Genetic and virulence characterization of Toxoplasma gondii strains isolated from pigeons in Lisbon region

habitat with cats and humans, bands are observed in recreational areas such as urban parks, playgrounds and parks. The interaction between cats, birds and human population is quite evident favoring the fecal-oral transmission of T. gondii between the definitive host and intermediate hosts, in the urban cycle of the parasite. The results of the inoculation in vivo of the brain homogenates showed pigeon isolation rates (58.5%) significantly higher when compared with previous studies, including the preliminary study in 2006 that the isolation rate in mice was 39,1% (9/23) (Waap 2008) and another that was not achieved any isolation in mouse (Godoi 2010). The genotypic analysis revealed a majority of strains of type II, which is consistent with what has been described in Portugal, the rest of Europe and the USA (Ajzenberg 2005, Fazaeli 2000, Honoré 2000, Howe 1997, Waap 2008) . We also isolated strains of type III and type I. The identification of type III strains in animals have been reported by other authors, but the type I have been rarely found in animals has not been previously described in Portugal except in a preliminary study of our team at the 2008 (Waap 2008). The type I strains are usually associated with high virulence in laboratory mice, leading to death within days. This strain was identified by molecular biology and has not been isolated in vivo. The difficulty in isolation of strain may be related to the small number of cysts of the type I strains can develop, these type strains are considered low cystogenic. Genetic characterization of strains of T. gondii is far from its terminus, more sequences of different genes should be studied to help the understanding of the molecular epidemiology and genetic characterization of T. gondii, a relevant parasite for which these data are lacking. The combination of data from humans and animals, through the use of high resolution genetic characterization should improve our perceptive of T. gondii, which will be ultimately beneficial for the control of T. gondii transmission

Isolamento de Toxoplasma gondii a partir de cérebro e músculo de gatos serologicamente positivos utilizando culturas celulares

O isolamento de Toxoplasma gondii é imprescindível quer para efeitos de diagnóstico definitivo da infecção, quer para estudos visando a genotipagem de estirpes circulantes, tanto nos animais como no ser humano. O bioensaio é presentemente considerado o método de eleição para isolamento de T. gondii de amostras biológicas, no entanto, para além de eticamente questionável, a inoculação em ratinho é dispendiosa e laboriosa. O ensaio in vitro utilizando culturas celulares é frequentemente mencionado como alternativa, contudo o investimento nesta área tem sido diminuto, sendo raros os trabalhos que referem o recurso a este método para isolamento de T. gondii a partir de tecidos animais. Este estudo teve como objectivo testar diferentes métodos de isolamento de T. gondii em culturas de células. Para a preparação dos inóculos, colhemos amostras de tecido cerebral e muscular (coração e membros) de 16 gatos serologicamente positivos, durante a necrópsia. O tecido cerebral foi homogeneizado com agulha e seringa em meio de cultura e o tecido muscular digerido numa solução de ácido clorídrico e pepsina. A inoculação dos homogeneizados de cérebro e músculo em culturas de células Vero resultou, respectivamente, numa taxa de isolamento de 37,5% (6/16) e 62,5% (10/16). A visualização microscópica de taquizoítos nas culturas celulares foi possível 5-14 dias pós-inoculação, utilizando homogeneizados de cérebro e 7-32 dias pós-inoculação, utilizando homogeneizados de tecido muscular. Todos os isolados foram confirmados por n-PCR visando a região ITS1 do rDNA de T. gondii

