Why the market model for the care of people with learning disabilities is inviable

The high debt levels in the independent care sector, and the reliance of services on it, mean that the quality of care is being compromised. Lee Humber explains how the market model for the care and support for people with learning disabilities came to change in recent years, and why the current system is, at best, economically inviable

ANALISIS SISTEM PENGENDALIAN MANAJEMEN PEMBERIAN KREDIT PADA PT. HASJRAT MULTIFINANCE

PT. Hasjrat Multifinance merupakan badan usaha milik swasta yang bergerak dalam bidang pembiayaan. Dalam perihal ini, penjualan perusahaan merupakan pemberian kredit, tipe kredit/ pembiayaan yang dibiayai oleh PT. Hasjrat Multifinance merupakan kredit yang diperuntukan untuk membiayai pembelian kendaraan roda dua (motor) baik dalam kondisi baru ataupun bekas (tarikan motor dari debitor yang tidak memenuhi kewajiban buat membayar angsuran tiap bulan). Tujuan di adakannya penelitian ini yaitu untuk mengetahui pengendalian manajemen pemberian kredit pada PT. Hasjrat Multifinance, untuk mengetahui penyebab terjadinya pemberian kredit yang tidak sesuai standar, dan untuk mengetahui Kendala-kendala apa saja yang di hadapi dalam proses pengendalian manajemen pemberian kredit di PT. Hasjrat Multifinance. Metode penelitian yang digunakan adalah kualitatif deskriptif. Hasil penelitian menyatakan bahwa Penerapan unsur-unsur Pengendalian Manajemen Pemberian Kredit pada PT. Hasjrat Multifinance sudah berjalan dengan baik serta memenuhi syarat-syarat yang telah di tentukan dimana perusahaan sudah menerapkan unsur-unsur pengendalian manajemen. Meskipun dalam penerapannya sudah di tetapkan sesuai SOP perusahaan namun masih ditemukannya kendala-kendala terkait oknum yang menyalahi prosedur tersebut serta penunggakan pembayaran kredit oleh nasabah yang berdampak pada citra perusahaan serta finansial dari perusahaan. Adapun kendala yang di hadapi dalam proses pengendalian manajemen yaitu masih ditemukannya nasabah yang belum bisa memenuhi kewajibannya dalam membayar angsuran tepat waktu dikarena kondisi finansial. Hal ini pun di sebabkan oleh dampak dari Covid-19 yang menyebabkan beberapa dari nasabah mengalami dampak ekonomi

Molekularbiologische Untersuchungen zur Interaktion des humanen endogenen Retrovirus K-Proteins Np9 mit dem Tumorsuppressor p53

