Difference and Hierarchy Revisited by Feminism

Drawing heavily on the work of classicist Page duBois, which eloquently explains the emergence, in ancient Greece, of hierarchy and of what is still understood today as the great chain of being (scala naturae: male, female, slave, barbarian, animal), this paper analyzes the age-old negative conotations of the concept of difference in western culture, considers the reinvention of difference as “positive” by Rosi Braidotti (after Deleuze & Guattari), and reassesses the efforts of several other feminist philosophers (e.g. Luce Irigaray, Judith Butler, Gayatry Spivak, Drucilla Cornell) to counter Lacan on the impossibility of “speaking women” beyond the dominant (male) philosophical discourse. Or, to paraphrase Marie Cardinal, their efforts to find “les mots pour le dire”

Characterization of orphan CFTR mutations

Tese de mestrado em Bioquímica, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2017A fibrose quística (FQ) é a doença autossómica recessiva letal mais comum na população caucasiana, afetando 1 em 2500-6000 recém-nascidos. Esta doença é causada por mutações no gene Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR). A proteína CFTR funciona como um canal de cloreto (Cl-) e bicarbonato (HCO3-) regulado por cAMP e é expressa na membrana apical de várias células epiteliais. Para além disso, a CFTR também regula outros canais de iões e transportadores, entre os quais o canal de sódio (Na+) epitelial (ENaC). Desta forma, a CFTR influencia o conteúdo em água e iões do líquido que reveste as vias respiratórias (airway surfasse liquid - ASL). A sua desregulação leva a uma redução do volume do ASL e consequentemente a um muco muito espesso e desidratado que impede a limpeza mucociliar e leva à acumulação de bactérias e agentes patogénicos. Isto leva a infeções persistentes, inflamação e, eventualmente, à fibrose e destruição do tecido das vias respiratórias, sendo esta a principal causa de morte. A proteína CFTR pertence à superfamília dos transportadores ABC (do inglês ATP binding cassette), sendo constituída por 5 domínios distintos: dois domínios transmembranares (MSDS1 e MSD2), formados por 6 segmentos transmembranares cada, e que em conjunto constituem o poro do canal; dois domínios de ligação ao ATP (NBD1 e NBD2) e um domínio regulador (R), que contém múltiplos locais de fosforilação – sendo responsáveis pela abertura e fecho do canal A proteína CFTR é sintetizada no retículo endoplasmático onde é glicosilada cotraducionalmente, dando origem a uma forma imatura (designada band B). Esta proteína sofre depois processamento, durante o seu tráfego pelo complexo de Golgi, originando uma proteína madura (banda C) que vai para a membrana celular onde funciona como canal de cloreto. Até à data, já foram descritas mais de 2000 mutações no gene CFTR, a maior parte das quais causadoras de fibrose quística. A deleção do resíduo de fenilalanina na posição 508 (F508del) é a mutação mais comum e causa um defeito no trafego e na função devido ao misfolding da proteína. Eventualmente, todas as mutações resultam num transporte deficiente de água e iões no epitélio. No entanto, de acordo com o defeito provocado por cada mutação, essa alteração no transporte pode ser mais ou menos grave (ausência total ou transporte residual de cloreto no epitélio, respetivamente). Assim, as mutações foram agrupadas em sete classes de acordo com o defeito causado. Nas mutações de classe I não há produção de proteína, sendo normalmente mutações nonsense, nas quais a existência de um codão stop prematuro leva à degradação do mRNA por nonsense-mediated decay (NMD); as mutações de classe II levam ao folding e processamento incorreto da CFTR, ficando a proteína retida no reticulo endoplasmático (RE) e posteriormente degradada pelo sistema ubiquitina-proteassoma; as mutações de classe III impedem o funcionamento do canal, sendo maioritariamente mutações localizadas nos NBDs; as mutações de classe IV levam a uma baixa condutância, localizando-se maioritariamente nos MSD1 e MSD2; as mutações de classe V resultam em diminuição dos níveis de CFTR, normalmente devido a defeitos no splicing; nas mutações de classe VI, a proteína é pouco