同时制备了相应的兔抗欧鳗 Ig 抗血清。SDS-PAGE凝胶电泳显示：经蛋白 A 亲和层析纯化后的 Ig 有两条分别为分子量约 68 ku 的重链和 26 ku 的轻链清晰蛋白条带，经山羊 IgG-琼脂糖免疫亲和层析纯化后的 Ig 在 SDS-PAGE 凝胶有三条清晰的蛋白条带，分别为分子量约68 ku的重链、分子量为26 ku和28 ku的两条轻链；兔抗欧鳗 Ig 血清经酶联免疫吸附法测定的效价均达到1：51200。Western-blotting结果显示兔抗欧鳗血清能清晰识别欧鳗血清的68 ku的重链，约在56 ku也出现一条信号较强的蛋白带，但轻链与兔抗鳗鲡 Ig 抗血清反应较弱。 2. 运用免疫组织化学技术研究了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) 感染的实验组欧鳗和未经感染的对照组欧鳗脾脏、肾脏和肝脏 Ig 阳性（Ig+） 细胞定位与分布特点。结果表明：对照组欧鳗脾脏 Ig+ 细胞数较少，肾脏相对较多，肝脏未发现。实验组欧鳗脾脏 Ig+ 细胞数量明显比对照组增多，肾脏有所增多但不明显，肝脏未发现。在实验组和对照组中，黑色素巨噬细胞在脾脏和肾脏中均见明显聚集并与淋巴细胞形成黑色素巨噬细胞中心（Melano-macrophage centres, MMCs），其中脾脏 MMCs 多数位于血管附近，脾脏 Ig+ 细胞均主要分布在 MMCs 及其周边，且在实验组中数量多而密集，而肾脏 Ig+ 细胞在对照组中明显分布于 MMCs 及其周边，但在实验组不明显。与对照组相比，实验组中脾脏和肾脏黑色素巨噬细胞数量和体积均有明显增多。本试验结果说明欧鳗肾脏和脾脏是具有 Ig+ 细胞的重要免疫器官，其中黑色素巨噬细胞数量和体积变化很可能与免疫应答过程密切相关。 3. 采用RT-PCR和RACE方法克隆到的欧鳗 IgH 全长cDNA共2,089 bp，其中所编码的 IgH 蛋白分子含有 581 个氨基酸残基，由前导肽、可变区、恒定区1、恒定区2、铰链区、恒定区3、恒定区4以及 C 末端序列构成。经氨基酸序列分析表明恒定区 3 区存在其它鱼类未见报道的两个连续糖基化位点，该位点与形成链内二硫键半胱氨酸邻近，且在半胱氨酸下游 3 bp 处发现结合补体 C1q 的氨基酸基序‘His-X-Asp-X-X-X-Pro’。IgH恒定区的氨基酸序列与海鲢(Elops saurus)、大西洋鲑 (Salmo salar)、虹鳟 (Oncorhynchus mykiss)、 草鱼 (Ctenopharingodon idella)、 鲤鱼 (Cyprinus carpio)、斑点叉尾鮰 (Ictalurus punctatus)和斜带石斑鱼(Epinephelus coioides) 的同源性分别为 46.1%、 39.7%、 38.9%、 32.4%、 32.3%、 31.7% 和 30.7%。 4. 根据已经克隆的欧鳗 IgH 全长cDNA序列构建了欧鳗IgH链重组表达质粒，并在大肠杆菌中实现了高效表达。经Western blotting分析，目的基因表达产物都能被兔抗欧鳗 Ig 的抗血清特异性识别，表明原核表达的欧鳗 IgH 融合蛋白具有天然 Ig 的免疫原性。 5. 采用RT-PCR和RACE方法克隆到的欧鳗 IgL全长cDNA共1016 bp，其中所编码的 IgL 蛋白分子含有238 个氨基酸残基，由前导肽、可变区和恒定区组成。经氨基酸序列分析后发现两个对 IgH 和 IgL 结构域的聚合作用必须的两个基序，分别是位于可变区 FR2的 ‘PELLT’ 以及位于可变区 FR4的 ‘FGGG’。将欧鳗IgL 恒定区序列与其它23种脊椎动物的相应序列进行比较并构建系统发育树，结果显示欧鳗轻链与虹鳟和大西洋鲑轻链 L1 型群聚为一簇，据此克隆的欧鳗轻链属于轻链L1型。根据已经克隆的欧鳗 IgL 全长cDNA序列，成功构建了具有双酶切位点欧鳗IgL成熟肽重组表达质粒，为 IgL 在大肠杆菌中的表达奠定基础。 6. 利用荧光定量PCR技术研究了经山羊 IgG 免疫注射欧鳗前后 Ig 在肾脏、脾脏、肝脏、鳃、肌肉以及心脏的分布和表达量的变化。之后研究了山羊IgG 免疫注射欧鳗后 28 d Ig在肾脏、脾脏和鳃中表达的时空变化。结果表明免疫接种前后欧鳗肾脏、脾脏和鳃 Ig 基因表达水平均高于肝脏、肌肉和心脏，且免疫后的肾脏、脾脏以及鳃 Ig 基因表达水平较免疫前均有显著提高。因此欧鳗肾脏、脾脏和鳃应为其主要免疫应答器官。经背部肌肉注射山羊IgG后，欧鳗系统免疫相关器官脾脏和肾脏免疫应答反应分别在第 7 d 和 第 14 d较为明显，而粘膜免疫相关组织鳃在第21 d 较为明显，说明系统免疫应答反应较粘膜免疫应答反应快。 7. 根据欧鳗 IgH和IgL基因序列，分别设计了IgH 恒定区1、恒定区2、恒定区3 以及 IgL恒定区特异性探针引物，以欧鳗cDNA为模板进行克隆与测序，进而通过地高辛（DIG）对以上基因片段分别进行标记，制备 IgH 恒定区1、恒定区2、恒定区3 以及 IgL恒定区探针。探针标记效率的检测结果显示：IgH 恒定区2 和恒定区 3 所标记的探针与对照探针的浓度达0.1 pg/ µL时均可见到斑点，而对IgH恒定区1和 IgL恒定区所标记的探针浓度低至0.03 pg/ µL尚可见到斑点，表明探针标记均达到预期的效果，其中IgH恒定区1与 IgL 恒定区探针有更高的标记效率

