Study of acute toxicity and investigation of the presence of β-N-methylamino-L-alanine in the Gunnera manicata L. a species native to Southern Brazil

Gunnera (Gunneraceae) forma uma complexa associação com a cianobactéria Nostoc puctiforme L. A simbiose Gunnera-Nostoc é a única relatada envolvendo uma angiosperma e, em decorrência desta, ocorre a formação da neurotoxina β-N-metilamino-L-alanina (BMAA). No sul do Brasil, encontra-se a espécie G. manicata L., da qual não constam, na literatura científica, estudos fitoquímicos, farmacológicos e toxicológicos. Assim, o presente estudo avaliou a toxicidade aguda e a presença da neurotoxina BMAA em extratos aquosos de G. manicata. O ensaio de toxicidade aguda foi realizado com extrato aquoso das raízes de G. manicata na concentração de 2000 mg/kg, administrado em dose única via oral em ratos Wistar. Letalidade foi observada diariamente durante 14 dias pós-tratamento. Após a eutanásia, a massa relativa dos órgãos foi analisada por ANOVA de uma via e investigou-se a presença de alterações macroscópicas. A análise do BMAA por CG/EM envolveu uma etapa preliminar de derivatização, já a análise por ESI-EM/EM foi realizada por infusão direta. O presente estudo demonstrou a ausência da neurotoxina nas amostras de G. manicata analisadas bem como a ausência de toxicidade aguda no extrato aquoso das raízes. Esses dados demonstram alta margem de segurança dos extratos testados.Gunnera (Gunneraceae) forms a complex association with the cyanobacterium Nostoc puctiforme L. Gunnera-Nostoc symbiosis is the only one reported involving a flowering plant, and results in the formation of the neurotoxic amino acid β-N-methylamino-L-alanine (BMAA). The species Gunnera manicata L., for which phytochemical, pharmacological and toxicological studies are lacking, is found in Southern Brazil. Therefore, acute toxicity and the presence of neurotoxic amino acid were investigated in aqueous extracts of G. manicata. The acute toxicity test was conducted by administering aqueous root extract of G. manicata at a concentration of 2000 mg/kg in a single dose orally to Wistar rats. Lethality was monitored daily for 14 days after treatment. The relative mass of organs was analyzed by one-way ANOVA and macroscopic changes were investigated. The analysis of BMAA, a procedure performed by GC/MS, involved a preliminary derivatization step. The ESI-MS/MS analysis was done by direct infusion. The present study demonstrated absence of neurotoxin in the samples of G. manicata analyzed and absence of acute toxicity in aqueous root extracts. These data confirm that extracts from the roots of G. manicata have a high margin of drug safety

Análise de substâncias psicoativas em fluido oral de condutores brasileiros por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS)

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2012.Este estudo colaborativo foi realizado com objetivo de estimar a prevalência ponderada de substâncias psicoativas (SPA) entre os condutores automotivos brasileiros. Um total de 3397 amostras de fluido oral foi coletado em estradas federais de todas as capitais estaduais e do Distrito Federal, de Agosto/2008 a Setembro/2009. Deste total, 2235 amostras foram analisadas por LC-MS/MS após extração líquido-líquido com acetato de etila:hexano para a determinação simultânea de 32 SPA (anfetaminas, benzodiazepínicos, cocaína, canabinoides, opioides, cetamina e m-CPP) e seus metabólitos. O limite de detecção do instrumento (LOD) foi de 0,26 ou 0,65 ng/mL. A linearidade foi satisfatória entre 0,5-20 ng/mL (R2 = 0,9942-0,9995) e DPR60%). A maioria dos condutores que forneceram as amostras de saliva eram homens (94,4%), entre 18 e 80 anos de idade (média 37,1±11,2). A metade dirigia automóvel, e 29,6% motocicleta. Mais de 10% (236) das amostras foram positivas para pelo menos uma das SPA investigadas (≥ LOD). A classe mais prevalente encontrada nas amostras foi cocaína/metabolitos (6,1%), seguido por anfetaminas (3,2%), benzodiazepínicos (1,7%), canabinoides (1,3%) e opioides (0,4%). Entre as anfetaminas, a anfetamina (provavelmente como metabolito) teve a maior prevalência (1,7%), e entre os benzodiazepínicos, o diazepam (0,7%). Os condutores de moto e carro foram mais associados ao uso de cocaína e cannabis (8.2 e 3.0%, respectivamente), enquanto motoristas de caminhões e ônibus ao uso de anfetaminas. A prevalência do consumo de anfetaminas parece ser maior para os condutores >25 anos e de cocaína e cannabis para motoristas entre 18 e 24 anos de idade. Este estudo contribuiu com importantes informações em relação ao perfil de uso de SPA em estradas de rodagem brasileiras. O governo e demais formuladores de políticas devem considerar a inclusão de testes de SPA em estradas de rodagem, além do álcool, para aumentar a segurança de motoristas e passageiros. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACTThis is a collaborative work designed to investigate the prevalence of psychoactive drug (PAD) use among Brazilian drivers. A total of 3397 oral fluid samples were collected on federal roads of all state capitals and the Federal District from August 2008 to September 2009. From this total, 2235 samples were analyzed by LC- MS/MS after liquid-liquid extraction with ethyl acetate:hexane for the determination of 32 PAD (amphetamines, benzodiazepines, cocaine, cannabis, opioids, ketamine and m-CPP) and metabolites. Instrumental limit of detection (LOD) was 0.26 or 0.65 ng/mL. Linearity between 0,5-20 ng/mL was satisfactory (R2 = 0.9942-0.9995) and was RSD60%). Most of the drivers who donated samples were men, between 18 and 80 years (mean of 37,1±11,2). About half were driving car and 29.6% motorcycle. Over 10% (236) of the samples were positive for at least one compound analyzed (≥ LOD). The most prevalent PAD class found in the samples was cocaine/metabolites (6.1%), followed by amphetamines (3.2%), benzodiazepines (1.7%), cannabinoids (1.3%) and opioids (0.4%). Among amphetamines, amphetamine (probably as a metabolite) had the highest prevalence (1.7%), and among the benzodiazepines, diazepam (0.7%). Car and motorcycle were more associated with cocaine and cannabis use (8.2 e 3.0%, respectively), while truck and bus drivers with amphetamine use. Prevalence of amphetamine use seemed to be higher for drivers over >25 years and that for cocaine e cannabis for drivers between 18 and 24 years of age. This study brought relevant information over the PDA use profile in Brazilian federal roads. Government and policymakers need to consider the inclusion of roadside drug testing, other than alcohol, to increase the safety of drivers and passengers in Brazilian roads

