银鲫两个蛋白合成相关基因全长cDNA的克隆及其特征分析

通过构建雌核发育银鲫心跳期SMARTcDNA质粒文库并从文库中随机挑选克隆测序 ,克隆得到银鲫翻译起始因子 3亚单位 2 (GTIF3 S2 )和翻译延伸因子 1亚单位α(GEF 1α)基因全长cDNA。银鲫翻译起始因子 3亚单位 2基因cDNA全长 12 80bp ,开放阅读框位于 117— 10 91bp之间 ,编码 32 5个氨基酸。其推断的氨基酸序列存在三个WD结构域。该基因在鱼类中为首次报道。银鲫翻译延伸因子 1亚单位alpha基因cDNA全长 1784bp ,开放阅读框位于82— 14 6

A Taxol producing Endophytic Fungus Isolated from Taxus mairei and It′s Antitumor Activity

从南方红豆杉皮层分离到一株瘤座孢，其发酵提取物经TlC、HPlC分析以及抗瘤和促微管聚合活性测定，结果提示可能存在紫杉醇或紫杉醇类的活性物质.Strain TF 5, isolated from the inner bark of the Chinese Yew, Taxus mairei , grew rapidly in PDA.The colony reached more than 9 cm in diameter after 7 days incubation.The stromata, dark brown, rounded and irregular shape, appeares on the colony after about 20 days.The conidioiphore is pale yellow and has 2￣4 levels of branch.The spore is single, hyaline, dry, and oval to pyriform.The base end of the spore is truncate rounded and has an obvious scar.Some spores have a short sericate remains.It was identified as one kind of Tubercularia sp .by comparing with authentic taxol through TLC and HPLC, showing this strain to produce taxol or its analogue in mycelial culture.The products in PDA fermentation broth (25 ℃, 140r/min, 15days) approximately reached 185.4 μg/L.The products has toxicity to cancer cell lines KB and P388, while induces tubulin polymerization in vitro , similar to taxol

Screen of Stage-specific Expression Genes in Embryos at Tail-bud Stage and Heartbeat Beginning Stage in Silver Crucian Carp

构建并筛选了银鲫（Carassiusauratusgibelio）胚胎发育尾芽期（TBS）和心跳开始期（HBS）的抑制差减杂交文库.RT-PCR检测已经得到全长cDNA的基因,研究它们的时空表达特性,初步筛选出9个差异表达基因.差异表达的五个已知基因是：一,真核翻译起始因子3亚单位2基因;二,真核翻译延伸因子1-α基因;三,FAG-2基因;四,M3-CK基因;五,SE（spl）基因.在肝脏和脾中检测不到SE（spl）的转录产物.可能的未知基因有四个：一,SC32004基因;二,SC41065-1和SC41065-2基因;三,SC42004基因;四,SC42001基因.在成熟卵细胞检测不到转录产物,胚胎发育过程中最早可在原肠期检测到该基因极其微弱的信号,神经胚期信号已经很明显,至心跳开始期和出苗前期检测到的转录产物水平最高,出苗后可能略有下降.在被检测的几种组织中均检测到转录产物,肾脏最强,依次为心脏、脾、脑、卵巢以及精巢和肝脏,其中,肝脏和性腺检测到的转录产物极少

银鲫原肠胚差异表达基因的筛选

胚胎发育是基因组中各个基因在时间和空间上选择性表达的结果。为了鉴定参与鱼类早期胚胎发育和胚层分化的调控因了,分别构建了银鲫(Carassiusauratusgibelio)原肠胚和成熟卵子的SMARTcDNA文库,并采用差异筛选的方法,从银鲫原肠胚SMARTcDNA文库中筛选不同于成熟卵子的差异表达基因。通过菌斑和PCR产物的两轮斑点杂交,从大约1500个克隆中筛选出131个阳性克隆,从中选择58个克隆测序并将测得的序列进行了数据库比对分析,结果显示这些差异表达基因大部分为参与转录和翻译的调控因子和核糖

鱼类培养细胞抗病毒基因差减cDNA文库的构建

紫外线灭活的草鱼出血病病毒（GCHV）能诱导鲫囊胚培养细胞（CAB）产生高滴度的干扰素，从而诱导宿主细胞基因表达的改变并处于抗病毒状态。提取灭活病毒诱导未经病毒诱导的CAB细胞mRNA，利用抑制性差减杂交技术，成功构建了鱼类培养细胞抗病毒基因差减cDNA文库。以鲫管家基因α－tubulin和β－actin作为差减指标，检测差减cDNA文库的差减效率分别高达2^15和2^7倍，表明经过病毒诱导后的细胞中，某些差异表达基因的富集效率也接近2^15倍。鱼类抗病毒基因差减cDNA文库的建立对快速分离、克隆鱼类抗病毒相关基因和认识鱼类细胞抗病毒免疫的分子机理有重要意义