Isolation of Besnoitia besnoiti from infected cattle in Portugal

Abstract Besnoitia besnoiti, an obligate intracellular protozoan parasite belonging to the phylum apicomplexa, is the causative agent of bovine besnoitiosis. Besnoitiosis is responsible for significant losses in the cattle industry of Africa and Mediterranean countries due to the high morbidity rate, abortion and infertility in males. The acute stage of disease is associated with the proliferative forms (tachyzoites) and is characterized by fever, whimpery, general weakness and swelling of the superficial lymph nodes. During the following chronic stage, a huge number of cysts are formed mainly in the subcutaneous tissues. This process is non-reversible, and chronic besnoitiosis is characterized by hyper-sclerodermia, hyperkeratosis, alopecia and, in bulls, atrophy, sclerosis and focal necrosis that cause irreversible lesions in the testis. In this paper we report on the identification of large cysts in the skin of a cow and a bull in Portugal, which presented loss of hair and enlargement and pachydermis all over the body. The observation of a two-layered cyst wall within the host cell, the encapsulation of the host cell by a large outer cyst wall, and the subcutaneous localization of the cysts within the host, were characteristic for B. besnoiti. The parasites were isolated from the infected animals and successfully propagated in Vero cells without prior passages in laboratory animals. Morphological characterization of B. besnoiti tachyzoites and the amplification of the 149 bp segment from the internal transcribed spacer 1 (ITS1), aided with specific primers, confirmed the identification of B. besnoiti. Keywords: Besnoitia besnoiti; Bovine besnoitiosis; Portugal; Cyst; In vitro cell cultur

Padrões temporais de fornecimento de Megalopas de Carcinus Maenas na Ria de Aveiro: influência dos ventos e das marés

Dissertação mest., Biologia marinha - Ecologia e conservação marinha, Universidade do Algarve, 2007Muitos invertebrados marinhos apresentam uma fase planctónica com desenvolvimento larvar no mar, capaz de grande dispersão. Para concluírem o ciclo de vida dependem de correntes favoráveis à migração de regresso das larvas aos locais de maternidade. Este estudo pretendeu investigar os processos envolvidos no transporte de megalopas de Carcinus maenas para a Ria de Aveiro, ao analisar a influência dos ventos que sopram paralelamente à costa (ventos N-S) e das marés na variabilidade intra-anual de fornecimento destas larvas. Para análise, obtiveram-se dados diários entre Março e Junho (2006) de: amplitude de maré (DTR), nível subtidal do mar (SSL), ventos NCEP e abundância de megalopas no Canal de Mira, recolhidas a partir de duas redes de plâncton, à superfície e no fundo da coluna de água. As variações de SSL e predominância dos ventos Norte foram consistentes com a presença de afloramento costeiro na costa noroeste portuguesa. A intensidade de ventos NS apresentou uma correlação positiva com SSL para atrasos de -1 e 0 dias, indicando a presença de uma resposta rápida de divergência e convergência costeira da camada de Ekman. O fornecimento de megalopas apresentou um padrão com pulsos distintos a ocorrerem em períodos quinzenais de marés vivas. As magnitudes de fornecimento estiveram positivamente associadas ao relaxamento e reversão dos ventos Norte, indicando que as larvas foram transportadas em direcção à costa durante convergência costeira da camada de Ekman. O atraso na resposta entre o fornecimento e o forçamento do vento foi de -1 dias. Este encontra-se em conformidade com a possibilidade das larvas ficarem retidas na plataforma continental interior, pela presença de um padrão de migração nictemeral (DVM) durante a circulação de afloramento costeiro. À entrada da Ria, as megalopas parecem ter utilizado o transporte selectivo pelas correntes de maré (STST) para promover a imigração para dentro do estuário

Trophic relationships among pelagic predators of the deep seas of the Madeira Islands

This thesis provides a detailed study of the diet of various procellariiformes using new molecular approaches. Dietary studies remove fundamental blocks to our understanding of the structure of food webs, and provide insights into the demographic regulation of populations and the structuring of communities. The study species were the Band-rumped Storm-petrel (Hydrobates castro), Bulwer’s petrel (Bulweria bulwerii), Cory’s shearwater (Calonectris borealis) and White-faced Storm-petrel (Pelagodroma marina). The breeding colonies of the Madeiran-archipelago are Important Bird Areas (IBA) in the North-Atlantic, but little is known about the predator-prey relationships of its seabird populations. This probably relates to difficulties associated with obtaining robust prey estimates and the need to develop new methodologies to improving the resolution of species identification. Here, new molecular approaches were developed to recover prey from faeces and stomach contents using DNA-barcoding and high-throughput sequencing (HTS). The results obtained show clear improvements to the identification of the diets of procellariiformes, considerably outperforming morphological analysis, and retrieving prey identities from non-invasive faecal remains. Such approaches further showed that sympatric small seabirds of the sub-tropical NE-Atlantic significantly segregated their resources, while showing similar prey types with the species distributed in the Pacific, indicating that these petrels maintain foraging specialization across their distribution range. Foraging efficiency in seabirds has been widely hypothesized to change according to the moon cycle. Predators either optimise foraging during moonlit nights or reduce foraging effort because less accessible prey migrate downward the water column to avoid visual predators. I tested whether prey composition and diversity differ between moon-phases. However, I found no evidence for a significant influence of the moon on the diet of Bulwer’s petrel, contradicting previous ecological assumptions. The results highlight the potential of DNA methodologies to the understanding of marine food webs and predator-prey relationships and will certainly make important contributions to marine community ecology