Plantas utilizadas como medicinais no Rio Grande do Sul e com evidências de toxicidade em humanos

07

Plantas utilizadas como medicinais no Rio Grande do Sul e com evidências de toxicidade em humanos

07

Triterpenes and new saponins from ilex chamaedryfolia : chemotaxonomic tool to ilex species differentiation

Three saponins were isolated from leaves of Ilex chamaedryfolia. Their structures were established by spectroscopic and mass spectrometry data as the new saponin 3β-O-β-D-glucopyranosyl-(1-3)-α-L-arabinopyranosyl-20(S)-19α-hydroxyurs-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1-3)-β-D-glucopyranosyl ester, the new saponin 3β-O-β-D-glucopyranosyl-(1-3)-α-L-arabinopyranosyl-20(S)-19α-hydroxyurs-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester and the known saponin 3β-O-β-D-glucuronopyranosyl-20(R)-19α-hydroxyurs-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester. Ursolic acid and α-amyrin were also isolated

Análise fitoquímica de Ilex chamaedryfolia e isolamento de saponinas

39

Triterpenes and new saponins from ilex chamaedryfolia : chemotaxonomic tool to ilex species differentiation

Three saponins were isolated from leaves of Ilex chamaedryfolia. Their structures were established by spectroscopic and mass spectrometry data as the new saponin 3β-O-β-D-glucopyranosyl-(1-3)-α-L-arabinopyranosyl-20(S)-19α-hydroxyurs-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl-(1-3)-β-D-glucopyranosyl ester, the new saponin 3β-O-β-D-glucopyranosyl-(1-3)-α-L-arabinopyranosyl-20(S)-19α-hydroxyurs-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester and the known saponin 3β-O-β-D-glucuronopyranosyl-20(R)-19α-hydroxyurs-12-en-28-oic acid 28-O-β-D-glucopyranosyl ester. Ursolic acid and α-amyrin were also isolated

Study of acute toxicity and investigation of the presence of β-N-methylamino-L-alanine in the Gunnera manicata L. a species native to Southern Brazil

Gunnera (Gunneraceae) forma uma complexa associação com a cianobactéria Nostoc puctiforme L. A simbiose Gunnera-Nostoc é a única relatada envolvendo uma angiosperma e, em decorrência desta, ocorre a formação da neurotoxina β-N-metilamino-L-alanina (BMAA). No sul do Brasil, encontra-se a espécie G. manicata L., da qual não constam, na literatura científica, estudos fitoquímicos, farmacológicos e toxicológicos. Assim, o presente estudo avaliou a toxicidade aguda e a presença da neurotoxina BMAA em extratos aquosos de G. manicata. O ensaio de toxicidade aguda foi realizado com extrato aquoso das raízes de G. manicata na concentração de 2000 mg/kg, administrado em dose única via oral em ratos Wistar. Letalidade foi observada diariamente durante 14 dias pós-tratamento. Após a eutanásia, a massa relativa dos órgãos foi analisada por ANOVA de uma via e investigou-se a presença de alterações macroscópicas. A análise do BMAA por CG/EM envolveu uma etapa preliminar de derivatização, já a análise por ESI-EM/EM foi realizada por infusão direta. O presente estudo demonstrou a ausência da neurotoxina nas amostras de G. manicata analisadas bem como a ausência de toxicidade aguda no extrato aquoso das raízes. Esses dados demonstram alta margem de segurança dos extratos testados.Gunnera (Gunneraceae) forms a complex association with the cyanobacterium Nostoc puctiforme L. Gunnera-Nostoc symbiosis is the only one reported involving a flowering plant, and results in the formation of the neurotoxic amino acid β-N-methylamino-L-alanine (BMAA). The species Gunnera manicata L., for which phytochemical, pharmacological and toxicological studies are lacking, is found in Southern Brazil. Therefore, acute toxicity and the presence of neurotoxic amino acid were investigated in aqueous extracts of G. manicata. The acute toxicity test was conducted by administering aqueous root extract of G. manicata at a concentration of 2000 mg/kg in a single dose orally to Wistar rats. Lethality was monitored daily for 14 days after treatment. The relative mass of organs was analyzed by one-way ANOVA and macroscopic changes were investigated. The analysis of BMAA, a procedure performed by GC/MS, involved a preliminary derivatization step. The ESI-MS/MS analysis was done by direct infusion. The present study demonstrated absence of neurotoxin in the samples of G. manicata analyzed and absence of acute toxicity in aqueous root extracts. These data confirm that extracts from the roots of G. manicata have a high margin of drug safety