Einleitung: Der seit über 30 Jahren ausgiebig erforschte Transkriptionsfaktor p53 besitzt offenbar Funktionen, die über seine bekannte und gut untersuchte Aktivität als Tumorsuppressor hinausgehen. So scheint er auch an der Regulation der menschlichen Lebenserwartung - über die Vermittlung einer allgemeinen physischen Robustheit - sowie der weiblichen Fertilität beteiligt zu sein. Insbesondere Primaten zeichnen sich durch eine vergleichsweise lange Lebenserwartung und eine lange reproduktive Phase aus. Ob p53 hier eine Rolle spielen könnte, ist unbekannt. Unsere Arbeitsgruppe entdeckte vor einigen Jahren das humane endogene Retrovirus-K (HERV-K) Protein Np9, dessen Gen sich in mehreren Kopien nur bei Menschen, Schimpansen und Gorillas findet. Weitere Untersuchungen wiesen außerdem darauf hin, dass Np9 an den Tumorsuppressor p53 zu binden vermag. Ziele der Untersuchungen: Es stellte sich also die Frage, ob die Funktion von p53 durch die Bindung an Np9 moduliert werden kann. Eine derartige Modulation des multifunktionellen Transkriptionsfaktors wäre natürlich auf Hominiden beschränkt. In der vorliegenden Arbeit sollten einige Teilaspekte der Interaktion von p53 und Np9 näher untersucht werden. Material und Methoden: Für die Bindungskartierung von p53 und Np9 wurden GST-Pulldown-Analysen durchgeführt. Die GST-Protein-Plasmide wurden in E.coli BL21 transformiert und nach Induktion mit IPTG exprimiert. Sie dienten als „Fängerproteine“ und waren dank ihres Glutathion-S-Transferase-tags in der Lage an GST-Sepharose-Kügelchen zu binden. Der putative Interaktionspartner als „Beuteprotein“ wurde in vitro translatiert und in diesem Zuge auch mit 35S radioaktiv markiert. Dann wurde er mit den an die Beads gebundenen GST-Proteinen inkubiert und anschließend die Proben auf ein SDS-Gel aufgetragen und aufgetrennt. Das Gel wurde anschließend auf eine Membran übertragen und der Blot auf einen Radioaktivfilm aufgelegt, woraufhin die Protein-Protein-Bindungen anhand des radioaktiven Beuteproteins als Banden erkennbar waren. Abschließend wurde der Blot mit GST-Antikörper inkubiert, dann am Folgetag mit Anti-Mouse-Antikörper. Mittels ECL Substrat konnte nun die Bindung der GST-getaggten Proteine an die Sepharosebeads nachgewiesen werden. Für den Electrophoretic Mobility Shift Assay wurden verschiedene Versuchsansätze pipettiert, welchen nach einer Inkubationszeit das zuvor mit 32P radioaktiv markierte Oligonukleotid zugegeben wurde. Nach erneuter Inkubation wurden die Proben auf das nicht-denaturiende EMSA-Gel aufgetragen und elektrophoretisch aufgetrennt. Dabei wurden die Protein-Oligonukleotid-Verbindungen gemäß ihrer Ladung, Größe und Konformation getrennt. Die Gele wurden im Geltrockner getrocknet und direkt mit einer Verstärkerfolie auf den Radioaktivfilm in einer Radioaktivkassette aufgelegt. Ergebnisse: Zunächst war es notwendig, die Bindung der beiden Partner biochemisch zu kartieren. Dies geschah mittels der GST-Pulldown-Analyse, in der Fragmente der Proteine exprimiert, miteinander inkubiert und schließlich kopräzipitiert wurden. Es stellte sich heraus, dass p53 mit seinem C-Terminus an Np9 bindet. Np9 hingegen band mit seinen Aminosäureresten (aa) 1-64 (ohne den C-terminus mit den aa 65-74) an p53. Das Np9-Fragment 36-74 zeigte nur eine schwache Bindung an p53. Interessanterweise band das Np9-Fragment 36-64 stärker an p53 als Volllängen-Np9 (1-74), was auf eine die Interaktion hemmende Domäne im C-Terminus von Np9 hinweisen könnte. Um zu untersuchen, ob die Bindung von Np9 an den C-Terminus von p53 die p53-DNA-Interaktion beeinflusst, wurden Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSAs) durchgeführt. Es konnte gezeigt werden, dass Np9-zumindest in vitro-durch Bindung an die regulatorische Domäne von p53 und in Anwesenheit des p53-aktivierenden Antikörpers PAb421 in der Lage war, die spezifische Bindungsfähigkeit von p53 an DNA zu erhöhen und somit seine Funktion als Transkriptionsfaktor zu unterstützen. Schlussfolgerungen: Die Resultate weisen also erstmals darauf hin, dass das nukleäre HERV-K Protein Np9 spezifisch in Hominiden eine p53-abhängige Tumorsuppressoreigenschaft aufweisen könnte. Weitere Untersuchungen-insbesondere in vivo-sind nun notwendig. Dies könnte auch als Forschungsgrundlage zu endogenen Retrovirusproteinen beim Pferd dienen.:1 Einleitung und Zielsetzung der Arbeit 1 2 Literaturübersicht 2 2.1 Der Tumorsuppressor p53 2 2.2 Das Kernprotein Np9 7 2.2.1 Retroviren 7 2.2.2 Endogene Retroviren 8 2.2.3 Humane endogene Retroviren 8 2.2.4 HERV-K 10 2.2.5 Das nukleäre Protein Np9 10 3 Material und Methoden 15 3.1 Material 15 3.1.1 Chemikalien 15 3.1.2 Puffer und Lösungen 17 3.1.3 Antikörper 21 3.1.4 Enzyme 22 3.1.5 Reaktionskits 22 3.1.6 Bakterienstämme 23 3.1.7 Kulturmedien 23 3.1.8 Oligonukleotide für EMSA 23 3.1.9 Größenstandards 24 3.1.10 Plasmide 26 3.2 Methoden 28 3.2.1 Nukleinsäuretechniken 28 3.2.2 Protein-Methoden 31 3.2.3 Prokaryonten 40 4 Ergebnisse 42 4.1 Interaktion zwischen Np9 und dem Tumorsuppressorprotein p53 42 4.2 GST-Pulldown 43 4.2.1 Klonierung für die GST-Pulldown-Analysen 43 4.2.2 Induktion der Proteinexpression 48 4.2.3 GST-Pulldown-Experimente 53 4.3 EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay) 57 4.3.1 