estável na membrana celular; e por fim, as mutações de classe VII levam a que não haja produção de mRNA CFTR, sendo muito difícil a sua correção usando fármacos (ex: grandes deleções). As consequências funcionais causadas por uma determinada mutação podem gerar defeitos celulares que resultam na inclusão de uma dada mutação em mais que uma classe - é o caso da mutação F508del que possui defeitos que tanto a classificam como uma mutação de classe II (retenção intracelular) como de classe III (abertura reduzida do canal). De entre as cerca de 2.000 mutações no gene CFTR, muitas são variantes pouco comuns, sendo designadas de mutações “órfãs”. Para estas mutações, é difícil prever os efeitos da mutação pois a mutação ainda não foi caracterizada em termos funcionais e porque na maioria dos casos existem em heterozigotia com outras mutações. Para além disto, como estas mutações afetam poucos pacientes, é difícil não só fazer o diagnóstico, mas também testar os fármacos já existentes (e aprovados) para mutações mais comuns. Assim, há uma necessidade de fazer uma caracterização funcional destas mutações órfãs a fim de se poder fazer a validação de compostos que levem à correção especifica de cada mutação. Para o estudo da fisiopatologia da fibrose quística têm sido desenvolvidos vários modelos. De forma a se poder estudar a CFTR no seu ambiente natural, ou seja, na membrana das células, é importante usar células com um fenótipo epitelial e que tenham capacidade de polarizar e estabelecer tight junctions para se poder medir o transporte iónico. Estas células são normalmente imortalizadas e são manipuladas de forma a que expressem a proteína CFTR wt ou mutante. Quando é requerido um modelo que represente melhor o epitélio das vias respiratórias, são usadas células primárias do epitélio nasal ou dos brônquios - estas podem ser obtidas através de biópsias/escovados ou pólipos nasais ou isolados a partir de materiais de doentes após transplante pulmonar. Outro tipo de sistema são os organoides intestinais, que são produzidos a partir de células estaminais primárias das criptas do reto e podem ser cultivados em matrigel por longos períodos de tempo sem modificações genéticas. Este sistema tem a vantagem de poder ser usado para ensaios funcionais nos quais a ativação da CFTR pela forskolin leva à secreção de sais e fluido para o lúmen no organoide, levando ao seu inchamento (forskolin-induced swelling - FIS). Assim, embora seja fisiologicamente relevante o uso de materiais de doentes para estudar os mecanismos de doença e testar possíveis estratégias terapêuticas, estes necessitam de ser complementados com modelos celulares, pois a maioria das mutações aparecem em heterozigotia, e é difícil de perceber o efeito de cada uma individualmente. Assim as linhas celulares produzidas neste trabalho são indispensáveis para o estudo de mutações raras. Este trabalho teve como principal objetivo a caracterização de mutações órfãs no gene CFTR - nomeadamente as mutações P205S, L206W, R334W, R347P, I507del, R553P, R560S, L997F, H1079P, M1101K e D1152H. Estas foram estudadas a nível funcional e molecular, usando novos modelos celulares. Para além disto, testámos se os fármacos já existentes para mutações comuns são eficazes nestas mutações. Para isto foram levadas a cabo as seguintes tarefas: (i) Criação de novas linhas celulares (baseadas na linha CFBE) que sobre-expressam de forma estável cada uma das mutações em estudo; (ii) Estudo do efeito de cada mutação a nível funcional e molecular usando diferentes técnicas (Western blot, imunofluorescência, câmara de Ussing); (iii) Avaliação do efeito de drogas (já aprovadas para mutações comuns) nestas novas linhas celulares. A primeira tarefa foi concluída para as mutações P205S, R334W, R560S e H1079P. Células CFBE (Cystic fibrosis bronchial epithelial) foram usadas como modelo celular, tendo sido estavelmente transduzidas com cada mutante (com recurso a vetores lentivirais). As restantes mutações foram estudadas usando células HEK293T transfetadas transientemente. Todas as mutações foram estudadas em termos de processamento (presença ou ausência da forma matura da proteína -banda C - por WB) da proteína CFTR e as mutações P205S