Epidemiologia e diagnóstico da besnoitiose bovina em Portugal

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias. Especialidade de Sanidade AnimalA besnoitiose bovina, causada por Besnoitia besnoiti, é uma doença reemergente na Europa. Neste trabalho, após revisão do conhecimento sobre a epidemiologia, patogenia e diagnóstico, dedicou-se especial atenção ao ciclo de vida e vias de transmissão deste agente. Desenvolveu-se uma técnica serológica de aglutinação direta (B-MAT), com elevada sensibilidade (96,9%) e especificidade (99,7%), validada num rastreio nacional para determinar a prevalência e distribuição geográfica de B. besnoiti. Neste rastreio, envolvendo 391 explorações em 83 concelhos, observou-se uma verdadeira prevalência de explorações infetadas de 5,1% e uma prevalência média intraexploração de 33,0% (0,7-72,4%). Por varredura espacial detetou-se um cluster no Alentejo, o que está de acordo com as observações clínicas históricas. Um inquérito nacional aos médicos veterinários de campo revelou que apenas 17,5% tinham experiência clínica da doença, maioritariamente no Alentejo. Finalmente, num rastreio serológico de 1297 animais pertencentes a outras espécies domésticas e silváticas pela técnica B-MAT, não se detetou a presença de anticorpos anti-B. besnoiti. Considerando a importância económica da doença, a sua divulgação junto dos médicos veterinários e criadores bem como a investigação da sua epidemiologia são fundamentais para apoiar o sector pecuário nacional, sobretudo no Alentejo onde se encontra a maior prevalência serológica e de casos clínicos.ABSTRACT - Epidemiology and diagnosis of bovine besnoitiosis in Portugal - Bovine besnoitiosis, caused by Besnoitia besnoiti, is a re-emergent disease in Europe. In this work, after reviewing the present knowledge on the epidemiology, pathogeny and diagnosis, special attention was devoted to the studies on the life cycle and transmission of this parasite. A direct agglutination serological technique (B-MAT) with a high sensitivity (96.9%) and specificity (99.7%) was developed and validated in a national survey to determine the prevalence and geographic distribution of B. besnoiti. The survey covered 391 herds in 83 municipalities. A true herd prevalence of 5.1% and a mean within-herd prevalence of 33.0% (0.7-72.4%) were estimated. Spatial scan statistics identified one cluster in the region Alentejo, which is in agreement with historical clinical data. A national inquiry to veterinary field practitioners showed that only 17.5% had clinical experience of besnoitiosis, the majority in Alentejo. Finally, no anti-B. besnoiti antibodies were detected in a B-MAT serological screening of 1297 animals belonging to other domestic and wildlife species. Considering the economic importance of the disease, the dissemination of information among veterinary practitioners and cattle producers as well as extended research on its epidemiology are essential to support the national livestock sector, especially in Alentejo, where the highest serological and clinical prevalence are found

The political nexus between water and economics in Brazil:A critique of recent policy reforms

The reform of water policies in Brazil has involved a combination of regulatory norms and economic-incentive instruments. Nonetheless, contrary to its formal objectives, the process has largely failed to prevent widespread environmental impacts and growing spatial and sectoral conflicts. The main reason for such failures is the perverse influence of market rationality, which is particularly evident in the reorganization of the public sector, the quantification of the monetary value of water, and the payment for environmental services