Radioaktive Markierung der Sonden 58 4.3.2 EMSA-Experimente 58 5 Diskussion 63 6 Zusammenfassung 68 7 Summary 70 8 Literaturverzeichnis 72 Danksagung 86 Abbildungsverzeichnis 87 Tabellenverzeichnis 88Introduction: The transcription factor p53, extensively investigated for over 30 years, apparently has functions which exceeds his known and well examined activity as a tumor suppressor. It seems to be involved in the regulation of the human life expectancy – by providing a general physical robustness - as well as of the female fecundity. Primates too are characterized by a comparatively long life expectancy and long reproductive phases, yet the possible influence of p53 is unknown. Our research group has discovered some years ago the Np9 protein of human endogenous retrovirus K (HERV K), which is found in several copies only with humans, chimpanzees and gorillas. Other investigations by our group suggested that Np9 might be able to interact with the tumor suppressor p53. Objective of the investigations: To study whether the function of p53 can be modulated by the interaction with Np9. Such a modulation of the multifunctional transcription factor would of course be limited to hominids. In the present work some aspects of the interaction between p53 and Np9 were analysed. Materials and methods: For the mapping of the interaction of p53 and Np9, GST pulldown assays were carried out. The GST protein plasmids were transformed in E. coli BL21 and expressed after IPTG induction. They served as bait proteins and bound to GST sepharose beads because of their Glutathione S-transferase-tags. The putative interaction partner as a prey protein was translated in vitro and radioactively marked with 35S. After being incubated with the GST-proteins bound to the beads, the samples were transferred on a SDS gel and separated. The gel was transferred to a membrane and the blot was exposed to an X-ray film. Thus, the radioactively labelled prey protein forms bands that identify the protein-protein interaction. Finally the blot was incubated with GST antibody, then on the following day with anti-mouse antibody. Using ECL-substrate it was now possible to demonstrate that the GST-tagged proteins bound to the sepharose beads. For the Electrophoretic Mobility Shift Assay different samples were prepared and, after an incubation time, the oligonucleotide radioactively marked with 32P was added. After additional incubation it was transferred on non-denaturating EMSA gel and separated by electrophoresis. Thus the protein oligonucleotide conjugates were separated according to charge, size and conformation. The gels were dried in the gel dryer, transferred to a membrane and placed against an X-ray film in a cassette. Results: Initially a biochemical mapping of the binding of the two partners had to be carried out. This was done by means of the GST pulldown assay, in which fragments of the proteins were extruded, incubated together and finally co-precipitated. It turned out that the C-terminus of p53 bound to Np9. However, Np9 bound to p53 with his amino acid residues (aa) 1-64 (lacking the C-terminal aa 65-74). The Np9 fragment 36-74 showed only a weak binding to p53. Interestingly the Np9 fragment 36-64 was binding stronger to p53 than a full length Np9 (1-74), which could point to a C-terminal domain in Np 9 inhibiting the interaction. In order to examine whether the binding of Np9 to the C-terminal of p53 affects the interaction of p53 with DNA, Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSAs) were carried out. It could be shown that Np9 was able to raise the specific binding ability of p53 with DNA and to support therefore its function as a transcription factor, by binding to the regulatory domain of p53 in presence of the activating p53 antibody PAB421. Conclusions: The results show for the first time that, specifically in hominids, the nuclear HERV-K protein Np9 could have a tumor suppressing quality that is dependent on p53. Further investigations, in particular in vivo, are necessary. This could be the starting point for research on equine endogenous retrovirusproteins in horses.:1 Einleitung und Zielsetzung der Arbeit 1 2 Literaturübersicht 2 2.1 Der Tumorsuppressor p53 2 2.2 Das Kernprotein Np9 7 2.2.1 Retroviren 7 2.2.2 Endogene Retroviren 8 2.2.3 Humane endogene Retroviren 8 2.2.4 HERV-K 10 2.2.5 Das nukleäre Protein Np9 10 3 Material und Methoden 15 3.1 Material 15 3.1.1 Chemikalien 15 3.1.2 Puffer und Lösungen 17 3.1.3 Antikörper 21 3.1.4 Enzyme 22 3.1.5 Reaktionskits 22 3.1.6 Bakterienstämme 23 3.1.7 Kulturmedien 23 3.1.8 Oligonukleotide für EMSA 23 3.1.9 Größenstandards 24 3.1.10 Plasmide 26 3.2 Methoden 28 3.2.1 Nukleinsäuretechniken 28 3.2.2 Protein-Methoden 31 3.2.3 Prokaryonten 40 4 Ergebnisse 42 4.1 Interaktion zwischen Np9 und dem Tumorsuppressorprotein p53 42 4.2 GST-Pulldown 43 4.2.1 Klonierung für die GST-Pulldown-Analysen 43 4.2.2 Induktion der Proteinexpression 48 4.2.3 GST-Pulldown-Experimente 53 4.3 EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay) 57 4.3.1 Radioaktive Markierung der Sonden 58 4.3.2 EMSA-Experimente 58 5 Diskussion 63 6 Zusammenfassung 68 7 Summary 70 8 Literaturverzeichnis 72 Danksagung 86 Abbildungsverzeichnis 87 Tabellenverzeichnis 8