e R560S foram também estudadas do ponto de vista funcional (determinação de transporte transepitelial em câmara de Ussing). Para as mutações em que se observou um defeito no processamento, foi testado o corrector VX-809 -componente do fármaco combinado lumacaftor/ivacaftor aprovado pela FDA e EMA. Os resultados neste trabalho mostram que: • As mutações P205S, L206W, I507del, R553P, R560S, H1079P e M1101K levam a um defeito no processamento (banda C ausente ou bastante reduzida). • O defeito de processamento das mutações L206W, R553P e M1101K é corrigido pelo corretor VX-809. • O defeito de processamento causado pelas mutações I507del e H1079P não é corrigido pelo VX-809. • O defeito de processamento causado pela mutação R560S não é corrigido por nenhum dos compostos testados (VX-809, VX-661, cisteamina – isolada ou combinada com o epigalocatequinagalato) nem pela incubação a baixa temperatura. • As mutações R334W, R347P, L997F e D1152H não levam a um defeito no processamento, gerando possivelmente uma deficiência a nível funcional. A continuação do trabalho desenvolvido neste projeto será importante para a melhor compreensão do efeito de cada mutação e para a identificação de compostos já disponíveis (aprovados ou em ensaio clínico) levam à sua correção. Assim este trabalho contribuirá para a descoberta de novas abordagens terapêuticas para pacientes que possuem mutações raras como as que aqui foram estudadas.Cystic Fibrosis (CF) is the most common lethal autosomal recessive disorder in the Caucasian population, affecting 1 in 2,500-6,000 newborns. CF is caused by mutations in the CF Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) gene, being the most common a deletion of a phenylalanine residue at position 508 (F508del) that disrupts its traffic and function, due to protein misfolding. CFTR functions as a cyclic AMP-regulated chloride (Cl-) and bicarbonate (HCO3-) channel at the apical membrane of a variety of epithelial cells, also controlling several other ion channels and transporters, such as the epithelial sodium (Na+) channel (ENaC). CFTR influences the ion and water content of the airway surface liquid (ASL). Its dysregulation, leads to a reduced ASL volume and consequently thick and dehydrated airway mucus. This thick mucus then impairs the mucociliary clearance (MCC) and causes the accumulation of bacteria and other pathogens, leading to persistent infections, inflammation and eventually to airway fibrosis and lung destruction, which is the primary cause of mortality in CF patients. CFTR is synthesized at the endoplasmic reticulum (ER) where it is co-translationally coreglycosylated, generating an immature form (called band B). The protein is then processed during its trafficking through the Golgi apparatus to produce its fully-glycosylated mature form (band C) that functions as a channel at the cell surface. About 2,000 alterations have been described to date in the CFTR gene, most presumed to be CF-causing. Ultimately, all of them result in defective cAMP-regulated Cl- secretion by epithelial cells but due to different reasons. This great diversity led to the grouping of CFTR alterations into several classes according to the basic functional defect caused by each mutation, so as to be targeted by the same therapeutic strategy. Among the ~2,000 CFTR mutations, many of them are very rare variants - termed “orphan” mutations due to their low frequency, >1,000 existing in less than 5 patients worldwide. For some of these mutations, the prediction of disease outcome is difficult, since the functional defect has not been characterized. In addition, as they affect very few patients, it is difficult not only to establish the diagnosis and prognosis, but also to assess the potential of new mutation-based therapies. Nevertheless, it is likely that some of these mutations will respond to already approved CFTR modulator drugs. Thus, there is an unmet need to functionally characterize these orphan mutations to establish validated drugs for mutation-based therapies. The main goal of the present work was to better characterize a set of 11 CFTR orphan mutations which occur in Portuguese CF patients (P205S, L206W, R334W, R347P, I507del, R553P, R560S, L997F, H1079P, M1101K