SOROPREVALÊNCIA DE LEISHMANIA SP. EM EQUÍDEOS NO ESTADO DO RIO GRANDE DO SUL, BRASIL

This study aimed to determine the frequency and antibody titres of Leishmania sp. in equines destined for slaughter in a slaughterhouse in the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Additionally, the influence of two risk factors for leishmania infection in equines was evaluated: sex and altitude. Blood samples were collected from a total of 351 horses and 3 mules. The indirect immunofluorescent test was used for serological diagnosis of Leishmania spp. in all equids. The influence of the risk factors was assessed by the chi-square test with Yates correction using the statistical software Biostat 5.0. In 14.12% (50/354) of the equines, their antibodies reacted to the Leishmania sp. antigen. The following endpoint titers were determined: 35 animals with titers of 1:40, 10 with titers of 1:80, 4 with titers of 1:160, and 1 with titers of 1:320. Neither of the two risk factors studied were significant. Exposure of equidae to Leishmania spp suggests the presence of infected vectors (Lutzomyia sp.) in the region, which may pose a public health and veterinary medicine problem, since they may transmit the disease both to animals and humans.Objetivou-se através deste estudo determinar a frequência e a titulação de soros de equídeos reagentes e não reagentes aos antígenos para Leishmania sp. em equídeos destinados ao abate em um frigorífico no estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Além disso, foi avaliada a influência de dois fatores de risco para Leishmania em equídeos: sexo e altitude. Participaram do estudo 351 equinos e 3 muares, sendo colhidas amostras de sangue de todos os animais. Foi utilizada a reação de imunofluorescência indireta para diagnóstico sorológico de Leishmania sp. em todos os equídeos. Para avaliar a influência dos fatores de risco testados foi utilizado o teste do Qui-quadrado com correção de Yates através do Programa Biostat 5.0. Em 14,12% (50/354) dos equídeos, seus anticorpos reagiram ao antígeno de Leishmania sp., sendo que na titulação o resultado foi: 35 animais com títulos de 1:40, 10 com títulos de 1:80, 4 com títulos de 1:160 e 1 com títulos de 1:320. Nenhum dos dois fatores de risco avaliados foram significativos. A exposição destes equídeos a Leishmania sp. sugere a presença de vetores infectados (Lutzomyia sp.) na região, o que pode representar problemas de saúde pública e na medicina veterinária, já que tanto animais domésticos quanto os humanos podem adquirir esta doença

ÁCAROS TROMBICULÍDEOS: REVISÃO DE UMA PARASITOSE NEGLIGENCIADA EM ANIMAIS DE COMPANHIA

A trombiculose é uma parasitose causada por ácaros trombiculídeos (Acari: Trombiculidae) que afeta vertebrados, incluindo cães, gatos e o ser humano. É a fase larvar dos ácaros trombiculídeos que se caracteriza por ser parasita obrigatório e responsável pelo aparecimento de sinais clínicos. Estes incluem prurido, várias lesões cutâneas, podendo, em alguns casos, surgir distúrbios gastrointestinais, neurológicos ou mesmo a morte do animal quando as infestações são massivas. Apesar da sua distribuição mundial, incluindo em Portugal, esta é uma parasitose negligenciada, sobretudo no contexto da medicina veterinária de animais de companhia. Os estudos existentes são escassos, contribuindo para o seu desconhecimento, e a sua verdadeira prevalência nestes animais é pouco conhecida a nível mundial. Apesar do seu papel enquanto vetores de agentes patogénicos não ser claro, alguns estudos já demonstraram a presença de ADN de Anaplasma spp., Bartonella spp., Borrelia spp. e Rickettsia spp., em trombiculídeos. O facto de os ácaros trombiculídeos afetarem várias espécies animais, incluindo os animais de companhia e o ser humano, bem como o seu potencial papel no ciclo de manutenção de vários agentes infeciosos, revela a importância de um maior conhecimento acerca desta parasitose, tanto ao nível da comunidade científica como da comunidade médico veterinária. Assim, esta revisão pretende reunir os dados disponíveis à data quanto à epidemiologia, características clínicas e tratamento desta parasitose, com especial enfoque em Portugal