Kualitas Pelayanan Pembuatan Akta Kelahiran Pada Dinas Kependudukan Dan Pencatatan Sipil Kota Manado

This study aims to identify, examine, and analyze the quality of services for making birth certificates at the Department of Population and Civil Registration of the City of Manado. The research was carried out in March 2022 at the Department of Population and Civil Registration of the City of Manado. The type of research used in this research is descriptive qualitative research, namely research or subject study with the main objective of describing or describing a situation or event. Data collection techniques in this study using observation techniques, interviews and documentation. The sources of information in this study were 6 informants who were selected non-randomly or not randomly using a purposive technique, namely determining the informants to be interviewed on research objects related to the problem or research focus. The data analysis technique used is data reduction, data presentation, data triangulation, drawing conclusions. The results of the research based on data analysis and findings in the field show the quality of service for making birth certificates at the Department of Population and Civil Registration of the City of Manado from the aspects of tangibles, reliability, responsiveness, assurance, empathy is still low and needs to be further improved

Kuntotarkastusten vaikutus reklamointiin asuntojen ja asuinkiinteistöjen virheistä

Asuinhuoneistojen ja –kiinteistöjen kauppaa tehdään usein mielikuvilla ja kohteiden todellinen kunto jää ostajalle usein epäselväksi. Myyjä ei välttämättä piilottele kohteen todellista kuntoa tahallaan, koska useat virheet kohteissa ovat sellaisia, että niiden aiheuttamat haitat eivät välttämättä esiinny kaikilla ihmisillä samalla tavoin. Tämän vuoksi kohteiden tutkiminen tieteellisin menetelmin on tarpeen. Nykyisin ennen kaupantekoa suoritetaan suurimmassa osassa tapauksia kohteen kuntotarkastus, jonka tarkoituksena on selvittää kaupan osapuolille kohteen todellinen kunto, eli se, onko kohde asumiskelpoinen, soveltuuko se ostajan aikomaan tarkoitukseen ja onko pyydetty kauppahinta oikeassa suhteessa siihen, millainen kohde todellisuudessa on. Myös kaupanteon jälkeen suoritetaan usein toteuttamistavaltaan hyvin samankaltaisia, niin sanottuja kuntotutkimuksia, joissa pyritään kuitenkin kuntotarkastuksista poiketen etsimään kohteesta virheitä ja selvittämään niiden vaikutuksia siinä tarkoituksessa, että tutkimuksista laaditun raportin perusteella ostajaosapuolella on mahdollisuus reklamoida kohteen virheistä ja ryhtyä vaatimaan myyjältä hyvitystä. Useissa tapauksissa ostaja on käytännössä kokonaan riippuvainen suoritetun tutkimustyön laadusta, niin kohdetta ostaessaan kuin jälkikäteen hyvitystä vaatiessaan. Kuntotarkastuksiin ja –tutkimuksiin liittyy kuitenkin merkittävänä ongelmana ja puutteena se, että tarkastuksia ja niitä suorittavaa ammattikuntaa ei sääntele seikkaperäisesti mikään laki. Kuluttajalla ei ole näin ollen mitään luotettavaa lähdettä, jonka nojalla voisi varmistua siitä, että tilattu työ suoritetaan säännönmukaisesti, luotettavasti, riittävässä laajuudessa ja ammattitaidolla. Vastaavasti tarkastustoimintaa harjoittavilla yrittäjillä ei ole itsellään mitään ammattikunnan etuja valvovaa tahoa, joka tarjoaisi esimerkiksi täydennyskoulutusta, tiedottaisi säädösmuutoksista, toimisi ammatinharjoittajien turvaverkkona jne. Lainsäädännön puuttuminen ja sen myötä syntynyt epävarmuus tutkimustyön luotettavuudesta yhdistettynä tiettyihin, täsmentämättömiin reklamointia koskeviin säännöksiin on johtanut tilanteeseen, jossa pahimmassa tapauksessa huonosti laadittu kohteen tarkastus tai tutkimus ei anna riittävästi tietoa osapuolille ja viime kädessä taloudelliset vahingot voivat olla hyvinkin suuria, kun mahdollisuudet saada kompensaatiota on joko määräaikojen umpeen kulumisen tai lainvoiman saaneen tuomioistuimen ratkaisun johdosta menetetty, eikä asia ole kuitenkaan ratkennut osapuolia tyydyttävällä tavalla