and D1152H), at the cellular level by novel cellular models and to test the efficacy of existing CFTR corrective drugs on these mutations. To accomplish this goal, the following tasks were proposed: (i) to generate novel cell lines stably expressing each of the CFTR mutants in study; (ii) to assess the molecular and functional effect of each CFTR mutant, using different approaches (Western blot, immunofluorescence and Ussing chamber); (iii) to test the efficacy of already approved drugs (for more common CFTR mutations) on these CFTR mutants expressed in the novel cell lines. The first task was accomplished for the mutations P205S, R334W, R560S and H1079P. CF bronchial epithelial (CFBE) cell models stably expressing the above mutants were generated. The remaining mutations were studied using HEK293T cells transiently transfected with each CFTR mutant. All the above mutations were studied in terms of processing (no appearance of fully glycosylated form, i.e. band C in WB assays) and for both R560S and P205S, also in terms of function (Ussing chamber assays). For the mutations that showed processing defects, the corrector VX-809, part of the FDA/ EMA-approved lumacaftor/invacaftor drug, was tested. Overall the results showed that: 1. Mutations P205S, L206W, I507del, R553P, R560S, H1079P and M1101K cause processing defects (abrogating or drastically reducing the production of band C). 2. Among these seven mutations affecting processing, P205S-, L206W-, R553P- and M1101KCFTR are rescued by the corrector VX-809. 3. Mutations R334W, R347P, L997F and D1152H did not cause a defect in processing – thus are likely to cause CF by impairing CFTR function. The continuation of the work developed during this project will be important to further characterize the cellular effect of each mutation and to assess whether they can be rescued by the already approved drugs in order to contribute to bringing these novel therapeutic approaches to CF patients carrying such rare mutations

Orpheu et al.: Modernism, Women, and the War

The article takes off from Orpheu, the little magazine at the origin of Portuguese modernism, to reflect, from a comparative perspective, on the development of modernist poetry in the context of the Great War and the social changes evolving during the first decades of the twentieth century on both sides of the Atlantic.O artigo parte de Orpheu, a revista que dá origem ao modernismo português, para reflectir, numa perspectiva comparada, sobre o desenvolvimento da poesia modernista no contexto da Grande Guerra e das mudanças sociais emergentes nas primeiras décadas do século XX dos dois lados do Atlântico

Role of IL-4 in the lineage plasticity of human CD4 single positive thymocytes

Tese de mestrado em Biologia Molecular e Genética, apresentada à Universidade de Lisboa, através da Faculdade de Ciências, 2016Os progenitores de células T sofrem uma série de transformações durante o seu desenvolvimento incluindo seleção, comprometimento para uma determinada linhagem (CD8 ou CD4) e maturação no timo de modo a poderem diferenciar-se em células T funcionais CD4 auxiliares ou CD8 citotóxicas. A decisão de se diferenciar numa das duas linhagens envolve o recetor de células T (TCR), sinalização por parte de interleucinas (IL) e fatores de transcrição (TF) específicos para cada linhagem, crendo-se, atualmente, ser um processo vitualmente irreversível. Compreender as bases que fundamentam a decisão de uma célula se diferenciar numa determinada linhagem é de extrema importância para a compreensão dos mecanismos envolvidos no desenvolvimento dos timócitos humanos. Deste modo, este modelo é dos mais debatidos em imunologia apesar de se recorrer maioritariamente ao modelo animal do ratinho que, apesar de ter proporcionado um vasto leque de conhecimentos, nem sempre se aplicam ao modelo humano, raramente estudado. O modelo de sinalização cinética definido em ratinho para explicar o desenvolvimento dos timócitos aponta para a IL-7 como força motriz na especificação e diferenciação em células CD8, sendo a sua ausência durante o desenvolvimento no timo responsável pela manutenção do fenótipo CD4 definido nos estadios mais precoces de