银鲫原肠胚差异表达基因的筛选

胚胎发育是基因组中各个基因在时间和空间上选择性表达的结果。为了鉴定参与鱼类早期胚胎发育和胚层分化的调控因了，分别构建了银鲫(Carassius auratus gibelio)原肠胚和成熟卵子的SMART cDNA文库，并采用差异筛选的方法，从银鲫原肠胚SMART cDNA文库中筛选不同于成熟卵子的差异表达基因。通过菌斑和PCR产物的两轮斑点杂交，从大约1500个克隆中筛选出131个阳性克隆，从中选择58个克隆测序并将测得的序列进行了数据库比对分析，结果显示这些差异表达基因大部分为参与转录和翻译的调控因子和核糖体蛋白以及一些在胚胎早期大量表达的参与脂类代谢的脂蛋白和一些未知的新基因。接着采用RT-PCR技术，对其中6个基因在胚胎发育不同阶段的表达特征进行了分析，进一步证实这些基因在胚胎发育过程中存在表达差异；研究还从分析的基因中揭示出4类不同的表达模式。通过本研究，已筛选出一批在银鲫胚胎发育早期开始表达的调控基因，为开展鱼类胚胎发育早期表达基因的功能研究奠定了前期工作基础

银鲫原肠胚差异表达基因的筛选

胚胎发育是基因组中各个基因在时间和空间上选择性表达的结果。为了鉴定参与鱼类早期胚胎发育和胚层分化的调控因了，分别构建了银鲫(Carassius auratus gibelio)原肠胚和成熟卵子的SMART cDNA文库，并采用差异筛选的方法，从银鲫原肠胚SMART cDNA文库中筛选不同于成熟卵子的差异表达基因。通过菌斑和PCR产物的两轮斑点杂交，从大约1500个克隆中筛选出131个阳性克隆，从中选择58个克隆测序并将测得的序列进行了数据库比对分析，结果显示这些差异表达基因大部分为参与转录和翻译的调控因子和核糖体蛋白以及一些在胚胎早期大量表达的参与脂类代谢的脂蛋白和一些未知的新基因。接着采用RT-PCR技术，对其中6个基因在胚胎发育不同阶段的表达特征进行了分析，进一步证实这些基因在胚胎发育过程中存在表达差异；研究还从分析的基因中揭示出4类不同的表达模式。通过本研究，已筛选出一批在银鲫胚胎发育早期开始表达的调控基因，为开展鱼类胚胎发育早期表达基因的功能研究奠定了前期工作基础

雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎差异表达基因的呈现

构建了雌核发育银鲫原肠期胚胎和尾芽期胚胎间的抑制性差减杂交cDNA质粒文库。对原肠期’739个和尾芽期816个PCR阳性克隆进行斑点杂交，得到72个原肠期和98个尾芽期斑点杂交阳性克隆。测序和基因数据库比对结果表明：72个原肠期斑点杂交阳性克隆中，包括19个已知基因的cDNA片段和31个没有同源性的cDNA片段；98个尾芽期斑点杂交阳性克隆中，包括52个已知基因的cDNA片段和37个没有同源性的cDNA片段。采用虚拟Northern杂交和RT-PCR证实了部分基因在银鲫胚胎发育过程中的差异表达。这些差异表达基因的呈现为进一步研究银鲫胚胎发育的分子机制奠定了基础

银鲫两个蛋白合成相关基因全长cDNA的克隆及其特征分析

通过构建雌核发育银鲫心跳期SMART cDNA质粒文库并从文库中随机挑选克隆测序，克隆得到银鲫翻译起始因子3亚单位2(GTIF3—S2)和翻译延伸因子1亚单位α(GEF-1α)基因全长cDNA。银鲫翻译起始因子3亚单位2基因cDNA全长1280bp，开放阅读框位于117—1091bp之间，编码325个氨基酸。其推断的氨基酸序列存在三个WD结构域。该基因在鱼类中为首次报道。银鲫翻译延伸因子1亚单位alpha基因cDNA全长1784bp，开放阅读框位于82—1467bp之间，编码462个氨基酸。RT-PCR表明，这两个基因在成熟卵母细胞和胚胎发育早期可以检测到少量的转录产物，在胚胎发育期间从原肠期开始转录，并随着发育进程逐渐增强。成鱼组织中除精巢表达较弱外，其他组织都表达较强。同源分析比较表明，TIF3-S2和EF-1α在物种进化过程中具有高度的进化保守性，在物种间的同源性很高。因此，作者认为，这两个基因是研究物种间系统发育的优良对象