水平内循环流化床气化特性数值模拟研究

本文利用Barracuda软件对水平内循环流化床气化（HiFBG）特性进行了数值模拟研究。HiFBG技术在保证产气量的同时，降低了系统的高度，延长了固体颗粒在气化系统内的停留时间，提高气化效率和气化气的热值。从模拟结果可以发现，采取HiFBG技术后，合成气管道中CO、H2的含量较烟气管道出口处高，而N2的含量比烟气管道中低，因此，本技术可以有效减少合成气中N2含量，从而提高气化气热值

欧洲鳗鲡免疫球蛋白阳性细胞的组织化学定位与分布特点

采用蛋白A亲和层析法分离纯化欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla,欧鳗)血清免疫球蛋白(Ig),制备其特异性兔抗血清,并运用免疫组织化学技术研究了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染的试验组鳗鲡和未经感染的对照组鳗鲡脾脏、肾脏和肝脏Ig阳性(Ig+)细胞定位与分布特点。结果表明:纯化后的Ig经SDS-PAGE检测含有分子质量约68 ku重链和26 ku轻链的2条清晰蛋白条带,由其制备的兔抗Ig血清效价达1∶51 200。对照组欧鳗脾脏Ig+细胞数较少,肾脏相对较多,肝脏未

鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验培养条件的初步研究

探讨鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验的最优条件,为鳗鲡的细胞免疫研究提供方法。通过对培养时间、培养温度、小牛血清和刀豆蛋白A(ConA)浓度4个参数的测定,初步确定了鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑(MTT)法的培养条件。结果表明,在培养时间60 h和68 h,培养温度为18.0℃、24.0℃、30.0℃,RPMI细胞培养液中小牛血清浓度为5%、10%和15%,ConA浓度为0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL和10μg/mL的范围内,淋巴细胞于18.0℃、含10μg/mL ConA和15%小牛

鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验培养条件的初步研究

探讨鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验的最优条件，为鳗鲡的细胞免疫研究提供方法。通过对培养时间、培养温度、小牛血清和刀豆蛋白A（ConA）浓度4个参数的测定，初步确定了鳗鲡外周血淋巴细胞转化试验四甲基偶氮唑（MTT）法的培养条件。结果表明，在培养时间60h和68h，培养温度为18．0℃、24．0℃、30．0℃，RPMI细胞培养液中小牛血清浓度为5％、10％和15％，ConA浓度为0μg／mL、2．5μg／mL、5μg／mL和10μg／mL的范围内，淋巴细胞于18．0℃、含10μg／mL ConA和15％小牛血清的营养液中培养68h后可获得相对最好的淋巴细胞转化效果