maturação. A IL-4 tinha já sido testada no modelo do ratinho tendo tido fraco desempenho no sentido de conduzir à diferenciação dos timócitos em células T CD8 quando comparada com a IL-7. A IL-4, membro da família de recetores com cadeia γ, foi originalmente descrita em 1982 como sendo uma citocina pleiotrópica de tipo I produzida maioritariamente por linfócitos T auxiliares do tipo 2 (Th2), basófilos, eosinófilos, mastócitos, células natural killer (NK), células T foliculares (Tfh) e células T γ/δ. Esta citocina tem a função de induzir a polarização do fenótipo Th2 e suprimir a diferenciação das células Th1. Adicionalmente, a IL-4 promove o crescimento e diferenciação dos linfócitos B, controlando a especificidade das alterações de classe de imunoglobulinas tal como o desenvolvimento de células B de memória. As funções fisiológicas desta citocina são mediadas pelo recetor de IL-4, composto por uma cadeia α de 140kDa e uma cadeia γ partilhada com os recetores das citocinas IL-2, IL-7, IL-9 e IL-15. Este dímero pode ser encontrado em células hematopoiéticas ativadas exclusivamente após ligação da IL-4. Após ligação da IL-4 ao seu recetor é promovida ativação do ativador de transcrição e transdutor de sinal 6 (STAT6), que por sua vez promove a regulação de genes responsáveis pela diferenciação de células T CD4 ativadas em células Th2 e Th9, expressão de GATA binding protein 3 (GATA3), produção de quimiocinas e pelo aumento da expressão da imunoglubina IgE responsável pelo desenvolvimento de uma resposta imunológica alérgica. Neste projeto sugerimos um papel para a IL-4 na manutenção da plasticidade dos timócitos CD4+CD8- (single positive, CD4SP) em humano. Mostramos que esta citocina apresenta a capacidade de induzir a expressão dos co-recetores CD8α e CD8β em timócitos CD4SP, gerando timócitos duplos positivos (DP) e CD8SP, e aprofundamos os mecanismos na base desta reversão de co-receptores. A indução da expressão de CD8 em timócitos CD4SP purificados não mostrou ser dependente de proliferação das células uma vez que uma significativa porção de células CD8 positivas geradas não se dividiu em cultura. A indução da expressão de CD8 foi muito baixa na presença de IL-2, enquanto que na presença de IL-7 surgiram DP mas muito poucas CD8SP. A IL-13, uma citocina que partilha da sinalização através do recetor α da IL-4, não aumentou a expressão de CD8 em timócitos CD4SP. É de notar que a IL-4 não teve qualquer impacto na expressão de CD4 quando adicionada a culturas de timócitos CD8SP. A reversão de co-receptor induzida pela IL-4 observou-se mesmo no caso de timócitos CD4SP já com expressão dos marcadores de maturação e de saída do timo CD27 e CD45RA, respetivamente, apesar de apresentarem níveis mais baixos de indução de expressão de CD8 quando comparados com timócitos CD4SP CD27-. Na periferia, a IL-4 foi capaz de induzir expressão de CD8 em células T CD4 provenientes do cordão umbilical. É de notar que esta capacidade se perde com células T CD4 provenientes de sangue adulto, confirmando assim uma perda gradual desta capacidade de induzir a expressão de CD8 desde o timo para a periferia. As células CD8SP geradas a partir de timócitos CD4SP parecem ser verdadeiras CD8, uma vez que a expressão deste co-receptor se manteve estável mesmo na ausência de estímulo da IL-4 em cultura. O mesmo não se observou no caso das DPs geradas, as quais parecem depender do estímulo de IL-4 para manter a expressão de CD8. O padrão transcripcional das células CD8SP induzidas pela IL-4 em cultura apoiam uma modulação dos genes responsáveis pela especificação da linhagem e comprometimento das células T CD8, revelado pela diminuição dos níveis transcripcionais de CD4 e ThPOK e pelo aumento dos níveis de CD8. Por fim, encontrámos expressão de IL-4 na medula do timo humano, apontando, assim, para um possível papel fisiológico desta citocina no desenvolvimento das células T humanas. Em estudos futuros pretendemos descobrir qual a via envolvida na sinalização de IL-4 responsável pela indução da expressão de CD8 em timócitos CD4SP usando inibidores das várias vias usadas pela IL-4. Deste modo poderemos identificar a via exata usada pela IL-4 para induzir a reversão de co-recetor de