High Cycle Fatigue Performance of Buckling-Restrained Braces

プロジェク

Characterization of apoptotic cells induced in vitro in Meckel\u27s chondrocytes by anticancer agents

抗癌剤のエトポシトとカンプトセシンによってメッケル軟骨に誘導される細脳死かアポトーシスによるものか否かを検索した。細脳死は胎生16日のマウスから分離した培養メッケル軟骨にエトポシト(200μg/ml)とカンプトセシン(50μg/ml)によって誘導した。これらの効果はTUNEL法と光顕およひ電顕に加え、免疫組織化学的に解析した。エトポント処理した培養細胞はアポトーシスの指標となる多くのTUNEL陽性細胞を示した。微細構造的にエトポシトてのアポトーシス様の細脳死は細脳性出芽、核クロマチンの濃縮、アポトーシス小体の形成によって引き続かれた。これに対し、カンプトセシンによる細脳死はエトポシトと同様にTUNEL陽性細胞の増加を示した。これらの抗癌剤処理後のアポトーシスは時間依存的に増加し、特に、12時間後から急速に増加した。P53の免疫染色では、この蛋白は正常な培養軟骨細胞では陰性であったか、エトポノトとカンプトセシン処理群では恒常的に促進された。一方、bcl-2の反応は培養初期の正常軟骨細胞に局在したが、抗癌剤処理群では認められなかった。本研究から、エトポシトとカンプトセシンによってメッケル軟骨に誘導された細脳死は典型的なアポトーシスによる細脳死で、これらの抗癌刻は腫瘍細胞のみならす、正常な軟骨細脳にもアポトーシスを誘導することか示唆された。Cell death induced in Meckel\u27s chondrocytes in vitro with the anticancer drugs, etoposide and camptothecin, was examined from the viewpoint of an apoptotic event. Cell death was induced in vitro in Meckel\u27s chondrocytes that were enzymatically isolated from 16-day gestation mouse embryos. The effects were assayed histologically and immunohistochemically by using the TUNEL procedure, and light and electron microscopy. Etoposide and camptothecin-treated cultures were followed by the strong appearance of TUNEL (TdT-mediated biotinylated dUTP nick end-labeling)-positive apoptotic cells; statistical analysis showed that these agents induced apoptosis significantly 12-24hrs after treatment. At an ultrastructural level, apoptotic cell death from etoposide was followed by the formation of cell blebs, chromatin condensation and the formation of apoptotic bodies. Immunostaining for p53 revealed that this protein was absent from intact chondrocytes but was continuously accelerated in the cells treated with etoposide and camptothecin. Bcl- 2 was immunolocalized in intact chondrocytes at an early stage of culture, but was not detected in anticancer-treated cells. In the present study, we confirmed that cell death in Meckel\u27s chondrocytes induced by etoposide and camptothecin is typical apoptotic cell death, and that these agents also induce apoptosis in intact chondrocytes