RNA-Mediated Gene Silencing Signals Are Not Graft Transmissible from the Rootstock to the Scion in Greenhouse-Grown Apple Plants Malus sp.

RNA silencing describes the sequence specific degradation of RNA targets. Silencing is a non-cell autonomous event that is graft transmissible in different plant species. The present study is the first report on systemic acquired dsRNA-mediated gene silencing of transgenic and endogenous gene sequences in a woody plant like apple. Transgenic apple plants overexpressing a hairpin gene construct of the gusA reporter gene were produced. These plants were used as rootstocks and grafted with scions of the gusA overexpressing transgenic apple clone T355. After grafting, we observed a reduction of the gusA gene expression in T355 scions in vitro, but not in T355 scions grown in the greenhouse. Similar results were obtained after silencing of the endogenous Mdans gene in apple that is responsible for anthocyanin biosynthesis. Subsequently, we performed grafting experiments with Mdans silenced rootstocks and red leaf scions of TNR31-35 in order to evaluate graft transmitted silencing of the endogenous Mdans. The results obtained suggested a graft transmission of silencing signals in in vitro shoots. In contrast, no graft transmission of dsRNA-mediated gene silencing signals was detectable in greenhouse-grown plants and in plants grown in an insect protection tent

The NRPD1 N-terminus contains a Pol IV-specific motif that is critical for genome surveillance in Arabidopsis

RNA-guided surveillance systems constrain the activity of transposable elements (TEs) in host genomes. In plants, RNA polymerase IV (Pol IV) transcribes TEs into primary transcripts from which RDR2 synthesizes double-stranded RNA precursors for small interfering RNAs (siRNAs) that guide TE methylation and silencing. How the core subunits of Pol IV, homologs of RNA polymerase II subunits, diverged to support siRNA biogenesis in a TE-rich, repressive chromatin context is not well understood. Here we studied the N-terminus of Pol IV’s largest subunit, NRPD1. Arabidopsis lines harboring missense mutations in this N-terminus produce wild-type (WT) levels of NRPD1, which co-purifies with other Pol IV subunits and RDR2. Our in vitro transcription and genomic analyses reveal that the NRPD1 N-terminus is critical for robust Pol IV-dependent transcription, siRNA production and DNA methylation. However, residual RNA-directed DNA methylation observed in one mutant genotype indicates that Pol IV can operate uncoupled from the high siRNA levels typically observed in WT plants. This mutation disrupts a motif uniquely conserved in Pol IV, crippling the enzyme's ability to inhibit retrotransposon mobilization. We propose that the NRPD1 N-terminus motif evolved to regulate Pol IV function in genome surveillance

Design of small-molecule active-site inhibitors of the S1A family proteases as procoagulant and anticoagulant drugs

Vitamin K antagonists (VKA) have long been the default drugs for anticoagulant management in venous thrombosis. While efficacious, they are difficult to use due to interpatient dose–response variability and the risks of bleeding. The approval of fondaparinux, a heparin-derived factor Xa (fXa) inhibitor, provided validation for the development of direct oral anticoagulants (DOAC), and currently such inhibitors of thrombin and fXa are in clinical use. These agents can be used without regular coagulation monitoring, but the inherent risk of bleeding complications associated with blocking the common coagulation pathway remains. Efforts are now underway to develop DOACs that inhibit components of the intrinsic and extrinsic coagulation cascades upstream of thrombin and fX. Evidence from humans and from transgenic animal models suggests that this strategy may provide a better therapeutic margin between antithrombotic and antihemostatic effects. Here the design of active-site inhibitors of S1A proteases involved in coagulation and fibrinolysis is summarized