CD4 para CD8 no decurso do desenvolvimento das células T no timo humano. De igual modo, em estudos adicionais pretendemos estudar a capacidade funcional das células T CD8 geradas no sentido de determinar se possuem ou não a característica função citotóxica, possivelmente através da medição de fatores citolíticos tais como Granzima-B, interferão γ (IFN-γ) e Perforina. Outros estudos funcionais podem ser realizados usando linhas de células alvo para testar o poder citotóxico das células T CD8 geradas. Uma vez que um circuito epigenético estabelece a identidade das linhagens auxiliar vs citotóxica, será importante compreender quais os mecanismos epigenéticos a atuar durante a diferenciação das células T no timo, tal como quais os mecanismos mediados pela cromatina envolvidos no comprometimento CD4/CD8. Determinação da acetilação/metilação do DNA e das histonas apresenta-se como um possível método a usar neste sentido. O estudo de culturas com pedaços de timo (TOCs) permitirá revelar um possível papel fisiológico da IL-4 durante a diferenciação dos timócitos, visto que os pedaços de tecido tímico mantêm as células o mais próximo possível do seu ambiente natural com todos os mecanismos envolventes intrínsecos, difícil de replicar usando células purificadas. Dada a importância da utilização do modelo animal, assumimos a relevância de testar se uma semelhante indução de CD8 poderá ocorrer em timócitos de murganho. Em suma os nossos resultados revelam um papel da IL-4 no desenvolvimento e diferenciação das células T humanas, em especial na condução da reversão de co-recetor e manutenção de um certo nível de plasticidade das células T CD4 do timo humano, algo desconhecido até ao momento. Adicionalmente, este sistema providencia um valioso modelo de regulação do comprometimento das células T para uma determinada linhagem no timo humano, merecendo mais estudo.The thymus is the primary organ for the production of T cells, critical for the generation of adaptive immune responses. T cell progenitors proceed through a series of developmental stages, including selection, lineage commitment and maturation in the thymus, in order to differentiate into functional CD4 helper or CD8 cytotoxic T cells. The decision to commit into either lineage is known to involve T-cell receptor (TCR) binding, cytokine signaling and lineage-specific transcriptions factors, and is believed to be virtually irreversible. Here, we report a role for IL-4 in the plasticity of CD4 single positive (CD4SP) thymocytes. We showed that IL-4 has the capacity to induce CD8α and CD8β upregulation in CD4SP thymocytes, generating mature double positive (DP) and CD8SP thymocytes, and further investigate the mechanism underlying this co-receptor reversal. CD8 upregulation in purified CD4SP thymocytes was not dependent on cell proliferation, as a significant proportion of the CD8+ cells generated had not divided in culture. CD8 upregulation was very low in the presence of IL-2, while IL-7 generated some DP but few CD8SP cells. IL-13, a cytokine that shares IL4Rα signaling with IL-4, did not increase CD8 expression in CD4SP thymocytes. Of note, IL-4 did not have an impact on CD4 expression when added to CD8SP thymocytes. IL-4-induced co-receptor reversal was observed even when CD4SP cells expressed the human maturation and egress markers CD27 and CD45RA, respectively, though to a lesser extent. In agreement, IL-4 induced lower upregulation of CD8 expression in CD4 T cells from cord blood. Notably, this ability was lost in CD4 T cells from adult blood, thus confirming a gradual loss of upregulation capacity from the human thymus towards the periphery. CD8SP cells generated from CD4SP thymocytes upon IL-4 exposure appear to be bona fide CD8 T cells, as CD8 expression was stable upon IL-4 removal from culture. This was not observed for DP cells, which depended on the presence of IL-4 to maintain CD8 expression. Furthermore, the transcriptional pattern of IL-4-induced CD8SP cells in culture supported the modulation of lineage-specific genes towards CD8 commitment, as revealed by the decrease in the transcriptional levels of CD4 and ThPOK and the increase of CD8. Moreover, we found that IL-4 was expressed in the medulla of the human thymus, in agreement with a possible physiological role for IL-4 in T cell development. Collectively our results support a role for IL-4 in human T cell development and differentiation, specifically in driving co-receptor reversal in CD4SP thymocytes, a mechanism unknown until now. Additionally, this system provides a valuable model for the study of the regulation of T cell lineage commitment in the human thymus, and merits further study

