Avaliação e correlação de ensaios in vitro e in vivo de antivenenos botrópicos

Exportado OPUSMade available in DSpace on 2019-08-13T07:58:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 disserta__o_de_mestrado_de_wany_selena_maria.pdf: 1675188 bytes, checksum: 0ca490adbc0be885d83dc4c33f044269 (MD5) Previous issue date: 3Foram investigados coeficientes de correlação entre teste de neutralização da letalidade (DE50), neutralização da atividade fosfolipásica (PLA;) e níveis de anticorpos dosados por ELISA para avaliar a potência neutralizante de antivenenos botrópicos. Trinta equinos foram hiperimunizados com veneno de serpentes Bothrops alternatus, B. jararaca, B.jararacussu, B. neuwiedi e B. moojeni. Para as provas de atividade dos antivenenos utilizou-se veneno de B. jararaca (veneno referência para teste de potência dos soros antibotrópicos no Brasil). Também foi usado como antígeno nas placas de ELISA uma fração tóxica deste veneno purificada por cromatografia em coluna Sephadex G-100. Todos os antivenenos analisados neutralizaram a atividade letal variando de 1,6 a 9,6mg veneno/ml de antiveneno. Os coeficientes de correlação obtidos entre DE50 e títulos de anticorpos, medidos por teste ELISA, para veneno bruto e fração tóxica foram de r=0,45 (p<0,05) e r=0,60 (p<0,0005), respectivamente. Estudos de correlação da neutralização da atividade fosfolipásica com DE50 e títulos de anticorpos (ELISA) apresentaram valores de r=0,46 (p<0,02) e r=0,59 (p<0,001). Assim, os resultados obtidos permitem sugerir que teste ELISA usando fração tóxica do veneno de B.jararaca como antígeno na fase sólida pode ser usado como um método para avaliar potência neutralizante de antivenenos botrópicos.The correlation coefficients between in vivo neutralization of lethal toxicity (ED50), neutralization of the hemolytic activity (PLA²) and levels of antibodies measured by ELISA, was investigated to test the potency of horse anti-bothropic antivenom. Thirty horses were hyperimmunized with Bothrops venoms (B. alternatus, B. jararaca, B. jararacussu, B. neuwiedii and B. moojeni). To set up an indirect ELISA, for neutralization of PLA² activity and for determination of ED50 in . Swiss mice, the whole Bothrops jararaca venom (reference venom for assessing the bothropic antivenom potency in Brazil) was used. The toxic fraction (purihed from B. jararaca venom by Sephadex G-100 chromatography) was also used as antigen for ELISA. All antivenoms analyzed effectively neutralized the lethal activity in the range of 1.6 to 9.6 mg/ml of antivenom. The correlation coefticient between ED50 and ELISA antibody titers against the crude venom and toxic fraction was r=0.45 (P<0.05) and r=0.60 (P<0.0005), respectively. Correlation between ED50 and neutralization of PLA; activity was r=0.46 (P<0.02), and the correlation between ELISA antibody titers and neutralization of PLA² activity was r=0.59 (P<0.001). Thus, the ELISA which · measures only the antibody against the major toxic fraction of the B. jararaca venom should be most suitable for use as an in vitro assay of bothropic antivenom potency