Electronic publishing of ADB editions

Arquivo Distrital de Braga (ADB), the second largest Portuguese Archive, owns thousands of important master pieces, published according to merely typographic techniques. For the great majority, their existence in electronic support is still a mirage. However, some years ago, ADB and the Department of Computer Science at the University of Minho have created a synergy aiming at modernizing, through computing processes, the unique cultural value the Archive owns. The goal of this document is to provide a technological overview on the work developed at ADB along the years in the arena of electronic publishing. It includes the presentation of a practical case

Análise da eficácia de um programa de exercício centrado no controlo postural e equilíbrio sobre a funcionalidade, aplicado a uma população idosa

De acordo com estimativas das Nações Unidas, o número de pessoas idosas vai duplicar, passando dos 600 milhões atuais para 1,2 biliões em 2025 e, novamente para 2 biliões em 2050. Segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS), a grande maioria dos idosos vive nas suas casas e comunidades, mas em condições que não serão as melhores para as suas necessidades e capacidades (World Health Organization [WHO], 2010). Estima-se que por volta de 2015, o número de pessoas com mais de 65 anos chegará a superar o número de crianças com idade inferior a cinco anos. A confirmar-se esta ocorrência será a primeira vez, desde o início da história, que as pessoas mais velhas estarão em maior número face ao número de crianças (Aboderin et al., 2012).info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Seminal traits, suitability for semen preservation and fertility in the native Portuguese horse breeds Puro Sangue Lusitano and Sorraia: Implications for stallion classification and assisted reproduction

The Puro Sangue Lusitano (PSL) is the major national breed of horse in Portugal, but no studies exist on its seminal characteristics, or on the possibility of conserving semen for future use. The aim of this study was to evaluate semen parameters, fertility and the aptness to semen preservation in Lusitano Stallions. In order to compare characteristics defined by a single or by multiple semen collections per stallion 152 ejaculates obtained from 152 Lusitano stallions presented at an annual breeding soundness examination as well as data related to 371 ejaculates obtained from 9 PSL were analyzed. These latter samples were also evaluated in terms of their possible use in assisted reproduction and were compared with 113 ejaculates obtained from 4 Sorraia horses, a rare and endangered Portuguese breed. The percentage of motile spermatozoa (PMS) was assessed after collection (AC), after semen dilution (AD) and at 24 h of cool-storage. Mean values obtained for sperm motility and morphology and semen pH observed after semen collection differ significantly (P < 0.05) between single collection/multiple stallions and multiple collections/limited stallions, and no age related effects were detected. Overall, Lusitano semen quality was comparable to that of related breeds, while Sorraia stallions had very poor semen quality. The response to cool-storage of diluted semen samples differed among stallions and breeds, and the best results for progressive motile sperm cells at 24 h were in a range of 35-53% for PSL stallions and were lower for Sorraia stallions. Fertility rates obtained with artificial insemination (AI) averaged at 85% for PSL. With the exception of PMS AC, sperm vitality and semen pH no other seminal trait seemed to influence fertility rates in the Lusitano breed.http://www.sciencedirect.com/science/article/B6T43-4SPJ1TD-3/1/6a0fc54305a5730ccff6ba975a4abd0